Tf .
2 2 o
Dxpreslon genlca:
II. Síntesisy clasificación
de proteínas
T-r
-Un.l capítuloanterior,describimosel fluio de informa-
ción génicadel DNA al ARN, centrándonósen la trans-
cripción del DNA y en el procesamientode los tránscritos
de RNA resultantes.En los genesque codificanRNA ribo-
sómicoy RNA de transferencia (y algunos,otrasmoléculas
pequeñasde RNA), el RNA esla última expresióndel gen.
Peroen milesde genesdel genomade un organismo,el úl-
timo producto es una proteína.Este capítulo describe
cómo el RNA mensajeroproducidopor los genesque co-
difican proteínas,se traduce en polipéptidos,cómo los
polipéptidos se hacen proteínasfuncionalesy cómo las
proteínasllegana los destinosdondellevana cabosusfun-
ciones.
La traducción,la primeray más importantefasede la
síntesisde proteínas,implica un cambiode lenguajedesde
la secuenciade nucleótidosde una moléculade nRNA. a la
secuencia de aminoácidos de una cadenapolipeptídica.
En
esencia,el orden secuencialde los nucleótidosdel mRNA,
leído como codonesde tripletes,especificael orden en el
quelos aminoácidosentrantessevan incorporandoala ca-
denapolipeptídicaqueseestásintetizando. Losribosomas
sirven como lugaresintracelularespara el procesode la
traducción, mientras que las moléculasde RNA son los
agentesque aseguranla inserciónde los aminoácidosco-
rrectosen cadaposición del polipéptido.Empezaremos
describiendoel conjunto de componentesde la célulane-
cesariosparallevara cabola traducción,antesde examinar
en detallelos pasosde esteproceso.
Thaducción: los componentes
La maquinariacelularparaIa traduccióndel mRNA a po-
lipéptidosconstade cinco componentesprincipales:los
ribosomas,quellevana caboel procesode síntesisde poli-
péptidos,lasmoléculasde IRNA, que alineanlos aminoá-
cidosen el orden correctoa lo largo del molde de mRNA,
las aminoacil-tRNAsintetasas, que unen los aminoácidosa
susmoléculasde tRNA correspondientes, lasmoléculasde
mRNA que llevan codificadala información de la secuen-
cia de aminoácidos paraquesesinteticenlos polipéptidos,
y los factoresproteicosque facilitan variospasosdel proce-
sode traducción.Paradescribirestoscomponentes, empe-
zaremosconlos ribosomas.
Losribosomasllevana cabola sintesisde polipéptidos
Los ribosomasdesempeñan un papelfundamentalen la
síntesisde proteínas,orientandoadecuadamente el mRNA,
con respectoa los tRNAsqueportan a los aminoácidos, de
tal maneraque el código genéticoselea adecuadamente y
catalizandola formación de los enlacespeptídicosque
unen los aminoácidosde la cadenapolipeptídica.Como vi-
mos en el Capítulo4, los ribosomas son partículashechas
de RNA y proteínasque se encuentranen el citoplasma,
tanto de célulaseucariotas como de procariotas,así.como
en la matriz mitocondrial y en el estromade los cloro-
plastos.En el citoplasmaeucarióticosepuedenencontrar,
Traducción:
loscomponentes 747
tanto libresen el citosol,como unidos a lasmembranasdel
retículo endoplásmicoy a la mernbranaexternade Ia en-
vueltanuclear.Losribosomasdelos eucariotasylos proca-
riotas son estructuralmentemuy similares,pero no idénti-
cos.Los ribosomasde los procariotasson más pequeños,
contienenmenosprotelnas,tienen moléculasde RNA más
pequeñas(y menosRNA) y son sensiblesa diferentesinhi-
bidoresde la síntesisde proteínas.
En la imagen de microscopíaelectrónicade la Figura
22.1sepuedever la forma de los ribosomasde los proca-
riotas.Como todos los ribosomas,constade dos unidades
disociablesdenominadassubunidadmayor y subunidad
menor.Un ribosomaporcarióticocompleto,con un coefi-
cientede sedimentaciónde unos 70S,constade una subu-
nidad menor 30Sy de una subunidadmayor 50S;su equi-
menor
Subunidad Subunidadmayor Ribosomaintacto
y sussubunidades
procariotas
(a) Ribosomas 0,1¡r.m
Ribosomacompleto(70S)
Subunidad
(b) Dos vistasdel ribosomaprocariotay sus subunidades
748 génica:
22 Expresión
Capítulo ll. Síntesis deproteínas
y clasificación
valenteeucariotaes un ribosoma 80Sque constade una
subunidad40Sy otra 605.La Tabla22.1recogealgunas
propiedadesdelos ribosomasy de sussubunidadesen pro-
cariotasy eucariotas.Los RNA ribosómicosy lasmoléculas
de proteínasseautoensamblanen subunidadesmayoresy
menores,pero los dos tipos de subnidadessólo se unen
cuandoseintroduceel mRNA, comoveremosbrevemente'
La cristalografrade rayosX ha permitido recientemente
conocera nivel atómico Ia organizaciónde todaslas pro-
teínasy RNAsde lassubunidadesmenor y mayor de los ri-
bosomasbacterianos.
Funcionalmente,los ribosomassehan llamado a veces
<bancosde trabajo> de la síntesisde proteínas,pero su
papel activo en la síntesisde polipéptidoshaceque <má-
quina>seaun término másapropiado.En esencia,el papel
Figwa22,L El dbosomade células procariotas, a) Esta
micrografia electrónica muestra, tanto los ribosomas
completos,como las subunidades(MET). (b) Estos
modelos estánbasadosen las micrograftas.En las dos
vistas,el ribosoma seha rotado 90 grados.EI ribosoma
procariota tiene unos 25 nm de diámetro. (El ribosoma
de eucariotases aproximadamentede Ia misma forma y
tiene unos 30 nm de diámetro.)
mayor(50S)
menor(30S)
Subunidad
 Tabla22.1- Propiedades
de losdbosomas en procadotas
citoplasmáticos y eucariotas
-Tamaño Iamaño Proteinas RNAs
de losfibosomas Subunidad de subunidad de la subunidad de la subunidad

Fuente ValorS* Pesomolecular ValorS Pesomolecular ValorS Nucleótidos

Célulasprocariotas 70s 2,5 x 106 Mayor 50s 1,6x 106 34 235 2.900
5S t20
Menor 30s 0,9 x 106 21 165 1.540
Célulaseucariotas 80s 4,2 x 706 Mayor 60s 2,8 X 106 Unas46 25-285 <4.700
5.8S 160
5S 120
Menor 40s 1,4x 106 Unas32 18S 1.900
* Si le sorprendeque los valoresS de las subunidadesno sumenel total del ribosoma,recuerdeque el valor S esuna medida de la velocidada la que sedimentauna
partículaconcreta,y sólo serelacionaindirectamentecon la masade la partícula.

del ribosomaen la síntesisde polipéptidosrecuerdaal de SitioP (peptidil) SitioA (aminoacil)

una complicaday gran enzimaconstruidaa partir de más
de 50 proteínasdistintasy variostipos de rRNAs.Durante
muchosaños,sepensóque el rRNA proporcionabasim- SitioE (salida)
plementeun anclajeestructuralpara proteínasribosoma-
les,siendoestaslas que,de hecho,llevabana cabola sínte-
sispolipeptídica.Perohoy sabemosque el casoinversoestá
máspróximo a la realidad,el rRNA llevaa cabomuchasde Sitiode unión
lasfuncionesprincipalesde los ribosomas. a mRNA
En el ribosomaexistencuatro lugaresparticularmente
importantesparala síntesis deproteínas(Figura22.2).Son (a)
un sitio de unión a mRNA y tres sitios a los que puede
unirse IARN: un sitio A (aminoacil), donde se une cada
nuevo IRNA, que llegaportando un aminoácido,un sitio
Cadena
P (peptidil), donde reside el IRNA que lleva la cadena polipeptícida
polipeptídicaen formación, y un sitio E (exit, salida en en crec¡miento
inglés),desdeel cual los tRNAs abandonanel ribosoma,
despuésde haberdescargado susaminoácidos. El funcio-
namiento de estossitios en el procesode traducción que-
daráclaroseguidamente.
Sitlode unión
a mRNA
Lasmoléculas de RNAde transferencia
llevan
los aminoácidos
al ribosoma
Dado que la secuenciade codonesdel mRNA determinala (b)
secuenciade aminoácidosde las cadenaspolipeptídicas, Figura22.2 Sitios de unión impoftantesen el ilbosomaprocariota,
debeexistir un mecanismoque permita a los codonesor- Este modelo estructural del ribosoma muestra los sitios A
ganizara los aminoácidosen el orden adecuado.La natu- (aminoacil) y P (peptidil) como cavidadesdel ribosoma
ralezageneralde estemecanismofue propuestapor prime- donde se unen las moléculas de IRNA cargadas(transportando
ravezpor FrancisCrick. Con una extraordinariaprecisión, aminoácidos) durante la síntesisde polipéptidos. EI sitio E (salida)
es el sitio desdeel que abandonan el ribosoma los tRNAs
Crick postuló que los aminoácidosno podían reconocer descargados.El sitio de unión a mRNA se une a una secuenciade
directamentesecuencias de basesde nucleótidosy que por nucleótidos determinada, cercadel extremo 5' del mRNA,
tanto debía existir algún tipo de molécula <adaptadora> situándolo en la posición adecuadapara la traducción de su
hipotéticaque mediaraIa interacciónentreaminoácidosy primer codón. (a) Representaciónesquemáticadel ribosoma
mRNA. Además,predijo que cada molécula adaptadora que se emplea en estecapítulo. El par de líneas horizontales
punteadasindica dónde queda la molécula de nRNA. (b) Una
poseeríadossitios,uno de unión a un aminoácidoespecí- representaciónmás realista.Los sitios de unión estánlocalizados
fico y otro que reconoceríauna secuenciade basesdel exactamenteen la interfase entre las subunidadesmayor y menor
mRNA, que codificaríaesteaminoácido. o cercade ella.

Traducción:
loscomponentes 749
 A1año siguientede la propuesta de Crick, Mahlon Ho-
agland descubrió una familia de moléculas adaptadoras
que presentabanlas propiedades predichas.Mientras in-
vestigaba el proceso de síntesis de proteínas en siste-
mas no celulares, Hoagland encontró, trabajando con
aminoácidos radiactivos,que éstosse encontraban prime-
ro covalentementeunidos a pequeñasmoléculas de ARN.
Añadiendo estos complejos aminoácido-ARN a los ribo-
somas, se inicia el proceso de síntesis de proteínas y Ia
incorporación de aminoácidos radiactivos a las nuevas
proteínas. Hoagland concluyó, por lo tanto, que los ami-
noácidos se encuentran inicialmente unidos a pequeñas
moléculas de ARN, que despuésllevan a los aminoácidos
al ribosoma, para su posterior inserción en las cadenas
polipeptídicas en formación.
Las moléculas de RNA descubiertaspor Hoagland se
denominaron ARNs de transferencia (tRNAs). Adecuán-
dosea su papel de intermediarios entre el nRNA y los ami-
noácidos,las moléculasde tRNA presentandos tipos de es-
pecificidad. Cada IRNA se une a un aminoácido específico
y cadauno reconoce uno o más codones de los mRNAs,
que especificanel aminoácido particular, segúnlas corres-
pondencias indicadas en el código genético.Los RNAs de
tranferencia están unidos a sus aminoácidos correspon-
dientespor un enlaceésterque une el aminoácido al grupo
2'- o 3'-hídroxilo del nucleótido de adenina (A), localiza-
do en el extremo 3' de todas las moléculasde IRNA (Figu-
ra 22.3a). La seleccióndel aminoácido correcto pata cada
IRNA es responsabilidadde las enzimas que catalizan la
formación del enlaceéster,como veremosbrevemente.Por
convención, el nombre del aminoácido que se une a un
IRNA dado se indica como un superíndice.Por ejemplo,
las moléculas de IRNA específicasde la alanina se identifi-
can como tRNAAlu.rJnavezque está unido el aminoácido,
el IRNA se denomina aminoacil IRNA (ej., alanil tRNAau).
Se dice que el IRNA se encuentra cargadoy que el aminoá-
cido estáactivado.
Las moléculasde RNA de transferenciapueden recono-
cer codones en el mRNA porque cada IRNA poseeun an-
ticodón, una secuenciaespecialde tres nucleótidos locali-
zada dentro de uno de los bucles de la molécula del IRNA
(véaseFrgura22.3a).El anticodón de cada IRNA es com-
plementario a uno o más codones del mRNA que
especificaal aminoácido que deber ser transportado por el
IRNA. Por lo tanto, losanticodonespermiten alas moléculas
de IRNA reconocercodonesen el zHNA, por complemen-
tariedad de basel Tome nota de la convención usada al
representar codones y anticodones: los codones del mRNA
se escriben en dirección 5' --'>3' , mientras que los anti-
codones del IRNA suelen representarse en orientación
3' -+ 5'. Así, uno de los codonesde la alaninaes 5'-GCC-3'
y el correspondienteanticodón en el IRNA es 3'-CGG-5'.
Dado que el código genéticoemplea61 codonesdistin-
tos para especificarlos aminoácidos,es de esperarque hu-
biera 61 moléculas distintas de IRNA implicadas en la sín-
7s0 génica:
22 Expresión
CapÍtulo ll. Síntesis deproteinas
y clasificación
tesisde proteínas,cadauna de ellasresponsable del reco-
nocimiento de un codón distinto. Sin embargo,el número
detRNAsdistintosessignificativamente menorde 61,por-
que muchasmoléculasde IRNA reconocenmásde un co-
dón. Estosepuedeapreciarexaminandola tabla del códi-
go genético(véaseFigura 21.8).Los codonesque difieren
en la tercerabase suelen codificar el mismo aminoácido.
Por ejemplo, UUU y UUC codifican fenilalanina;UCU,
y
UCC, UCA UCG codifican serina; y asísucesivamente.
En estoscasos,el mismo IRNA se une a másde un codón
sin introducir errores.Por ejemplo, un mismo tRNA pue-
de reconocerlos codonesUUU UUC y porque ambosco-
difican el mismo aminoácido,la fenilalanina.
Estasconsideraciones llevarona FrancisCricka propo-
ner que el mRNA y el IRNA sealineanen el ribosoma,de
forma que permitenciertaflexibilidado nbalanceo> en el
apareamiento entrela tercerabasedel codóny la corres-
pondientebasedel anticodón.De acuerdoconla hipótesis
del balanceo,estaflexibilidaden la unión codón-antico-
dón permitequeseformenalgunosapareamientos inespe-
rados,como semuestraen la Figura22.4.Lainusualbase
inosina(I), que esextremadamente rara en otrasmolécu-
IasdeARN, sepresentaa menudoen la posiciónde balan-
ceode los anticodonesdel IRNA (véaseFigura22.3a).La
inosinaesla más<balanceante> de todaslasbasesde la ter-
cera posición,ya que puedeaparearcon U, C o A. Por
ejemplo,un IRNA con el anticodón3'-UAI-5' puedereco-
nocerlos codonesAUU,AUC y AUA,quecodificanel ami-
noácidoisoleucina.
Espor estaposiciónde balanceopor lo queserequiere,
paraalgunosaminoácidos, un menornúmerodemoléculas
de IRNA que el número de codonesque especificandichos
aminoácidos. En el casode Ia isoleucina, por ejemplo,una
célulapuedetraducirlostrescodonesconunasolamolécu-
la de IRNA quecontengacomoanticodón3'-UAI-5'. De la
misma manera,los seiscodonesdel aminoácidoleucina
(UUA,UUG, CUU,CUC,CUAy CUG) requierensólotres
tRNAs debido al balanceo.Aunquela existenciadel balan-
ceosignificaque una mismamoléculade IRNA puedere-
conocermásde un codón,losdiferentes codonesreconoci-
dospor un determinado IRNA siempre codificanel mismo
aminoácido,y por Io tanto el balanceo no conduce a la in-
serciónde aminoácidos incorrectos.
Lasaminoac¡l-tRNAsintetasasunenlos aminoácidos
adecuados
a los RNAsde transferencia
Antes de que una molécula de IRNA pueda llevar su
aminoácidoespecífico al ribosoma,eseaminoácidodebe
estarunido covelentemente al IRNA. Lasenzimasrespon-
sablesde la unión de los aminoácidosa sus respectivas
moléculasde tRNA sedenominanaminoacil-tRNA sinte-
tasas.Las célulastienen normalmente20 tipos distintos
de aminoacil-tRNAsintetasas, una por cadauno de los 20
aminoácidosmásfrecuentes para la síntesisde proteínas.
 li'i","1."¿.il-----.-fi

A
TRNAA Alanil{RNAAra
(a) Estructura
secundariadel IRNA,antes
y despuésde la unióna. a.niroacido

S i t i od e u n i ó n
ai aminoácido

(b) Estructura
terciariadel tRNA

Figwa 22'3 Secuencia,estÍuctutay aminoacilación de un tRNA. (a) El IRNA alaninade levadura,como todaslas moléculasde IRNA, trene
tresbuclesprincipales,cuatro regionesde apareamientode bases,un triplete anticodóny una secuencia3' terminal de CCA a la que debe
unirse el aminoácidoadecuadomedianteun enlaceéster.Lasbasesmodificadasestáncoloreadasen oscuroy susnombres (como
nucleóxidos) estánabreviados:I para inosina, mI para m_etilinosina,D para dihidrouridina, T para ribotimidina, ry'para pseudouridina y G-
para metilguanosina.(Paraentenderel significadode Ia flexibilidaden la tercerabasedei anticodón,véaselafigtalZ.+.j g) En Ia
estructura terciaria en forma de L del IRNA, el sitio de unión al aminoácido estáen un extremo y ei anticodón én el otro. El código de
coloresde los buclesdel tRNA correlacionalas estructurassecundarias(bidimensionales)del apartadoa con la estructuraterciaria
(tridimensional) de la parte izqtrerda del apartado b. El modelo de tRNA de la derechade1apaitado b muestra los átomos individuales.
La
estructura que aquí sepresenta,escaracterísticade todos los tRNAs.

Traducción:
loscomponentes 751
 n lace éster,en una reacción acopladaa la hidrólisis de AIP
Citosina
I en AMP y pirofosfato:
N

R o AMp + ppi
*'rtr, ATp

ry
Guanina lll \ -\r '
o H3N+-CH-C-O- + HO{RNAI / >
Aminoacil-RNAt
o Aminoácido sintetasa

RO
N tlt_
I H3N+-cH-ó-o-@
n

La Figura 22.5 resumelos pasosde estareacción.La hi-

Uracilo drólisis del pirofosfato a 2 Pt conduce la reacción.

W.
Se dice que el enlace éster que une el aminoácido al
tRNA es un enlacede nalta energía>.Esto significa simple-
mente que la hidrólisis del enlacelibera suficiente energía
para permitir la formación del enlacepeptídico, que poste-
o Grrrnina riormente unirá el aminoácido a la cadena polipeptídica
o en formación. El proceso de aminoacilación de una molé-

*.@H cula de IRNA se denomina, por lo lanfo, activación del

aminoócido,porque no sólo une el aminoácido a su tRNA
adecuado,sino que ademáslo activa para la posterior for-
mación del enlacepeptídico.

Basesreconocidas
I
en el codón
(sóloen la terceraposición) Baseen anticodón
U A
c sintetasasreconocennucleótidos localizadosen, al menos,
AoG U dos regiones distintas de las moléculas del IRNA, cuando
CoU
U,CoA | (lnosina)
Figwa22.4 Lahipótesis delbalanceo.Losdosdiagramas
ilustrancómoun pequeñodesplazamiento enla posiciónde1a
baseguaninaen el anticodónde un IRNAle permitiríaaparear
conuracilo(debajo)en lugardeconsubasecomplementaria
habitual,la citosina(arriba).La tabla¡esumelosapareamientos
permitidosen la terceraposicióndeun codónpor la hipótesisdel
balanceo.
Cuando existemás de un IRNA para un determinado ami-
noácido, Ia aminoacil-tRNA sintetasacorrespondientepara
eseaminoácido reconocecada uno de los tRNAs. Algunas
célulaspresentanmenos de 20 aminoacil-tRNA sintetasas.
En estoscasos,la misma aminoacil-tRNA sintetasapuede
catalizar la unión de dos aminoácidos a sus IRNA corres-
pondientes o puede unir un aminoácido incorrecto a una
molécula de tRNA. Estos errores son despuéscorregidos
por una segunda enzima que altera el aminoácido inco-
rrecto tras su unión al tRNA.
Las aminoacil-tRNA sintetasascatalizan la unión de un
aminoácido a su correspondienteIRNA, mediante un en-
¿Cómo identifican las aminoacil-tRNA sintetasas el
IRNA correcto para cada aminoácido? Las diferenciasen
las secuenciasde basesde las distintas moléculas de IRNA
hacen posibie distinguirlas ¡ sorprendentemente,el anti-
codón no es la única característicareconocible.Los cam-
bios en la secuenciade basesdel triplete anticodón o en el
extremo 3'delamolécula de IRNA pueden cambiar el ami-
noácido al que se une el IRNA. Así, Ias aminoacil-tRNA
interaccionan con el IRNA que va a unirse a un aminoáci-
do concreto.Despuésde unir un aminoácido a la molécu-
Ia de IRNA, algunas aminoacil-tRNA sintetasasrevisan el
producto final, para asegurarsede que se ha introducido el
aminoácido correcto.Estaactividad correctora es llevada a
cabo por un sitio de la aminoacil-tRNA sintetasa,que re-
conoce aminoácidos erróneos y los libera hidrolizando el
enlacede unión al IRNA.
Unavez que se ha unido a su IRNA el aminoácido co-
rrecto, es el propio IRNA (y no el aminoácido) el que reco-
noce el codón apropiado en el mRNA. La primera eviden-
cia de esto la dieron Francois Chapville y Fritz Lipmann,
que diseñaron un eleganteexperimento con el IRNA del
aminoácido cisteína.Tomaron el IRNA al que ya se había
unido la cisteína y lo trataron con un catalizador de níquel,
que convirtió la cisteínaen el aminoácido alanina.El resul-
tado fue, por lo tanto, una alanina unida covalentementea
una molécula de tRNA que normalmente transportaba
cisteína.Cuando los investigadoresañadieron esteamino-
acil IRNA anormal a un sistemade síntesisde proteínas in
vitro, la alanina se insertó en las cadenaspolipeptídicasen
las localizacionesque normalmente ocupaba la cisteína.

752 génica:
Capftulo22 Expresión y clasificación
ll. Síntesis deproteínas
 aminoacil-tRNAsintetasaescrucial parala precisiónde la
Amlnoácido
expresióngénica,porque aseguraque a cadatRNA seune
---tt el aminoácidoadecuado.

a El RNAmensajerollevala infomacióncodificada
al r¡bosoma

w-
.-.-r- ü| Como vimos en el Capítulo 21, es la traducciónde los
codonesdel mRNA la que determina el orden en el que
los aminoácidosseunen durantela síntesisde proteínas.
Así, es el mRNA que se une a un determinadoribosoma
el que determinaqué polipéptidogeneraráel ribosoma.
El núcleodel RNA mensajeroes,por supuesto,su mensa-
je -la secuenciade núcleotidosque codifican el poli-
péptido-. Sin embargo,una moléculade mRNA tiene
tambiénsecuencias en ambosextremosqueno sontradu-
@@ cidas,como semuestraen la Figura22.6.Lasecuencia no
Pirofosfato
traducidaen el extremo5' del mRNA precedeal codón de
I iniciación,queesel primer codónen sertranscrito.El co-
@6 dón de iniciación sueleser AUG, aunque algunosotros
Fosfato
tripletesseusanocasionalmente como codonesde inicia-
ción en algunosvirus y eucariotas.La secuenciano tradu-
cida del extremo 3'esla que sigueal codón stop, que esel

ffi-.,
tRNA
ultimo codón que setraducey que puedeserUAG,UAA o
UGA. Las regiones5'y 3'no traducidaspresentanlongi-
tudes de entre unas docenasy cientosde núcleotidos.
Aunque estassecuenciasno se traducen, su presenciaes
esencialpara una traducción adecuadadel mRNA. Lasre-
gionesno traducidasde los mRNA eucariotasincluyenun
.".'aQ-/ casquete en 5'y una colade poli(A), comovimos en el Ca-
"? pítulo 21.
@ En los eucariotas,cada molécula de mRNA codifica
normalmenteun solo polipéptido.En los procariotas,sin
-L embargo,algunosmRNAs sonpolicistrónicos:, estosignifica

'T#:i"'"ffi
AminoacilIRNA
O
Figwa 22,5 Activaciónde un aminoácidopor mediode la aminoacil'
IRNA sintetasa, Esta enzima catahzalaformación de un enlace
ésterentre el grupo carboxilo de un aminoácido y el grupo 3'OH
del IRNA apropiado, en una reacción de dos pasos.@ El
aminoácido y una molécula de ATP entran en el sitio activo de la
enzima. Simultáneamente,el ATP pierde el pirofosfato, y el AMP
resultanteseune covalentementeal aminoácido. El pirofosfato es
hidrolizado a2P1. @ El IRNA seune covalentementeal
aminoácido, desplazandoal AMP. El aminoacil IRNA selibera
despuésde Ia enzima.
Esteresultadoprobó que los codonesdel mRNA recono-
cen a las moléculasde IRNA y no a los aminoácidosa los
que estánunidas.Así, la especificidadde la reacciónde la
que codificanvarios polipéptidos,normalmentecon fun-
cionesrelacionadasen la célula.Los conjuntos de genes
que dan lugar a moléculasde mRNA policistrónicosson
unidadestranscripcionalessencillasdenominadasopero-
nes,queveremosen el Capítulo23 duranteel estudiode la
reguiacióngénica.Lasregionesque codificanproteínasde
los mRNAs policistrónicossuelenestarseparadasentre sí
por regionesespaciadoras.
Se requierenfactoresprote¡cosparala iniciación,
elongacióny teminaciónde las cadenaspolipeptÍdicas
Ademásde lasaminoacil-tRNAsintetasas y los componen-
tesproteicosde los ribosomas,la traducciónrequierede la
participaciónde otros tipos de proteínas.Algunosde estos
factoresprotelcosson necesariosparalainiciación de la tra-
ducción,otrosparala elongaciónde la cadenapolipeptídi-
ca en formación,y otros para la terminación de la síntesis
de polipéptidos.Las funcionesconcretasde estosfactores
seexpondrána continuación,cuandoexpliquemosel me-
canismode traducción.

Traducción:
loscomoonentes753
 Regiónno traducible Secuenciacodificante
Sitiode unión Codónde
al ribosoma iniciaciónAUG
(a) RNAmprocariota
Regiónno traducible Secuenciacodlficante
(b) RNAmeucariota
Figuta22.6 RNAmensajero. (a) Una molécula de mRNA que codifica un solo polipéptido tiene las característicasmostradas.(Un mRNA
procariota poligénico tendría generalmenteestascaracterísticasen cada gen.) (b) Una moiécula de mRNA eucariota tiene, además,un
casqueteetr 5' y o.ru cola de poli(A) en 3'. Además,no presentael sito de unión al ribosoma (una secuenciade nucleótidosdenominada
también secuenciaShine-Dalgarno,por susdescubridores).
El mecanismo de traducción
La traducción de los mRNAs a polipéptidos es un proceso
secuencialy ordenado que comienza con la síntesisde una
cadena polipeptídica por el extremo amino terminal, o
N-terminal, y continúa con Ia adición de aminoácidos a Ia
cadenaen crecimiento,hastaque sellega al extremo carbo-
xilo terminal, o C-terminal. La primera evidencia experi-
mental de un mecanismo de traducción se dio en 1961 de
la mano de Howard Dintzis, que investigabala síntesisde
la hemoglobina en los eritrocitos en desarrollo,que se ha-
bían incubado brevemente con aminoácidos radiactivos.
Dintzis pensó que si el tiempo de incubación con un ra-
dioisótopo es relativamentebreve,la radiactividad presen-
te en las cadenasde hemoglobina completasdebería con-
centrarseen el extremo de la última molécula sintetizada.
Encontró que las concentracionesmás altas de radiactivi-
dad en las cadenasde hemoglobina completasestabaen el
extremo C-terminal, lo que indicaba que el extremo C-ter-
minal es lo último que se sintetiza de la cadenapolipeptí-
dica. Esto le permitió concluir que durante Ia traducción
del mRNA, los aminoécidosse van añadiendo q Ia cadena
polipeptídica en crecimiento, empezandopor el extremo N-
terminal y continuandohacia el extremoC-terminal.
En teoría, el nRNA podría leerse tanto en dirección
5' --.>3'como en dirección 3' --->5'. El primer intento de
determinar la dirección real de lectura implicó el uso
de moléculas de RNA artificiales. Un ejemplo típico es
el RNA sintético que se puede hacer añadiendo la ba-
se C al extremo 3' de poli(A), dando lugar a la molécula
5'- AJav4\rqJavavtauL\...AAc-3'. Cuando se añade a un siste-
ma de síntesisde proteínas in vitro, esteRNA estimula Ia
síntesisde un polipéptido que consta de un conjunto de
residuosde lisina con una asparaginaen el extremo C-ter-
minal. Dado que AAA codifica lisina y AAC codifica as-
paragina, esto significa que el zKNA se traduce en dirección
754 génica:
22 Expresión
Capitulo ll. Síntesis deproteínas
y clasiflcación
Regiónno traducible
Codón stop
UAG,UAA,
o UGA
Regiónno traducible
5' --->3'. Algunas evidenciasque lo confirmaron vinieron
de numerosos estudiosen Ios que las secuenciasde mRNA
se comparaban con las secuenciasde aminoácidos de las
cadenaspolipeptídicas que los codificaban. En todos los
casos,la secuenciade aminoácidos de Ia cadenapolipeptí-
dica correspondía al orden de los codones del mRNA Ieí-
dos en dirección5' -+ 3'.
Para comprender cómo la traducción del mRNA en di-
rección 5' --->3' conduce a la síntesisde polipéptidos en Ia
dirección del extremo N-terminal al extremo C-terminal,
es útil subdividir el proceso de traducción en tres fases,
como se muestra en la Figura 22.7: A La fasede iniciación,
en la que el mRNA se une al ribosoma y se posiciona para
la traducción; @ la fasede elongación,en la que los amino-
ácidossevan uniendo secuencialmentepor medio de enla-
cespeptídicos en el orden determinado por Ia ordenación
de codones del nRNA; y @ Una fasede terminación,enla
que el mRNA y la nueva cadenapolipeptídica se desligan
del ribosoma.
En las siguientes secciones, examinaremos detalla-
damente cada una de estas fases.Nuestra exposición se
centraráprincipalmente en la traducción en célulasproca-
riotas, donde los mecanismos son especialmentebien co-
nocidos; los procesosequivalentesen eucariotasson bas-
tantes similares. Los aspectosde la traducción que son
exclusivosde procariotas o eucariotasse encuentran fun-
damentalmente en Ia fasede iniciación, como veremos en
la siguientesección.
tequiete
factores
dela ttaducción
Lainiciación
y IRNA
subunidades
deiniciación, mRNA
ribosómicas,
iniciador
enprocadotas,
Iniciación Enla Figura22.8serepresenta
la
iniciación de la traducción en procariotas,donde se apre-
cia que la iniciación se puede subdividir en tres pasos
 @
[S IRNRllevandoel ,/ i
aminoácido ,^ro,
ffi orir"r ( ._á Subunidad
,X"
Anticodón
ry t*--#y.J
I rNrcrnctótt

s', Codon \
\-/ mRNA de iniciación
\
AUG UAG I

Codónde iniciación Codónstop I

I ! rlonencróru
I

II
I
v
Reciclado
de componentes
de la traducción
a-).1
aY'É,
w,--.
ffi:#Y
HOilpepuoo Factorde
comprero liberación

| rcnurNncróN

Codón stop

Figwa 22.7 Unavisión generalde la trcducción. La traducción se da en tres fases.O En la iniciación, los componentesdel aparato de
traducción seunen a la molécula de mRNA . Un IRNA que lleva el primer aminoácido (AAr), se une al codón de iniciación. @ En la
elongación,los aminoácidos son transportados hasta el mRNA por los tRNAs y sevan añadiendo,uno a uno, a la cadenapolipeptídica en
formación. @ En la terminación, un codón stop del mRNA es reconocido por un factor de liberación proteico, y el aparato de la traducción
queda aparte,liberando la cadenapolipeptídica completa.

distintos. En el paso O, los tres factores de iniciación
-denominados /Fl, IF2 e IF?- seunen a la subunidadri-
bosómicamenor,con el GTP unido a IF2.
En el paso@ de la Figura22.8,el mRNA y el IRNA que
llevael primer aminoácidoseunen a la subunidadribosó-
mica 30S.El mRNA seune a la subunidad30Sen la orien-
taciónadecuada por medio de una secuencia de nucleóti-
dos especialdenominadasitio de unión del zNNA al
ribosoma(conocidatambién como secuenciaShine-Dal-
garno,porsusdescubridores). Estasecuencia constade un
conjuntode 3-9 nucleótidosde purina (a menudo AGGA)
Iocalizados ligeramente por delantedel codón de inicia-
ción. Estaspurinas del mRNA apareancon una secuencia
rica en pirimidinasdel extremo3'del rRNA 165,que for-
ma el sitiode unióna rnNNAdelribosoma. Seha puestode
manifiestola importancia del sitio de unión a mRNA por
medio de estudioscon colicinas,que son proteínasprodu-
cidaspor ciertascepasde Escherichia coli, qre puedenma-
Una de estasproteínas,
tar a otrostipos debacterias. la co-
licina E3,matabacteriasanulandosu capacidadde síntesis
de proteínas. Despuésde la entradaen el citoplasmade las
bacteriassusceptibles,la colicinaE3 catúizala eliminación
de un fragmentode 49 nucleótidosdel extremo 3'del
rRNA 165,destruyendoel sitio de unión al mRNA y por lo
tanto, generandoribosomasque ya no puedeniniciar la
síntesisproteica.
La unión del mRNA a su sitio de unión en la subuni-
dad ribosómicamenor, sitúa el codón AUG de iniciación
del mRNA en el sitio P del ribosoma,desdedonde sepue-
de unir al anticodóndel IRNA adecuado.El primer indicio
de que hay un tipo especialde tRNA implicado en este
paso fue el descubrimientode que aproximadamentela
mitad de lasproteínasde E.colicontienenmetioninaen su
extremo N-terminal. Esto resultabasorprendenteporque
la metionina es un aminoácido relativamentepoco co-
mún, que representaun porcentajepequeñode los ami-
noácidospresentes en lasproteínasbacterianas. La explica-
ción de estaobservación provino del descubrimiento de
quelascélulasbacterianascontienendostipos de IRNA es-
pecíficosde metionina.Uno, denominadoTRNAM'I, llevala
metioninanormal, destinadaa la insercióndel aminoácido
en regionesinternasde lascadenas polipeptídicas.El otro,

Elmecanismo
detraducción 755
 Figusa22.8 Iniciaciónde la ttaducciónen
ptocatiotas, La formación del complejo
lad 30S
Subunidad30S de iniciación 70Stiene lugar en tres pasos.
,{¡e"-___/) lorpl
,I'A,L/
O Tresfactoresde iniciación (IF) yGTP
se unen a la subunidad ribosómica menor.
U n i ó nd e l o s l F s
a lasubunidad l,_ci"@
w re)
@ El aminoacil tRNA iniciador y el

''¿
mRNA seunen. El sitio de unión a mRNA
ribosómica30S
f J5:.",..deiniciación estácompuesto,al menos en parte, por

I una oorción del rRNA 165 de la

subunidad menor. @ La subunidad
ribosomal mayor se une al complejo.

@ \l.a',
Sitiode uniónal ribosoma
(secuenciaShine-Dalgarno)
El comoleio de iniciación 70Sresultante
tiene flvlet-tRNAfMeten el sitio P del
ribosoma.
.K
'lrlr{
mRNA -A U U
lniciadortRNA
Codónde iniciación
I union o"t,l\A ^. ^
I n r c r a o oy ro e l m H l \ A
a la subunidad30S
c@

5',

Sitiode unión
al mRNA Comoleiode iniciación30S

U n i ó nd e l a
subunidad
ribosómica50S

@*@*@

Complejode iniciación70S

denominado IRNATM'tleva una metionina que se convier- H

te en el derivado N-formilmetionina (fMet) después de la Grupoformilo
unión al IRNA (Figura22.9). En la N-formilmetionina, el
I
grupo amino de la metionina está bloqueado por la adi- NHO
ción de un grupo formilo y por lo tanto no puede formar lll
un enlacepeptídico con otro aminoácido; sólo estádispo-
cH3-s-cH"-cH, -c-c
I
nible el grupo carboxilo para unirse a otro aminoácido. H
Por lo tanto, la N-formilmetionina sólo puede situarseen
Figuta 22.9 Estructurade la N-formilmetionina.
el extremo amino terminal de la cadena polipeptídica, lo La N-formilmetionina (fMet) esel aminoácido modificado
que sugiere que el tRNAtr"t funciona como un iniciador con el que se inicia la sintesisde todos los polipéptidos en
de tRNA que inicia el proceso de traducción. Esta idea fue Dfocarlotas.

756 génica:
22 Expresión
Gapitulo ll, Síntesis de proteínas
y clasificación
confirmadapor el descubrimientode quelascadenaspoli-
peptídicasen los primerosestadiosde la síntesiscontienen
siempre N-formilmetionina en su extremo N-terminal.
Cuandoseha completadola cadenapolipeptídica(y en al-
gunoscasosmientrastodavíaseestásintetizando), el gru-
po formilo,y a menudola propiametionina,son elimina-
dos enzimáticamente.
Durante la iniciación.el IRNA iniciador con su N-for-
milmetionina seune al sitio P de la subunidadribosómica
30Spor la accióndel factor de iniciaciónIF2 (unido a
GTP), que puededistinguir al tRNAtor"tde otros tipos de
tRNAs.Estapropiedaddel IF2 a¡rda a explicarpor qué los
codonesAUG de iniciación seunen al IRNAÍ¡4"tiniciador
mientrasquelos codonesAUG localizadosen otro sitio del
mRNA se unen al tRNAM" no iniciador. IJna vez que el
tRNAñ4'tentra en el sitio P,su anticodónapareacon el co-
dón deiniciaciónAUG del mRNA,y seliberanIFI e IF3.El
complejoformadopor la subunidad30Scon el GTP-IF2,
el mRNA y la N-formilmetionil IRNATM'I, seconocecomo
complejo de iniciación 30S.
Por último, en el paso@ de la Figura22.8,el complejo
de iniciación30Sseune a una subunidadribosómica50S
libre, generandoel complejo de iniciación 70S.La unión
de la subunidad50Sseproducegraciasa la hidrólisisdel
GTP asociadoaIF2,que seda cuandoIF2 abandonael ri-
bosoma.En estafase,los tres factoresde iniciaciónhan
sidoliberados.
Iniciaciónen eucariotas.El procesode iniciaciónen euca-
riotasrequiereun conjunto diferentede factoresde inicia-
ción (denominados eIFs),una ruta algodistintade ensam-
blaje del complejode iniciacióny un iniciador especial
IRNAM" que -como el IRNA normal de la metionina,
pero a diferenciadel IRNR iniciador en procariotas- lleva
una metionina que no ha sido previamenteformilada. El
factor de iniciación eIF2,con el GTP ya unido, se une al
iniciador metionil tRNAM"t;posteriormenteesteIRNA se
une a la subunidadmenor del ribosoma,junto con otros
factoresde iniciación.El complejoresultanteseune des-
puésal extremo5' de un mRNA, reconociendoel casquete
5'(en algunassituaciones el complejopuedeunirsea un si-
tio internode unión al ribosomao IRES,que seencuentra
por encimadel codón de iniciación en ciertostipos de
mRNA, incluyendomRNAsvirales).Despuésde la unión
a un mRNA, la subunidadmenor del ribosoma,con el
tRNA iniciador ya unido, rastreaa lo largo del mRNA y
normalmenteempiezala traducciónen el primer triplete
AUG que encuentra.Los nucleótidossituadosa ambosla-
dos del codón de iniciación eucariota,parecenestarimpli-
cados en el reconocimiento; ACCAUGG (denominada
también secuenciaKozac)es una secuenciade iniciación
común, en la que el triplete subrayadoesel codón de ini-
ciación.Cuandoel TRNAM'Iiniciador apareacon el codón
de iniciación, la subunidad ribosómica mayor se une al
complejo.
Laelongación de la cadenaimplicaciclossecuenc¡ales
deunióndelaminoacilIRNA. fomaciéndelenlace
peptíd¡co
y traslocación
Una vezformadoel complejode iniciación,sesintetizauna
cadenapolipeptídicapor adicionessucesivas de aminoáci-
dos. de acuerdocon la secuenciade codonesdel mRNA.
Comoseespecifica en la Figura22.10,estaetapade elonga-
ción de la síntesisdel polipéptido implica un ciclo repetiti-
vo de trespasosen el que O la unióndeun aminoacilIRNA
lleva un nuevo aminoácidoa la posiciónde unión a la ca-
denapolipeptídica,@ 7aformacióndel enlacepeptídicoune
el aminoácidoa la cadenapolipeptídicaen formación,y @
seproduceun desplazamiento del mRNA de tresnucleóti-
dos mediante el proceso de traslocaciónpara llevar al si-
guientecodón a la posición correctapara la traducción.
Cadauno de estos pasos sedescribirámásdetalladamente
en los siguientes párrafos.
Unióndelaminoacil IRNA. Al principio de la etapade elon-
gación,el codón de iniciaciónAUG del mRNA estálocali-
zadoen el sitio P del ribosomay el segundocodón (el co-
dón inmediatamentepor debajodel codón de iniciación)
estálocalizadoen el sitioA. La elongaciónempiezacuando
un aminoacilIRNA cuyo codón escomplementarioal se-
gundocodónseune al sitioA del ribosoma(véase Ia Figu-
ra 22.10,O). La unión de estenuevoaminoacilIRNA al
codón del sitio A requieredosfactoresde elongaciónpro-
teicos,EF-Tuy EF-TS, y estámediadapor la hidrólisisde
GTP.A partir de estemomento,todoslos nuevosaminoá-
cidosque sevan incorporandoseunen primero al sitio A
(aminoacil),de ahí el nombrede estesitio.
La funciónde EF-Tu,con su GTP unido,estransportar
el aminoacilIRNA al sitio A del ribosoma.El complejoEF-
Tu-GTPpromuevela unión de todoslos aminoacilIRNA
al ribosoma,exceptoel IRNA iniciadorasíseasegura, por
lo tanto,que los codonesAUG localizados por debajodel
codónde iniciaciónno reclutenerróneamente haciael ri-
bosomaa un IRNA iniciador.Durante la transferenciadel
aminoacilIRNA al ribosoma,sehidroliza GTPy seliberael
complejoEF-Tu-GDP.La función de EF-Tses regenerar
EF-Tu-GTPa partir de EF-Tu-GDPparaeI siguienteciclo
de elongación (véase Figura22.10,@).
Los factoresde elongaciónno reconocenanticodones
concretos,lo que significaque cualquiertipo de aminoacil
IRNA (distinto del IRNA de iniciación) puede ser trans-
portadohaciael ribosoma.Sinembargo,algunosmecanis-
mos debenasegurarque en el ribosomasólo seretieneel
aminoacil tRNA correcto para su utilización, durante la
formacióndel enlacepeptídico.Si el anticodónde un nue-
vo aminoacil IRNA no es complementariodel codón ex-
puestoen el sitio A, el aminoaciltRNA no seune al riboso-
ma lo suficientecomo para que pueda producirsela
hidrólisisde GTP.Cuandoel ajusteescasicorrectopero no
exacto,puede darseuna unión transitoria y se hidroliza
Elmecanismo
detraducción 757
 lniciación fMet (o péptido) Terminación

AminoaciltRNApara
el segundocodón

tRNA 5', . . J

descargado ...-),)-)D>

0q.
X
'fr-rrll

(y
r(ír¡¡)
'j I Translocación
I
I

l'-6a
I
'fzr¡{-

¿# Roni¡laia

I "^
JY W,4
/,?GTp:
de EF-Tucon
la ayudade
trtr T^

€f,5s Centrode la peptidiltransferasa

Figwa22.L0 Elongaciónde la cadenapolipeptidicaen ptocariotas. La elongación de la cadenadurante la síntesisde proteínas requiere Ia

presenciade un peptidil IRNA o, en el primer ciclo de elongación (como se muestra aquí), un fMet-tRNAM"t en el sitio peptidil (P). e fa
elongación empiezacon la unión del segundoaminoacil tRNA al sitio aminoacil (A) del ribosoma. El IRNA estransportado al sitio A por el
factor de enlongación EF-Tu, que también lleva unido GTP.Cuando el IRNA seune seproduce la hidrólisis de GTP y selibera EF-Tir. EF-Ts
facilita el reciclajede EF-Tu. @ Seforma un enlacepeptídico entre el grupo carboxilo de la fMet (o, en un ciclo posterior, del aminoácido
terminal) del sitio P y el grupo amino del nuevo aminoácido situado en el sitio A. Esta reacción estácatalizadapor la actividad peptidi-
transferasade Ia molécula de IRNA 23Sde la subunidad mayor del ribosoma. @ Tras la unión del EF-G-GTP al ribosoma, sehidroliza el
GTP y el tRNA que lleva el polipéptido elongado setrasloca del sitio A al P.El tRNA descargadose desplazadel sitio P al sitio E (salida) y
deja el ribosoma. La traslocación del peptidil IRNA desplazatambién al mRNA. En consecuencia,el siguiente codón del mRNA se desplaza
al sitio A, que estáabierto para el siguiente aminoacil IRNA. Esteciclo se repite cadavez que se añadeun nuevo aminoácido.

Capítulo génica:
22 Fxpresión ll. Síntesis deproteínas
y clasificación
GTP.Si embargo,los desapareamientos entreel anticodón el peptidil IRNA se desplazadel sitio P al sitio E (salida),
del aminoaciltRNA y el codón del nRNA generanuna es- dondese libera del ribosomaQtéase Figura22.10,@). El
tructura anormal del sitio A que normalmenteesdetecta- procesode traslocaciónrequiereque un factor de elonga-
da por el ribosoma,1oque suponeun rechazoa la unión ción,denominadoER-Gyunamoléculade GTRseasocien
del aminoaciltRNA. Estosmecanismosde seleccióncontra transitoriamente al ribosoma.La energíaparala trasloca-
aminoaciltRNA incorrectos,junto con la capacidadde co- ción procedede la hidrólisisde esteGTP.
rrección de erroresde las aminoacil IRNA sintetasasdes- Durante Ia traslocación,el peptidil IRNA permanece
crita anteriormente,hacenque la tasafinal de error en la unido medianteun puentede hidrógenoal mRNA, mien-
traducción no seanormalmentemayor de 1 aminoácido tras el mRNA avanzatresnucleótidos.El papelfundamen-
incorrectopor cadai0.000incorporaciones. tal del peptidil IRNA en el procesode traslocaciónse
demostróusandomoléculasde tRNA mutantescon anti-
Formación del enlacepeptidico.Tias la incorporacióndel codonesde cuatronucleótidos.EstostRNAsseunen me-
aminoaciltRNA adecuadoen el sitio A del ribosoma,el si- diante puentesde hidrógeno a cuatro nucleótidosdel
guientepasoesla formación de un enlacepeptídicoentre mRNA y cuando se produce la traslocación,el mRNA
el grupo amino del aminoácidounido al sitio A y el grupo ayanzacuatro nucléotidosen lugar de los tres habituales.
carboxilopor el que el aminoácidoinicial (o la cadenapo- Peroaunqueestaobservaciónindica queel tamañodel bu-
lipeptídicaen formación) seencuentraunido al IRNA del cle del anticodóndel peptidil tRNA unido al sitio A deter-
sitio P.La formación de esteenlacepeptídicohaceque la mina cúanto avanzael mRNA durante la traslocación,no
cadena polipeptídica en formación sea transferida del estáclarala basefísicadel mecanismoque translocareal-
IRNA localizadoen el sitio P al IRNA del sitio A (véaseFi- menteel mRNA sobrela superficiedel ribosoma.
gura 22.10,@). La formacióndel enlacepeptídicoes el El efectoneto de la traslocaciónes el desplazamiento
único pasoen la síntesisde proteínasque no requiereni del mRNA al sitio A, de maneraque el ribosoma estáde
factoresproteicosno ribosómicosni una fuenteexternade nuevolisto pararecibir el siguienteaminoaciltRNA y re-
energíacomoel GTP o el AIP. La energíanecesaria proce- petir el ciclo de elongación.La única diferenciaentrelos
de de la ruptura del enlacede alta energíaque une el ami- sucesivos ciclosde elongacióny el primer ciclo esque un
noácidoo la cadenapolipeptídicaal IRNA localizadoen el tRNA de iniciaciónocupael sitio P al principiodel primer
sitio P. ciclo de elongacióny esun peptidil tRNA el que lo ocupa
Durantemuchosañosse pensóque la formacióndel al principio delos siguientesciclos.A medidaqueseañade
enlacepeptídicoestabacatalizadapor una hipotéticapro- un nuevo aminoácido,el mRNA seva leyendoprogresiva-
teína ribosómicaa la que se daba el nombre de peptidil menteen dirección5' --->3' . El extremoamino terminal de
transferasa.Sin embargo,en 1992Harry Sollery suscole- la cadenapolipeptldicaen crecimientosaledel ribosomaa
gasmostraron que la subunidadmayor de los ribosomas travésde un canaldesalidasituadoen la subunidad50S,y
bacterianosreteníala actividad peptidil transferasades- la cadenaempiezaa plegarsegeneralmente segúnsalede
puésde habereliminadotodaslas proteínasribosómicas. estetúnel.La síntesisde los polipéptidosesmuy rápida;en
Sin embargo,estaactividadpeptidil transferasadesaparece una célulade E.colien crecimiento,un polipéptidode 400
rápidamentecuandoel rRNA sedegradapor exposiciónde aminoácidos puedesintetizarse en ¡10segundos!
los ribosomasa ribonucleasas. Estasobservaciones suge-
rían que era el rRNA en lugar de lasproteínasribosómicas
La terminaciónde la sintesispolipeptídica está mediada
el responsablede la catálisisde la formación del enlace por
factoresde libelaciónque reconocencodonesstop
peptídico.En los ribosomasbacterianos, la actividadpep-
tidil transferasaseha localizadoen el rRNA 23Sde la su- El procesode elongaciónrepresentado en la Figura22.10
bunidad mayor del ribosoma,y los datosestructuralesde continúa de forma cíclica,leyéndose un codón tras otro y
alta resoluciónobtenidospor rayosX señalancomo sitio añadiendosucesivos aminoácidosa la cadenapolipeptídi-
catalíticoa un átomodenitrógenosituadoen un nucleótido ca,hastaque uno de los tresposiblescodonesstop (UAG,
de adeninaconcretode la cadenadeARN. Así,el rRNA 23S UAA o UGA) del mRNA llegaal sitio A del ribosoma (Fi-
es un ejemplo de ribozima,una enzímacompuestasóIo gura22.Il).A diferenciade lo que sucedecon otroscodo-
por RNA (véaseCapi1rtlo 6, página161). nes,no hay moléculasde tRNA que reconozcancodones
stop.Estoscodonesstopson,sin embargo,reconocidos por
Traslocación. Despuésde la formacióndel enlacepeptídi- proteínasdenominadasfactoresde liberación, que mime-
co, el sitio P contieneun IRNA vacío,mientrasque el sitio tizan la estructuramolecular de las moléculasde tRNA.
A contieneun peptidil IRNA (el RNA al que seencuentra que llevandoGTR seunen al sitio A del ribosomay finali-
unida la cadenapolipeptídica).El mRNA avanzaentonces zanlatradtcción, puestoque separana la cadenapolipep-
una distanciade tres nucleótidosrespectoa la subunidad tídica completadel peptidil IRNA. El corteeshidrolítico; el
menor,llevandoel siguientecodón a la posiciónadecuada polipéptido setransfierea una moléculade aguaen lugar
parala traducción.Durante esteprocesode traslocación, de a un aminoácidoactivado,quedandoun grupo carboxi-

Elmecanismo
detraducción 759
 ciones adecuadas en un tubo de ensayo. Sin embargo, el
plegamiento de las proteínas dentro de las células estánor-
malmente facilitado por proteínas denominadas chapero-
nas moleculares (véasepág.32).De hecho, el plegamiento
adecuado de algunas proteínas requiere la acción de varias
Sitio
chaperonas distintas que actúan en diferentes fases del
proceso de plegamiento, empezando por el momento en
que la cadenapolipeptídica empieza a salir del ribosoma.
Una de las funciones primarias de las chaperonas es unirse
a las cadenaspolipeptídicasdurante las primeras etapasdel
plegamiento,evitando así que interaccionencon otros po-
Codónstop localizado
en el sitioA lipéptidos antesde haber adquirido su conformación ade-
(UAG,UAAo UGA) cuada. Cuando se producen fallos en el plegamiento, las
proteínasmal plegadaspueden ser destruidaso, en algunos
@
'h \-______-Y-
casos,reparadascon la ayuda de las chaperonas.Sin em-
bargo, algunostipos de cadenaspolipeptídicasincompletas
o incorrectamente plegadastienden a unirse entre sí, for-
mando agregadosinsolublesque sedepositanen el interior
Factor de las célulaso entre ellas.Estosdepósitosproteicosdesen-
de liberación cadenan alteracionesen Ias funciones celularesy pueden
[q.
'r- ) Subunidades incluso dar lugar a degeneracióntisular y muerte celular.
ribosómrcas El Anexo 22A describecómo estossucesoscontribuyen al
é)
u1fll desarrollo de enfermedadescomo el Alzheimer o el <mal
I R N Al i b r e
de las vacaslocaso.
Sehan encontrado chaperonasen todo tipo de organis-
mos vivos, desdebacteriasa orgánulos de célulaseucario-
tas.Dos de las familias de chaperonasmás frecuentesse de-
nominan Hsp70 y Hsp60. (El <Hsp> procede de la
designación inicial de estas proteínas como <heat shock
Figura22.t1 Terminaciónde la traducción. Cuando un codón proteins) -proteínas de choque térmico- porque sepro-
stop -UAG, UAA o UGA- llega al sitio A, es reconocido por ducen en bacteriassujetasa condiciones de estréscomo la
factoresde liberaciónasociadosa GTP,que seasociana estos exposición a una elevadatemperatura; en estascondicio-
codones.La hidrólisisde GTP seasociaa la liberacióndel nes,las chaperonasfacilitan el replegamientode las proteí-
polipéptido completo,seguidode la disociacióndel IRNA, mRNA,
nas dañadaspor el calor). Las dos familias de chaperonas
subunidadesribosómicasy factoresde liberación.
operan mediante mecanismos algo distintos, pero ambas
tienen actividad ATPasay funcionan uniendo y liberando
lo libre al final de la cadenapolipeptídica,que essu extre- cíclicamente a sus proteínas sustrato, con el concurso de
mo C-terminal.Al mismo tiempo que el polipéptidoseli- ATP. Es Ia liberación de la proteína lo que requiere la hi-
bera por la hidrólisisde GTR los otros componentes del drólisis de ATP. En los últimos años se ha confirmado que
complejoribosómicose separan.Ahora estánde nuevo las chaperonasestán implicadas en otras actividadesade-
disponiblesparasu reutilizaciónen un nuevocomplejode más del plegamiento;veremosun ejemplo relacionadocon
iniciación. el transporte de proteínasmás adelante,en estemismo ca-
pítulo.

del polipéptido
El plegamiento estáfacilitado
pof chapefonas
moleculales
Paraque los polipéptidossintetizados<denovo) puedan
llevara cabosusfuncionesbiológicas,debenplegarsepara
adquirir la conformacióntridimensionaladecuada.Los
polipéptidossuelenempezara plegarseen susestructuras
secundaria y terciariacuandotodavíaestánsiendosinteti-
zados.Como vimos en los Capítulos2 y 3,la estructura
primaria de una proteínaessuficienteparadeterminarsu
estructuratridimensional,y de hechomuchospolipépti-
dos sepuedenplegarespontáneamente en susconforma-
deproteínas
Lasíntesis unafracción
sueleutilizar
de lasreseruas
importante energéticas celulares
La elongación de las cadenaspolipeptídicas implica la hi-
drólisis de, al menos, cuatro enlacesfosfoanhídrido de alta
energía,por cada aminoácido añadido. Dos de estosenla-
ceslos proporciona el AIP que se hidroliza a AMP duran-
te la reacción de la aminoacil-tRNA sintetasa.Los restantes
los aportan dos moléculas de GTP: una que se utiliza en la
unión del aminoacil tRNA al sitio A, y la otra en el paso de
traslocación. Asumiendo cue cada enlace fosfoanhídrido

760 génica:
22 Expresión
Capítulo ll. Síntesis deproteínas
y clasiflcación
A ne x o

ENpBnuEDADES ASocTADASAL pLEGAMIENTo DE pRornÍNns

Antesde desarrollarsusfunciones,lascadenaspolipeptídicas Lasanomallasen el plegamientodeproteínastambiénsonla
debenplegarseadecuadamente. Sehan encontradomásde una basede un conjuntode enfermedades degenerativas queincluyen
docenade enfermedades humanasasociadas a defectosen el el <scrapie>en lasovejasy la <enfermedad delasvacaslocas> en el
procesode plegamiento. Entrelasmejor conocidasestála ganadobovino.StanleyPrusiner,querecibióel PremioNobelen
enfermedadde Alzheimer,una disfunción mental que afectaa uno 1997por serpioneroen los trabajosde estecampo,propusoque
de cadadiezamericanos de másde 65 años.Lossíntomasdel estasenfermedades podíansertransmitidaspor partlculasproteicas
Alzheimerseasociancon,al menos,dostipos de anomalías infecciosasdenominadas priones (sedescribenbrevemente en el
-agregadosintracelulares de una forma poliméricade una Capltulo4). Dadoquelos prionesno parecencontenerDNA o RNA,
proteínaasociada a losmicrotúbulos,denominadatau,y placas Prusinerha formuladouna teoríaúnicaparaexplicarcómolos
amiláceasextracelularesque contienenfibras de una pequeña prionespodrlantransmitirla enfermedadcausandouna expansión
proteínallamadap-amihcm (AÉ).La evidenciade queAB podría infecciosadelplegamientoanormalde lasp-rotelnas. De acuerdo
serIa causaprimariadelAlzheimersurgióa principiosde los años con estateoría,un prión (denominadoPrP"')essimplementeuna
90,cuandosedescubrióquealgunasformashereditarias de versiónmal plegadade una protelnacelular-normal(denominada
Alzheimerestáncausadas por mutacionesen el precusorde una PrP").Cuandola proteínamal plegadaPrP""encuentrauna cadena
proteínadela membranaplasmática, denominadaAPP,cuyo polipeptídicanormal PrP" en procesode plegamiento, provocaun
procesamientoda lugar a AB. El mutanteAPP da lugar a una forma plegamientoanómaloen Ia protelnanormal (Figura22A.1).La
desplegada deAB queseagregaen largasfibras,creandoplacas proteínamal plegadaresultanteprovocaun dañoen la célula
amiláceas queseacumulanen el cerebrocausandopérdidade la nerviosadel cerebroresponsable de queseproduzcanmovimientos
funciónmentalpor dañoen lasneuronaspróximasa lasplacas. musculares incontroladosy posteriormente la muerte.La presencia
Aunque estaevidenciagenéticapone de manifiestola de cantidades muy pequeñasdeprionespuededesencadenar el
importancia de lasplacasamiláceas,la mayoríade los indiüduos plegamientoprogresivode cadenas polipeptldicasnormalesPrPc
quedesarrollanAlzheimerno presentanmutacionesen el precusor en susformasincorrectasPrP"",lo quepermitea lospriones
APPy por lo tanto producenla versiónnormal deAp. Ia moléculas reproducirsea sí mismossin necesidad de ácidosnucleicos.
normalesde AB son solublesy por lo tanto inofensivasen la El descubrimientode diferentes(cepas>de prionesresponsables
mayorlade los individuos, pero en algunaspersonas,estasmismas de enfermedades ligeramentedistintasfue inclusomássorprendente.
moléculasAB seagreganen fibras que seacumulanformando las Cuandolos científicosmezclanpequeñascantidadesde distintas
placasamiláceas. Aunquela razón de estecomportamientono estii cepasPrPe en tubos de ensayoseparados,con grandescantidades
clara,el descubrimientode que laspersonasque tienen distintas del mismopolipéptidoPrP'normal,cadatubo producemayor
formas de una protelna denominadaapolipoproteína E (apoE) cantidaddel PrP"'específico de la cepaqueseintrodujo
tienen distinto riesgode padecerIa enfermedad,aportó alguna originalmenteen el tubo. Estaposibilidaddeidentificardistintas
pista.ApoE funciona fundamentalmentecomo transportadorde cepasde prionesha permitido a los investigadores probar que más
colesterol, perouna pequeñacantidadseencuentraasociada a las de 100personasen el ReinoUnido sehan infectadocon priones
placasamiláceas en los espacios El mecanismopor
interneuronales. de <vacaslocas>por comercarnede ganadoenfermo,Io que tiene
el queapoEejercesu efectoen Ia enfermedaddeAlzheimerno está como resultadouna forma letal de la enfermedadde lasvacaslocas
claro,perosehan propuestodosposibilidades. Una esqueapoE conocidacomoenfermedad deCreutzfeldt-Jakob,o vC,lD.Sehan
facilitedirectamente la formaciónde lasplacasamiláceas en los sacrificadocasi200.000cabezas de ganadoinfectadoen el Reino
espacios entrelascélulasnerviosasinterfiriendoen el plegamiento Unido paratratar de acabarcon la propagaciónde la enfermedad
adecuadodeAB o en su eliminacióndel espaciointercelular. La peropodría morir másgentede vClD por ingestiónde carnede
otra posibilidadesqueapoEliberecolesterolen lasmembranasde vacunoinfectadaen lasdosdécadaspasadas.
lascélulasnerviosas, produciendoun mediorico en colesterolque
Polipéptido ParcialmenteCompletamente
facilitael procesamiento deAPPen AB.Estaideaestáapoyadapor plegado
desplegado plegado
el descubrimientode quelasenzimasimplicadasen la conversión
deAPPenAB seencuentranen regionesde Ia membrana
plasmáticaricasen colesterol.
Esperemos quela mejoradel conocimientode la relaciónentre
=d-UT[fEi ¡ PrPU
lasplacasamiláceasy el Alzheimerconduzcaal desarrollode (oroteinanormal)
tratamientoseficaces. Seha visto en animalesde experimentación PrPscpromueve |
quela formaciónde placasamiláceas sereducecon tratamientos laagregación
^ +
talescomo:(a) inhibidoresenzimáticos quebloqueanel
procesamiento deAPP paradar AB,(b) antibióticosquedisuelven .d.^ -,t^
lasplacasamiláceas o previenensu formacióno (c) vacunasque lNrlg-Iñ\
contienenAB y estimulanel sistemainmune para eliminar las 14{rf,(J-*{
-jrú<r ,
placaso prevenirlos depósitosdeAB.Estasvacunaspuedenincluso PrPsc f'.t"
protegera los ratonesde la pérdidade memoria,lo quehacequese (prión) - r- v
puedaalbergarla esperanza de acabarcon estadevastadora Figura22A.1-Modelodelmecanismoporel quelos pilones(PrPs')
enfermedaden un futuro no muylejano. podrianplomover
su autopropagación.

Elmecanismo
detraducción 76r
tieneuna AG'' (energíalibre estándar)de 7,3kcal/mol,los fundamental,obviamente,como portadoresdel mensaje
cuatro enlacesrepresentanun requirimiento de energíali- genético.Lasmoléculasde IRNA funcionan como adapta-
bre de 29,2kcallmolpor cadaaminoácidoinsertado.Así, dores que llevan los aminoácidosa los codonesapropia-
lasetapasde elongaciónrequeridas parasintetizarun poli- dos.Por ultimo, pero no menosimportante,las moléculas
péptido de 100aminoácidos tienen un valor de AG"' de de rRNA tienen múltiples funciones.No sólo son compo-
aproximadamente2.g20 kcal/mol. más,seutilizan GTPs
Es nentes estructuralesde los ribosomas,sino que uno de
adicionalesdurante la formación del complejo de inicia- ellos(el rRNA 165dela subunidadmenor)funcionacomo
ción, durantela unión transitoria de aminoaciltRNAs in- lugar de anclajedel mRNA, y otro (el rRNA 23Sde la su-
correctosal ribosomay durantela etapade terminaciónde bunidad mayor) catalizalaformación del enlacepeptídico.
la síntesisde polipéptidos.Claramente,la síntesisde AIP Lasimportantesfuncionesdel RNA podrían ser un vesti-
esun procesoenergéticamente costoso;de hecho,supone gio evolutivode los primerosorganismos vivos.Como vi-
una importante fracción de las reservasenergéticasde la mos en el Capítulo 6, el descubrimientode RNAscatalíti-
mayoriade lascélulas.Si consideramostambién la energía cos (ribozimas)ha reforzadoIa idea de que los primeros
requeridaparalasíntesisdel RNA mensajero y los compo- catalizadores de la Tierra pudieronhabersido moléculas
nentesdel aparatode la traducción,asícomo los requeri- de RNA autorreplicativasen lugar de proteínas.Así,los ri-
mientosdeATP de laschaperonas, el costeenergéticode Ia bosomasde nuestrosdíaspodríanhaber evolucionadoa
síntesisde proteínasseráaún mayor. partir de un aparatode traducciónprimitivo basadoínte-
Es importante recordar que durante la traducción, el gramenteen moléculasde RNA.
GTP no funcionacomo un donadortípico de ATP:su hi-
drólisisno estádirectamente ligadaa la formaciónde un
enlacecovalente. El GTP pareceinducir cambiosconfor- Mutación y traducción
macionalesen los factoresde iniciacióny elongaciónpor
unión y disociacióncon estosfactores.Estoscambioscon- Despuésde la descripcióndel procesonormalde traduc-
formacionales permitena los factoresunirse(no covalen- ción,vamosa considerar lo quesucedeconlosmRNAsque
temente)y serliberadosdel ribosoma.Además,la hidróli- llevanmutaciones, cuando son traducidos.El Anexo 22B
sisde GTP unido a EF-Tucontribuyeaparentemente a que da una visión general de los principalestipos de mutacio-
el procesode traducciónseapreciso,porqueintervieneen nesy su impactoen las cadenas polipeptidícas producidas
el mecanismode correcciónde errores,que rechazalos a partir de los mRNAs mutantes. La mayoría de las muta-
aminoaciltRNAs incorrectosque entran en el sitio A. cionesde un codónafectansimplemente a un aminoácido
y lasmutacionesen la tercerabasede un codónno suelen
producirun cambiode aminoácido.Sin embargo,lasmu-
Resumende la traducción
tacionesqueañadeno eliminancodonesstop,o cambianel
Hemosvisto que la traducciónsirvecomo mecanismode marcode lecturapuedenalterarprofundamente la traduc-
conversiónde la informaciónalmacenada en las cadenas ción.En estasección, veremosdistintasformasde respues-
de codonesdel mRNA,en cadenas de aminoácidos unidos ta de la célulaa estasmutaciones.
medianteenlaces peptídicos.Para una visión general del
proceso,puedevolver a la Figura 22.7.A medida que el
en la dirección LostRNAssupresoreseliminanlos efectosde al$unas
ribosomalee el mRNA codón tras codón
mutaciones
5' --->3' ,los distintosaminoácidosson reclutadoshaciael
ribosomapor apareamiento debasescomplementarias en- Lasmutacionesque conviertenlos codonesque codifican
tre los codonesdelmRNAylos anticodones de lasmolécu- aminoácidosen codonesstop seconocencomo mutacio-
las de aminoacil-tRNA.Cuando se encuentraun codón nessin sentido.La Figura22.12representa un casoen el
stop,selibera el polipéptido completoy el mRNA y lassu- quela mutaciónen un par debasesen el DNA convierteun
bunidadesribosómicas estánde nuevodisponibles paraun codón lisina AAG del mRNA en una señalUAG stop.Las
nuevoproceso. mutacionessin sentidocomo éstasuelendar lugar a poli-
La mayoríade los mensajes son leídospor variosribo- péptidosincompletos,no funcionales, que han terminado
somasque sedisponencontinuossobreuna mismamolé- de sintetizarseprematuramenteen el codón stop mutante,
cula de mRNA. Un conjunto de estosribosomasunido a comomuestraIa Figura22.12b.
una moléculademRNA sedenominapolirribosoma(véa- Aunque las mutacionessin sentidoen genesesenciales
seFigura21.18).Mediantela síntesisde variospolipépti- suelenser letales,los fagoscon mutacionespuedencrecer
dos al mismo tiempo a partir de la misma molécula de en ciertotipo de bacterias.Estasbacteriasespeciales <supri-
mRNA, los polirribosomasmaximizanla eficienciade uti- men>el efectode terminaciónde lasmutacionessin senti-
lizacióndelmRNA. do porque tienen un IRNA mutante que reconocelo que
Lasmoléculasde RNA tienen funcionesespecialmente en otrascepasseríaun codónstope insertaun aminoácido
importantes en la traducción.El mRNA tienen un papel en eselugar.En el ejemplomostradoen la Figura22.I2c,

762 génica:
22 Expresión
Capítulo ll. Síntesis deproteinas
y clasificación
 un tRNA mutante tiene un anticodón alterado que Ie per-
DNA de g'-ffffQ-$'
mite leer el codón stop UAG como codón tirosina. El ami-
doble hélice J ' - T T C - 5 ' noácido insertado escasisiempre diferentedel aminoácido
t _ rranscnpcron que estaríapresenteen esaposición en la proteína no mu-
I
Y
tada, pero la característicamás importante de la supresión
mRNA g'-AAG-3'
es que previene la terminación y permite la formación de
conmoléculas
I Traducción
(AAGse un polipéptido completo.
I de tRNAnormales
I leecomocodónlisina) Una molécula de tRNA que elimina de este modo el
ProteínaH.N+- l-Ys coo- efecto de una mutación se denomina tRNA supresor.
Como puede imaginar, existen tRNAs supresoresque eli-
Proteínaf uncionalsalvaje
minan los efectosde otros tipos de mutaciones ademásde
(a) Gel normal, moléculas de IRNA normales mutacionessin sentido (véaseProbIema22.7al final del
capítulo). Para que la célula sobreviva,el IRNA supresor
debe ser relativamente ineficiente; de lo contrario, el apa-
DNAde $'-TAG-3/ rato de síntesisde proteínas produciría demasiadaspro-
d o b l e h é l i c ef , ' - A T C - s ' teínasanormales.Un supresor demasiadoeficiente podría
Transcripción causar,por ejemplo, que los codones stop normales se le-
I
V yeran como si codificaran un aminoácido, de modo que
mRNA $'-UAG-3' no se daría la terminación normal. De hecho, la síntesisde
conmoléculas
I Traducción
(UAGse la mayoría de los polipéptidos acaba adecuadamenteen
I de IRNAnormales
leecomocodónstop) las célulasque contienen tRNAs supresoresde mutaciones
{
sin sentido, lo que indica que el codón stop situado en el
Proteína
flrN+-COO-
sitio adecuado para la terminación de una secuenciade
nofuncional
Fragmento
mRNA sigue desencadenandola terminación, mientras
(b) Genmutante,moléculasde IRNAnormales que el mismo codón en una localización interna no Io
hace.Esto sugiereque ademásde requerir un codón stop,
Ia terminación normal implica el reconocimiento de una
DNAde $'-TAG -3', secuenciaespecialo una configuración tridimensional Io-
doblehélice J' - ATC- 5' caIízada cerca del final de Ia secuencia codificadora del
Transcripción mRNA.
I
mRNA $'-UAG-3'
Ladegradaciónmediadaporcodones sinsentido
I Traducclóncon un RNAt
potausenc¡a
y la degradación determinación
I mutante(UAGse leecomo
{ tirosina) sonmecanismos quefacilitan
la destlucciÓn
demRNAs
PfoteínaH.N+- Tyr coo- defectuosos
Proteínamutantefuncional En ausenciade un IRNA supresoradecuado, un codónsin
sentidopuedehacer que la traduccióntermine prematura-
(c) Gen mutante, molécula de IRNA mutante (supresor)
mente,generando por lo tantoun polipéptidoincompleto.
Figuta22.L2 Mutacionessin sentidoy IRNAsupresores. (a) Un Paraevitaresteproblemalascélulasde losmamíferos(que
gen salvaje(no mutado, normal) setranscribeen una moléculade normalmentecarecende IRNA supresores) destruyenlos
mRNA que contiene el codón AAG en cierta posición. Tras la mRNAsquecontienencodonesstopprematuros,median-
traducción,estecodón codificael aminoácidolisina (Lys)en una te un mecanismodenominadodegradaciónmediadapor
posición de la proteína funcional salvaje.(b) Si seda una mutación
en el DNA que cambia el codón AAG del mRNA por UAG, e] codón
codonessin sentido. La piezaclavede estemecanismoes
UAG seleerá como una señalstop, y el producto de Ia traducción el complejode unión a exones(EJC),un complejo multi-
seráun polipéptido corto, no funcional. Las mutaciones de estetipo proteico que se deposita,durante el ayustedel mRNA, en
se denominan mutaciones sin sentido. (c) En presenciade una cadapunto donde se elimina un intrón del pre-mRNA.
molécula de tRNA que lea el UAG como un codón que codifica un Así,cadanuevamoléculademRNA tendráuno o masEJCs
aminoácido en lugar de una señalstop, seinsertará un aminoácido
y continuará la síntesisdel polipéptido. En el ejemplo mostrado,
unidos,uno cercadel principio de cadaunión exón-exón.
UAG selee como codón tirosina porque el mutante tirosin-tRNA Durante la traducción,la distinción entre codonesstop
tiene como anticodón 3'-AUC-5' en lugar del 3'-AUG-5' común normalesy prematurossehaceen basea su relacióncon
(que reconoceel codón tirosina 5'-UAC-3'). La proteínaresultante losEJCs.Si en un mRNA seencuentraun codónstopantes
serámutante porque la lisina ha sido sustituida por una tirosina en del último EJC -en otras palabras,antes del último
una posición determinada de la cadena.La proteína podría seguir
siendo funcional si su actividad biológica no estágravemente
exón-, debeser un codón stop prematuro.Estecodón
afectadapor la sustitución del aminoácido. dará lugar a un procesode traducción que terminará

y traducción 763
Mutación
Anexo
UN cBNERADOR DE MUTACIONES
En su sentidomás amplio, el término mutación hacereferencia
a cualquiercambio en la secuenciade núcleotidosde un
genoma.Ahora que hemosvisto los procesosde transcripcióny
traducción,podemoscomprenderlos efectosde variostipos de
mutaciones.Limitándonosa los genesque codificanproteínas,
vamosa consideraralgunosde los principalestipos de
mutacionesy susconsecuencias en el polipéptido codificado
por el genmutante.
En estecapítuloy en el anterio¡ hemosvisto variostipos de
mutacionesen los que el cambio en el DNA afectasólo a uno o
unospocosparesde bases(Figura22B.la).N principio dei
Capítulo2L,por ejemplo,mencionamos el alelogenéticoque,
en homocigotos,causala anemiafalciforme.Estealelose
originabapor un tipo de mutación denominadosustituciónde
un par de bases.En estecaso,un par de basesAI estaba
sustituidopor un par TA en el DNA. Como resultado,un codón
GUA sustituyea un GAA en el mRNA transcritoa partir del
alelomutantey en el polipéptido (B-globina)una valina
reemplazaal ácidoglutámico.Estesimplecambiode
aminoácido,causadopor el cambiode un solo par de bases,es
suficientepara alterarla conformaciónde la B-globina¡ por lo
tanto, del tetrámerode hemoglobina,modificandola forma de
empaquetamientode lasmoléculasde hemoglobinaen los
eritrocitosy produciendocélulascon formasanómalasque
quedanatrapadasy dañadascuandopasana travésde los vasos
sanguíneos pequeños(véaseFigura 21.3).Estetipo de
sustitucionessedenominanmutacionesde cambiode
aminoácido,porqueel codón mutado continúa codificandoun
aminoácido-pero el <incorrecto>.
Por otra parte,la sustituciónde un par de basespuedecrear
una mutación de supresióndeparada,por conversiónde un
codón stop normal en un codón que codificaun aminoácido;o
a la inversa,puedecrearuna mutación sin sentidopor
conversiónde un codón correspondientea un aminoácidoen
un codón stop.En esteultimo caso,Ia maquinariade traducción
terminaríael polipéptido prematuramente.A menosque la
mutación sin sentidoseencuentrecercadel final del mensajeo
que estépresenteun supresorde tRNA, el polipéptido no será
funcional.Los codonessin sentido,de supresiónde stop,y de
mientras el mRNA tiene todavía uno o más ElCs unidos, y
la presenciade estos EJCs funcionará como una señal de
degradación del mRNA.
Pero, ¿cómo hacen frente las células al fenómeno opues-
to, es decir, a los mRNAs carentesde codones stop?En las
células eucariotas, la traducción se paraliza cuando un ri-
bosoma encuentra el final de un mRNA sin haber encon-
trado un codón stop. Un complejo enzimático de
degradaciónde RNA se une en esemomento al sitio A del
ribosoma, desocupado, y degrada el mRNA defectuoso
mediante un proceso conocido como degradación por
764 génica:
22 Expresión
Capitulo ll. Síntesis deproteínas
y clasificación
cambiode aminoácidopuedenoriginarsetambién a partir de
inserciones de paresde basesy deleciones que causanmutaciones
de cambiode marcode lectura.
Un solo cambio de un aminoácido(o inclusoun cambio en
variosaminoácidos)no siempreafectadrásticamentea la
función de lasproteínas.Si la conformacióntridimensionalde
la proteínasemantiene,esprobableque la actividadbiológica
no seveaafectada.La sustituciónde un aminoácidopor otro
del mismo tipo-por ejemplovalinapor isoleucina-nosuele
afectara la función de Ia proteína.La naluralezadel código
genéticominimiza, de hecho,los efectosde lasalteracionesen
un solo par de basesporque puedegenerarmutaciones
silenciosas quecambianla secuenciade núcleotidossin alterarel
mensajegenético.Por ejemplo,el cambioen la tercerabasede
un codón sueledar lugar a un nuevocodón que sigue
codificandoel mismo aminoácido.En estecaso,el polipéptido
(mutante) esexactamenteel mismo que el del gensalvaje,
Ademásde las mutacionesque afectana uno o unos pocos
paresde bases,algunasalteracionesimplican a largos
segmentos de DNA (Figura22B.lb).Algunasafectana
fragmentosdel genomatan largosque los cambiospuedenser
detectadosobservandolos cromosomasen el microscopio
óptico.Algunasde estasmutacionesa gran escalaestán
generadaspor inserciones o delecionesde largossegmentos
de DNA, pero puedendarsetambién medianteotros
mecanismos.En una duplicación,un segmentode DNA está
repetidoen tándem.En una inversión,un segmentodel
cromosomasecortay reinsertaen su posiciónoriginal,
pero en la direcciónreversa.Una traslocaciónimplica eI
movimiento un segmentode DNA desdesu localización
normal en el genomaa otro lugar,dentro del mismo
cromosomao en uno distinto. Dado que estasmutacionesa
gran escalapuedeno no afectara la expresiónde muchos
genes,tienenun amplio rangode expresiones fenotípicas,
pudiendoserletaleso inocuas.
Cuandopensamosen los posiblesefectosde lasmutaciones,
esútil recordarque los genestienen componentesno
codificantesmuy importantesy que estostambiénpuedenestar
mutadosy afectarseriamentea los productosgénicos.Una
ausencia de terminación. Este mismo problema se resuel-
ve de manera ligeramente distinta en bacterias.Cuando la
traducción se paraliza al final de un mRNA bacteriano que
carece de codones stop, un tipo de RNA poco común,
denominado tmRNA ((RNA transferente-mensajero>)se
une al sitio A del ribosoma y promueve la adición de alre-
dedor de una docenade aminoácidos adicionalesa la cade-
na polipeptídica. Esta secuenciade aminoácidos funciona
como una señal para la destrucción de la proteína forma-
da. Al mismo tiempo, el mRNA es degradado por una ri-
bonucleasaasociadaal tmRNA.
 en un par de basespuedengenerar:
Las sustituc¡ones lnserción
Mutacionesde cambiode aminoácido [r-fT-n Deleción
fT-t-T-Tt
DNA: CTT + CAT
mRNA:GAA + GruA Duplicación
Proteína:Glu + Val fr-fl-fl t-I*-fT-ft
Mutacións¡nsentido
DNA: AAT + ATT lnversión
mRNA:UUA + UIA
fr-rn fr-lft
Proteína:Leu Stop

Mutac¡ónsilenciosa frn-ff.l Translocación n-T]-Tt

DNA: GGG + E (reciprocidad) t-f-ffi
mRNA: CCC + cctr DNAdecromosomas
no homólogos
Proteína:Pro + ,;t'lQ
queafectana largossegmentos
(b) Mutaciones de DNA
Unainsercióno deleciónen un par de basespuedegenerar:
Mutacionesde cambiosde marcode lectura lnserción
¿
DNA:TACTTCAAACTG+ TACGTTCAAACTG
m R N AA: U G A A GU U U G A C" . + AUGMAAGUUUGAC
Proteína:Met - Lys- Phe-Asp + Met- Gln - Val -StoP
\____/\_J
Cambio Sin
de sentido
aminoácido
(a) Mutacionesque afectana un par de bases

Figwa 228,L Tiposde mutaclones. (a) Mutaciones que afectana un par de bases.(b) Mutaciones que afectana largos segmentosde DNA.

mutación en un promoto6 por ejemplo,puedetener como
resultadouna transcripciónmáso menosfrecuentede un gen'
Inclusolasmutacionesen un intrón puedenafectaral producto
génicode forma importante si afectaa una región críticade la
secuenciadel sitio de ayrste.
Por ultimo, Iasmutacionesen genesque codificanproteínas
reguladoras-es decir,proteínasque controlanla expresiónde
otros genes- puedentener efectos<adistancia>sobreotras
proteínasimportantes.Veremosestocon másdetalleen el
Capítulo23.

Procesamiento postraducción minal, pesea que todos ellos se iniciaran de estemodo. A

Despuésde la síntesisde las cadenaspolipeptídicas,éstas
suelensermodificadasquímicamenteantesde poderllevar
a cabosusfunciones.En procariotas,por ejemplo,el grupo
N-formil localizadoen el extremoN-terminalde lascade-
naspolipeptídicassuelesereliminado.Esmás,la metioni-
na a la queseencuentraunido sueleeliminarsetambién,de
Ia mismaforma quela metioninainicial delos polipéptidos
de eucariotas.Como resultado,relativamente pocospoli-
péptidosmadurostienenmetioninaen su extremoN-ter-
vecesson incluso grandes conjuntos de aminoácidos los
que seeliminan del polipéptido. Ciertasenzimas,por ejem-
plo, son sintetizadascomo precusoresinactivos que deben
ser activadospor eliminación de una secuenciaespecífica
en uno u otro extremo. El transporte de proteínas a través
de la membrana también implica la eliminación de una
secuencia señal terminal, como veremos brevemente, y al-
gunos polipéptidos tienen segmentosinternos de amino-
ácidos que deben ser eliminados para dar lugar a la forma
activa. Por ejemplo, la insulina se sintetiza como un poli-

postraducción 765
Procesamiento
péptido que es despuésprocesadopara eliminar una se-
cuenciainterna;los dos segmentos restantes
seunen me-
diante puentesdisulfuro entre residuosde cisteína,en la
hormonaactiva(Figura 22.I3a).
t
Otros tipos de procesamientoincluyen modificaciones
químicas de grupos de aminoácidos concretos -metila-
ciones, fosforilaciones o reacciones de acetilación, por
ejemplo-. Además, un polipéptido puede ser glicosilado
(adición de cadenaslateralesde carbohidratos;véaseCapi-
tulo 12) o unirse a grupos prostéticos. Por último, en el
casode proteínascompuestaspor muchas subunidades,las
cadenaspolipeptídicas individuales deben unirse a alguna

ff'.!f
u-¿
Precursor Proteínafinal
otra forma de las proteínasdel multímero o complejo mul-
timolecular.
Además de los procesospostraducción enumerados,al-
gunas proteínas experimentan un tipo de procesamiento
relativamente inusual denominado ayuste de proteínas,
que es análogo al fenómeno de ayuste de RNA expuesto en
el Capítulo 21. Como vimos, las secuenciasde intrones se
(a)Corteproteolítico eliminan del RNA durante el a¡rste y las secuenciasres-
tantes,los exones,se empalman entre sí. De la misma for-
ma, durante el a¡rste de proteínas, unas secuenciasde
aminoácidos específicasdenominadas inteínasson elimi-
nadasde la cadenapolipeptídica y los segmentosrestantes,
denominados exteínas,se empalman para dar lugar a la
proteína madura. EI a¡rste de proteínassueleser intramo-
lecular e implica la escisiónde una inteína a partir de una
Precursor ProteÍnafinal sola cadenapolipeptídica mediante un mecanismo autoca-
talítico (Figura 22.13b). Sin embargo, el ayuste también
de proteína
(b)Ayuste (intramolecular) puede darse entre dos cadenas distintas codificadas por
dos mRNAs distintos.Por ejemplo, en algunasbacteriasfo-

fl¿
tosintéticasse produce una subunidad de la DNA polime-
rasa III a partir de dos genesseparadosque codifican un
polipéptido con una inteína, que incluye parte de la subu-
nidad de la DNA polimerasa.Los dos polipéptidos se unen
tr"""tot"t por unión entre sus segmentosde inteínas y una reacción
de a¡rste intermolecular une los dos polipéptidos, al tiem-
po que seelimina Ia inteína (Figura 20.22c).En algunosca-
sos, las inteínas eliminadas por reaccionesde ayrste se

ru
vuelven proteínas establescon su propia actividad endo-
nucleasa.Por lo tanto, aunque fue considerado en princi-
pio una rareza,el ayustede proteínasya se ha detectadoen
docenasde organismos distintos, tanto procariotas como
eucariotas.
(c) Ayustede proteína(intramolecular)

Figwa22.13 Procesamientode proteinasprecursoras. Algunos Clasificación y regulación

polipéptidossesintetizancomo precursoresinactivosde ios que se
deben eliminar fragmentos para dar lugar a la proteína activa. (a) El
corte en la proteína esun mecanismo que puede usarsepara
eliminar varios aminoácidos de una cadenapolipeptídica. Por
ejemplo, la hormona proteica insulina se sintetiza como precursor
inactivo (proinsulina)que despuésseconvierteen la hormona
activa eliminando enzimáticamenteuna larga seccióndel
polipéptido. Las dos cadenasgeneradaspor eliminación de esta
secuenciainterna permanecenconectadaspor puentes disulfuro
entre residuosde cisteína.Las partes (b) y (c) ilustran el mecanismo
alternativo de a¡rste de proteínas,en el que unas secuenciasde
aminoácidos denominadasinteínas seeliminan de uno o más
precursorespolipeptídicos y los segmentospolipeptídicos
resultantesseempalman entre sí para dar lugar a una cadena
polipeptídica continua.
de la localización de las proteínas
Ahora que hemos visto cómo se sintetizan las proteínas,
podemos explorar los mecanismosque dirigen cada nueva
proteína a su destino correcto. Piense un momento en la
célula eucariota típica con su diversidad de orgánulos, cada
uno con su propio conjunto de proteínas.Esta célula ten-
dría billones de moléculas de proteínas,lo que supone al
menos 10.000tipos distintos de polipéptidos. Cada uno de
ellos debe encontrar su localizaciónadecuadaen la célula o
fuera de ella. Un número limitado de estos polipéptidos
estácodificado por el genoma de la mitocondria (y en cé-

766 Capítulo génica:

22 Expresión y clasificación
ll. Síntesis deproteínas
lulasvegetales, tambiénen el cromosomadel cloroplasto),
pero Ia mayoríason codificadospor genesnuclearesy sin-
tetizadosmedianteun procesoque comienzaen el citosol.
Cadauno de estospolipéptidosdebe,por lo tanto,serdiri-
gido a su destino adecuadoy deberátener algún tipo de
<códigopostal>molecularque aseguresu liberaciónen el
lugar correcto.Así,como temafinal de estecapítuloconsi-
deraremosesteprocesode clasificacióny regulaciónde la
localizaciónde lasproteínas.
Podemosempezaragrupandolos distintos comparti-
mientosde las célulaseucariotasen tres categorías: (1) el
sistemade endomembranas. un sistemainterrelacionado
de compartimientosmembranososque incluye el RE, el
complejode Golgi, Ios lisosomas,las vesículasde secre-
ción,la envueltanucleary la membranaplasmática;(2) el
citosol;y (3) lasmitocondrias,los cloroplastos, los peroxi-
somas(y orgánulosrelacionados) y el interior del núcleo.
Lospolipéptidoscodificados por genesnucleares sedi-
rigen a estoscompartimientosmediantedistintosmeca-
nismos.El procesocomienzacon Ia transcripciónde los
genesnuclearesen RNAsque son procesadosen el núcleo
y luegotransportados a travésde los porosnucleares para
su traducciónen el citoplasma,donde se encuentranla
mayoríade los ribosomas.Mientrasla traducciónes un
procesomayoritariamentecitoplásmico,algunaseviden-
ciasrecientes sugierenqueun l0 o/odelos ribosomasde las
célulasseencuentranen el núcleo,dondepuedentraducir
ARNssintetizados <denovo>.La traducciónnuclearpare-
ce funcionarsobretodo como mecanismode control de
calidadque examinalos nuevosmRNA, en buscade posi-
bleserrores(véaselaexplicaciónde la degradación media-
da por mutacionessin sentidoenlapágina763).
A pesarde la existenciade estosribosomasnucleares,
estáclaro que la mayor parte de la síntesisde polipéptidos
ocurreen los ribosomasdel citoplasmadespués de quelos
mRNAs hayansalidodel núcleo a travésde los poros nu-
cleares.Tias su llegadaal citoplasma,estosmRNAs seaso-
ciancon ribosomas libres(ribosomasno asociados a ningu-
na membrana).Pocodespuésdel inicio de la traducción,
hay una divergenciade rutas para el direccionamientode
los nuevospolipéptidos(Figura22.14).La primeraruta es
utilizadapor ribosomasque sintetizanpolipéptidosdesti-
nadosal sistemade endomembranas o que seránexporta-
dosfuerade la célula.Estosribosomasseencuentranuni-
dos a lasmembranasdel RE al principio de la traduccióny
los polipéptidossetransfierendespués a travésdela mem-
brana del RE a medida que se van sintetizando(Figura
22.I4b).Lasproteínasintegralesde membranaquedanin-
sertadasen la membranaen lugar de atravesarla.
Estatransferenciade polipéptidoshaciael RE sedeno-
mina exportación cotraslacional,porque el movimiento
del polipéptido a travéso haciala membranadel RE está
directamenteacopladocon el procesode traducción.El
transporteposteriorde estasproteínasdesdeel RE a sus
destinosfinaleslo llevan a cabovariasvesículasy el com-
plejo de Golgi, como vimos en el Capítulo \2 (véaselaFi-
gura 12.8).
Los péptidos destinadosal citosol o a las mitocondrias,
los cloroplastos,los peroxisomas y el interior nuclear (Figu-
ra 22.14c) utilizan una ruta de transporte alternativa. Los
ribosomas que sintetizan este tipo de polipéptidos se en-
cuentran libres en el citosol, no anclados a ninguna mem-
brana. Despuésde que se ha completado el procesode tra-
ducción, los polipéptidos se liberan de los ribosomas y
permanecen en el citosol si éste es su destino, o bien son
importados por el orgánulo adecuado.La llegada de estos
polipéptidos a los orgánulos requiere la presenciade seña-
les de localización especialesy se denomina exportación
postraducción. En el caso del núcleo, los polipéptidos en-
tran a través de poros nucleares,como se vio en el Capítu-
lo 18 (Figura 18.30). La entrada de los polipéptidos a las
mitocondrias, los cloroplastosy los peroxisomas,implica
un mecanismo diferente, como veremos en breve.
Con estavisión general,ahora estamospreparadospara
examinar en detalle los mecanismos de exportación du-
rante la traducción y despuésde Ia traducción.
Laexportación
durante pemitequealgunos
la tladucción
polipéptidos
entrenenel REa medida quesevan
sintetizando
Laexportación cotraslacional
haciaelREeselprimerpaso
dela rutaenla quelascélulas lasproteínas
distribuyen sin-
tetizadas<denovo>haciadistintaslocalizaciones del siste-
ma de endomembranas.Lasproteínasque se distribuyen
por estemecanismose sintetizanen ribosomasque se
unen a la membranapocodespuésdel inicio de la traduc-
ción.Vamosa centrarnosprimero en el comportamiento
de lasproteínassolubles,un grupo que incluyea lasproteí-
nasque seránsecretadas por la célulaasícomo proteínas
solublesque acabaránen el interior de las cisternasde las
endomembranas, comoel complejode Gogi,loslisosomas
o elpropioRE.
Evidencia de lassecuencias señaldel RE. La idea de que el
RE estabaimplicado en el transportede protelnassinteti-
zadas<denovo>haciavariaslocalizaciones dentrodela cé-
lula, surgió por primera vez a partir de unos estudiosde
Colvin Redmany David Sabatinisobrela síntesisde pro-
teínasen vesículasaisladasdel RE rugoso(vesículasdel RE
con ribosomasincorporados).Despuésde incubarbreve-
mentelasvesículas de RE rugosoen presencia de aminoá-
cidos radiactivosy otros componentesnecesariospara la
síntesisde proteínas,añadieronel antibióticopuromicina
paradetenerel proceso.Ademásde bloquearla síntesisde
proteínas,la puromicinahacequelascadenas polipéptidi-
cas,parcialmente sintetizadas,
seliberende los ribosomas.
Cuandolos ribosomasy lasvesículassesepararony seana-
lizaron para ver dónde selocalizabanlos polipéptidosra-
diactivossintetizadosde novo, se encontró una fracción
y regulación
Clasificación delasproteínas 767
dela localización
 Subunidad
menordel
,. L-4b/\
floosoma \L
-
mRNA

Polipéptido
c-l 'NH.
+NH. sintetizado
Subunidad\*-i
mayoroel "de novo"
ribosoma (a) Iniciaciónde la traducciónen el citosol

(b) Asociaciónde los

ribosomascon la
membranadel RE

s', CA

coo-

Permanece
*NH.

# Polipéptldo
completado
en el citosol

en el citosol O es exportado
a otroorgánulo

de los poros
nucleares

@
-rflffiffifrfffim Peroxisoma

ffi Núcleo

#
Vesículasecre Membranaplást¡ca
Lrsosoma

EXPOFTACIÓN COTRADUCCIÓN E X P O R T A C I ÓPNO S T R A D U C C ] Ó N

h a c i al a l u zd e l R E ,s e g u i d ad e l hacia varios orgánulos
transportehaciala localización final

Figwa 22.14 Distribuciónintracelularde las proteinas. (a) La síntesisde polipéptidoscodificadospor genesnuclearescomienzaen el

ciiosol.Lassubunidadesmayor y menor del ribosomaseasocianentre sí y con el extremo 5'de una moléculade mRNA' formando un
ribosomafuncional q,t. .-pi.ru a formar el polipéptido.Cuando el polipéptido tiene unos 30 aminoácidosde Iongitud, entra en dos rutas
alternativas.(b) Si estádestinado a compartimietttoi ¿.t sistemade endomembranas,o va a ser exportado, el nuevo polipéptido seasociaa la
membrana del RE y setransfiere a travéi de la membrana hacia el lumen (espaciointerno) del RE y continúa la síntesis.Esteproceso de
importación escotiaslacional.El polipéptido completopuedepermaneceren el RE o sertransportadopor medio de variasvesículasal
complejode Golgi o a otra localizaciónhnal (Lasproteinasintegralesde membranaquedaninsertadasen.lamembranadel RE mientrasse
estánsintetizandó,en lugar de localizarseen el lumen). (c) Si el destinodel polipéptido esel citosolo va a importarseal núcleo,las
mitocondrias, cloroplastáso peroxisomas,su síntesiscontinúa en el citosol. Cuando el polipéptido estácompleto selibera del ribosoma y
permaneceen el citósol, o biü estransportado al orgánulo adecuadomediante exportación postraslacional.El polipéptido entra en_el
,rú.1"o u travésde los poros nucleares,usando un mecanismo diferente del de exportación postraslacionalque seda en otros orgánulos.

génica:
22 Expresión
Capitulo ll. Síntesis deproteínas
y clasificación
sustancialde la radiactividad en Ia luz del RE (Figura
22.1,5).Estosresultadossugeríanque algunosde los nue-
vospolipéptidosempezaban a pasaral lumen del REa me-
dida queseiban sintetizando, permitiendoasísuposterior
transportea laslocalizaciones pertinentes.
Si algunospolipéptidospasandirectamenteal lumen
del REa medidaquesevan sintetizando, ¿cómodetermina
la célulaquépolipéptidosson éstos? La respuestaa la pre-
guntala dieronGünterBlobely DavidSabatinien 1971,en
un modelo que se denominó hipótesisde la señal,porque
proponíaquealgúntipo de señalmolecularintrínsecadis-
tingueestospolipéptidosde la grancantidadde polipépti-
dos destinadosal citosol.Estahipótesisha tenido un im-
pactotan grandeen el campode la biologíacelular,que
Blobelfue galardonadocon el PremioNobelen 1999,por
todossusañosde trabajoen la demostraciónde la validez
y relevanciade la ideade que las proteínastienenseñales
intrínsecas,quedeterminansutranspor te y lo calización en
la célula.La hipótesisde la señalindicaba que para los
polipéptidosdestinados al RE,el primer segmentodel po-
lipéptido en ser sintetizado,el N-terminal,contieneuna
secuencia señaldel RE que dirige el complejoribosoma-
mRNA-polipéptidoa la superficiedel RE rugoso,dondeel
complejoseanclaa una proteína(puente)en la superficie
del retículo.Después, a medidaquela cadenapolipeptídi-
caseelongadurantela traducción,va atravesando la mem-
(Ú
@ tener entre 15 y 30 aminoácidos y constan de tres domi-
.c
a)
(Ú.o
-O
6o
.>o
o el interior lipídico de la membrana. En cualquier caso,hoy
.(g
!
(Ú
cÉ
5 cias señal RE se pueden insertar o atravesarla mernbrana
Minutos
f
Momentoen el que
se añadela puromicina
Figura22.L5 Evidenciade que las ploteinassintetizadasen los
ribosomasunidosa membranas del REpasandirectamentea la luz del
RE. Seaislaron e incubaron vesículasdel RE que tenían ribosomas
unidos con aminoácidos radiactivos para marcar las cadenas
polipeptídicassintetizadas<denovoo.Despuésseparalizóel
procesode síntesisde proteínaspor adición de puromicina,que
producetambién la liberaciónde las cadenaspolipeptídicasque se
estánsintetizandode los ribosomas.Sesepararondespuéslos
ribosomasde las vesículasy semidió la cantidadde proteína
radiactiva asociadaa los ribosomas y a las vesículas.La gráñca
muestra que tras la adición de puromicina, la radiactividad se
pierde en la muestra correspondientea los ribosomas y apareceen
el interior de las vesículas,lo que sugiereque las nuevascadenas
polipeptídicas seinsertan en la membrana del RE a medida que se
van sintetizando y que la puromicina haceque las cadenasse
liberen prematuramente en el lumen de las vesículas.
brana del RE progresivamente entrando en el lumen (Fi-
gura22.16).
La confirmación de que existen secuenciasseñal de RE
la obtuvieron poco despuésCesarMilstein y sus colabora-
dores,estudiandola síntesisla subunidad menor, o cadena
ligera de la proteína inmunoglobulinqG.En los sistemasno
celularesque contienen ribosomas y los componentesne-
cesariosparala síntesisde proteínas,el mRNA que codifi-
ca la cadenaligera de Ia inmunoglobulina dirige la síntesis
de un polipéptido que tiene 20 aminoácidos más en el ex-
tremo N-terminal que la auténtica cadenaligera.Añadien-
do membranas del RE a estesistemase produce una cade-
na ligera de la inmunoglobulina del tamaño correcto.Estos
hallazgossugieren que el segmento extra de 20 aminoáci-
dos está funcionando como una secuenciaseñal del RE y
que estasecuenciase elimina cuando el polipéptido pasaal
retículo. Los estudios posteriores han revelado que otros
polipéptidos destinadosal RE también tienen una secuen-
cia N-terminal necesariapara dirigir la proteína a dicho
orgánulo y que esta secuenciase elimina cuando el poli-
péptido se trasloca. Las proteínas que contienen estasse-
cuenciasseñal de RE en su extremo N-terminal se suelen
denominar preproteínas(ej.: prelisozima, preproinsulina,
pretripsinógeno,etc.).
La secuenciaciónde las proteínas ha revelado que la
composición de aminoácidos de las secuenciasseñal del
RE es sorprendentementevariable,pero presentanalgunas
característicascomunes.Las secuenciasseñaldel RE suelen
nios: una región N-terminal cargada positivamente, una
región central hidrófoba y una región polar adyacenteal
sitio de corte de la proteína madura. El extremo cargado
positivamentepodría promover la interacción con el exte-
rior hidrofílico de la membrana del RE y Ia región hidrófo-
ba podría facilitar la interacción de la secuenciaseñal con
día está establecidoque sólo los polipéptidos con secuen-
del RE a medida que se van sintetizando.De hecho, cuan-
do seusan métodos de DNA recombinante para introducir
secuenciasseñalen polipéptidos que no suelentenerlas,los
polipéptidos recombinantesse dirigen al RE.
Lasfuncionesde la SRPy del ttanslocón, Una vez que quedó
confirmada la existenciade secuenciasseñaldel RE, quedó
claro en poco tiempo que los polipéptidos nacientesde-
bían unirse a Ia membrana mucho antes de que la cadena
polipeptídica saliesedel ribosoma. Si la traducción conti-
nuara sin asociaciónal RE, el plegamiento de la cadenapo-
lipeptídica dejariaoculta la secuenciaseñal.Para entender
qué es lo que evita que esto suceda,tenemos que observar
el mecanismo de señalizacióncon más detalle.
En contra de la hipótesis inicial, la secuenciaseñal no
inicia por sí misma el contacto con el RE. El contacto está
mediado por una partícula de reconocimiento de la señal
y regulación
Clasificación delasproteínas 769
dela localización
 CITOSOL CITOSOL

0/
SRP

TraslocÓn

DELFE
LUN4EN LUI\4ENDEL RE

SRPse une a la secuenciaseñal

del REy bloqueala traducción
o S F Ps e u n ea r r e c € p i o dr e S F P .
Y lluu¡ul I é
^^^^^^t^^^
5E duupla a o
! Cff se uTrea SFf, y e, receptorde SRP,
trt PUtu >E dur v y ¡v r r>c ta

membrana el pollpéptido

CITOSOL

trÁntirln

completado
L U M E ND E LR E

GTPy se liberaSRP
a. hidroliza Una peptidasacortala secuenc¡a Iv El oolioeotido
' comoletose l bera
O I
señala medidaqre el pol pépt do se a t u m e no e t H t v e t o o r oo e l
elongay se traslocaal lumendel RE trasloconse clerra

Figura22,16 Modelodel mecanismode señalización del procesode expottacióncottaslacional. Estafigura muestraun modelo actual
del mecanismo de señalización.Acualmente estábien establecidoque el polipéptido en formación setrasloca mediante un poro hidrófilo
creadopor una o variasproteínasde membrana.El complejode proteínasde membranaque lleva a cabola traslocaciónsedenomina
traslocón.

génica:
22 Expresión
Capítulo ll. Síntesis deproteÍnas
y clasificación
(SRP)quereconocey seune a la secuenciaseñaldel RE del
nuevo polipéptido y despuésa la membranadel retículo.
En principiosepensóqueSRPerasóloproteica(la P de su
nombrehacereferencia a proteína).Más tarde,sin embar-
go, se vio que SRP consta de seispolipéptidos distintos
asociados con una moléculade RNA de 300 nucleótidos
(7S).Los componentes proteicostienentres sitiosactivos
fundamentales: uno que reconocey seune a la secuencia
señaldel RE, otro que interaccionacon el ribosoma para
bloquearla traduccióny el terceroque se une a la mem-
branadel RE.
La Figura22.16esquematizaelpapel dela SRPen la ex-
portación cotraslacional.El proceso empiezacuando un
mRNA que codifica un polipéptido destinadoal RE em-
piezaa sertraducido en un ribosomalibre. La síntesisdel
polipéptidocontinúahastaquesesintetizala secuencia se-
ñal y emergede la superficiedel ribosoma.En esteestadio,
la SRP(ennaranja)seune a la secuencia señaly bloqueael
procesode traducción(PasoO).La SRPune después el ri-
bosomaa una estructuraespecialde la membrana del RE
denominadatraslocónporquellevaa cabola traslocación
de polipéptidosa travésde Ia membranadel RE. (Observe
que el término traslocación,que significa literalmente
<cambiode localización)seusatanto parareferirseal mo-
vimiento de proteínasa travésde las membranas,como al
movimiento del mRNA a travésdel ribosoma,comovimos
al principio del capítulo).
El translocónesun complejoproteicocompuestopor
varioscomponentes implicadosen la exportacióncotras-
lacional,que incluyeun receptorSRPal que seune SRRun
receptordel ribosoma,quemantieneal ribosomaen su lu-
gar,un poro proteico,que forma un canala travésdel cual
los polipéptidospuedenentrara la luz del REy una pepti-
dasa,una enzimaque elimina la secuenciaseñaldel RE.
Comosemuestraen @,la SRP(conel ribosomaunido) se
une primeroa su receptor,permitiendoqueel ribosomase
una al receptorribosomal.Después, el GTPseunea la par-
tículaSRPy al receptorde SRRdesbloqueando la traduc-
ción y provocandola transferencia de la secuencia señalal
poro proteico,cuyo canalcentral seabre a medida que se
va insertando@.MástardesehidrolizaGTP acompañado
por la liberaciónde SRP@.A medidaque seelongael po-
lipéptido,pasaal lumen del RE y la peptidasacortala se-
cuenciaseñal,que esrápidamentedegradada@. Cuando
seha completadola síntesis,el polipéptido final se libera
en la luz del RE,secierrael canaldel traslocóny el riboso-
ma sedisociadela membranadel REy seseparaen susdos
subunidades,liberando el mRNA @.
BiPy fa proteínadisulfuroisomerasa,Unavez que los poli-
péptidossehan liberadohaciala luz del RE,seplieganen
su conformaciónterciariay, en algunoscasos,se asocian
con otros polipéptidospara formar proteínasmultiméri-
casque presentanestructuracuaternaria.Como vimos al
principio del capítulo,el plegamientode las proteínasestá
facilitadopor las chaperonasmoleculares.Una de las cha-
peronasmásabundantesen el lumen del RE esuna proteí-
na denominadaBiP (nombre derivado del término bln-
ding protein-proteínade unión en inglés).BiP,que esun
miembro de la familia de las chaperonas Hsp70,seune a
regioneshidrófobasde las cadenaspolipeptídicas, espe-
cialmentea regionesenriquecidas en losaminoácidos trip-
tófano,fenilalaninay leucina.
En una proteínamadura,totalmenteplegada,estasre-
gioneshidrófobasestánocultasen el interior de la proteína.
Sin embargo,en una cadenapolipeptídicadesplegada, estas
mismasregioneshidrófobasestánexpuestas al medio acuo-
so en el que seencuentran,lo que generauna situaciónde
inestabilidaden la quelos polipéptidostiendena agregarse.
BiP previenela agregaciónde las proteínasdesplegadas,
uniéndosea las regioneshidrófobasde los polipéptidos
desplegados, a medidaque van saliendodel lumen del RE.
BiP libera mástarde el polipéptido>paralo que serequiere
la hidrólisis de ATR dando a la cadenapolipeptídicauna
breve oportunidad para plegarseadecuadamente(quizá
ayudadapor otraschaperonas). Si el polipéptidosepliega
adecuadamente, sus regiones hidrófobas quedanencerra-
dasen el interior de la moléculay no vuelven a unirsea BiP.
Perosi los segmentos hidrófobosno seplieganadecuada-
mente,BiP seune de nuevoal polipéptidoy serepiteel ci
clo. De estemodo, BiP utiliza la energíaliberadapor la hi-
drólisis de AIP para promover el plegamientoadecuado.
Lasproteínasqueseplieganinadecuadamente repetidasve-
cessonreconducidas de nuevoa travésdela membranadel
REal citosoldondeson degradadas por la ruta de la ubicui-
tina-proteosoma descritaen el Capítulo23.
Otro procesoasociadoal plegamiento correctoen el lu-
men del RE esla formaciónde puentesdisulfuroentrelas
cisteínaslocalizadasen diferentesregionesde una cadena
polipeptídica.En los eucariotas, los puentesdisulfuroes-
tán restringidosa proteínasque sesintetizanen el RE.El
lumen del RE contienela enzimaproteína üsulfuro iso-
merasa, que catalizala formación y ruptura de puentes
disulfuroentrelos residuosde cisteína.Esteprocesosuele
comenzarantesde quela síntesisde un nuevopolipéptido
se hayacompletado,permitiendoque se puedanensayar
variascombinacionesde puentesdisulfuro hastaque seen-
cuentrala otganizaciónmásestable.
delasproteínas
Distribución solubles.La mayoríadelaspro-
teínassintetizadasen los ribosomasque estánancladosal
RE son glicoproteínas -es decir,proteínasque seunen co-
valentementea gruposcarbohidrato-. Como vimos en el
Capítulo12,lasreacciones inicialqueaña-
de glicosilación
den estascadenasde carbohidratos,tienen lugar en el RE,
a menudo mientrasla cadenapolipeptídicaestáaún en
síntesis.
Una vezque los polipéptidoshan sido liberadosen la
luz del RE, glicosiladosy plegados,sedistribuyena través
de varios componentesdel sistemade endomembranas
y reguiación
Clasificación delasproteínas 771
dela localización
hastasusdestinoscelulares.La primera paradaen estaruta que los segmentos transmembranahidrófobosanclanlas
de transporteseproduce en el complejo de Golgi, donde cadenas polipeptídicas a la bicapalipídicadela membrana
puededarseotro procesode glicosilacióny procesamiento del RE.
de cadenas hidrocarbonadas.
laterales El complejode Gol- El primero de los mecanismos implica a los polipépti-
gi puede,por lo tanto, funcionar como lugar de clasifica- dos con una secuencia señal típica del REen su extremoN-
ción y distribución de proteínashaciaotraslocalizaciones. terminal, que permite a una SRP unirse al complejoribo-
La ruta por defecto,paralasproteínassolubles,condu- soma-mRNA a la membrana del RE. La elongaciónde la
cea éstasdesdeel complejode Golgi hastalasvesículasse- cadena polipeptídica continúa después hasta que sesinte-
cretorasque sedirigen haciala superficiecelulary sefusio- tiza el segmento transmembrana hidrófobo. Como se
nan con la membranaplasmática,liberando las proteínas muestraenla Figura 22.l7a,este segmento de aminoácidos
al exterior(véaseFigara 12.8).Lasproteínassolublesno funcionacomo una señalde paradade la transferenciaque
destinadasa la secrecióntienen ciertascadenaslateralesde paralizalatraslocaciónde la cadenapolipeptídicaa través
carbohidratoso cortas secuenciasseñal de aminoácidos de la membrana del RE. La traducción continúa pero el
que las dirigen a suslocalizacionesadecuadasdentro del restodel polipéptido permaneceen el lado citosólicode la
sistemade endomembranas. Por ejemplo,en el Capítulo membranadel RE,lo que da lugar a una proteínatrans-
12vimos que muchasenzimaslisosomalestienen cadenas membranaque tiene el extremo N-terminal en el lumen
lateralesde carbohidratosque contienenun azúcarpoco del REy el extremoC-terminalen el citosol.Mientrastan-
común, la manosa-6-fosfato.Esta azúcarsirve como un to, Ia señalde paradade transferencia del segmentohidró-
dispositivode reconocimiento quepermiteal complejode fobo se desplazalateralmentefuera del traslocónhacia la
Golgi empaquetarselectivamente estasproteínasen nue- bicapa lipídica, formando el segmentotransmembrana
voslisosomas(véase Figura12.9).Existeotro tiPo de señal permanente,que anclala proteínaa la membrana.
usadapor proteínascuyo destinofinal esel RE.El extremo El segundomecanismoimplica a proteínasde membra-
C-terminal de éstassuelecontenerla secuenciaKDEL, que na que no presentanla secuencia señaltípica en el extremo
constade los aminoácidos Lys-Asp-Glu-Leu o una secuen- N-terminal, pero poseenuna secuenciainterna de inicia-
cia relacionada. (Las letrasK, D, E y L son las abreviaturas ción de transferenciaque tiene dos funciones:primero ac-
de una letrade estos cuatro aminoácidosi véase Tabla3'3.) túa como una secuencia señalque permitea una SRPunir-
El complejode Golgi emplea una proteína receptora quese seal complejoribosoma-mRNAa la membrana,y después
une a la secuencia y manda a la proteína de vuelta al RE. su región hidrófoba funciona como un fijador que ancla
permanentemente al polipéptidoa la bicapalipídica (Figu-
Inserciónde ptoteÍnas integralesde memblana usando secuen' ra22.l7b).Laorientacióndela secuencia deiniciacióndela
c¡asde palada de transferencia. Hasta ahora, nos hemos transferenciaen el momentodela inserción,determinaqué
centradoen el transportecotraslacional y en la distribu- extremodel polipéptidoquedahaciael lumen del REy cuál
ción de proteínassolubles destinadas a la secreción,o a los en el citosol.Lasproteínastransmembranacon muchasre-
espacioso cisternasde componentesendomembranosos, gionesde pasoseinsertande una maneramuy similar,ex-
comoel RE,el complejode Golgi,Ioslisosomas y vesículas ceptoen que un patrón alternativode secuencias de parada
relacionadas. El otro grupo principalde polipéptidos sin- e iniciación de la transferencia,generaun polipéptido que
tetizadosen los ribosomasdel RE son las moléculasdesti- contienemultiplessegmentostransmembrana.
nadasa serproteínasintegralesde membrana'Los polipép- IJnavezque el nuevopolipéptidoseha incorporadoen
tidos de estetipo se sintetizanmediante un mecanismo la membrana por uno de los mecanismosanteriores,puede
similaral representado en la Figura22.16paralasproteí- permaneceren su lugar para funcionar como proteínade
nassolubles,exceptoen que el polipéptido completoper- membranadel RE o sertransportadaa otros componentes
maneceancladoa la membranadel RE en lugar de liberar- del sistemade endomembranas, como el complejode Gol-
seal lumen del RE. gi, los lisosomas, la em'uelta nuclear o la membranaplas-
Recordemosdel Capítulo7, quelasproteínasintegrales mática.EI transportees llevado a cabo por una seriede su-
de membranasesuelenencontrarancladasa la bicapali- y
cesosde evaginación fusión en los que lasvesículassalen
pídicapor uno o mássegmentos transmembrana a-hélice de un compartimientodel sistema de endomembranas y se
que constande 20-30aminoácidoshidrófobos.Conside- fusionancon otro,comosedescribióen la Figura 12.8.
rando el mecanismoquepermitea estasproteínasquedar
retenidascomopartede la membranadel REtrassu sínte- permite
El procesode exportaciónposttaduccional
sis,en lugar de serliberadasal lumen del RE,nos vamosa que algunospolipéptidos
entrenen orgánulosdespués
centraren el casomássencillo:proteínascon uno solode de habersidosintetizados
estossegmentos transmembrana. Los principiosque go-
biernanesteproceso,sin embargo,se extiendena proteí- A diferenciadel procesode exportacióncotraduccionalde
nascon configuraciones más complicadas. Los investiga- proteínasen el RE,las proteínasdestinadasal interior nu-
dores postulan dos mecanismosfundamentalespor los clear,lasmitocondrias,cloroplastoso el peroxisoma,seex-

772 génica:
22 Expresión
Gapitulo ll. Síntesis deproteinas
y clasificaciÓn
 CITOSOL
Secuencia

Figuta 22.\7 Insercióncotraslacionalde

Paradaen Ia las ploteínastransmembrana en la
traslocación membranadel RE, Estafigura muestra dos
mecanismospropuestospara la inserción
+ de proteínas integralescon un único
segmentotransmembrana. Para
simplificar, Ia SRR el ribosoma y la mayor
parte del resto del aparato de la traducción
sehan omitido. (a) Inserciónde un
polipéptido con una secuenciaseñalde ER
y una secuenciade paradade la
te por
la peptidasa transferencia. La secuenciade paradade la
LUZDELRE de la señal transferenciaparalizala traslocación y
anclael polipéptido a la membrana,
qoe generandouna proteínatransmembrana
(a) Polipéptido con una seña nrorna r l o ¡ ¡ r q ur v1qe
vu,
d,o iranef oronai2
vv
,/ irn: ronai2

s e ñ a tl e r m i n adl e R E con su extremoN-terminal en la luz del

RE y su extremoC-terminal en el citosol.
(b) Inserciónde un polipéptido con una
solasecuenciade inicio de transferencia
interna con el polipéptido de inicio
transferidoy ancladopermanentemente
en la membrana.Si estepolipéptido
tuvieratambién una señalde paradade
transferenciaque evitasela transferencia
completadel polipéptido a travésdel
translocón,el resultadoseríauna proteína
transmembranacon los dos extremos,C y
N-terminal, en el citosol.Lasproteínas
transmembranacuyosextremosC y N-
terminal estánorientadosen direcciones
opuestasa las mostradasen estafigura,
puedengenerarsemediantesecuencias de
inicio de transferenciaque tienen la
orientaciónopuestacuando seinsertanen
l e i n i c i a c i ódne t r a n s f e r e n ciinat e r n a
( b ) P o l i p é p t i dcoo n u n a s e ñ a d el aparatode traslocación.

portan hacia estosorgánulos despuésde que el proceso de
traducción haya frnalizado. Dado que estasproteínas se
sintetizan en ribosomas libres y se liberan al citosol, cada
proteína debe tener algún tipo de señalque las dirija al or-
gánulo correcto. En el Capítulo 12,vimos que la secuencia
serina-lisina-leucina (SKL en el código de una letra) loca-
lizada cercadel extremo C-terminal de una proteína,la di-
rige a los peroxisomas.Y en el Capítulo 18 vimos que Ia ex-
portación postraducción de proteínas al núcleo depende
de señalesde localizaciónnuclearque dirigen el transporte
de las proteínas a través de los complejos de los poros nu-
cleares(véaseFigwa 18.30). Aquí nos centraremos en la
exportación de proteínas hacia Ias mitocondrias y los clo-
roplastos,que requiere secuenciasseñal similaresa las uti-
lizadaspara Ia exportación cotraslacional.
Exportaciónde polipéptidosa m¡tocondriasy cloroplastos,
Aunque tanto las mitocondrias como los cloroplastoscon-
tienen sus propios DNAs y maquinaria de síntesisde pro-
teínas, sintetizan relativamente pocos de los polipéptidos
que requieren.La mayor parte de las proteínasque residen
en estos dos orgánulos, así como todas las proteínas del
núcleo y los peroxisomas,están codificadaspor genesnu-
clearesy sesintetizanen los ribosomas del citosol. (Los po-
cos polipéptidos que se sintetizan directamenteen Ia mito-
condria están destinados principalmente a la membrana
interna de la mitocondria, y los polipéptidos sintetizados
en los cloroplastosse localiza.nfinalmente en las membra-
nas de los tilacoides. Casi sin excepción,los polipéptidos
codificados por genes de las mitocondrias y cloroplastos
son subunidades de proteínas multiméricas, con una o
más subunidadescodificadaspor genesnuciearese impor-
tadasdel citosol.)
La mayoría de los polipéptidos de las mitocondrias y los
cloroplastosse sintetizanen los ribosomasdel citosol, se li-
beran al citosol y se exportan a los orgánulos adecuados
(mitocondrias o cloroplastos) en pocos minutos. La se-
cuenciade direccionamientode estospolipéptidos sedeno-
mina secuenciade tránsito. Igual que la secuenciaseñaldel
RL, la secuenciade tránsito estálocalizadaen el extremo N-
terminal del polipéptido. Una vez en Ia mitocondria o el
cloroolasto, la secuenciade tránsito se elimina mediante

y regulación
Clasificación delasproteínas 773
dela localización
úna peptidasq de tránsitolocalizada dentro del orgánulo. La
eliminación de la secuenciade tránsito siempre sucedean-
tes de que el proceso de transporte se haya completado.
Las secuenciasde tránsito de los polipéptidos de las mi-
tocondrias y los cloroplastossuelencontener tanto amino-
ácidos hidrófobos como hidrófilos. La presenciade ami-
noácidos cargados positivamente es crítica, aunque la
estructura secundaria puede ser más importante que los
aminoácidos concretos. Por ejemplo, algunas secuencias
mitocondriales de tránsito tienen aminoácidos cargados
positivamente, intercaladoscon aminoácidos hidrófobos,
de manera que cuando la secuenciase pliega en forma de
hélice a, la mayor parte de los aminoácidos cargadosposi-
tivamente están en una cara de la hélice y los aminoácidos
hidrófobos en la otra.
La entrada de los polipéptidos con secuenciade tránsi-
to estámediada por complejosde transporte especializados
localizados en las membranas interna y externa de las mi-
tocondrias y los cloroplastos.Como se muestra en Ia Figu-
ra22.18,los complejosde transportemitocondrial se de-
nominan TOM (traslocasade la membrana mitocondrial
externa) y TIM (traslocasade Ia membrana mitocondrial
interna); los complejos comparables del cloroplasto son
TOC (traslocasade la membrana externadel cloroplasto)y
TIC (traslocasade Ia membrana interna del cloroplasto).
Los polipéptidos son seleccionadosinicialmente para ser
transportados a las mitocondrias o los cloroplastos por
componentes de TOM o TOC conocidos como receptores
de las secuenciasde tránsito. Una vez que Ia secuenciase ha
unido a estereceptor,el polipéptido que contiene Ia secuen-
CrrosoL
Membrana
u^LEt Id
Membrana
interna
MATRIZ ESTROMA
MITOCONDRIAL DELCLOROPLASTO
Mitocondrial Cloroplasto
Figura22,L8 Principalescomplejosde transportede las membranas
internay externade las mitocondtiasy los cloroplatos. Los
polipéptidosde las mitocondriasy los cloroplastosque sesintetizan
en el citosolson transportadoshaciaestosorgánulosmediante
complejos de transporte especializadoslocalizadosen sus
membranas externa e interna. En la mitocondria, los complejos de
membrana interna y externa se denominan TIM y TOM
respectivamente;Ias estructurascomparablesen los cloroplastos
son TIC y TIM. Los complejosde transportede las membranas
externas(TOM y TOC) constan de dos tipos de componentes:
proteínas receptorasque reconoceny se unen a los polipéptidos
con secuencias concretaspara estosorgánulos,y poros proteicos
que forman canalesa través de los cualeslos polipéptidos se
traslocan hacia el interior.
774 génica:
22 Expresión
Capítulo ll. Síntesis deproteÍnas
y clasificación
cia se trasloca a través de Ia membrana externa por un poro
del complejo TOM o TOC. Si el polipéptido estádestinado
al interior del orgánulo, el movimiento a través de TOM o
TOC se continuará inmediatamente con el desplazamiento
a travésde los complejosTIM o TIC de la membrana inter-
na, presumiblemente en un sitio de contacto donde las
membranas interna y externa están muy próximas.
Algunas evidenciasque apoyaban estemodelo proceden
de estudios de microscopía electrónica, que revelaron que
existían muchos sitios de contacto entre las membranas in-
terna y externa,y de experimentosbioquímicos, en los que
los sistemasde importación mitocondrial in vitro se incu-
ban en hielo para affapar los polipéptidos en el momento
de la traslocación(Figura 22.19).Labaja temperatura hace
que el movimiento del polipéptido separalicepoco después
de empezar.En estemomento, los polipéptidos ya han per-
dido sus secuenciasde tránsito por acción de la peptidasa
de tránsito localizada en Ia matriz mitocondrial, pero toda-
vía pueden seratacadospor enzimasproteolíticasañadidas.
Estos resultados indican que los polipéptidos pueden ex-
tendersetransitoriamente entre ambas membranas duran*
te la importación; en otras palabras,el extremo N-terminal
puede entrar en la matriz mitocondrial mientras el resto de
la molécula estátodavía fuera del orgánulo.
Generalmente,los polipéptidos que entran en las mito-
condrias y los cloroplastosdeben ser desplegadosantes de
pasar a través de las membranas de estos orgánulos. Este
requerimiento ha quedado demostrado por unión de poli-
péptidos que contienen secuenciasde tránsito mitocon-
drial a agentesque mantienen la cadena polipeptídica en
un estado de fuerte plegamiento. Estos polipéptidos se
unen a la superficie externa de la mitocondria, pero no se
mueven a travésde la membrana, aparentementeporque el
tamaño del polipéptido plegado supera el diámetro del
poro de la membrana a travésdel cual debe pasar.
Para mantener el estado de plegamiento necesario,los
polipéptidos destinadosa las mitocondrias y los cloroplas-
tos están unidos a chaperonassimilaresa las que ayudan a
plegarsea los polipéptidos sintetizadosde novo.La Figura
22.20 muestra un modelo actual de esteprocesode impor-
tación de polipéptidos a la matriz mitocondrial mediada
por chaperonas.Para empezar el proceso,las chaperonas
de tipo Hsp70 se unen a un polipéptido que se estásinteti-
zando en el citosol, manteniéndolo en un estado ligera-
mente plegado (paso O).Después, la secuenciade tránsito
del extremo N-terminal del polipéptido se une al receptor
del complejo TOM, que sobresalede Ia superficie de la
membrana mitocondrial externa (@). Se liberan entonces
las chaperonasy se produce al mismo tiempo la hidrólisis
de AIR al tiempo que el polipéptido es traslocadoa través
de los poros de TOM y TIM hacia la matriz mitocondrial
(@). Cuando la secuenciade tránsito asoma en la matriz,
es eliminada por la peptidasa de tránsito (@). A medida
que el resto del polipéptido entra despuésen Ia matriz, las
moléculas de Hsp70 mitocondrial se unen a é1temporal-
 o CrrosoL
CITOSOL

Polipéptido
destinado Esoaciointermembrana (chaperona)
tu HspTO
O
a la mitocondria

Membrana
*NHs interna
uneal receptor
MATRIZ
MITOCONDRIAL Membrana
MATRIZIVITOCONDRIAL interna
¡
(a) I
vI ".,""
:::l:t,:: @
-
t-asmoléculas,HspTO
seoarana medidaoue el
se
ü,^

CrrosoL polipéptldoatraviesala

Fuerade la mitocondria,la mayor

partedel polipéptidoestátodavía
accesiblepara ser atacadopor
proteasasexógenas

Secuencia
de tránsito

Enel interior
de la mitocondria,
la secuenclade tránsitoestá
accesiblea la oeot¡dasade tránsito

(b)
I rña \/ eó lihora ¡lal
Figura22.L9 Demostración experimentalde que los polipéptidos
polipéptidoa medidaque
cruzanlas dos membranas mitocondriales
durantela importación,
(a) Parademostrarque los polipéptidosque estánsiendo entraen la matriz
importadosa la mitocondria cruzanlas dos membranasal mismo
tiempo, el sistemade importación in vitro seincubó en hieio,en pliegaayudadopor
lugar de hacerloa la temperaturahabitual de 37 "C. A baja
Hsp60(chaperona)
temperatura,los polipéptidospuedenempezara penetraren la
mitocondria,pero su traslocaciónseparaliza.(b) En estas
condiciones,la secuenciade tránsito escortadapor la peptidasade Figwa22.20 lmpodaciónpostraslacional de polipéptidos
por la
mitocondtia, Al igual que la importación cotraslacionalpor el RE,
tránsito presenteen la matriz, indicando que el extremoN-terminal
la importación postraducciónpor la mitocondria implica la
del polipéptido estádentro de la mitocondria.Al mismo tiempo, la
presenciade una secuenciaseñal(denominadasecuenciade
mayor parte del polipéptido estátodavía accesiblepara ser atacada
por enzimasproteolíticasexógenasfuera de la mitocondria.Así, tránsito en estecaso),un receptorde membrana,proteínasde
membranaque forman un poro y una peptidasa.Sin embargo,en la
concluimosque el polipéptido debeatravesarambasmembranas
mitocondria,el receptorde membranareconocela secuenciaseñal
transitoriamentedurantela importación,presumiblementeen un
directamente,sin la intervenciónde una SRPcitosólica.Es más,Ias
sitio de contactoentre las dos membranas.
chaperonastienen funciones fundamentalesen el proceso
mitondrial: Mantienen el polipéptidoparciaimentedesplegadotras
la síntesisen ei citosol,de maneraque sepuedanproducir la unión
mente;su posteriorliberacióntambiénrequierela hidróli- de la secuenciade tránsitoy el procesode traslocación(pasosO-
sisde AIP (@). Sepiensaque esestaúltima hidrólisisde @); las chaperonasdirigen la traslocaciónpor unión y liberación
AIP lo quedirigerealmentela traslocación.
Por último, en de los polipéptidosdentrode la matriz, en un procesodependiente
de AIP (paso @; y al.udan al polipéptido a plegarseen su
muchoscasoslas moléculasde Hsp60mitocondrialesse
conformaciónfinal (paso @). Laschaperonasincluidasaquí son
unenal polipéptidoy le aludana plegarse
totalmenteen su versionescitosólicasy mitondrialesde Hsp70 (en azul) y una
conformación final (@). Hsp60 mitocondrial (no representada).

y regulación
Clasificación delasproteínas
dela localización / lJ
 Tantolos cloroplastoscomolasmitocondriasrequieren nal normalmenteseelimina.Tambiénseutiliza una com-
energiaparaimportar La importacióndepo-
polipéptidos. binación de secuencias de clasificaciónhidrófobaspara
lipéptidos hacia la mitocondria requierela hidrólisis de dirigir el polipéptidoal espaciointermembrana.En este
ATPy un gradienteelectroquímicoa travésde la membra- caso,las secuencias señalpasana travésde Ia membrana
na interna.El gradienteelectroquímico parecesernecesa- externa y se eliminan las secuencias señal,quedandoel
rio sólo paraIa unión y penetraciónde la secuenciade polipéptido en el espaciocomprendido entre las dos
tránsito.IJnavezqueseha dado estepaso,Ia disipaciónex- membranas.
perimentaldel potencialde membranano interfierecon el Tambiénhay muchasseñalesimplicadasen el direccio-
resto del procesode transferencia.Los cloroplastosman- namientode algunospolipéptidosde cloroplastosa su des-
tienen,por otra parte,un gradienteelectroquímicoa través tino final. Lospolipéptidosquedebenquedarinsertadosen
de la membranade los tilacoides'pero no a travésde la (o transportadosa travésde) la membranadel tilacoide,
membranainterna. Presumiblemente, los requerimientos por ejemplo,debenserdirigidosprimero haciael cloroplas-
energéticos parael importehaciael estromadel cloroplas- to y transportadosal estroma,seguramente atravesando las
to sebasanen el AIP. membranasexternae internaa travésde un sitio de contac-
to entreambas.En el estroma,la secuencia de tránsitoutili-
Direccionamiento depolipéptidos a loscompart¡mentos adecua- zadapara esteprimer paso es eliminada del polipéptido,
dosdentrodelasmitocondrias y loscloroplastos.Debidoa Ia desenmascarando una secuencia señaldel tilacoidehidrófo-
complejidadestructuralde las mitocondriasy los cloro- ba que dirige al polipéptido a la membranadel tilacoideo
plastos,las proteínasque van a ser exportadasdel citosol bien al lumen tilacoidal.En los polipéptidosdestinadosa la
debendirigirse no sólo al orgánulocorrecto,sino aI com- membranatilacoidal,la secuencia señalhidrófobasepuede
partimientoadecuadodentro del orgánulo.Lasmitocon- inse¡tarespontáneamente y anclaral polipéptido en Ia bi-
driastienencuatrocompartimientos: la membranaexter- capaüpídica de la membrana.Alternativamente,la inser-
na, el espacio intermembrana, la membrana internay la ción de algunospolipéptidosen la membranadel tilacoide
matriz. Los cloroplastos tienen cuatro compartimentos si- requierela participaciónde una proteínadependientede
milares (en los que el estroma sustituye a Ia matriz) y dos GTP parecidaaIa particulade reconocimientode señal
compartimentos adicionales: la membrana de los tilacoi- (SRP)que seune a los polipéptidosy los dirigea lasmem-
y
des el lumen del tilacoide. Así, un polipéptido podría te- branas delRE(véaseFígura22.16).
ner que atravesar una, dos e incluso tres membranas para Los polipéptidosdestinadosal lumen tilacoidalson
alcanzarsu destinofinal. translocados complemente a travésde la membranade los
Dadala complejidadestructural de ambos orgánulos, tilacoides y se produce la liberación de la secuencia señal
que
quizáno seasorprendente muchos polipéptidos de"las del tilacoide a medida que el polipéptido se libera en la luz.
mitocondriasy cloroplastosrequieran más de una señal Lamayoria de los polipéptidos dirigidos al lumen setrans-
parallegara susdestinosadecuados. Por ejemplo,el direc- locan a travésde la membranadel tilacoideen un estado
cionamientode un polipéptido a lasmembranas externa o desplegado medianteun procesodependiente deAIP, que
interna de la mitocondria requiereuna secuencia de trán- se asemeja al mecanismo empleado para translocar poli-
sito N-terminal para dirigir el polipéptidoa la mitocon- péptidos a través las membranas externas de lasmitocon-
dria, ademásde una secuencia de inserciónadicional,de- drias y cloroplastos. Sin embargo,se ha descubiertore-
nominadaseñalde clasificación hidrófoba,para dirigir el cientemente que algunas proteínas totalmente plegadas
polipéptidoa su destinofinal. En estoscasos,la señalde pueden ser transportadas a travésde lasmembranasde los
clasificaciónhidrófobaactúacomouna secuencia de pata- tilacoides mediante un mecanismo alternativo,conduci-
da de transferencia que bloqueala traslocacióndel poli- das por la energía derivada del gradiente de protones.
péptido a travésde las membranasinterna y externa.La Aunquela traslocación de proteínas plegadas a travésde
señalde clasificación hidrófobapermaneceentoncesem- las membranases relativamente poco común, sehan de-
bebidaen la membrana,anclandoel polipéptidoa la bica- tectado mecanismossimilares en los peroxisomas y la
pa lipídica,mientrasquela secuencia de tránsitoN-termi- membranaplasmática bacteriana.

La traducciónes el procesomedianteel
cual los polipéptidos son sintetizadosen
los ribosomasde la célula.La maquinaria
celular de traducciónestá dirigida por
distintos tipos de RNA. Los RNAs men-
sajerosdeterminan el orden de los ami-
noácidosen el polipéptido, el IRNA lleva
el aminoácido al ribosoma y el rRNA
aytda al posicionamientodel mRNA en
el ribosoma,y cafalízala formación del
enlace peptídico. Además, algunos facto-
res proteicos desencadenanprocesos es-
pecíficos durante las etapas de iniciación,
elongación y terminación de la traduc-
ción. La unión y la hidrólisis de GTP di-

776 génica:
22 Expresión
Capítulo ll. Síntesis deproteínas
y clasificaciÓn
rigen los cambiosconformacionales de sirvencomo señalesde direccionamiento;
los factoresproteicos.La especificidad algunas proteínas reconocen selectiva-
requeridapara unir el aminoácidoco- menteestasseñales, lo que permite la cla-
rrecto a las moléculasde tRNA adecua- sificaciónde los polipéptidos.En una de
das,es una propiedadde las aminoacil- las rutas, las proteínasdestinadasa ser
tRNA sintetasas, qr¡e catalizan estas componentesdel sistemade endomem-
reacciones. Una vez que se produce la branaso a sersecretadas, seimportanco-
unión del mRNA, las subunidadesribo- traslacionalmente por el RE.La secuencia
somalesy el aminoacil tRNA iniciador señalque dirige estospolipéptidosal RE
para formar el complejo de iniciación, estálocalizadaen el extremoN-terminal
otrosaminoaciltRNAsreconocenlos su- del nuevopolipéptido.Una SRPdel cito-
cesivoscodonesdel mRNA y añadensus sol se une a la secuenciaseñaly poste-
aminoácidosa la cadenapolipeptídicaen riormente a un receptorde SRP de la
formación.El procesode terminaciónse membranadel RE,anclandoei complejo
da cuandoseencuentrauno de los codo- ribosoma-mRNA-polipéptido a la mem-
nes stop, y el polipéptido completo se brana.A medidaque tiene lugar la sín-
libera despuésdel ribosoma.El plega- tesisdel polipéptido,se produceIa tras-
miento adecuadode los polipéptidosli- locacióndel polipéptido a travésde la
beradossueleestarfacilitadopor chape- membrana del RE mediante un poro
ronas. Las anomalíasen el procesode proteico.La secuencia señaleseliminada
plegamientopueden provocardistintas por una peptidasa,permitiendoal poli-
enfermedades, como la de Alzheimero el péptido resultanteplegarseen su confor-
nmalde lasvacaslocas>. mación tridimensionalfinal. Los poli-
Conocerel códigogenéticoy los deta- péptidosque seinsertanen la membrana
llesdel procesode traducciónnospermi- del RE tienenuna o másseñales internas
te comprenderlos efectosdeletéreosde de paradade transferencia, en lugarde o
las mutacionessin sentidoy sabercómo ademásde una secuencia señalde REter-
puedenser suprimidaspor mutaciones minal. La mayor parte de las proteínas
compensatoriasen el IRNA. El efectofe- que sesintetizanen el R-E, estánglicosila-
notípicode una mutaciónquecambiaun das;algunasde estascadenas lateralesde
codón que codificaun aminoácidopor oligosacáridos sirvencomo señales de re-
un codónstop,puedesersuprimidosi un gulaciónde la localización celularquedi-
IRNA con el anticodónmutadoleeel co- rigenlasproteínasa otraspartesdel siste-
dón stopcomoun aminoácido. ma de endomembranas.
Lasproteínasaicanzansu destinofinal En la otra ruta generalde clasifica-
en la célulamediantedosrutasgenerales, ción, las proteínasdestinadas al interior
queimplicanen amboscasosla selección y nuclear,las mitocondrias,los cloroplas-
direccionamiento de los polipéptidos.La tos o los peroxisomas sesintetizanen ri-
estrategia generalsebasaen que los poli- bosomasdel citosol(al igualque laspro-
péptidossintetizados<denovo>tienense- teínasquepermancenen el citosol)y son
cuenciasespecialesde aminoácidosque exportadasdespuésde la traducciónal
orgánulo de destino. Los polipéptidos
destinadosa los peroxisomascontienen
una secuenciaespecialde direcciona-
miento cerca del extremo C-terminal,
mientras que aquéllasdestinadasal nú-
cleo contienen señalesde localización
nuclear que promuevensu paso a través
de los poros nucleares.El direcciona-
miento hacialas mitocondriasy los clo-
roplastosrequiereuna señalde tránsito
localizadaen el extremoN-terminal. Los
polipéptidosson transportadosa estos
orgánulosen sitiosde contactodondelas
membranasexternae interna estánmuy
próximas.En estaruta, las proteínasre-
ceptorasde la membranaexternareco-
nocen directamentelas secuenciasde
tránsito. La energíanecesariapara el
transportede polipéptidosdesplegados a
la mitocondriaseobtienede la hidrólisis
deAIP asociada a la liberaciónde la cha-
perona,y del gradienteelectroquímicoa
travésde la membranainterna. En los
cloroplastos, el transportede polipépti-
dosdesplegados al orgánuloestádirigido
sólo por Ia hidrólisisde ATR pero esne-
cesarioel gradienteelectroquímicopara
el transportede algunasproteínasplega-
dasal la luz del tilacoide.
Dado que las mitocondriasy los clo-
roplastos tienen múltiples comparti-
mientos(cuatroy seis,respectivamente) a
los quepuedendirigirselos polipéptidos,
lasproteínasde los cloroplastos y lasmi-
tocondriassuelenrequerirmásde unase-
ñal parallegara susdestinosfinales.Estos
polipéptidossuelentener una secuencia
de tránsito N-terminal para dirigir el po-
lipéptidoal orgánulo,ademásde una se-
ñal de clasificaciónhidrófoba para diri-
sirlo a su localizaciónfinal.

Problemas
Losproblemas
demayor conun ..
estánmarcados
diflcultad de aminoácidos de la vasopresina?(EI código genético está
representadoen la Figura 21.8.)
22.1, El código genéticoy dos hormonas humanas.La
(d) En su forma inactiva, Ia vasopresina es un nonapéptido (es
a un pequeñosegmentode
siguientesecuenciacorresponde
DNA real: decir, tiene nueve aminoácidos) con una cisteína en su
extremo N-terminal. ¿Cómo podría explicar esto en
GGTTTCCAATCAITAAs,
3,AAITATACACGATGAAGCTTGTGACAG función de tu respuesta al apartado c?
TAGTAATT3,
CAAAGGT
5,TTAATAIGTGCTACTTCGAACACTGTCC (e) Una hormona relacionada, la oxitocina, tiene la siguiente
(a) ¿Quédos moléculasde RNA podrían sertranscritasa partir secuenciade aminoácidos:
de esteDNA? Cys-Tyr- Ile-Glu-Asp-Cys -Pro -Leu- GIy
(b) Só1ouna de estasdosmoléculaspodríasertranscrita
¿En qué lugar y cómo podría cambiar el DNA que codifica
realmente.Expliquepor qué. ia vasopresina para que codificara la oxitocina? ¿Sugierasu
(c) La moléculade RNA que puedesertranscritaesel mRNA respuesta alguna posible relación evolutiva entre Ios genes
que codificala hormona vasopresina,
¿Cuálesla secuencia de la vasopresina y la oxitocina?

Problemas 777
22.2 Localizandomutaciones.El siguientediagramamuestra HsC.. .rCH,
.N'
los aminoácidosque segenerancomo resultadode mutaciones NHz
I
en un aminoácidoconcretode un polipéptido bacteriano: I

- IIe
'fiA -ñü
,/'
-A* o
r a\ '
VT -tz--ñ
g*l tRNA
\ -.
Lys----+ Thr ------+Ser II ill
HOCH, o I R , - O - POCH2o I
\ I
,,oo l-Ll l---l
rvl o- rvl
Asumaque cadaflechasimbolizala sustituciónde un par de
H-N OH 90H
basesen el DNA bacteriano.
(a) Volviendoal códigogenéticorepresentadoen la Figura C:O Grupo
21.8,determinelos codonesmásprobablesparacada | 67'l I amtno-
H-C-CHz{ ocH3 H-C- R
acrl
aminoácidoy el codón stop del diagrama. I
t\;
(b) Partiendode una poblaciónde célulasmutantesque tienen NHe NHz
mutacionessin sentido,seaíslaotro mutante en el que se Puromicina Extremo3' del aminoacil-RNAt
suprimeuna señalde stop.Asumiendoque no seda
balanceoy que seha producido el cambio en una solabase ñgwa 22.2L la estructurade la putomicina.VéaseProbIema22.5.
del anticodón,¿cuálessonlos aminoácidos que sepodrían
encontraren la posicióndel aminoácidomutado en
muestraen la Figura22.21.(La R representa el grupofuncional
cuestión?
del aminoácido;R' representael restode la moléculade IRNA.)
22.3 Iniciación de la traducción. El diagramade la Figura Cuandoseañadepuromicinaa un sistemaacelularque contiene
22.8representa la iniciaciónde la traducciónen procariotas. la maquinarianecesariaparala síntesisde proteínas,selibera un
Dibuje un diagramasimilar,marcandolos pasosdel proceso polipéptidoincompletode los ribosomas. Cadauna de estas
de iniciaciónen eucariotas.¿Cúales sonlasprincipales cadenastiene puromicina unida covalentemente.
diferenciasentrelos procesosde iniciación en procariotas (a) Expliqueestosresultados.
y eucariotas?
(b) ¿Aqué extremodel polipéptido esperaríaque seuniera la
22.4 Comparandolos procesosde sintesisde proteínasen puromicina?Razónelo.
eucariotasy procrüiotas.Paracadauna de lassiguientes (c) ¿Esperaría
que Ia puromicina seunieseal sitio A, al sitio P
afirmaciones,indique si sepuedenaplicara la síntesisde
o a ambossitiosdel ribosoma?Explíquelo.
procariotas(P),eucariotas (E),ambos(A) o ninguno(N).
(d) Asumiendoque penetraen la céluladel mismo modo en
(a) El mRNA tiene un sitio de unión al ribosomadentro de su amboscasos,¿esperaría quela puromicinafuesemejor
secuenciainicial. de proteínasen eucariotas
inhibidor de la síntesis que en
(b) AUG esun codón de iniciación. procariotas? Razónelo.
(c) La enzímaque catalizala formación del enlacepeptídicoes .22,6 Un antibiótico ficticio, En un estudiocon un sistema
una moléculade ARN. <invitroo de síntesis de protelnasen E.coli,el
polirribonucleótidoAUGUUUUUUUUUUUU determinala
(d) El RNA setraduceen dirección3' - 5' .
síntesisde un oligopéptidofMet-Phe-Phe-Phe-Phe. En
(e) El extremoC-terminal del polipéptido esel último en presenciade rambomicina,un nuevoantibiótico que acabade
sintetizarse. serdesarrolladopor la compañíafarmacéuticaMacho,sólo se
(D La terminaciónde la traducciónesllevadaa cabopor forma el dipéptido fMet-Phe.
moléculasde tRNA especiales que reconocencodonesstop. (a) ¿Quépasode la síntesisdel polipéptidoinhibela
rambomicina?Expliquesu respuesta.
(g) La hidrólisis de GTP inducecambiosconformacionales
en
variasproteínasimplicadasen la elongacióndel (b) ¿Seencontraráel oligopéptidofinal unido a tRNA tras la
polipéptido. reacciónno inhibida?¿Seencontraráel dipéptido unido a
IRNA al final de la reaccióninhibida por rambomicina?
(h) La unión de los aminoácidosal tRNA requierela hidrólisis
Explíquelo.
de ATP.
22,7 Supresióndel cambio de marco de lectura. Como vimos
(i) La especificidadrequeridapara unir los aminoácidos en estecapítulo,una mutación sin sentidopuedesersuprimida
adecuadosa lasmoléculasde IRNA correctasesuna por un tRNA mutante en el que uno de los nucleótidosdel
propiedadde lasenzimasdenominadasaminoacil-tRNA anticodónha cambiado.Describaun mutante tRNA que pueda
sintetasas. suprimir una mutación de cambio de marco de lectura.(Pista:
.22.5 Un inhibidor antibiótico de la traducción. La un mutanteIRNA de estetipo seusó parainvestigarel papelde
puromicina esun potenteinhibidor de la síntesisde proteínas. la peptidil IRNA en la traslocacióndel mRNA durantela síntesis
Esun análogodel extremo3' del aminoacil-tRNA,como se de proteínas.)

778 génica:
22 Expresión
CapÍtulo ll. Síntesis de proteínas
y clasificación
'22.8 Plegamientode proteínas.El papelde BiP en el
plegamientode proteínassedescribióbrevementeen este
capítulo.Contestea lassiguientescuestionessobre
observacionesy sucesosque implican a BiP.
(a) BiP seencuentraa altasconcentraciones
en el lumen del
REpero no estápresenteen concentraciones significativas
en otraslocalizacionescelulares.¿Cómopiensaque se
establece y mantieneestasituación?
(b) Si el gen que codificaBiP tiene una mutación que afectaal
sitio de unión de la proteínaen aminoácidoshidrófobos,
¿quéimpacto tendráestoen la célula?
(c) Supongaque seestánutilizando técnicasde DNA
recombinanteparaintroducir un nuevogen en una célulay
que estegen codificauna subunidadX de una proteínade
secreción queestáformadapor dostiposde polipéptidos
distintos,X e Y. Si el gen que codificala subunidadY no
estápresenteen la célula,¿quépiensasquele sucederá al
polipéptidoX cuandoseproduzca?
.22.9 Exportación cotraslacional.Ustedestállevandoa cabo
unosexperimentos sobrela síntesisde Ia hormonade la
pituitariaprolactina,queesuna cadenapolipeptídicade 199
aminoácidos. El mRNA que codificala prolactinasetraduceen
un sistemaacelularquecontieneribosomas,
aminoácidos,
IRNA, aminoacil-tRNAsintetasas, ATP,GTP y los factoresde
iniciación,elongacióny terminaciónadecuados. En estas
condiciones, seproduceuna cadenapolipeptidicade22T
aminoácidos.
(a) ¿Cómopodríaexplicarla discrepancia queseobservaentre
Ia longitudde la prolactinanormal (199aminoácidos)y Ia
de la prolactinade su experimento(227aminoácidos)?
(b) En un segundoexperimentoen el que añadeSRPa su
sistema, encuentraqueel procesode traduccióntermina
después de que sehayaformadoun polipéptidode unos70
aminoácidos. ¿Cómopuedeexplicaresteresultado? ¿Puede
haceralgunapropuestasobrela funciónde estefenómeno
parala célula?
Bibliografía recomendada
Lasreferencias
conimportancia
histórica con..
estánmarcadas
Traducción
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(c) En un tercerexperimento,añadetanto SRPcomo vesículas
del RE a su sistemade síntesis,y encuentraque la
traduccióndel mRNA de la prolactinada lugar ahoraa un
polipéptidode 199aminoácidos.¿Cómopuedeexplicareste
resultado?¿Dóndeesperaríaencontrarestepolipéptido?
22.L0 Dos tipos de exportación postraducción.El
mecanismopor el que lasproteínassintetizadasen el citosolson
exportadashaciala matriz mitocondrial esdistinto del
mecanismopor el que lasproteínasentran al núcleo,pero
ambostienencaracterísticas comunes.Por ejemplo,en los dos
casos,lasproteínasdebenatravesar dosmembranas. Indiquesi
cadauna de lassiguientes afirmaciones sepuedeaplicaral
procesode importaciónnuclear(Nu), importación
mitocondrial(M), a ambos(A) o a ninguno(N). Revisela
importaciónhaciael núcleodel Capítulo18antesde contestara
estaspreguntas(fíjeseespecialmente en Ia Figura18.30).
(a) El polipéptidoqueva a trasladarse al orgánulotieneun
corto segmentode aminoácidosquedirigeal polipéptido
haciael orgánulo.
(b) La secuencia señalsiempreseencuentraen el extremo
N-terminaly escortadopor una peptidasadentrodel
orgánulo.
(c) La secuencia señalesreconocida, y seune a una proteína
receptorade la membranaexternadel orgánuio.
(d) Sesabequela hidrólisisdeAIP esnecesaria parael proceso
de traducción.
(e) SesabequeIa hidrólisisde GTP esnecesaria parael
procesode traducción.
(0 Existeuna claraevidenciade que hay chaperonas
implicadasen el procesode traslocación de lasproteínas.
(g) Lasproteínasimportadaspor un orgánuloentranen su
interior a travésde una especie de poro proteico.
(h) El complejodel poro constade muchasproteínas¡ con
una masatotal de másde 100millonesde Da, eslo
suficientemente grandecomoparapoderverseal
microscopioelectrónico.
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