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FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS Y PECUARIAS

BIOQUÍMICA AGRICOLA
PRACTICA Nº 2
IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

1. CARBOHIDRATOS O GLUCIDOS

Los carbohidrtaos o glucidos son las biomoleculas mas abundantes. En las plantas se forman
a partir de la Fotosintesis. Las funciones principales son la funcion energética (Formación de
ATP a partir de la glucosa) y estructural (Formando parte de estructuras de algunos seres
vivos (Celulosa, quitina)

Los carbohidratos se clasifican en Monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los


monosacáridos pueden ser aldosas y cetosas, que pueden ser desde triosas hasta heptosas, se
señalan algunos ejemplos:

• Triosa: Gliceraldehido
• Tetrosas: Eritrosa
• Pentosas: Ribosa, arabinosa.
• Hexosas: Glucosa, fructuosa, galactosa, manosa

Los disacáridos (oligosacáridos) se forman por la union (condensación) de 2 monosacáridos,


unidos por un enlace O-glucosídico (monocarbonilo o dicarbonilo), por ejemplo la lactosa
(presente en la leche) que esta formado por Glucosa y galactosa unidos por un enlace  (1-4)
glucosídico, la sacarosa (presente en el azucar de mesa) formado por glucosa y fructuosa
unidos por un enlace  (1-2) glucosídico, la maltosa (presente en la cerveza-cebada) formado
por 2 glucosas unidas por un enlace  (1-4) glucosídico.

Otros oligosacáridos, son los que estan formados por 3 a 10 monosacáridos unidos por
enlaces glucosídicos, que pueden ser reductores y no-reductores (dependiendo del OH
hemiacetalico).
Un disacarido importante es la celobiosa que se forma a partir de la hidrólisis de la celulosa,
esta formada por 2 D-glucosas unidos por un enlace  (1-4) glucosídico. Otros oligosacáridos
importantes son los que se encuentran unidos a proteinas y lipidos en la superficie de la
membrana celular con funciones de reconocimiento.

Los polisacáridos estan formados de mas de 10 a miles de monosacáridos que dependiendo


del enlace glucosidico tienen funciones diferentes, el enlace  glucosídicos (FUNCION
ENERGÉTICA) facilmente digeribles por enzimas (hidrolasas), y el enlace  glucosídicos
(FUNCIÓN ESTRUCTURAL), casi no son digeribles, a excepcion solamente por enzimas
producidos en ciertos organismos que producen celulasas (Org. Simbioticos en las vacas,
termitas) o quitinasas.

Se clasifican en homopolisacáridos y heteropolisacáridos (en ambos lineales y ramificados).


Algunos ejemplos de homopolisacáridos son el almidón (amilosa formada por enlaces  (1-
4) y amilopectina fromada por enlaces  (1-4) lineal que forma helices cada 6 glucosas y 
(1-6) que crea ramificaciones cada 12 glucosas) , el glucógeno (celulas animales, igualmente
con enlaces  (1-4) lineal y  (1-6)), la celulosa formada por enlaces  (1-4). El almidón se
almacenan como reserva energética en los cloroplastos, amiloplastos en tuberculos como la
papa, semillas, raices como la zanahoria y tambien se almacena como dispersiones
coloidales, esto permite su almacenamiento en grandes cantidades. La hidrólisis del almidón
se produce por la acción de las  amilasas que actua sobre los enlaces  (1-4), la  amilasas
actua en el enlace (1-4 ) del extremo reductor dando como resultado disacáridos, de la accion
de las amilasas se producen glucosas, maltosas y dextrinas (ramificaciones (1-6)).

El glucógeno se alamacena en los musculos, pero sobretodo en el higado, se ramifican cada


10 carbonos con enlaces  (1-6), por lo que presenta mas ramificaciones que el almidón. La
pseudohidrólisis del almidón se denomina Glucógenolisis hecha por una glucógeno
fosforilasa ( (1-4)) que añade un grupo fosfato, por lo que se obtiene glucosas fosfato y una
glucógeno desramificante ( (1-6)).
La celulosa es un polisacárido de -D-glucopiranosas ( glucosas) unidos por enlaces 
glucosidico, enlace que no permite que la cadena lineal se enrolle como en el almidón que lo
hace cada 6 glucosas, por lo que las cadenas lineales una sobre otra permiten la formacion de
puentes de hidrogeno en lo OH de las cadenas, lo que lo hace resistentes, por lo que forman
parte de las estructuras (fibras celulósicas en diferentes direcciónes). La celulosa forma parte
de las paredes celulares de las celulas vegetales. Otro ejemplo en animales es la quitina que
forma parte de la estructura de exoesqueletos de insectos, de hongos (N-acetil -D-
glucosamin o glucosa 2-amina)

Algunos heteropolisacáridos son la agarosa de algas rojas (L galactosa-D galactosa) de


estructura lineal, en animales el acido hialuronico de los tejidos (2-amino-2-deoxy-D-
glucosa-Ácido D-glucurónico)

2. IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

2.1. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

• Identificar muestras de carbohidratos


• Realizar la hidrólisis de carbohidratos

2.2. REACTIVOS

• Muestras de glucidos (Soluciones)

o Glucosa
o Fructuosa
o Lactosa
o Maltosa
o Sacarosa
o Almidón
• Reactivo de Fehling A y B
• Lugol
• HCl diluido
• Bicarbonato

2.3. MATERIALES

• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Vaso de precipitado para calentar
• Mechero
• Pinzas para Tubos de ensayo
• Cinta adhesiva de papel
• Matraz Erlenmeyer

3. FUNDAMENTOS

3.1. REACCIÓN DE FEHLING.

El reactivo de Fehling consiste en 2 soluciones acuosas:

• Sulfato de cobre cristalizado: 35 g y agua destilad hasta 1.000 mL.


• Sal de Seignette: Tartrato mixto de potasio y sodio 150 g, solución de hidróxido de
sodio al 40 %, 3 g y agua hasta 1.000 mL.

Su fundamento se basa en el en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos


presente en los monosacáridos de tipo aldosas. Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre
en medio alcalino a óxido de cobre (Cu2O), formando un precipitado de color rojo.
Si un azúcar reduce el reactivo de Fehling a óxido de cobre rojo, se detecta un azúcar
reductor, por ejemplo la glucosa.
En resumen: Este método consiste en la reducción directa de iones cúpricos divalentes
(Cu2+), a iones cuprosos monovalentes (Cu+ ) (1). En presencia de calor, los iones cuprosos
reducidos forman óxido cuproso (Cu2O) (2), precipitado rojo ladrillo

3.2. REACCIÓN DE LUGOL

Es una técnica utilizada para la identificación de polisacáridos. Esto se lleva al cabo al poner
el almidón en contacto de con unas gotas del reactivo de lugol que es una solución de yodo
(I2+KI) produciendo un color púrpura o violeta profundo.

Su fundamento se basa en una “pseudoreacción” que es el resultado de la formación de


cadenas de poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el yodo presente en la solución
de un reactivo de Lugol. La amilosa, de cadena lineal, forma hélices donde se juntan las
moléculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro. La amilopectina,l componente
del almidón de cadena ramificada, forma hélices mucho más cortas, y las moléculas de yodo
son incapaces de juntarse, obteniéndose un color entre naranja y amarillo.
Al romperse o hidrolizarse el almidón en unidades más pequeñas de carbohidratos, el color
azul-negro desaparece. Por lo que esta prueba puede determinar el final de una hidrólisis,
cuando ya no hay cambio de color constituyendo una evidencia experimental ampliamente
utilizada.

La solución de yodo también reaccióna con el glucógeno, aunque el color producido es más
castaño y mucho menos intenso.

Vista esquemática de una hélice de amilosa, con iones I3− embebidos.

3.3. AZUCARES NO REDUCTORES (HIDRÓLISIS DE CARBOHIDRATOS)

Esta tecnica se fundamenta que la sacarosa es un azúcar no reductor, por lo que presentará
una reacción de Benedict o Fehling negativa. Pero, si la sacarosa se hidroliza en medio ácido
(HCl) y calentamiento, se rompe el enlace glicosídico  (1-2), y libera a sus dos
monosacáridos constituyentes, glucosa y fructosa, los cuales son azúcares reductores.
4. METODOLOGÍA

4.1. REACCIÓN DE FEHLING

• Rotular 6 tubos de ensayo: 1 glucosa, 2 Fructuos, 3 Lactosa, 4 Maltosa, 5 Sacarosa,


6 Almidón
• Al tubo que corresponda depositar 3 ml de la solución a analizar.
• Añadirle a cada tubo 1 ml. del Rx Fehling A y 1 ml. del Rx Fehling B. Todas las
soluciones adquieren un color azul fuerte, casi negro.
• Calentar los tubos al baño Maria o uno por uno directamente al mechero alejando el
tubo del rostro con direcccion opuesta a nuestra posicion.
• La Reacción sera positiva si la muestra adquiere un color rojo-ladrillo.
• La reacción sera negativa si el color azul se mantiene o cambia a azul-verdoso.

4.2. REACCIÓN DE LUGOL

• En un tubo de ensayo o matraz erlenmeyer pequeño depositar 3 ml del carbohidrato


a analizar.
• Añadirle unas gotas de la solucion de lugol.
• Si la disolucion del tubo cambia de color a un color azul-violeta fuerte, a muestra es
positiva.

4.3. HIDRÓLISIS DE CARBOHIDRATOS

La prueba de Fehling demostros que la sacarosa no es un azucar reductor. Ya que no tiene un


carbono hemiacetalico libre (OH libre).

• A un tubo de ensayo o matraz erlenmeyer pequeño añadirle 3 ml. de solución de


sacarosa.
• Añadirle 10 gotas de HCl 10%.
• Calentar directo al mechero 3 min. aproximadamente y dejar enfriar.
• Realizar la prueba de Fehling
• Para asegurar una buena coloración neutralizar con Bicarbonato.
• Si la reacción sale positiva, se logro romper el enlace O-glucosídico de la sacarosa

5. PRESENTACION DEL INFORME DE PRACTICA

• Introducción
• Objetivos
• Material y reactivos.
• Procedimiento
• Resultados
• Conclusiones.

Gestión 01/2020 Docente: Dr. Juan Guaraguara Karita

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