FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

CURSO:
Análisis Instrumental

TEMA:
Determinación Espectrofotometrica UV-Vis De Cromo Total. Método De La
Difenilcarbazida.

DOCENTE:
CRUZ MONZO, Jose Alfredo

ALUMNA:
SALINAS PRINCIPE, Jarumy Anais

CICLO:
VII

TRUJILLO - PERÚ
2020 - I
DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMETRICA UV-VIS DE CROMO TOTAL. METODO
DE LA DIFENILCARBAZIDA.

I. INTRODUCCION:
El cromo se encuentra en la naturaleza en las rocas volcánicas, es el séptimo
elemento más abundante en la Tierra, pero la principal fuente de la contaminación
ambiental con cromo es antropogénica. La descarga de efluentes industriales al
ambiental es la causa más importante de acumulación de cromo. Los compuestos
de cromo (VI) son tóxicos y agentes carcinógenos para una variedad de
organismos. Ellos son móviles en los sistemas suelo/agua, mucho más que los
compuestos de cromo (III). Esto se debe a que el cromo (VI) es un oxidante fuerte
y es muy soluble en sus formas aniónicas, mientras que los compuestos de cromo
(III) tienden a formar precipitados inertes cerca de pH neutro.
Cromo (VI) puede coexistir en aguas naturales, efluentes y suelos dependiendo
del pH del medio y sus características redox. Este metal se puede presentar en
varios estados de oxidación, pero en los sistemas acuosos sólo se encuentran el
trivalente y el hexavalente. En relación con el cromo trivalente se encuentra
principalmente como catión, siendo el hidróxido muy insoluble mientras que el
cromo hexavalente se encuentra como anión dependiendo una u otra del pH,
siendo todas ellas muy solubles.
En la sección de espectrofotometría, se engloban las áreas de espectrofotometría,
colorimetrías y volumetrías. Aquí se ubican los equipos para la determinación de
los cationes mayoritarios, así como los metales pesados que pueden encontrarse
en las muestras. En el área de Colorimetrías se realizan técnicas basadas en
reacciones colorimétricas que son cuantificadas por medición espectrofotométrica
de absorción molecular (UV-VIS). Las Volumetrías son técnicas rápidas, mediante
las que se obtiene una visión global sobre las características físico-químico de
cualquier tipo de agua, por lo que puede evitarse una analítica más cara y
compleja, cuando esta información descarta un determinado uso del agua
problema. [ CITATION JEL11 \l 2058 ]

II. OBJETIVO:
 Determinar la concentración en ppm de Cromo Hexavalente y Trivalente en
una muestra acuosa cualquiera, utilizando la espectrofotometría visible.
 Determinar la longitud de Onda óptimo del instrumento.
III. FUNDAMENTO TEORICO:
MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS
1. Espectrofotometría de Absorción
Es usualmente usada con moléculas disueltas en un solvente transparente.
La absorbancia de un soluto depende linealmente de la concentración y por
consiguiente la espectrofotometría de absorción es ideal para hacer
mediciones cuantitativas. La longitud de absorción y la fuerza de
absorbancia de una molécula no sólo depende de la naturaleza química, si
no del ambiente molecular en donde se encuentre el cromóforo. La
espectrofotometría de absorción es por lo tanto una excelente técnica para
seguir reacciones de unión a ligando, catálisis enzimáticas y transiciones 8
conformacionales en proteínas y ácidos nucleicos. Las mediciones
espectroscópicas son muy sensibles y se requieren pequeñas muestras de
material para el análisis.
2. Espectrofotometría de Emisión
Es una metodología relacionada, donde mediante temperaturas muy
elevadas se logra la completa ionización de los elementos, minimizando las
interferencias químicas. [ CITATION PRÁ15 \l 2058 ]
METALES PESADOS
Se conocen como metales pesados aquellos cuya densidad es superior a 5 g/cm3;
estos elementos pertenecen al grupo de metales de transición y forman
compuestos de coordinación. Algunos metales pesados representativos son cromo
(Cr), hierro (Fe), cobre (Cu), níquel (Ni).
1. CROMO
El cromo es un elemento natural que se encuentra en rocas, animales,
plantas y el suelo. Está presente en el medio ambiente en varias formas
diferentes. Las formas más comunes son el cromo (0), el cromo (III) y el
cromo (VI). Los compuestos de cromo no tienen ningún sabor u olor
especial.
El cromo entra al aire, al agua y al suelo principalmente en las formas de
cromo (III) y cromo (VI) como resultado de procesos naturales o de
actividades humanas. En los procesos industriales se utilizan mucho las
sales de cromo, y pueden pasar al suministro de agua a través de los
 desechos industriales. Frecuentemente se añaden cromato al agua de
refrigeración para control de la corrosión.
En agua para de consumo el nivel de cromo es usualmente bajo. El cromo
III es un nutriente esencial para los humanos y la falta de este puede
causar condiciones del corazón, trastornos metabólicos y diabetes. Pero la
ingesta de abundante cromo III puede causar efectos sobre la salud
también, por ejemplo, erupciones cutáneas.

FUNDAMENTOS DE LA ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA−VISIBLE.

La espectrofotometría UV – visible es un método de análisis óptico que permite

determinar la concentración de una sustancia en disolución al comparar la
radiación absorbida o transmitida por una disolución que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia. Se emplea la espectrofotometría ultravioleta-visible (UV/VIS) la cual
utiliza luz visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagnético. Se emplea un espectrofotómetro, equipo que permite
seleccionar una longitud de onda y dirigirla a través de una disolución; por medio
de un detector se determina la cantidad de radiación absorbida, según la
concentración del soluto, y este valor se interpola en una curva de calibración.

LEY DE BEER

Cuando un rayo de luz monocromático pasa a través de un medio absorbente, su

intensidad disminuye exponencialmente a medida que aumenta la concentración
de la sustancia absorbente en el medio.

De acuerdo con esta ley, la absorbancia (a) está relacionada linealmente con la
concentración (c) de las especies absorbentes y con la longitud de la trayectoria
de la radiación (b) en el medio absorbente. La absorbancia es la cantidad de
intensidad de luz que absorbe una muestra y la absortividad es la medida de la
cantidad de luz absorbida por una solución.

CURVA DE CALIBRACIÓN

Es la representación gráfica, en un plano cartesiano, de la Concentración (C) en

función de la Absorbancia (A). Se preparan varias disoluciones de concentración
conocida y se determinan sus A, y con estos datos se construye la curva de
calibrado, que es una recta. [ CITATION DIA10 \l 2058 ]

LA DETERMINACIÓN DE POR MEDIO DEL MÉTODO

ESPECTROFOTOMÉTRICO DE LA DIFENILCARBAZIDA.

Los derivados del cromo hexavalentes (cromatos y dicromatos), usualmente, son

de origen antropogénico, que en sus altas concentraciones producen toxicidad.
Dicho analito se puede determinar por método colorimétrico que se basa en la
reacción del cromo hexavalente con 1,5-difenilcarbazida en medio ácido, lo que
produce la formación de un compuesto desconocido de color rojo violeta. Éste
puede ser medido espectrofotométricamente a una longitud de onda de 540 nm y
la absorbancia es proporcional a la concentración de cromo en la muestra. Para
determinar cromo total, la muestra debe ser sometida a digestión ácida y oxidación
con permanganato de potasio, previo a la reacción con la difenilcarbazida.
[ CITATION CAS13 \l 2058 ]

Varios autores han reportado estudios acerca de la aplicación y versatilidad de la

1,5-difenilcarbazida como agente acomplejante del ión metálico Cr (VI). No
obstante, todos los trabajos datan de los años 50 y en ellos se evidencian algunas
falencias tales como la pureza del reactivo, debido a que este era sintetizado;
incluso, en algunos trabajos se utiliza una mezcla de 1,5-difenilcarbazida con 1,5-
difenilcarbazona; asimismo, la sensibilidad de los equipos utilizados,
espectrofotómetros de un solo haz, carencia del control en el valor del pH,
situaciones que podían conducir a una descomposición del agente acomplejante;
reactivos de naturaleza acídica de acceso limitado y, ante todo, la omisión del
tiempo de contacto adecuado para la interacción del reactivo con la solución de Cr
(VI) en la formación estable del complejo coloreado. [ CITATION Glo13 \l 2058 ]

CRITERIOS DE VALIDACIÓN

Para efectuar la validación de nuestro método analítico, estudiaremos las

siguientes características:

1. Selectividad: Es el grado en que un método puede cuantificar o cualificar

al analito en presencia de interferentes en la matriz.
 2. Linealidad: La linealidad de un método analítico es su capacidad, dentro
de un cierto intervalo, de obtener resultados directamente proporcionales a
la concentración de la impureza a determinar o por una transformación
matemática bien definida.
3. Límite de detección: Es la mínima concentración que da señal detectable
en las condiciones de trabajo establecidas por el método.
4. Límite de cuantificación: Es la mínima concentración que puede
determinarse con un nivel aceptable de exactitud y precisión.
5. Exactitud: Grado de concordancia entre el resultado de un ensayo y el
valor de referencia. Cuando se aplica a un método de ensayo se refiere a
una combinación de veracidad (error sistemático) y precisión (error
aleatorio).
 Veracidad: Es el parámetro que expresa el grado de concordancia
entre el valor verdadero o valor de referencia aceptado y el valor
determinado por el análisis.
 Precisión (Repetibilidad, precisión intermedia,
reproducibilidad): Es el grado de concordancia entre resultados
obtenidos al aplicar el procedimiento experimental repetidas veces
bajo las condiciones establecidas. Se calcula como desviación
estándar o coeficiente de variación de los resultados de las
mediciones. Cuanto mayor sea la desviación estándar, menor será
la precisión obtenida.
6. Robustez: Sensibilidad que presenta un método ante pequeñas
variaciones en las condiciones de ensayo descritas en el procedimiento.
7. Incertidumbre: Parámetro asociado al resultado de una medición, que
caracteriza la dispersión de los valores que podrían razonablemente ser
atribuidos al mesurando. [ CITATION JOR18 \l 2058 ]

IV. REACTIVOS, MATERIALES E INSTRUMENTOS:

1. Solución Madre de Cromo (VI): Disolver 0,1410 g de K2Cr2O7 en agua y
diluir a 1000 mL con agua destilada.
2. Solución patrón de Cromo: Diluir 10 mL de la solución madre a 100 mL con
agua destilada.
 3. Solución de Difenilcarbazida: Disolver 0,150 g de 1,5-difenilcarbazida en 50
mL de acetona. Almacenar al frasco ámbar, en caso de decoloración
descartar.
4. Solución de H2SO4 0,2000 N
5. Fiolas de 50, 100, vasos de 80 y 400 mL; pipetas de 5 y 10 mL
6. Equipo Colorimetrico: Puede utilizarse un espectrofotómetro para usar a
540 nm con un paso de luz de 1 cm, o mayor.
Para Digestión y oxidación de muestra
7. Ácido Nítrico concentrado (gr.)
8. Ácido Sulfúrico, H2SO4, (1:1)
9. Peróxido de Hidrogeno, H2O2 al 30%
10. Hidróxido de Amonio, NH4OH concentrado (gr.)
11. Solución de KMnO4: Disolver 4 g de KMnO4 en 100 mL de agua destilada.
12. Solución de Azida de Sodio: Disolver 0,50 g de NaN3 en 100 mL de agua
destilada.
13. Ácido Fosfórico, H3PO4 concentrado (gr.)
14. Embudo de separación de 125 mL con tapón y llave de vidrio.
V. IV. PROCEDIMIENTO:
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE CROMO HEXAVALENTE:
1. Tomar 6 Matraces volumétricos de 125 mL y 6 Fiolas aforadas de 100 mL.
Numerarlas.
2. Depositar en los matraces numerados, los volúmenes adecuados para
tener 0,00; 0,05; 0,10; 0,15; 0,20 y 0,25 ppm Cr Hexavalente.
3. Adicionar solución de H2SO4 0,200 N hasta ajustar las soluciones a un
pH=2.
4. Transferir a las correspondiente fiolas numeradas y diluir a 100 mL con
agua destilada. Agitar.
5. Adicionar 2 mL de la solución de Difenilcarbazida y mezclar. Dejar reposar
por 5 a 10 min para que desarrolle el color.
6. Utilizando la fiola N° 1 (blanco) calibrar el Spectronic 20 y proceder a
determinar la longitud de onda óptima de operación ( opt ) del
instrumento.
7. Graficar la Absorbancia vs  , y obtenga la curva que represente la zona de
máxima absorción.
 8. Seleccione la longitud de onda óptima de operación ( opt ), para el Cr.
(Alrededor de 540nm)
9. Proceder a leer la absorbancia de cada solución patrón.
10. Graficar la absorbancia vs concentraciones y verificar si cumple con la Ley
de Beer.

PREPARACION Y MEDICION DE LA MUESTRA.

A. OXIDACION DEL CROMO TRIVALENTE EN MUESTRA DIGERIDA:
1. Pipetear una porción medida de muestra previamente digerida,
(V1), que contenga de 0,01 a 0,1 g de Cromo dentro de un matraz
cónico de 125 mL.
2. Usando anaranjado de metilo, adicionar NH4OH, hasta que la
solución sea básica.
3. Adicionar gota a gota H2SO4 (1:1), hasta acidez. Adicionar 1 mL
más en exceso.
4. Ajustar a un volumen aproximado de 40 mL y calentar a ebullición.
Agregar 2 gotas de la solución de KMnO4 hasta coloración grosella.
Si se decolora agregar más, pero, gota a gota.
5. Hervir la solución y adicionarle 1 mL de azida de sodio, (NaN3),
hasta que la solución se decolore dentro de los 30 s. De ser
necesario adicionar 0,5 mL más hasta que se decolore.
6. Enfriar y adicionar 0,25 mL, (5 gotas), de H3PO4 CC.
7. Concentrar hasta un volumen igual al tomado en el punto 1. (V1).
B. MEDICION DEL CROMO TOTAL EN MUESTRA DIGERIDA:
1. Tomar una alícuota, (10 mL), de muestra digerida, para el análisis
en matraz de 125 mL.
2. Ajustar el pH a 2, utilizando la solución de H2SO4 0,200N.
3. Trasvasar a fiola de 100 mL y llevarla hasta aprox 80 mL con agua
destilada. Agitar.
4. Adicionarle 2 mL de la solución de Difenilcarbazida y mezclar.
5. Aforar a la marca con agua destilada y dejar reposar por 5 a 10
minutos
6. Calibrar el instrumento con la muestra blanco o testigo a la λ
especificada.
 7. Transferir una porción a la cubeta de absorción y proceder a leer su
absorbancia.
8. A partir de la recta de calibración, determinar la concentración de
Cromo (VI) total presente
9. Determinar la concentración real usando el factor de dilución
Para la presente marcha tenemos:
( gráfica )∗mL de alícuota diluída
ppmCr total ( muestra )= ppmCr
mLde alícuota directa

ppmCr total ( muestra )= ppmCr ( gráfica )∗ ( 100

10 )
VI. CÁLCULOS:
DATOS PARA DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE Cr (VI) EN
AGUA
A. Determinación de la masa teórica a tomar de la K 2 Cr2 O 7 para la
preparación teórica de 100 mL de una solución que sea de 350 ppm Cr
(VI).

ppmCr (VI ) requerido 350

Vol. S. Stock (L) 0.1
Masamolar K 2 Cr2 O 7 294.2
Masamolar Cr +6 52
Pureza (%) 99.4
NaN O2 a tomar (gr) 0.19921452

L∗1 gr Cr +6
∗294.2 gr K 2 Cr 2 O7
103 mg Cr+6
∗1
350 mgCr +6 52 gr Cr +6
W K Cr O ( gr )= ∗0.1
2 2 7
L 0.994
W K Cr O ( gr )=0.19921452 gr K 2 Cr 2 O 7
2 2 7

B. Determinación de la [ ] real para un peso real tomado en balanza

analítica de 0,0945 gr K 2 Cr2 O 7

Masatomada K 2 Cr2 O 7 (gr) 0.0945

Vol . A preparar 0.1
 Pureza K 2 Cr 2 O7 (% ) 99.4
Masamolar K 2 Cr2 O 7 294.2
Masamolar Cr +6 52
ppm Cr +6 real preparado 166.0270564

0.0945 ( 0.994 ) gr K 2 Cr 2 O7
∗52 gr Cr +6
0.1 L
∗103 mgCr +6
294.2 gr K 2 Cr O
2 7
[ Cr +6 ]=
1 gr Cr+ 6
ppmCr +6=166.0270564 ppmCr +6

C. Preparación de 50 mL de solución de trabajo de 20 ppmCr +6:

ppmCr +6 inicial (real prep.) 166.0270564

ppmCr +6 final (requerido) 20
Vol . Final a preparar S .Trab (mL) 50
Vol .inicial a tomar (mL ) 6.02311468
Vol .inicial a tomar ( μL) 6023.11468

C 1∗V 1=C 2∗V 2

166.0270564∗V 1=20∗50
20∗50
V 1=
166.0270564

V 1=6.02311468 mL
V 1=6023.11468 μL

D. Determinación de [ ] real de solución de trabajo por ajuste de volumen

teórico a 0.70 mL

ppmCr +6 inicial (real prep.) 166.0270564

Vol .inicial tomado(mL) 0.70
Vol . Final a preparar S .Trab (mL) 50
 ppmCr +6 Sol . Trab . 2.32437879

C 1∗V 1=C 2∗V 2

166.0270564∗0.7=C2∗50
166.0270564∗0.7
C 2=
50

C 2=2.32437879 ppmCr +6
E. Preparación teórica de las soluciones estándar para recta de calibrado
de Cr +6usando solución de trabajo real 28.8862482 ppmCr +6.

ppm Aforar Vol. a Vol. a

Std. ppm inicial
final a tomar (mL) tomar (L)
1 0 50 2.32437879 0 0
2 0.05 50 2.32437879 1.0755562 1075.5562
3 0.1 50 2.32437879 2.1511124 2151.1124
4 0.15 50 2.32437879 3.2266686 3226.6686
5 0.2 50 2.32437879 4.3022248 4302.2248
6 0.25 50 2.32437879 5.3777809 5377.7809

C 1∗V 1=C 2∗V 2

2.32437879∗V 1=0∗50
V 1=0 mL

C 1∗V 1=C 2∗V 2

2.32437879∗V 1=0.05∗50
V 1=1.0755562 mL
V 1=1075.5562 L

F. Determinación real de las concentraciones a los valores ajustados de

volumen

Std. Vol. a Vol. a ppm inicial Aforar a ppmCr +6

 tomar (L) tomar (mL)
2.3243787
1 0 0 50 0
9
2.3243787
2 1100 1.1 50 0.05114
9
2.3243787
3 2150 2.15 50 0.09995
9
2.3243787
4 3200 3.2 50 0.14876
9
2.3243787
5 4300 4.3 50 0.19989
9
2.3243787
6 5400 5.4 50 0.25103
9

C 1∗V 1=C 2∗V 2

2.32437879∗0=C 2∗50
C 2=0

C 1∗V 1=C 2∗V 2

2.32437879∗1.1=C 2∗50
C 2=0.05114

G. Lecturas obtenidas en el espectrofotómetro para estándares y

muestra
Volumen de muestra de agua tomada para análisis = 10 mL

Std. ppm Cr +6 Abs

1 0 0
2 0.05114 0.016
3 0.09995 0.035
4 0.14876 0.051
5 0.19989 0.067
6 0.25103 0.086
Muestra 0.052

1. Determinar la longitud de onda óptima del instrumento.

 Long.
Std ppmCr +6
Abs Onda (
nm)
1 0 0 540
2 0.05114 0.016 540
3 0.09995 0.035 540
4 0.14876 0.051 540
5 0.19989 0.067 540
6 0.25103 0.086 540
Muestra 0.052

Abs vs ppm Cr+6

0.1
0.09
0.08 f(x) = 0.34 x − 0
0.07 R² = 1

0.06
0.05
Abs

0.04
0.03
0.02
0.01
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
ppm Cr+6

2. Construir la recta de calibración para el Cromo Hexavalente.

 3. Determinar la concentración de Cromo Total.
Y =0.3422 ( X )−0.0003
Asb=0. 3422 ( ppm Cr+6 ) −0. 0003
0.052=0.3422 ( ppm Cr +6 )−0. 0003
0.052+0. 0003
ppm Cr +6=
0.3422
ppm Cr +6=0.1528345996 ppmCr +6

ppm Cr +6=0.1528345996 ( 5010 )

ppmCr +6=0.764172998 ppmCr+ 6

VII. CONCLUCIÓN:
 Logramos determinar la concentración en ppm de Cromo Hexavalente y
Trivalente ppmCr +6=0.764172998 ppmCr+ 6en una muestra acuosa
cualquiera, utilizando la espectrofotometría visible.
 Logramos determinar la longitud de Onda óptimo del instrumento
λ=540 nm.
VIII. REFERENCIAS:

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https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.pdf
García, C. A. (06 de 2013). VERIFICACIÓN ANALÍTICA PARA LAS DETERMINACIONES
DE CROMO. Obtenido de file:///C:/Users/Securitas/Downloads/Dialnet-
VerificacionAnaliticaParaLasDeterminacionesDeCromo-4694625%20(3).pdf

Gloria María Doria Herrera, P. A. (30 de 10 de 2013). Estandarización de la

difenilcarbazida como indicador y acomplejante en la identificación de cromo
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MILOVANOVIC, J. (2011). DESARROLLO Y OPTIMIZACIÓN DE UN MÉTODO PARA LA

DETERMINACION DE CROMO. Obtenido de https://iuaca.ua.es/es/master-
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MORALES, J. P. (NOVIEMBRE de 2018). Determinación de Fe III y/o Fe total en Aguas.

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SANTIAGO, D. V. (03 de 2010). VALIDACION DEL METODO

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