ENSAYO DE

VIGOR
VEGETATIVO
LAURA MILENA RUBIANO
DIEGO A. MORALES
JOSE DAVID RADA

PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y SANITARIA

TOXICOLOGÍA AMBIENTAL
 ¿QUE ES EL
VIGOR VEGETATIVO?
Independientemente del estado que esté, el árbol presenta un ritmo metabólico que lo mantiene dentro de
unos márgenes vegetativos indispensables para la supervivencia. Se pueden destacar tres momentos de la
actividad vegetativa a lo largo del año:

❖Brotación Primaveral.

❖Floración / Fructificación.

❖Brotación Otoñal.

Estos 3 momentos se analizan los siguientes parámetros:

• VITALIDAD: Designa CUALITATIVAMENTE la capacidad de producción estacional del árbol, bien sea
de tallos, hojas , flores o frutos, así como la intensidad del verde del follaje.

• VIGOR VEGETATIVO: Describe CUANTITATIVAMENTE la producción estacional, sobre todo en el

número y la longitud de los nuevos tallos, tamaño de flores y frutos, cantidad de hojas, etc.

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 DIRECTRICES DE LA
OCDE No 227 PARA
PRUEBAS EN
PLANTAS
TERRESTRES:
PRUEBA DE VIGOR
VEGETATIVO

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 PRINCIPIO DE La prueba evalúa los posibles efectos sobre las plantas después
del depósito de la sustancia de prueba en las hojas y las porciones
de plantas sobre el suelo.
LA PRUEBA
La prueba de vigor vegetativo está destinada a cumplir con los
requisitos de prueba para ambos productos químicos generales y
productos para la protección de cultivos.

Después de la aplicación, las plantas se evalúan frente a plantas

de control no tratadas para determinar los efectos sobre el vigor y
el crecimiento a diversos intervalos de tiempo durante 21 - 28 días
desde el tratamiento.

La prueba se puede realizar a una concentración / tasa única

como prueba límite de acuerdo con el objetivo del estudio o para
determinar si se justificaban más pruebas, es decir, una prueba de
dosis-respuesta.

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 INFORMACIÓN SOBRE
LA SUSTANCIA DE PRUEBA
Esta información es útil para la identificación de la ruta esperada de exposición a la sustancia y para diseñar la
prueba:

❑ Fórmula estructural

❑ Pureza

❑ Solubilidad en agua

❑ Solubilidad en solventes orgánicos

❑ Coeficiente de partición n-octanol / agua

❑ Comportamiento de sorción del suelo

❑ Presión de vapor

❑ Estabilidad química en agua y luz

❑ Biodegradabilidad

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 VALIDEZ DE LA PRUEBA
PARA QUE LA La emergencia de las plántulas es al Las plantas no exhiben efectos
PRUEBA SE menos del 70%; y en los controles: fitotóxicos visibles, por ejemplo, clorosis,
CONSIDERE necrosis, marchitez, deformaciones de
VÁLIDA, SE hojas y tallos. Las plantas exhiben solo
DEBEN CUMPLIR una variación normal en el crecimiento
LOS SIGUIENTES y la morfología de esa especie en
CRITERIOS DE particular.
RENDIMIENTO
La supervivencia media de la planta es Las condiciones ambientales para una
al menos del 90% durante la duración especie en particular son idénticas y los
del estudio: medios de crecimiento contienen la
misma cantidad de matriz del suelo,
medios de soporte o sustrato de la
misma fuente.

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 SUSTANCIA DE REFERENCIA

Se puede analizar una sustancia
de referencia a intervalos
regulares para verificar que el
desempeño de la prueba y la
respuesta de las plantas de
prueba en particular y la
instalación de prueba no han
cambiado significativamente con
el tiempo.
Alternativamente, la medición
histórica de la biomasa o el
crecimiento de los controles podría
usarse para evaluar el desempeño
del sistema de prueba en
laboratorios particulares, y puede
servir como una medida de
control de calidad intra-
laboratorio.

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 DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO

SUSTRATO ARTIFICIAL
SUELO NATURAL

Las plantas se pueden cultivar en

macetas utilizando un suelo franco Los sustratos artificiales no se usan
arenoso, arenoso o franco arcilloso para analizar productos de
arenoso que contiene hasta 1.5% de protección de cultivos, pero pueden
carbono orgánico, aproximadamente 3% ser útiles para analizar químicos
de materia orgánica. generales o para minimizar la
variabilidad de los suelos naturales
y aumentar la comparabilidad en
Se debe informar el tipo y textura,% de los análisis de resultados.
carbono orgánico, pH y contenido de sal
como conductividad electrónica del suelo
preparado final.

El suelo natural puede complicar la

interpretación de los resultados y
aumentar la variabilidad debido a las
diferentes propiedades físicas /químicas y
las poblaciones microbianas.

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 CRITERIOS PARA LA SELECCIÓN DE ESPECIES DE PRUEBA

Las especies tienen semillas uniformes que están fácilmente disponibles de fuentes de semillas
LAS SIGUIENTES CARACTERÍSTICAS DE LAS
POSIBLES ESPECIES DE PRUEBA SE DEBEN

estándar confiables y que producen una germinación consistente, confiable e incluso, así como
un crecimiento uniforme de las plántulas.
CONSIDERARSE EN LA SELECCIÓN

La planta es susceptible de pruebas en el laboratorio y puede proporcionar resultados

confiables y reproducibles dentro y entre las instalaciones de prueba.

La sensibilidad de las especies probadas debe ser consistente con las respuestas de las plantas
encontradas en el ambiente expuesto a la sustancia.

Se han utilizado hasta cierto punto en pruebas de toxicidad previas y su uso en, por ejemplo,
bioensayos de herbicidas, pruebas de detección de metales pesados, pruebas de salinidad.

Son compatibles con las condiciones de crecimiento del método de prueba y/o cumplen los
criterios de validez de la prueba.

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 APLICACIÓN DE LA SUSTANCIA DE PRUEBA.

La sustancia debe aplicarse en La cobertura debe ser uniforme

un vehículo apropiado (por en las superficies de las hojas y
ejemplo, agua, acetona, etanol, no debe producirse
polietilenglicol y goma "sombreado" de las hojas de la
arábiga). sustancia.

La sustancia de prueba se rocía Si se aplican solventes o

sobre la superficie de la planta portadores, se debe establecer
simulando aplicaciones típicas un segundo grupo de plantas
de tanques de rociado. de control que reciban solo el
solvente / portador.

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 VERIFICACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN / TASAS DE LA SUSTANCIA DE PRUEBA

Las concentraciones / tasas de aplicación deben confirmarse

mediante una verificación analítica adecuada:

➢ PARA MATERIALES SOLUBLES, la verificación de todas las

concentraciones / tasas de prueba se puede confirmar mediante
el análisis de la solución de prueba de concentración más alta
utilizada para la prueba con documentación sobre la dilución

➢ PARA MATERIALES INSOLUBLES, la verificación del material compuesto debe

proporcionarse con pesos del material de prueba agregado al suelo. Si se
requiere una demostración de homogeneidad, puede ser necesario el análisis
del suelo.

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 DESEMPEÑO DE LA PRUEBA
PRUEBA DE DISEÑO

El número de plantas por maceta Después de que las semillas hayan

Las plantas de la misma especie se cultivan
en macetas desde las semillas hasta la
etapa de 2 a 4 hojas verdaderas.
dependerá de la especie, el tamaño de la
maceta y la duración de la prueba, y debe
proporcionar condiciones de crecimiento
adecuadas y uniformes y evitar el
hacinamiento y el sombreado de las
plantas durante la prueba.
emergido, el adelgazamiento debe
completarse para que solo haya una
planta por maceta para las especies de
mayor crecimiento, mientras que para las
especies de crecimiento más pequeñas se
permite más de una planta por maceta.

Los grupos de control se utilizan para

asegurar que los efectos observados estén
asociados o atribuidos solo a la exposición
a la sustancia de prueba. El grupo de
control apropiado debe ser idéntico en
todos los aspectos al grupo de prueba,
excepto por la exposición a la sustancia de
prueba.
Se deben evitar las semillas recubiertas con
un insecticida o fungicida (es decir, semillas
vestidas). Sin embargo, algunas
autoridades reguladoras permiten el uso
de ciertos fungicidas de contacto no
sistémicos (por ejemplo, captan, tiram)

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 CONDICIONES DE LA PRUEBA
Las plantas deben mantenerse bajo buenas prácticas
hortícolas en cámaras de ambiente controlado, fitotrones o
invernaderos

• Temperatura: 22 o C ± 10 o C;
• Humedad: 70% ± 25%;
• Fotoperíodo: mínimo 16 h de luz;
• Intensidad de luz: 350 ± 50 μ E / m 2 / s.
Los nutrientes del suelo pueden complementarse
para mantener el buen vigor de la planta. La
necesidad y el momento de los nutrientes
Las plantas de control y tratadas deben mantenerse adicionales se pueden juzgar mediante la
en las mismas condiciones ambientales, sin embargo, observación de las plantas de control.
deben tomarse los medios adecuados para evitar la
exposición cruzada (por ejemplo, de sustancias
volátiles) entre los diferentes tratamientos y los
controles de la sustancia
de prueba.

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 Se podrá realizar una
prueba de detección de
rango para proporcionar
orientación sobre las
concentraciones o las tasas
de aplicación que se
probarán en el estudio
definitivo de dosis-
respuesta. Para la prueba
de búsqueda de rango, las
concentraciones / tasas de
prueba deben estar
ampliamente espaciadas
por ejemplo, 0.1, 1.0, 10,
100 y 1000 unidades de
PRUEBA DE BÚSQUEDA DE RANGO aplicación.

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 Para determinar la concentración / tasa apropiada de una
sustancia para realizar una prueba de concentración única o
CONCENTRACIÓN / TASA
tasase deben considerar varios factores:
PRUEBA A UNA SOLA

Para productos químicos generales, las propiedades físicas y

químicas de la sustancia.

Para los productos de protección de cultivos, las propiedades

físico-químicas y el patrón de uso de la sustancia de prueba.

Por ejemplo, 1000 mg / l de solución de prueba

El propósito de la prueba de concentración / tasa múltiple es

PRUEBAS A MÚLTIPLES
CONCENTRACIONES /

establecer una relación dosis-respuesta y determinar una CE X

o ER X para biomasa y / o efectos visuales en comparación con
controles no expuestos.
TASAS

Por ejemplo, si un CE50 Si se requiere, sería deseable realizar

pruebas a tasas que produzcan un efecto del 20 al 80%.

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 OBSERVACIONES

Durante el período de observación, las plantas se observan con frecuencia (al menos una vez
a la semana y, si es posible, diariamente) en busca de fitotoxicidad visual y mortalidad.

Al final de la prueba, se debe registrar la medición de la biomasa de las plantas

supervivientes, así como los efectos perjudiciales visibles en diferentes partes de la planta.

La biomasa final se puede medir usando el peso medio final del brote seco de las
plantas sobrevivientes, cosechando el brote en la superficie del suelo y secándolos hasta
un peso constante a 60 o C.

Alternativamente, la biomasa final se puede medir usando peso de brote fresco.

Se debe usar una puntuación uniforme para la lesión visual para evaluar las respuestas
tóxicas observables

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 PAUTAS DE PRUEBAS
DE LA EPA 712-C-011:
VIGOR VEGETATIVO

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 Parámetro OCDE EPA
Concentración efectiva CE25 y CE50 CE25
Temperatura 22 – 10 °C 25 – 6 °C
Humedad 70% – 25% 70% - 15%
Luminancia 350µ E / m 2 / s – 50 µ E / m 350µ E / m 2 / s – 50 µ E / m
2/s 2/s
Fotoperiodo 16 horas de luz 16 horas de luz y 8 de
ocuridad
 ADAPTING THE
VEGETATIVE VIGOUR
TERRESTRIAL PLANT TEST
FOR ASSESSING
ECOTOXICITY OF AEROSOL
SAMPLES
Nora Kováts, Eszter Horváth, Bettina Eck-Varanka, Eszter
Csajbók, András Hoffer
Institute of Environmental Sciences, University of Pannonia,
Egyetem str. 10, Veszprém 8200, Hungary

Received: 2 January 2017 /Accepted: 24 April 2017 /Published online: 13

May 2017. Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2017

ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO

 COLECCION DE LA
MUESRA

Observatorio Principal Del

Servicio Metereologico

25 Dic 2014
Muestra
6 Ene 2015 Compuesta
Digitel DHA-80
ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO
 PRUEBA DE Basado
Protocolo 227

ECOTOXICIDAD
Efectos, despues del deposito
de la sustancia de prueba en No Tratadas
hojas sobre el suelo.

Grupo de prueba (TG)

Cucumis Sativa 22d

15 cm
70% +- 25%

5 ml TG1 TG3
16 h

Comercial TG2
Dia 0 Dia 0, dia 8, dia 15

22 °C +- 10 °C
Dia 0, dia 8
ENSAYO DE VIGOR VEGETATIVO
 RESULTADOS Metales potencialmente
tóxicos
Aluminio 145 μg /L
Cromo 7.89 μg /L
Cadmio 1.55 μg /L
B 18.81 μg /L
Bario 12.2 μg /L
Daño necrótico - escala de 1 a 3 Niquel 5.18 μg /L
TG1 0 Plomo 31.9 μg /L
Cobre 18.6 μg /L
TG2 2.03
Mn 20,1 μg /L
TG3 3.31
Zinc 240 μg /L
 CONSLUSIONES
En los dos primeros grupos, solo se observó un efecto estimulante tanto
en la masa como en la longitud del brote en comparación con el
control, posiblemente debido a la presencia de nutrientes en el
extracto. Sin embargo, en el segundo y tercer grupo que recibieron
tratamientos repetidos, el efecto perjudicial y la necrosis se
desarrollaron al final de la exposición.

La prueba, similar a la mayoría de los bioensayos, no puede

vincular el efecto tóxico con un determinado contaminante; varios
compuestos tóxicos presentes en el extracto acuoso son candidatos
potenciales.
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. OCDE (2006), Prueba No. 227: Prueba de plantas terrestres: Prueba de vigor
vegetativo , Directrices de la OCDE para el ensayo de productos químicos, Sección 2,
OECD Publishing, París.
2. EPA (2012), Ecological effects. Test guidelines. Ocspp 850.4150: vegetative vigor. EPA
712-C-011, january 2012.
3. Adapting the vegetative vigour terrestrial plant test for assessing ecotoxicity of
aerosol samples. Nora Kováts, Eszter Horváth, Bettina Eck-Varanka, Eszter Csajbók,
András Hoffer. Institute of Environmental Sciences, University of Pannonia, Egyetem
str. 10, Veszprém 8200, Hungary. May 2017.