Bases analíticas del Eritrograma:

Recuento de eritrocitos. Dosaje de Hb y determinación del Hto

Recuento de eritrocitos:

1. Recuento manual
Obtener la cantidad de eritrocitos por uL a través de un cuentaglóbulos o hemocitómetro
Nos da poca exactitud y precisión (aproximativo)

Cámara cuentaglóbulos:
El conteo se realiza en una microcámara de cristal excavada en un portaobjetos que se cierra mediante un
cubreobjetos. Nos permitirá realizar una dilución de las células sanguíneas y posteriormente se puede
observar en el microscopio, a través de una cámara de Neubauer “modelo de retículo” (consta de 9
cuadrados grandes.
Recuente de eritrocitos: parte central (presenta mayor número de líneas de referencias)
4 cuadrados de las esquinas: recuento de leucocitos y plaquetas

Material:
1. Sangre capilar o venosa (utilizando EDTA)
2. Líquido de dilución: Líquidos neutros o isotónicos (para evitar la lisis de los eritrocitos)
3. Pipeta de dilución (Pipeta diluidora de Thoma o microcapilar calibrado “pipeta calibrada”)
4. Microscopio

Método:
1. Enrasar la pipeta de dilución para eritrocitos hasta 0,5 o 1 con sangre total
2. Se aspira el líquido de dilución isotónico hasta 1.101
3. Se agita suavemente el contenido del bulbo, una vez desechadas las tres primeras gotas
4. Se llena la cámara de cuentaglóbulos por capilaridad
5. Se observa al microscopio mediante el objetivo de 40X
6. Se hace el conteo de los glóbulos rojos

Conteo realizado en zig-zag

Cada cuadrado tiene 16 cuadrados pequeños (16x5 cuadrados= 80 cuadraditos)

Fórmula para hacer el conteo exacto:

- Cuadrado grande central: 25 cuadrados medianos
- Se multiplica por 5 cuadraditos (representa la quinta parte de los cuadraditos en total)

RBC = H x 5 x 10 x D
H: Hematíes contados en 5 cuadrados medianos
D: factor de dilución (100 “1” o 200 “0.5”)
RBC: recuento de hematíes (número de hematíes por mm3 de sangre)
Causas de error en el recuento celular mediante cámara cuentaglóbulos
- Extracción sanguínea (punción capilar: no despreciar las primeras gotas “efecto sobre el recuento
de plaquetas debido a su adherencia al tejido lesionado”, punción venosa: agitación insuficiente de
la misma)
- Envejecimiento del espécimen (lisis de leucocitos)
- Pipetas de dilución (o capilares): mal calibradas, sucias o húmedas, no eliminar el exceso de sangre
de las paredes antes de introducir la pipeta en el líquido de dilución, llenado incompleto o excesivo
de la pipeta de dilución (presencia de burbujas de aire en el capilar), falta de insuficiente agitación
de la sangre diluida en la pipeta o tiempo de espera insuficiente.
- Cámara cuentaglóbulos: no desechar las tres primeras gotas de la pipeta antes de llenar la cámara
cuenta glóbulos, mal ajustada, sucia o mojada, llenado incompleto de esta, empleo de un
cubreobjetos deformable (no rígido), células mal distribuidas en el fondo de la cámara.
- Errores al realizar el recuento
- Errores al efectuar los cálculos

2. Recuento de eritrocitos automatizados

- Más precio y exacto que el manual
- Índices hematimétricos derivados de este son más confiables y de mayor valor en la interpretación

Valores de referencia:
Hombres: 4.4M – 6M/mm3
Mujeres: 3.9M – 5.4M/ mm3
Aumento del valor de eritrocitos: eritrocitosis (a la par con un aumento de Hb “poliglobulia”)
Disminución de eritrocitos: eritrocitopenia (a la par disminución de Hb “anemia”)
Interviene: las hormonas, la testosterona (genera una mayor producción de eritropoyesis)

Eritrocitosis absoluta: aumenta de la masa eritrocitaria

Eritrocitosis relativa: masa de eritrocitos normal, pero hay disminución del volumen plasmático (en
pacientes con deshidratación, vómitos, diarreas, quemaduras…)

Dosis de Hemoglobina
Ayuda a determinar el diagnóstico de Anemia
Métodos:
Espectrofotómetro o fotómetro fotoeléctrico
- Hemoglobincianida
- Oxihemoglobina
Hemoglobina de lectura directa
Escala de color para la Hemoglobina de la OMS
Método de sulfato de cobre
Método manual de la cianometahemoglobina o Hemoglobincianida
- Hemolizar la muestra sanguínea para liberar la Hb del interior de hematíes y obtener una disolución
de hemoglobina con la cual trabajar
- Al liberar este pigmento, será medido por un espectrofotómetro en función de la luz absorbida o
transmitida (blanco, muestra, estándar)
- Convertir la Hb en cianometahemoglobina por acción de la mezcla de ferrocianuro y cianuro
potásicos (forman parte del reactivo de Drabkin)
- La transformación de la Hb en cianometahemoglobina tiene lugar en el siguiente proceso:
Hb + ferrocianuro potásico = metahemoglobina (MetaHb)
MetaHb + cianuro potásico = CianmetaHb (Cianometahemoglobina)
- Determinar la absorbancia de la disolución de la cianometahemoglobina con una lectura a 540nm

1. Pipeteamos el reactivo de Drabkin

2. Lo echamos en las 3 cubetas correspondientes
3. Cogemos la sangre (pipetear)
4. Le echamos en la cubeta que le corresponda
5. Cogemos el Standard
6. Lo echamos en la cubeta correspondiente
7. Mezclamos y esperamos 3min
8. Configuramos el espesctrofotómetro con el blanco
9. Leemos el Standard a 540nm
10. Leemos la muestra
11. Realizamos los cálculos
Se multiplica con la Hemoglobina patrón del Standard, predeterminado

g Absorbanciaa 540 nm de la muestra

Hb ( )
dL
=
Absorbancia a 540 nmdel patrón
x [ Hb ] del patrón

Hemoglobinómetro
- Lectura rápida, simple manejo
- Elevada fiabilidad
- Con una pequeña muestra
- Reporta en g/dL
Escala de color:
Consiste en colocar la muestra en el circulo en blanco, de manera que se compare el color de la sangre del
paciente con el color de la muestra, si el paciente tiene anemia, el color ira descendiendo, mientras más
disminuya el color aumenta la intensidad de la anemia.

Normal: 12g/dL
Anemia moderada: 8-11 g/dL
Anemia intensa: 6-7 g/dL
Anemia muy intensa: 4-5g/dL
Según la OMS

POBLACIÓN SIN ANEMIA ANEMIA

LEVE MODERADA SEVERA
Niños de 6 a 59 meses 11 o superior 10 – 10.9 7- 9.9 <7
Niños de 5 a 11 años 11.5 o superior 11-11.4 8 -10.9 <8
Niños de 12 a 14 años 12 o superior 11- 11.9 8- 10.9 <8
Mujeres no embarazadas 12 o superior 11-11.9 8-10.9 <8
(15 años o mayores)
Mujeres embarazadas 11 o superior 10- 10.9 7 -9.9 <7
Varones (15 años o mayores) 13 o superior 10-12.9 8-10.9 <8

*En g/dL

ANEMIA:
Edad y sexo Concentración de Hb
Niños de 6 meses - 6años < 11g/dL
Niños de 6 – 14 años < 12g/dL
Varones adultos < 13g/dL
Mujeres adultas < 12g/dL
Embarazadas < 11g/dL

POLIGLOBULIA:

SEXO Concentración de Hb
VARONES 16.5 g/dL
MUJERES 16 g/dL

Hematocrito
- El nombre que se le da a la fracción de volumen eritrocitario
- Corresponde al volumen ocupado por los eritrocitos en relación al volumen total de la sangre
- Se expresa en valor porcentual (%) o absoluto (ejemplo: 0.47)
- Puede ser:

Directo: Por centrifugación (microhematocrito y macrohematocrito “más en desuso”)

Indirecto: En contadores automáticos

- Su valor es DP con la [] Hb
- Su media constituye el procedimiento más simple para el diagnóstico de anemia
- Considerar: el valor Dx del Hto depende en gran medidad de que el volumen plasmático sea normal

- Descenso del volumen de plasma (Hemoconcentración) “muestra hemoconcentrada”:

Aumento relativo del Hto y Hb (por tanto, una falsa eritrocitosis o poliglobulia)
- Aumento del volumen plasmático (Hemodilución) “muestra hemodiluida”:
Producirá un descenso del Hto y Hb (por tanto, falsa anemia)
 Situaciones que pueden falsear el valor de la [ ] de Hb y Hto
 Casos de hemodilución: embarazo, anemias carenciales, Insuficiencia RA, Insuficiencia cardíaca
congestiva, Macroglobulinemia de Waldenström, Hipoalbuminemia, Esplenomegalia congestiva
(Hiperesplenismo), Ortostatismo
 Casos de hemoconcentración: deshidratación, síndromes diarreicos e inflamatorios crónicos del
intestino, paracentesis abdominal, diálisis peritoneal, acidosis diabética, diabetes insípida con
disminución de la ingesta de líquidos, estrés (poliglobulia espúrea)
 Casos de hemoconcentración y hemodilución: Hemorragia aguda, neoplasias, mixedema,
enfermedad de Addison, panhipopituitarismo.

Valores Referenciales del Hto (± 2DE)

Unidades clásicas (%) Unidades SI (l/l)

Recién nacidos 54 ± 10 0,54 ± 0,1
Niños (hasta 10 años) 38 ± 5 0,38 ± 0,05
Mujeres:
- 18-50 años 42 ± 5 0,42 ± 0,05
- Embarazadas 39 ± 5 0,39 ± 0,05
Hombres (18-50 años) 45 ± 5 0,45 ± 0,05

CONSIDERAR:
- Un Hto a partir de sangre venosa es siempre algo inferior al de sangre capilar
- Valor de Hto mediante sistemas electrónicos (analizadores hematológicos automatizados), tiene
también un valor al inferior al obtenido por centrifugación “No considera el plasma atrapado en los
eritrocitos”
Cuando tenemos una Muestra centrifugada:
- existe plasma atrapado entre los eritrocitos (factor de error, posible efecto de leucocitos y
plaquetas al realizar la lectura)
- a pesar de la elevada fuerza centrífuga aplicada a la que se somete la columna de sangre total,
siempre permanece cierta cantidad de plasma atrapado entre los eritrocitos

Método de referencia para determinar el valor del Hto:

 Micrométodo: centrifugación de sangre total en tubo capilar

 Macrométodo: mediante tubo de Wintrobe, menos recomendable debido a su mayor grado de
inexactitud e imprecisión

Ambos se basan en la centrifugación (miden el empaquetamiento de la columna de eritrocitos cuando la

sangre total con anticoagulante se somete a la acción de una fuerza centrífuga)
Microhematocrito
- Consiste en aplicar a la sangre total colocada en un tubo capilar una fuerza centrífuga de 12 – 15 x
103 r.p.m. por su mayor rapidez, simplicidad y fiabilidad, es el método recomendado por el ICSH y el
CLSI.

Materiales:
 Sangre total tratada con EDTA-K3
 Tubos capilares de vidrio desechables y no graduados
 Capilares con heparina: contienen heparina a la [ ] de 2 UI y una franja roja en uno de sus extremos
 Capilares sin anticoagulante: carecen de la franja roja. Se recomiendan en la práctica clínica
 Cera o plastilina para cerrar uno de los extremos del tubo capilar una vez lleno de sangre
 Centrífuga de hematocrito con radio superior de 8cm, que permite aplicar una fuerza centrífuga que
varía entre 10.000 y 15.000 r.p.m.
 Lector de microhematocrito -> capaz de indicar la relación entre la longitud total de la columna
sanguínea y la columna de eritrocitos

Métodos:
1. Llenar hasta un máximo de ¾ partes de la capacidad del tubo capilar con sangre total y se sella un
extremo de este con cera o plastilina
2. Se centrifuga el capilar durante 5 min (o 10 min si el Hto es > 0,5), la T° no debe ser > 40°C durante
todo el tiempo que duré la centrifugación
3. Para leer el resultado puede emplearse un lector de microhematocrito (si no se dispone de este,
puede terminarse mediante una simple regla graduada)

Macrohematocrito
- Muestra de sangre total con EDTA-K3, con un tubo de Wintrobe (diámetro interno 3mm) y una
centrifuga (brazos con longitud de 15 cm), medida desde el eje de rotación hasta la base de los
recipientes que contienen los tubos y que tenga un plano de giro horizontal
- La fuerza centrífuga aplicada es de 2.000 a 3.000 r.p.m.
- Una pipeta Pasteur con extremo largo (15cm mín. para el llenado de los tubos de Wintrobe)

Métodos:
1. Se llena el tubo de Wintrobe con sangre total bien homogeneizada utilizando la pipeta Pasteur
2. Una vez finalizado el llenado, la parte superior de la columna de sangre se halle a la tura de la
marca 10 grabada en el tubo
3. Se centrifugan los tubos (2.000-2.300 r.p.m.) durante 30 min, la temperatura de la centrífuga no >
40°C. Si el Hto es superior a 0,55, el tiempo total de centrifugación debe ser de 1h.
4. La lectura del resultado se realiza valorando la altura en milímetros de la columna eritrocitaria, que
corresponde a una fracción de la longitud original de la columna sanguínea (100 mm). Debe
excluirse de la lectura la columna de leucocitos y plaquetas

Lectura del tubo graduado: se mide directamente el nivel de la columna de G.R

Por varios motivos: principalmente inexactitud, necesidad de mayor cantidad de muestra, más tiempo para
el examen, esta técnica cayo en desuso.
 CAUSAS DE ERROR EN LA DETERMINACIÓN DEL HTO POR CENTRIFUGACIÓN
Manejo defectuoso de la muestra
- Empleo de una relación sangre/anticoagulante incorrecta. Exceso de EDTA con relación a la
cantidad de sangre (falso descenso del hematocrito por retracción de eritrocitos)
- Insuficiente anticoagulante (coagulación parcial)
- Extracción de sangre con condiciones defectuosas (hemoconcentración, hemodilución o hemólisis)
- Oxigenación excesiva de la sangre (falso descenso del valor del Hto)
- Retraso (>6h) en la realización de la determinación después de haberse extraído la sangre (falso
aumento del valor de Hto)
- Sangre obtenida directamente de un catéter, puede producirse su dilución en suero, líquido de
perfusión o anticoagulante local
- Temperatura de ambiente elevada y se emplea heparina como anticoagulante, debe conservarse a
4°C hasta el momento de realizar la determinación
- Homogenización defectuoso de la sangre antes de llenar el capilar

Fallo en la realización de la técnica

- Error en la identificación de los tubos
- Empleos de tubos no excesivamente limpios o húmedos
- Variaciones en el calibre del tubo empleado o uso de cpailares con medidas incorrectas
- Llenado insuficiente de los tubos (Wintrobe o capilares) con la sangre total
- Empleo de una fuerza centrífuga insuficiente
- Recalentamiento de la centrífuga (temperatura de centrifugación excesiva > 40°C) por uso excesivo
prolongado de la misma (causa de hemólisis)
- Fallo del sellado y pérdida del contenido del tubo capilar (método de microhematocrito)

Hematocrito en contadores automáticos:

- Más exacto que en centrifugación
- Eliminan los inconvenientes de métodos manuales
- Facilitan la obtención de más información en menos tiempo y costo menor
Ventajas: rapidez, eficiencia, exactitud, precisión, nuevos índices (RDW, etc)
Causas de error:
Falso aumentos del valor hematocrito
- Falso aumento de VCM: empleo de sangre envejecida, leucocitosis intensa, estados hiperosmolares
- Disminución ficticia de la [ ] de eritrocitos: panaglutinación celular por efecto del EDTA
Falso descenso del valor del hematocrito
- Falsa disminución de VCM: empleo excesivo de EDTA líq, T° amb elevada, estados hiperosomolares
- Disminución ficticia de la [ ] de eritrocitos: hemólisis in vitro, microcitosis extrema (< 50fl),
presencia de crioaglutininas.
Alteraciones del hematocrito por defectos del autoanalizador
- Sistema electrónico defectuoso
- Equipo mal calibrado
- Aspiración defectuosa de la muestra
- Depósitos de proteínas en el orificio de apertura
- Alteraciones del líquido de lavada
Poliglobulia por Hto (>48% en mujeres)