En esta práctica se utilizan colorantes preferentemente básicos, es decir, al ionizarse la

parte de la molécula que contiene el color, esta está cargada positivamente, lo cual le da
afinidad por la estructuras celulares de carga negativa; las bacterias en su superficie
tienen una carga neta negativa en medio neutro o alcalino, por lo que un colorante ácido
no favorecería la tinción, sin embargo a veces son útiles para revelar las capas
superficiales con bajo índice de refracción, como la cápsula.

Una endospora es una estructura resistente y latente que se conocen a agentes físicos y
químicos debido al número y estructura química de las cubiertas, se forma dentro de una
célula y brinda protección a una bacteria. Las endosporas son impermeables a colorantes,
sin embargo se tiñen cuando se les aplica calor a la preparación previamente cubierta con
solución de colorante.

Para la tinción de endosporas se utiliza el método de Schaeffer-Fulton, Primero se aplica

verde de malaquita sobre un frotis de células bacterianas bien se sabe que el verde de
malaquita es un colorante débilmente básico (con carga positiva débil) y que por lo tanto
se une débilmente a la bacteria, penetra en la celula vegetativa y posteriormente cuando
la preparacion se fija al calor también penetra las esporas. Un colorante soluble en agua
por cuya razón no se utiliza habitualmente en tinciones convencionales. El calor modifica
la permeabilidad de la endospora y permite la entrada del colorante a través de las capas
externas de la endospora. Durante el lavado con agua, el verde malaquita se elimina de las
células vegetativas pero no de la endospora. El colorante de contraste que es safranina de
color rojo solo tiñe a las células vegetativas que fueron decoloradas por el agua.

Finalmente lo que se va a distinguir son las esporas de color verde.

La morfología y disposición de la endospora en el interior de los microorganismos tiene

valor taxonómico