CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA​

Mónica Patricia Martínez Polo, José Gustavo Arias Vaca

Principios de química orgánica - Grupo 10
Universidad Nacional de Colombia
14 de Mayo de 2019. Bogotá, Colombia

1. RESUMEN cromatografía en capa fina la cual es

Se realizo la separación y identificación de los
componentes presentes en una mezcla
problema de colorantes haciendo uso de la
cromatografía en capa fina. Como patrón se
utilizaron 4 colorantes: o-Nitrofenol, Sudan
III, Rojo de metilo y p-Nitrofenol, como fase
estacionaria se utilizó la sílica gel y como fase
móvil se utilizaron 3 solventes: éter de
petróleo, butanona (MEK) y metanol y se
definió el mejor eluyente para la muestra, en
este caso se utilizó MEK con algunas gotas de
metanol.
A partir de análisis cromatográfico se
determinó que la mezcla contenía los
colorantes p-Nitrofenol y Rojo de metilo.
empleada como técnica robusta en un
laboratorio de análisis orgánico, tiene ventajas
como la simplicidad de sus métodos en
comparación con los tradicionales, la
velocidad de análisis, la gran sensibilidad de
detección, la aplicación al análisis de
sustancias no coloreadas, entre otras.
La CCF también se denomina cromatografía
en columna abierta y está basada en el
principio de adsorción, aunque también se
presentan fenómenos de partición en menor
grado cuando las placas contienen cierta
cantidad de agua, y fenómenos de intercambio
iónico. ​[1]
3. PROCEDIMIENTO

2. INTRODUCCIÓN

La cromatografía se define como un método

físico de separación en el cual los
componentes a separar se distribuyen entre dos
fases: una fase estacionaria inmóvil (sólida o
líquida) y una fase móvil ( líquida o gaseosa).
Fue inventada y denominada así por el
botánico ruso Mikhail Tswett a principio del
siglo XX e inicialmente se utilizó para separar
pigmentos vegetales, como clorofilas y
xantofilas.
Se basa en la diferencia de velocidades a las
que viajan los componentes de una mezcla por
la fase estacionaria bajo la influencia de la fase
móvil, la velocidad depende del tipo de
interacciones que se dan entre los
componentes y las fases, estas interacciones
pueden ser : puente de hidrógeno, fuerzas de
Van der Waals o dipolo-dipolo.

Actualmente existen diversos tipos de

cromatografía, uno de estos es la
 Tabla 1. Reactivos y propiedades.​[2]

5. RESULTADOS

A continuación se describen los valores

obtenidos de distancia recorrida tanto para la
muestra problema como los colorantes patrón.
Figura 1.Montaje de una cámara de elución.
Tomada de Donde:
https://uniiquim.iquimica.unam.mx/glossary/cromato A= Placa cromatográfica 1 con (P1, P2).
grafia-en-capa-delgada/​ B = Placa cromatográfica 2 con (P3,P4).
M = Muestra problema.
4. DATOS DE ENTRADA
Colorantes Distancia (cm) Rf

M-A 0 0

P1 1,7 0.33

P2 0,4 0.077

M-B 0 0

P3 0 0

P4 0 0
Tabla 2. Eluyente Éter de Petróleo. Distancia
recorrida 5,2 cm.

M P1 P2 M P3 P4
Figura 2. Eluyente Éter de Petróleo.
 M P1 P2 M P3 P4
Colorante Distancia (cm) Rf
Figura 4. Eluyente Metanol.
s
Basado en los resultados obtenidos se determinó
M-A 2,7 0.54 que la propuesta final de eluyente sería MEK +
gotas de metanol.
P1 2,8 0.51

P2 3,4 0.64 Colorantes Distancia Rf

(cm)
M-B 3,2 0.58
M-B,1 4,7 0,85
P3 3,3 0.60
M-B,2 5,2 0,95
P4 3,5 0,64
P3 4,6 0,84
Tabla 3. Eluyente MEK.
P4 5,1 0,96
Tabla 5. Eluyente MEK +Metanol. Distancia
recorrida 5,5 cm y 5,3 cm del lado de P4.

M P1 P2 M P3 P4
Figura 3. Eluyente MEK.

Colorantes Distancia (cm) Rf

M P3 P4
Figura 5. Eluyente MEK +Metanol.
M-A 4,9 0.89
Distancia recorrida por la mancha desde el punto de aplicación
Rf = Distancia recorrida por el eluyente desde el punto de aplicación
P1 5,2 0.95

P2 5,0 0.91
6. ANÁLISIS DE RESULTADOS
M-B 4,7 0.92
Se realizó una serie eluotrópica con éter de
P3 4,8 0.94 petróleo (poco polar), butanona
(medianamente polar) y metanol (polar),para
P4 4,9 0.96 determinar el mejor solvente a utilizar para
Tabla 4. Eluyente Metanol. Distancia recorrida 5,5 separar los componentes de la mezcla
cm en A y 5,1 en B. problema.
Inicialmente se observó que para la prueba con
éter de petróleo la muestra no eluyó en
ninguna de las dos placas lo que lleva a pensar
que la mezcla es polar y se queda en la fase
estacionaria debido a que tiene fuertes
interacciones con la silica que a su vez es
polar. Por otro lado se encontró que P1 si
eluyó de manera considerable con este
disolvente razón por la cual descartamos este
compuesto del análisis de la muestra
problema, también se observó la elución de P2
pero no fue suficientemente considerable para
descartar.
En la prueba con MEK se encontró que aunque
las muestras eluyeron no se logró la separación
de los colorantes presentes, lo cual lleva a
pensar que se necesita de una sustancia aún
más polar para lograr la separación. A pesar de
esto se analizaron los colorantes rojos (Sudan
III y rojo de metilo) que eluyeron, se encontró
para la primera placa un valor de Rf de la
muestra de 0,54 mientras que para el P2 fue de
0,64 se encontró un error del 18,51% por lo
cual se descarta este colorante como posible
componente de la muestra. En la segunda
placa se encontró un valor de Rf para la
muestra de 0,58 y para P3 de 0,6 es decir un
error del 3,45% y por lo tanto se considera que
este colorante es el que se encuentra presente
en la muestra, además el color de obtenido en
ambas manchas es el mismo.
Por otro lado, en la prueba con Metanol a
pesar de que la muestra eluyó al igual que para
el MEK no se logró la separación de los
componentes, esto posiblemente a que la
solución es demasiado polar, aunque este
componente logró de manera efectiva la
elución de P4.
Analizando la placa A se pudo descartar de
manera efectiva tanto P1 que obtuvo un error
del 6,74 (confirmando el descarte realizado en
la cámara con éter) como P2 que a pesar de
obtener un error bajo del 2,25% se observa que
los colores de las manchas fueron diferentes
además este colorante dejó una cola en la placa
que no se observa en la muestra confirmando
el descarte realizado previamente en la placa
de MEK.
Para la placa B se obtuvo un Rf de 0,92 para la
muestra, 0,94 para P3 y 0,96 para P4, es decir
un error de 2,17% y 4,35% respectivamente.
Con estos resultados y la coloración final en el
centro de las manchas se considera que P3 y
P4 son los colorantes presentes en la muestra.
Para confirmar y tener una mejor lectura, se
realizó una última prueba con una propuesta
de solvente, la propuesta fue MEK con gotas
de metanol para aumentar la polaridad del
mismo, y así lograr tanto la elución de P4
como la separación de los componentes de la
mezcla. Se realizó con gotas debido a que las
sustancias no son miscibles y la formación de
2 fases no permite una correcta realización de
la cromatografía.
En esta prueba se lograron finalmente separar
los componentes de la mezcla, aunque la
separación fue por una distancia muy pequeña,
esto se puede deber a que ambos colorantes
tienen interacciones similares con el solvente,
la principal interacción es el puente de
hidrógeno.
Para la primera mancha obtenida se obtuvo un
Rf de 0,85 y el obtenido por P3 fue de 0,84, es
decir que se obtuvo un error de 1,17%, para la
segunda mancha obtuvo un Rf de 0,95 y el
obtenido por P4 fue de 0,96, es decir un error
del 1,05%. Para ambos colorantes el error
obtenido fue bajo y además los colores en la
mancha de patrones y componentes separados
fue similar, lo que permitió confirmar la
presencia de rojo de metilo y p-nitrofenol en la
mezcla problema.
7. CONCLUSIONES
● La mezcla problema de colorantes era
polar, debido a que no diluyó con el
solvente apolar (éter de petróleo).
● El mejor eluyente para realizar la
cromatografía es aquel con índice de
polaridad entre 5 y 6. Es decir, un
solvente medianamente polar.
● La mezcla contenía los colorantes rojo
de metilo y p-nitrofenol.
8. CUESTIONARIO
I. ¿ Qué ocurre si al introducir la placa en la
cámara cromatográfica, el nivel del eluyente
alcanza el sitio de aplicación de la mancha?
Es un punto muy importante a considerar, pues
si el volumen del eluyente dentro de la cámara
alcanza el punto de aplicación de la muestra
problema y los patrones, se disolverán según la
polaridad y los datos serán erróneos o incluso
puede llegar al punto donde sea necesario
repetir todo el proceso, generando gasto de
reactivos y mayor tiempo. Para evitar que esto
pase, se recomienda medir con una regla la
cantidad que no pase de 1 cm de altura.
II. ¿Cuál es el efecto de la polaridad en la
cromatografía?
El efecto de la polaridad y los índices de
polaridad son factores influyentes a tener en
cuenta en las prácticas de cromatografía pues
es a partir de los niveles de polaridad que una
sustancia se desplaza a través de la fase
estacionaria. Se dice así que cuanto más polar
sea el compuesto de la muestra, más
firmemente se unirá a la fase estacionaria.
Inversamente en la fase sólida, cuanto más
polar sea, más fuertemente se unirá a un
compuesto de la fase móvil. Así, cuanto mayor
sea la polaridad del disolvente, mayor será su
capacidad para arrastrar y desplazar un
compuesto polar de la superficie estacionaria.
III. ¿Cuáles son las consecuencias de una
columna mal empacada?
Si el proceso de empaquetamiento y
distribución dentro de una columna para la
cromatografía queda mal, se pueden arrojar
resultados falsos e incluso hacer menos
efectiva la técnica. Es muy importante poner
las cantidades necesarias del adsorbente y la
mezcla de colorantes y no exceder los
volúmenes.
IV. ¿Cuáles son las diferencias entre
cromatografía líquida y de gases?
La diferencia principal entre estas dos técnicas
es que en la cromatografía líquida la fase
móvil es un líquido, mientras que para
desarrollar la cromatografía de gases,la fase
móvil es un gas. Otra diferencia es que esta
última solo se puede realizar en columna
mientras que la fase líquida se puede realizar
tanto en columna como en una hoja. La
cromatografía líquida se puede emplear para
separar cualquier mezcla soluble mientras que
la de gases solo sirve emplearse para
separación de composiciones volátiles y
mezclas gaseosas.
V. Profundización sobre fluorescencia para
sustancias incoloras.
En una práctica de cromatografía de capa fina
se pueden emplear sustancias incoloras pero
esto implica el uso de métodos especiales para
su localización.Con frecuencia se usa una
lámpara ultravioleta o un revelador. Para el
caso de la lámpara algunas sustancias que son
incoloras a la luz ordinaria o en las
condiciones de trabajo presentan fluorescencia
a la luz ultravioleta. Si lo anterior no ocurre se
pueden emplear ciertos reactivos con lo cual
los compuestos adsorbidos formen cierta
coloraciones y con ello estos funcionaria como
revelador.
VI. Parámetros de la cromatografía líquida de
alta eficiencia
Los siguientes son lo parámetros más
importantes a tener en cuenta cuando se quiere
desarrollar una HPLC.
Diámetro Interno: Según las dimensiones se
determina la cantidad de muestra que se puede
cargar a la columna. Las columnas que tienen
un diámetro interno mayor a 10 mm se utilizan
en la purificación de compuestos que se
utilizan luego, las que tienen diámetro interno
menor a 5 mm se utilizan en el análisis
cuantitativo de las muestras, y los disolventes
necesarios son reducidos.
Medida de las partículas: Entre más pequeñas
sean las partículas mayor es la superficie y una
mejor separación. Para las aplicaciones en
columnas de reparto y adsorción, la eficiencia
decrece notablemente con la cantidad de
muestra.
Tamaño de poro: Los poros pequeños
proporcionan una mayor superficie caso
contrario los poros de mayor medida
proporcionan una cinética mejor especialmente
al trabajar con compuestos de tamaño más
grande.
Presión del sistema: Las presión son variables
según el fabricante, tipo y modelo de las
columnas. Los instrumentos más modernos de
HPLC incorporan mejoras para lograr trabajar
a presiones altas, y por lo tanto poder utilizar
partículas de tamaño más reducido en las
columnas (<2 micrómetros).
VII. En qué orden (de arriba hacia abajo) se
puede esperar encontrar los siguientes
compuestos: naftaleno, ácido butírico, y presencia de más de uno, lo cual indicaría que
acetato de fenilo en un gel de placa de TLC de se tiene más de una sustancia.
sílice desarrollada con diclorometano.
El diclorometano es un disolvente de polaridad XI. De qué manera influye la saturación de la
intermedia, y de los tres compuestos el de cámara en el proceso de separación.
mayo polaridad es el ácido butirico, seguido Como la presión de vapor de los disolventes es
por el acetato de fenilo y por último, el menos baja, para garantizar una saturación buena en
polar, el Naftaleno. Así entonces el orden la cámara cromatográfica, una vez colocado el
sería: eluyente seleccionado se debe tapar la cámara
Naftaleno con un vidrio plano y esperar que se sature con
Acetato de fenilo el vapor del solvente. Esto con el fin de que
ácido butírico cuando la fase móvil se esté moviendo no se
seque lo que produciría problemas en el
VIII. Organice los siguientes compuestos en
desplazamiento de las muestras.
orden creciente de Rf empleando sílica como
fase estacionaria en cromatografía en capa
delgada: ácido acético, acetaldehído,
2-octanona, decano y 1-butanol. 9. BIBLIOGRAFÍA
En orden creciente de Rf quedaría así:
[1]​Guerrero,C. Polania,W. Parra,S. (2015).
Decano
Principios de química orgánica, guías de
acetaldehído
laboratorio. Editorial Académica Española.
2-Octanona
1-butanol Pag 20-.
Ácido acético [2] ​Schirmer,R. Modern Methods of
Pharmaceutical Analysis, Volume II. CRC
IX. ¿Qué efecto se produce si se siembra Press. Pagina: 305
mucha muestra en la cromatoplaca?
[3] Durst ,H.D.; Gokel ,G.W. Química
Esto es un factor importante al momento de Orgánica Experimental. Editorial Reverte S.A.
estar realizando las siembras de los patrones y Barcelona,España.1985.
la muestra problema pues no se recomienda
poner demasiada cantidad o saturar demasiado
los puntos pues cuando la fase móvil arrastre
estas muestras se van a formar colas, que
dificultan medir la longitud de desplazamiento
de la mejor maner. A este fenómeno se le
llaman formas de estelas.

X. Se observa una mancha con un Rf de 0,62

después de desarrollar la cromatoplaca para
una mezcla de reacción. ¿Prueba esto que
usted tiene solamente un producto presente?
Explique.
No, tener solamente este dato no permite
concluir inmediatamente que hay solo un
producto. Hay que comparar con sustancias
patrones y analizar la longitud de recorrido de
estos con la muestra problema. Además para
una mayor confiabilidad es bueno realizar
ensayo con varias fases móviles y determinar
si resulta un solo color o por el contrario hay