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LABORATORIO MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

SEGUNDA PRÁCTICA
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
Basados en la GTC 78
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DEFINICIÓN

En el laboratorio de microbiología, muchos ensayos y procedimientos dependen de que los


medios de cultivo sean homogéneos y produzcan resultados reproducibles. Los medios de
cultivo se usan con todas las técnicas de cultivo tradicionales y también muchas técnicas
alternas.
En los laboratorios donde se hacen exámenes microbiológicos de alimentos, el objetivo
principal es mantener, resucitar, hacer crecer, detectar y/o enumerar una gran variedad de
microorganismos. Los medios de cultivo por tanto deben cumplir con criterios establecidos de
desempeño para garantizar un trabajo microbiológico confiable.

Los medios de cultivo deben demostrar la aceptabilidad de cada lote, que el medio es
adecuado para el fin y que puede producir resultados consistentes.

1. MATERIALES

- Espátula
- Papel para pesar
- Frascos tapa rosca
- Tubos de ensayo
- Cajas de Petri

2. INGREDIENTES A UTILIZAR

- Agar OGY
- Agar nutritivo
- Papa
- Avena
- Sacarosa
- Tomate
- Harina de maíz
- Agua destilada

3. EQUIPOS

- Balanza
- Licuadora
- Autoclave
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4. PROCEDIMIENTO

Medios definidos:

Realice los cálculos correspondientes para la preparación del medio, teniendo en cuenta el
recipiente en que se va a envasar (Siga las indicaciones del fabricante)

Medios indefinidos:

PDA (papa-dextrosa-agar)

Ingredientes:
Papa 200gr               
Agar 15gr.             
Sacarosa 20gr.
Agua destilada aforar a 1000 ml

Procedimiento:
           
Partir 200 gr. de papa sin cáscara  y  cubrirlo con agua destilada.
Se deja hervir durante 15 min. Concluido éste tiempo se cuela la infusión o caldo de papa a través
de un lienzo.
 
Se disuelve el agar en 500 ml. de agua destilada, calentando ligeramente, se le agrega la sacarosa y
se disuelve.
 
Se añade la solución  de agar sacarosa  al caldo de papa mezclando bien y se afora  con agua 
destilada a 1000 ml. y se esteriliza.

AvA (avena-agar)
 
Ingredientes:
 
Avena 60 gr            
Extracto de levadura 2 gr
Agar 12 g           
Agua destilada aforar a 1000 ml
 
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Procedimiento:
 
Pese 60 gramos y adicione 600 ml de agua, hervir durante 30 min, licue y filtre la infusión a través
de un lienzo. Disolver el agar en 400 ml de agua destilada calentado ligeramente. Disolver el
extracto de levadura en la solución de agar. Añadir a esta solución la infusión de avena, mezclar
bien y aforar  con agua destilada a 1000 ml. Esterilizar

JTA (jugo de tomate-agar)


 
Ingredientes:
 
Jugo de tomate natural 60 ml.    
Ca Co3 0.6gr.
Agar 14gr.     
Agua destilada aforar a 1000 ml.                                                                         

 
Procedimiento:
 
Se licuan  los tomates con agua destilada y se cuelan  a través de un lienzo. El jugo se mezcla con el
CaCo3, se agita bien y se deja reposar durante 10 min, se  junta todo el líquido agitado  hasta
completar la cantidad requerida. Se disuelve el agar en otro poco de agua  destilada (800ml)  y se
añade la solución  de tomate, mezclando bien. Se afora a 1000 ml. Se esteriliza.

HMA (harina de maíz-agar)

Ingredientes:
 
Harina de maíz 20gr.        
Peptona 20gr.
Sacarosa 20gr. 
Agar 20gr.       
Agua destilada aforar a 1000 ml.      
 
Procedimiento:
 
En 500 ml. de agua destilada se agrega la harina de maíz y se calienta por 1 hora a 60º C se licua y
se filtra la infusión a través de un lienzo. Disolver el agar, la sacarosa y la peptona en 300 ml de
agua destilada calentando ligeramente. Añadir el líquido filtrado a la solución de agar-sacarosa-
peptona y aforar con agua  destilada a 1000 ml. Esterilizar.
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Prueba de esterilidad

Lleve de cada uno de los medios preparados luego de la esterilización a incubación durante 24
horas a 37ºC. Si después de este tiempo se observa crecimiento microbiano, los medios se
deben descartar y se deben investigar las causas del fracaso de la esterilización