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Extracción y determinación de rosa de bengala en muestras de agua mediante

microextracción de líquido dispersivo-líquido acoplado a espectrofotometría UV-Vis

Resumen
Este artículo describe el desarrollo de un nuevo método basado en la preconcentración de dispersión
líquida - microextracción líquida (DLLME) para la determinación de residuos de rosa de bengala
(RB) en el agua. La rosa de Bengala extraída se separó, identificó y cuantificó por
espectrofotometría UV-Vis. Se optimizaron los factores de influencia relevantes para DLLME, tales
como el tipo y volumen de disolvente extractor y dispersante, pH, efecto salino, tiempo de
extracción. Bajo las condiciones óptimas, el límite de detección para Rose Bengal fue de 0.05lg /
mL. El método propuesto se aplicó a la determinación de Rose Bengal en muestras de agua con
resultados analíticos satisfactorios. El método propuesto fue simple, rápido, rentable y sensible para
la detección de Rose Bengal.
Introducción.
En los últimos años, ha habido muchos informes de aplicaciones (Grego et al., 2013; Nakonechny et
al., 2013; Wang et al., 2013) y también nuevos usos (Tan y Neuhaus, 2013) de Rose Bengal. El tinte
de rosa de Bengala (RB) es un xanteno aniónico soluble en agua (4,5,6,7- tetracloro- 20,40,50,70-
tetraodio- de sal de disodio de fluoresceína) (Fig. 1). Es capaz de la conversión fotocatolítica de las
moléculas de oxígeno (O2) para producir oxígeno simple (1O2) tras la irradiación con luz verde.
Por lo tanto, se ha considerado un sensibilizador prometedor en la terapia fotodinámica (TFD) de
tumores (Theodossiou et al., 2003; Wachteret al., 2003). Se ha utilizado como sensibilizador
fotodinámico para la quimioterapia contra el cáncer, como agente fotosensibilizante para inactivar
especies biológicas como el virus vaccinia, microsomalglucos e-6-fosfatasa y tripsina (Thinakaran
et al., 2008), así como un diagnóstico oftálmico tópico. RB ha sido explotado como un
sensibilizador prometedor en el tratamiento de aguas residuales debido a su solubilidad en agua,
absorción en la región visible, buen rendimiento cuántico de oxígeno singlete y bajo costo (Chang
et al., 2008). Sin embargo, debido al nivel de toxicidad del tinte y su descarga en ríos desde
diferentes laboratorios, es esencial desarrollar un método efectivo para su eliminación, recuperación
y determinación en aguas residuales.
Debido a la baja concentración y la complejidad de las muestras ambientales, generalmente es
necesario un paso de preconcentración eficiente antes de la determinación. Líquido dispersivo: la
microextracción de li-líquido (DLLME) es un nuevo modo de LPME (Re-zaee et al., 2006).
DLLME es una técnica de pretratamiento de muestras ambientalmente beneficiosa muy popular
(Herrera-Herreraet al., 2010; Ojeda y Rojas, 2009; Rezaee et al., 2010; Zanget al., 2009). Algunas
de sus ventajas notables son la simplicidad de operación, la rapidez, la alta recuperación y el alto
factor de enriquecimiento, y el bajo consumo de solventes y muestras (Herrera-Herrera et al., 2010;
Ojeda y Rojas, 2009).
En muchas aplicaciones, podrían emplearse otras técnicas, pero la espectrofotometría UV-Vis por
su disponibilidad, simplicidad, versatilidad, velocidad, precisión, precisión y rentabilidad, se utiliza
habitualmente en química analítica para la determinación cuantitativa de diferentes analitos, como
iones de metales de transición, compuestos orgánicos altamente conjugados y macromoléculas
biológicas. El espectrofotómetro ultravioleta y visible se ha convertido en un instrumento analítico
popular en los laboratorios modernos. Sin embargo, las bajas concentraciones de muchas muestras
de analitosina en las muestras reales complejas hacen que sea difícil medirlas directamente por
espectrofotometría UV-Vis. Además, el amplio ancho de banda en el espectro UV-Vis de la especie
hace que la técnica no sea selectiva. Por lo tanto, es necesario un paso de preparación de muestra
antes de las garantías espectroscópicas para mejorar la selectividad y la sensibilidad (Shokou fi et
al., 2007).
Hoy en día, el uso de la técnica DLLME y sus modos modificados en combinación con el
espectrofotómetro UV-Vis se ha vuelto muy popular debido a su utilidad, altos EF, velocidad,
simplicidad, bajo costo y respeto al medio ambiente. Esta técnica, que está disponible para
prácticamente todos los laboratorios analíticos, presenta algunos beneficios importantes, tales como:
los volúmenes insignificantes de disolventes de extracción utilizados, el área de superficie muy
grande entre las gotitas finas del disolvente de extracción y la muestra acuosa y la cinética de
extracción rápida correspondiente. resulta en el rápido logro de un estado de equilibrio (Ma y
Cantwell, 1999) y el alto factor de enriquecimiento generalmente obtenido (Kocu ́ rova ́et al., 2012).
DLLME puede modificarse fácilmente para un propósito particular y conectarse a otras técnicas de
preparación de muestras (Zgo’a- Grzeskowiak y Grzeskowiak, 2011).
Hasta la fecha, y hasta donde sabemos, no se ha publicado ningún informe sobre la medición de RB
en muestras de agua utilizando microextracción líquida-dispersiva líquida (ion de microextracción
de fase líquida por espectrofotometría UV-Vis). En este estudio desarrollamos un sistema de
microextracción líquido-líquido dispersivo para la determinación de RB en muestras ambientales
reales con resultados satisfactorios.

Figure 1Structure of Rose Bengal.


Experimental.
2.1. Aparatos
Las mediciones de absorbancia se realizaron en un espectrofotómetro de doble haz UV-Vis modelo
Rayleigh 2100 utilizando células de 1 cm de cuarzo. Se usó un medidor de pH digital Metrohm,
modelo 630 para todas las mediciones de pH. Se usó un modelo de centrífuga eppendorf 5810 para
acelerar la separación de fases.

2.2. Reactivos
Octanol, ortoxileno, paraxileno, cloroformo y diclorometano como solvente de extracción, metanol
(para espectroscopía), tono ace (para espectroscopía) y acetonitrilo (grado HPLC) como solvente
dispersivo, se obtuvieron de Fluka (Buches, Switzerla nd) . La rosa de bengala, el cloruro de sodio,
el cloruro de potasio y el dicloruro de calcio se compraron de Merckcompany. La solución madre
de RB (100.0 mgL 1) se preparó disolviendo 0.01 g de la RB en metanol y diluyéndola a 100.0 mL
en un matraz volumétrico, y se almacenó en la oscuridad. La solución madre de RB se preparó a
partir del grado de reactivo analítico. Las soluciones de trabajo de RB se prepararon diariamente
mediante la dilución adecuada. Todos los productos químicos utilizados en este trabajo, fueron de
grado reactivo analítico y se utilizaron sin más purificación.

2.3. Procedimiento de microextracción líquido-líquido dispersivo.


Se colocaron 5 ml de una solución estándar o muestra real en un recipiente de extracción. Se
inyectó rápidamente acetona (2,00 ml) como dispersor que contenía 300 ml de octanol (como
disolvente de extracción) en la solución usando una jeringa. Se formó una solución de nube (agua /
acetona / octol) en el recipiente de extracción. En este paso, la muestra de RB en agua se extrajo en
las finas gotas de octanol. La mezcla se centrifugó luego durante 5 minutos a 4000 rpm. Después de
este proceso, se recogieron las finas gotas dispersas de octanol y se disolvieron en metanol y se
transportaron a un espectrofotómetro UV-Vis r para medir su absorbancia atkmax (530 nm).

3. Resultados y discusión.
En este estudio, se desarrolló una técnica DLLME combinada con UV-Visspectrophotom etry para
la determinación de RB en muestras de agua. Con el fin de obtener una alta recuperación, se
examinó el efecto de diferentes parámetros tales como el tipo de extracción y los disolventes
dispersivos y los volúmenes de los mismos, se examinó el efecto del pH, el tiempo de extracción y
la fuerza iónica y se seleccionaron las condiciones óptimas. Para evaluar los parámetros explicados,
se han utilizado recuperaciones de extracción. Eq. (1) se utilizó para calcular la recuperación.

donde R%, Vcol y Vaq son la recuperación de extracción, el volumen de la fase recogida y el
volumen de la muestra acuosa, respectivamente. El Ccol se determinó a partir de un gráfico de
calibración. Todos los experimentos se realizaron por triplicado y la media de los resultados se
utilizó para trazar figuras y preparar tablas.

3.1. Efecto de los parámetros DLLME.


3.1.1. Selección de disolvente de extracción y disolvente dispersante.
Es esencial seleccionar un solvente orgánico adecuado para el proceso DLME. Para este propósito,
se consideraron cinco solventes que incluyen 1-octanol orto-xileno, paraxileno, cloroformo y
diclorometano. punto importante para la selección de un dispersador. Por lo tanto, se seleccionan
acetona, acetonitr e y metanol, que tienen esta capacidad, para este propósito. Para obtener una
buena eficacia, se examinaron todas las combinaciones que usan 1-octanol, orto-xileno, para-xileno,
cloroformo y diclorometano como extractante con acetona, acetonitrilo, metano como disolvente
dispersivo. De acuerdo con los resultados mostrados en la Tabla 1, la acetona como disolvente
dispersante y el octanol como disolvente de extracción proporcionaron una recuperación de
extracción máxima del 51,32%. Por lo tanto, seleccionamos acetona / octanol como un conjunto
adecuado para experimentos posteriores.
3.1.2. Efecto del volumen de extractante.
Para el método de extracción, se debe prestar especial atención al volumen de solvente extractante.
Este factor obviamente podría afectar la eficiencia de extracción del método propuesto. En este
trabajo se realizó la investigación del volumen de octanol. De acuerdo con la figura. 2, al aumentar
el volumen de octanol, las recuperaciones de extracción aumentaron hasta 300lL. Con el aumento
del volumen del extractante, la concentración de RB en la fase de sedimento disminuyó debido al
efecto de dilución. Por lo tanto, 300 ml fue el volumen razonable para el experimento. Después del
procedimiento de extracción, las muestras enriquecidas se diluyeron a 1,5 ml en metanol para la
determinación posterior.
3.1.3. Efecto del volumen del disolvente dispersante.
Para estudiar el efecto del volumen del dispersor en la recuperación de RB, se fijaron todas las
condiciones experimentales excepto el volumen de acetona (0,50–4 ml). Los resultados se muestran
en la fig. 3. Según los resultados obtenidos, las eficiencias de extracción aumentaron hasta 2 ml y
luego disminuyeron al aumentar el volumen de acetona para RB, esto puede deberse a que el estado
nublado no está bien formado y, por lo tanto, la extracción se disuelve. turbed. Por otro lado, en los
altos volúmenes de acetona, aumenta la solubilidad del RB en agua, por lo tanto, las eficiencias de
extracción disminuyen debido a que los coeficientes de distribución disminuyen. Se eligió un
volumen de 2,00 ml como volumen óptimo para el dispersador.
3.1.4. Efecto del pH
El pH es un parámetro analítico importante porque; tiene un efecto en el aumento de la eficiencia de
extracción. La influencia de pH en la extracción de RB del agua se estudió en el rango de pH de 1 a
12. Como se puede ver en la figura. 4, la intensidad de señal más alta de RB obtenida a pH 2. Por lo
tanto, se seleccionó pH 2 para estudios posteriores. Además, para ajustar el pH 2, se utilizó ácido
nítrico. A valores de pH más altos y más bajos, la absorbancia de RB disminuye.
3.1.5. Efecto de la fuerza iónica
La adición de sal mejora la eficiencia de extracción en muchos procesos de extracción
convencionales. Debido a que el coeficiente de distribución de fase del receptor orgánico / donante
acuoso puede mejorarse aumentando la fuerza iónica de la muestra acuosa (Pedersen-Bjergaard y
Rasmussen, 2008; Psillakisand Kalograkis, 2003; Rasmussen y Pedersen-Bjergaard, 2004). El
fenómeno ayuda a mejorar la afinidad de la fase del receptor por las moléculas de analito. El cloruro
de sodio (NaCl) se agrega comúnmente a las muestras analíticas (Rasmussen y Pedersen-Bjergaard,
2004). Para investigar el efecto de la fuerza iónica en el rendimiento de DLLME, se realizaron
varios experimentos agregando diferentes cantidades de NaCl1–15% (p / v), mientras que otras
condiciones experimentales se mantuvieron constantes. Los resultados obtenidos mostraron que la
sal casi tuvo un efecto positivo en la eficiencia de extracción del RB. La concentración óptima de
NaCl se obtuvo al 10% (p / v). Por lo tanto, el trabajo se realizó con la adición de NaCl con una
concentración del 10% (p / v) (ver Figura 5).
3.1.6. Estudio del tiempo de extracción.
En DLLME, el tiempo de extracción se define como el tiempo de intervalo entre la inyección de la
mezcla de dispersador (acetona) y el solvente de extracción (octanol) en la muestra acuosa y
comienza a centrifugarse. Se observa que después de la formación de la solución turbia, el área de
contacto entre el disolvente de extracción y la fase acuosa (muestra) es infinitamente grande. De
este modo, la transición de los analitos de la fase acuosa (muestra) al disolvente de extracción es
muy rápida. Posteriormente, el estado de equilibrio se logra rápidamente, el tiempo de extracción es
muy corto. Esta es una ventaja de la técnica DLME, es decir, bajo tiempo de extracción. En este
método, el paso que lleva mucho tiempo es la centrifugación de la solución de muestra en el
procedimiento de extracción. El efecto del tiempo de extracción se examinó en el rango de 1 a 25
min, mientras que las otras condiciones experimentales permanecieron constantes. Los resultados
obtenidos se muestran en la Figura 6. Como resultado, se seleccionaron 5 minutos para estudios
posteriores.

3.1.7. Estudios de interferencia


Las posibles interferencias en el presente método fueron investigadas. Se estudió el efecto de
algunos metales alcalinos y alcalinotérreos y algunos metales de transición y aniones que coexisten
en el agua natural. En este experimento, las soluciones que contenían 2lgmL 1 de RB y 200lgmL 1
iones de anillo interfertal se trataron de acuerdo con el procedimiento recomendado. Los resultados
se resumen en la Tabla 2, muestran una recuperación adecuada del sistema desarrollado.
3.1.8. Figuras analíticas de mérito
El gráfico de calibración (Fig. 7) fue lineal en el rango de 0.2–9lgmL 1 con un coeficiente de
correlación (r2) de 0.9954. El límite de detección (LOD) calculado sobre la base de 3Sb / m (donde,
Sba y la desviación estándar del blanco y la pendiente del gráfico de calibración respectivamente)
fue 0.05lgmL 1. El factor de concentración previa, definido como la relación de las concentraciones
de analito en la fase de sedimentación y en la solución de muestra acuosa (concentraciones después
y antes de la preconcentración), fue 22.
3.1.9. Análisis de muestra real
La DLLME propuesta analizó dos muestras de agua (de Hamoon Lake y Hirmand Riverin IRAN)
combinadas con la espectrofotometría UV-Vis. Todas las muestras fueron enriquecidas con
colorante estándar en dos niveles, y fueron extraídas subsecuentemente usando la técnica DLLME y
finalmente los extractos fueron analizados por el método UV-Vis. Se realizaron tres réplicas de
períodos de tiempo para cada nivel de concentración. Los resultados se muestran en la Tabla 3.
Estos resultados demuestran que las matrices de aguas tienen un pequeño efecto en el
procedimiento de DLLME.
Conclusión
Se utilizó un método de microextracción líquido-líquido dispersivo acoplado a la espectrofotometría
UV-Vis para la preconcentración y determinación de la cantidad traza de Rose Bengal en muestras
de agua. El método es simple, rápido y económico. En este método, el tiempo de preparación de la
muestra, así como el consumo de disolventes orgánicos tóxicos, se redujo al mínimo sin afectar la
sensibilidad del método. DLLME proporciona buena repetibilidad, recuperación adecuada en poco
tiempo. El desempeño de este procedimiento en la extracción de Rose Bengal demostró que esta
técnica es factible para los análisis cuantitativos de Rose Bengal en muestras reales y podría usarse
en el análisis de rutina.

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