PCR cuantitativa para la detección del virus de la tristeza
de los cítricos en Colombia (CTV)
La citricultura constituye el segundo Recolección de muestras
renglón de importancia económica en el área de la producción de frutas en Colombia, El material biológico con síntomas de clorosis venosa, amarillamiento y decaimiento fue recolectado entre los meses de junio-julio, bajo una temperatura ambiental de 22 °C en promedio, en las zonas productoras de cítricos de los El amplio espectro de los síntomas departamentos del Meta (Villavicencio, La Libertad- provocados por el CTV define la Corpoica), Norte de Santander (Bochalema), Casanare enfermedad como un síndrome, lo que se (Yopal) y Cundinamarca (Mosquera-Tibaitatá). Se relaciona con la complejidad de la obtuvieron un total de 19 muestras a partir de 6 plantas de estructura poblacional de los aislamientos cítricos, las cuales consistieron en tejido foliar, corteza y de campo y la existencia de varios frutos de distintas plantas de cítricos. genotipos virales distribuidos globalmente
Extracción de ARN total
La cuantificación de partículas virales es La extracción se realizó a partir de 50-100 mg de
importante para diversos propósitos, tejido vegetal tratado con nitrógeno líquido, incluyendo la asociación potencial de la pulverizado en mortero estéril y utilizando el intensidad del síntoma con la reactivo TRIZOL® (Invitrogen®), siguiendo las acumulación de variantes virales. instrucciones del fabricante.
El método de cuantificación absoluta qRT-PCR
Estos resultados indican que el permitió detectar el patógeno presente en las procedimiento aquí descrito es de utilidad muestras; entretanto, la cuantificación absoluta no solo para los diagnósticos, sino también evidenció distintos niveles de acumulación de para estudiar diversos aspectos de la las partículas virales para los diferentes tejidos biología del virus, como la respuesta de los vegetales. diferentes órganos a la infección por este, los efectos potenciales de la acumulación del virus en brotes jóvenes, la expresión de síntomas y la transmisibilidad del áfido, El diagnóstico de CTV, agente causal de una de además de la resistencia relativa de diversos las enfermedades más onerosas en el cultivo de cultivares o plantas transgénicas de cítricos los cítricos, fue realizado por indexación a aislamientos específicos de CTV. biológica, serología, hibridación molecular o técnica de PCR (28-34, 13, 23), pero ninguno de estos procedimientos permite la cuantificación exacta de la acumulación del virus. La técnica de PCR en tiempo real es un método específico y sensible, de utilidad en los procesos de detección de las enfermedades El radio de dispersión de los virus de célula a célula varía virales presentes en este y otros de acuerdo con la clase y edad de las células de las plantas cultivos de interés agrícola. infectadas, y es mayor en células alargadas y jóvenes que en las viejas y redondas.