PRÁCTICA DE LABORATORIO No. 2.

ÁCIDOS NUCLEICOS

Las células contienen dos variedades de moléculas conocidas como ácidos

nucleicos: el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el ácido ribonucleico (ARN),
ambos participan en la transmisión, de información genética y en la
determinación de las proteínas que una célula debe producir. El ADN es el
material hereditario de las células y contienen instrucciones para la producción
de todas las proteínas que el organismo necesita.
El ADN contiene la información necesaria para dirigir la replicación y síntesis
de proteínas. Cada molécula de ADN está constituida por dos cadenas o bandas
formadas por un elevado número de compuestos químicos llamados
nucleótidos. Los ácidos nucleicos son polímeros de nucleótidos o
polinucleótidos. Los nucleótidos son unidades moleculares que constan de un
azúcar de cinco carbonos (pentosa), ya sea ribosa o desoxirribosa; un grupo
fosfato; y una base nitrogenada adenina, guanina, citosina y timina. En casi
todos los organismos celulares el ADN está organizado en forma de cromosomas
situados en el núcleo de la célula.

OBJETIVO

EXTRACCIÓN DE ADN

Materiales
- Mortero con pistilo
- Colador o centrífuga (licuadora)
- Vaso de precipitado de 100 ml (frasco de vidrio)
- Tubo de ensayo grande (frasco de vidrio)
- Varilla fina o asa de Henlle (tubo vidrio, empaque lapicero plástico)
- Matraz erlenmeyer 125 ml (frasco de vidrio)
- Muestra vegetal (cebolla redonda)
- 1 Kilogramo de Hielo
- Agua (destilada o mineral) (filtrada o hervida)
- Cloruro de sodio (Sal)
- Bicarbonato sódico
- Detergente líquido o en polvo
- Alcohol etílico 90 % (alcohol industrial, alcohol antiséptico)

FUNDAMENTO

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los

iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su
disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las
células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una
disolución tampón en la que se disuelve el ADN.
En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos
moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor
proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrá
fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas de él por acción del
detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y
detergente, para lo cual se utiliza alcohol etílico (industrial).

Procedimiento

Preparar el tampón o solución de lisis con los siguientes ingredientes y

mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:
50 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.
1,5 g cloruro de sodio sal (1/3 de una cucharita)
5 g de bicarbonato sódico (1 cucharita)
5 ml de detergente líquido (1 cucharita bajita)
2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda
haber en la cocina (cebolla, ajo, etc.) y cortarla en cuadraditos, y molerla en el
mortero con pistilo. Triturar la muestra con un poco de agua 5-10 ml
3. Mezclar en un matraz de 125 mL limpio 10 ml del triturado celular con 20 ml
del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar
después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar
por un colador lo más fino posible (tela). Lo ideal es centrifugar a baja velocidad
5 minutos y después pipetear el sobrenadante.
4. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10
ml de alcohol etílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol
por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará
flotando sobre el tampón.
5. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la
separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia
atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el
ADN quedará adherido a su estreno con el aspecto de un copo de algodón
mojado.

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que,

entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se
realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que
se unan al ADN.

Preguntas

1. ¿Cuál es la función del detergente en el experimento? Explique y esquematice

la acción.

2. ¿Cuál es la función química del cloruro de sodio en el experimento?

3. ¿Cuál es la función del alcohol en el experimento?

4. Al finalizar la experiencia se obtiene un mucus blanco y fibroso que sería el

ADN. ¿Es posible que la molécula de ADN se visualice a simple vista? ¿Por qué?
¿Y qué creen que contiene "el ADN" obtenido en el experimento?