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Juan Luis Timaná Lanfranco (20152627K), Gustavo Javier Pérez Contreras (20152646E)
Laboratorio de Química Orgánica II, PQ-322, FIPP
juanluistblull@gmail.com, gperezc152@gmail.com
RESUMEN
1. INTRODUCCIÓN
Formación de osazonas
Antes de la espectroscopia, una de las mejores maneras de identificar cetonas y aldehídos era la conversión a
hidrazonas cristalinas, especialmente fenilhidrazonas y 2,4-dinitrofenilhidrazonas. En su trabajo exploratorio
sobre las estructuras de los azúcares, Emil Fischer formó y usó derivados de fenilhidrazona. De hecho, el uso
constante de la fenilhidrazina provocó finalmente la muerte de Fischer en 1919 por envenenamiento crónico
con fenilhidrazina.
Esquema 1. Síntesis de la fenilhidrazona
Sin embargo, los azúcares no forman los derivados de fenilhidrazona sencillos que podríamos esperar. Dos
moléculas de fenilhidrazina se condensan con cada molécula del azúcar para formar una osazona, en la que los
compuestos se han convierten en fenilhidrazonas. El término osazona se deriva del sufijo -osa de un azúcar y la
última mitad de la palabra hidrazona. La mayoría de las osazonas se cristalizan con facilidad, con puntos de
fusión bien definidos. Los puntos de fusión de los derivados de osazona proveen pistas valiosas para la
identificación y comparación de azúcares.
Fischer descubrió también que la formación de osazonas no solo era útil para la identificación de
carbohidratos, sino también para la determinación de sus configuraciones, lo que es mucho más importante.
Un par de aldosas diastereomeras que solo difieren en configuración en torno al C-2 se denominan epímeros
Un modo de identificar un par de aldosas como epímeros, es por medio de la formación de una misma
osazona.
“La identificación de los carbohidratos por osazonas nos permitirá poner en práctica la teoría adquirida sobre
carbohidratos y sus reacciones en la clase de Química Orgánica II”.
Objetivo general: Evaluar las competencias procedimentales adquiridas teóricamente por los alumnos en la
asignatura de Química Orgánica.
Objetivos Específicos:
2. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
En un vaso de precipitado se mezcla la solución de fenilhidrazina con ácido acético glacial y agua. Por otro lado,
en tubos de ensayo se preparan los carbohidratos orgánicos a identificar mezclando los siguientes compuestos:
glucosa, fructosa, maltosa, sacarosa y lactosa. Se añade agua independientemente a cada uno de los tubos de
ensayo y se colocan en baño maría mezclándolos previamente con la mezcla preparada de fenilhidrazina
simultáneamente. Se comenzó a calcular el tiempo. Pasada la media hora de calentamiento en ebullición se
extrajeron los tubos de ensayo y se dejó enfriar. Luego se separó el precipitado usando un equipo de filtración
al vacío, con la finalidad de tomar las muestras de los productos obtenidos y calcular el punto de fusión con el
software vernier en Logger Pro.
3. PARTE EXPERIMENTAL
Se puso a hervir unos 300 ml de agua en un vaso de 500 ml para usarlo como baño maría. En cinco tubos de
ensayo numerados colocamos 0.5 gr. de glucosa, maltosa, fructosa, sacarosa y lactosa respectivamente y se
disolvió en 6 ml de agua(figura1). Se preparó el reactivo de fenilhidrazina, y se agregó 3ml de
fenilhidrazina(figura2) en un tubo de ensayo que contenía 3ml de ácido acético glacial en 10 ml de agua. En
esta parte del laboratorio es de vital importancia tener en cuenta que la fenilhidrazina ES MUY VENENOSA, se
debe evitar al máximo aspirar sus vapores y evitar que el líquido tenga contacto con la piel. En caso de
quemaduras se aplica ácido acético diluido (05-10%) repetidas veces y posteriormente lavarse con bastante
agua y jabón. Se esperó hasta que el baño del agua maría esté hirviendo, y se añadió rápidamente a cada tubo
3ml aproximar del reactivo de fenilhidrazina recién preparado y coloque los cinco tubos a la vez en el agua
hirviendo (figura3). Se anotó el tiempo que demora la aparición de cada osazona. Se siguió el experimento
continuando el calentamiento por lo menos 30 minutos. Se enfrió la solución en la cual no apareció
precipitado. Como no se apreció obtener un precipitado evidente se procedió a usar un equipo de filtración al
vacío para obtener un mejor precipitado(figura4). Se sacó pequeñas porciones de cada uno de los precipitados
obtenidos(figura5) y se determinó sus puntos de fusión con el software Vernier de Logger Pro(figura6).
RF
3mL fenilhidrazina
3mL CH3COOH glacial
6mL H2O
Filtración al vacío de
cada osazona
4. RESULTADOS
Finalizada la obtención de las osazonas de cada azúcar, se procedió a la medición del rango de fusión
de cada una.
Tabla 1. Puntos de fusión de las osazonas de cada azúcar.
Compuesto Rango de fusión
Osazona de glucosa 216.6 °C – 217.8 °C
Osazona de maltosa 206.1 °C – 207.2 °C
Osazona de lactosa 199.4 °C – 200.7 °C
Osazona de fructosa 216.3 °C – 217.6 °C
Osazona de sacarosa 216.5 °C – 217.5 °C
5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Observando y comparando los rangos de fusión obtenidos para cada azúcar, se puede apreciar un alto grado de
similitud entre los rangos de fusión de la glucosa, la fructosa y la sacarosa.
Era de esperarse que la glucosa y la fructosa tengan puntos de fusión similares, debido a que ambos
compuestos son hexosas, una cetosa (fructosa) y una aldosa (glucosa), las cuales al reaccionar con la
fenilhidrazina dan la misma osazona.
En cambio, para el caso de la sacarosa, esta se hidroliza y se produce una mezcla de α-D-glucosa y
β-D-fructosa (azúcar invertida). Al momento de darse la formación de la osazona, esta parte ya sea de la
glucosa o de la fructosa, obteniéndose una misma osazona puesto que son hexosas.
6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Fue posible realizar la formación de las osazonas y de sus respectivas fenilhidrazonas logrando
determinar los puntos de fusión de las osazonas de cada uno de los carbohidratos.
Por el lado de las recomendaciones, es importante trabajar con reactivos de la mejor calidad, lo cual no
fue el caso en el experimento desarrollado. De la misma manera realizar un correcto uso de los
instrumentos de laboratorio al momento de manipularlos, en especial la manipulación de la
FENILHIDRAZINA realizarla con extrema diligencia y desarrollar las técnicas en cada uno de los procesos
involucrados tales como disolver los reactivos, la correcta posición del papel de filtro en el equipo de
vacío y una buena lectura en el equipo vernier.
7. CUESTIONARIO
Porque la fructosa y la glucosa son hexosas (monosacáridos de 6 carbonos) cetosa y aldosa respectivamente.
En la formación de una osazona, el C1 y el C2 se convierten a fenilhidrazonas. Por tanto, una cetosa forma la
misma osazona que su aldosa relacionada.
CHO HC NNHC6H5
NH 2
H OH HN NNHC6H5
HO H + HO H
H OH H OH
H OH H OH
CH2OH CH2OH
CH2OH HC NNHC6H5
NH 2
O HN NNHC6H5
HO H + HO H
H OH H OH
H OH H OH
CH2OH CH2OH
Reacción de Benedict
Se basa en la reducción de Cu 2+ a Cu+ en medio básico débil. Aunque es similar a la reacción de Fehling, el
medio básico débil (HNaCO3) y el estabilizante (citrato sódico) usados hacen que este test sea más sensible y
estable.
Procedimiento:
1. Pipetear en un tubo de ensayo 5mL del reactivo de Benedict.
2. Calentar a ebullición.
3. Añadir 1mL de la solución de azúcar, mezclar bien y volver a calentar a ebullición
Resultado:
Si la reacción da positiva aparece un precipitado rojizo, aunque si la cantidad de azúcar es pequeña puede dar
color anaranjado o rojizo.
Reacción de Braun
Los azúcares reductores en medio alcalino pueden reducir el picrato, de color amarillo, a picramato, de color
rojo en medio alcalino (Na2CO3)
NO2 NH 2
– –
O O
Prueba de Barfoed
En medio ácido, tan sólo los monosacáridos son capaces de reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ producido reduce al
ácido fosfomolíbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.
Procedimiento:
1. Pipetear en un tubo de ensayo: 1mL de solución de azúcar, 1mL de solución ácida de cobre.
2. Calentar a ebullición durante 3 minutos.
3. Enfriar en agua durante 2 minutos.
4. Añadir 1mL del reactivo de fosfomolibdato.
Resultado:
Si la prueba es positiva aparece un color azul oscuro muy intenso.
Los monosacáridos son capaces de reducir, en medio amoniacal, el ion Ag + a Ag0 (plata metálica), que se
deposita en las paredes del tubo.
0
+ ¿+ R−CHO → Ag + R−COO NH4 ¿
Ag+¿+2 NH → Ag(NH )
3 3 2 ¿
Procedimiento:
1. Añadir en un tubo de ensayo: 1mL de AgNO3 al 1%, 1mL de NH3 al 30%, 1mL de solución de azúcar.
2. Mezclar bien y calentar durante 2 minutos.
3. Dejar reposar.
Resultado:
Si el ensayo da positivo, la plata metálica se va depositando en la pared del tubo formando un espejo (“espejo
de plata”).
4. ¿Cuál de los siguientes azúcares dan positivo la prueba de Tollens o Fehlling? Explique brevemente
La prueba de Fehling se utiliza para el reconocimiento de azúcares reductores. El poder reductor que pueden
presentar los azúcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes
oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder reductor. Por
otro lado la prueba de Tollens es específica para cetosas y para el reconocimiento de galactosa y sus derivados.
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] L. Wade, Química Orgánica Volumen 2, Séptima edición, México: Pearson Educación, 2011.
[2] R. N. B. R. T. Morrison, QUÍMICA ORGÁNICA Quinta edición, México: Addison Wesley Longman, 1998.
[3] C. Timaná de La Flor, Química Orgánica II - Guía de Laboratorio, Lima: UNI-FIP-Timaná, 2001.