Cómo cambiar el valor de α?

Para GC y HPLC

Rampas de temperatura
Isotermas
 La ampliación de banda es un fenómeno que reduce la eficiencia de una
separación y conduce a una resolución reducida y un rendimiento
cromatográfico deficiente. Esto es problemático en términos de la calidad
de la separación obtenida y la precisión con qué componentes de la
muestra se pueden cuantificar
 Ensanchamiento de banda: Teoría cinética

La forma gaussiana de una banda se atribuye a los diferentes procesos de

transferencia de masa y a la combinación aditiva de los movimientos
aleatorios de las distintas moléculas a medida que descienden por la
columna. Los factores que contribuyen a la anchura de banda son:

La eficiencia se analiza en términos de altura de platos teóricos (H)

Variables cinéticas que modifican la altura de los platos teóricos:

1- Difusión por turbulencia (remolino) o trayectorias diferentes seguidas por la

fase móvil (Difusión de Eddy)

2- Difusión longitudinal del soluto a lo largo de la columna

3- Los equilibrios del soluto entre la fase móvil y la fase estacionaria

 Altura de plato teórico: Ecuación de Van
Deemter

Estas variables cinéticas están relacionadas en una ecuación aproximada

muy utilizada denominada Ecuación de Van Deemter.

ó ó

𝒔 𝑴

A: Término difusión de remolino

B: Término de difusión longitudinal
C: Término de transferencia de masa
u: Velocidad flujo fase móvil
 Columnas

HPLC GC

0,3 – 10 mm de d.i 2.1–4.6 mm de d.i

Empacadas Tubulares
2-50 μm abiertas
5 μm
Uniformes
Empacadas
200 μm
 Término A
Difusión por turbulencia o trayectorias múltiples (en remolino o
difusión de Eddy)
https://www.chromacademy.com/gc-training.html

A ⁓ λdp

λ=cte depende de las dimensiones, geometría A=0 Para columnas tubulares abiertas
uniformidad del empaquetamiento Y Partículas pequeñas y
dp=diámetro medio de las partículas de la uniformemente empaquetadas
fase estacionaria conducen a columnas más eficaces.
 Carlos Mario:
Según lo anterior…..Si H
sólo dependiera de la
contribución de A, cual de
las siguientes columnas
presenta mayor eficiencia?
Y por qué!

Tubulares
Empacadas abiertas
 Francisco:
Según lo
anterior….mencione
algunos factores que
pueden afectar el término
A.
 Huber:
Si aumento el flujo de la
fase móvil, cómo cambia
A?
 Término B/u: Difusión longitudinal
Difusión longitudinal: La banda se ensancha cuando las moléculas se difunden
hacia las zonas de menor concentración hacia adelante y hacia atrás de la banda.

⁓ 𝑴

γ= Factor de impedimento, = Coeficiente de difusión de la fase móvil

 Miriam:
Según lo anterior…..
• Si u (flujo de la fase
móvil) cambia, cambia
la contribución de B?
• Si u aumenta, H
aumenta? Disminuye?
 Vanessa:
Según lo anterior…y sólo
teniendo en cuenta la
contribución de B, cual
tipo de cromatografía
esperaría que tuviese
mayor ensanchamiento de
banda LC o GC? Y por
qué!

• En cromatografía liquida B es mucho menor que en gases

2

 veces mayor
 Juan José:
Como vimos, la difusión
longitudinal es
proporcional al coeficiente
de difusión molecular,
según esto, qué factores
esperaría usted que
afectaran el término B?
 Término Cu
Resistencia a la transferencia de masa entre la fase móvil y la fase
estacionaria

• El equilibrio de distribución entre la fase estacionaria y la fase móvil no es

inmediato y no tiene el tiempo suficiente para establecerse.

• El equilibrio o la transferencia de masa entre una fase y otra va a ser

proporcional a la velocidad de flujo (u).

Cs  Transferencia de masa analito - fase estacionaria  Interacción

analito –fase estacionaria
C
CM  Transferencia de masa analito - fase móvil  difusión del
analito a través del flujo de la fase movil

https://www.chromacademy.com/frameset-
chromacademy.html?fChannel=0&fCourse=0&fSco=3&fPath
=sco3/hplc_1_3.asp
 𝒔  Depende del tipo de fase estacionaria que se tenga

Para fases sólidas es despreciables  el proceso es rápido, el tiempo

que se demore para ser adsorbido y desorbido.

Para fases líquidas, este parámetro depende del espesor de la película

(df) y el coeficiente de difusión del analito (Ds) en la fase líquida

Si el espesor de la fase estacionaria es grande, el analito se difunde y

debe recorrer un mayor camino y si la difusión es menor, requerirá mayor
tiempo para salir y encontrarse con la fase móvil para ser llevado a lo
largo de la columna, esto produce un ensanchamiento de pico, por tanto,
un aumento de la altura de plato teórico.

Se prefieren fases líquidas poco viscosas.

𝑴  Describe la resistencia a la transferencia de masa en la fase móvil

La difusión perpendicular al flujo de la fase

móvil. La velocidad de difusión > velocidad fase
móvil
Cada soluto permanece dentro del mismo
pequeño volumen a medida que es
transportado

Si la velocidad de la fase móvil > veloc.

Difusión
Las moléculas que difunden en un intervalo de
distancias para alcanzar el soporte recorren
distancias variables antes de ser adsorbidas.
La banda se extiende.

dp: diámetro partículas de relleno

⁓ dc: diámetro columna
Efectos de u (velocidad fase móvil) sobre la ecuación de Van Deemter

HPLC GC Capilar
 Factores extra-columna
ensanchamiento de las bandas cromatográficas

Son factores que contribuyen al ensanchamiento de banda y no involucran

la columna.

Volúmenes muertos en el sistema de

Introducción de la muestra inyección, detector y tubos de conexión

Para minimizar el ensanchamiento de las bandas cromatográficas por factores

extra-columna, deben minimizarse todos los espacios muertos y las
dimensiones de los tubos; la muestra deberá aplicarse en una zona muy
estrecha y deberá procurarse que penetre en la columna antes de mezclarse
con el eluyente.
 APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA

Análisis cualitativo Pocas aplicaciones…

Con el tiempo de retención resulta difícil asegurar la presencia de un

componente en una mezcla, aunque si se puede afirmar la ausencia.
Análisis cuantitativo

Las caracteristicas cromatograficas cuantitativas de la columna se basan en la

comparacion de la altura o el area del pico del analito con la de uno o mas
patrones.

Altura Área

Cuál de los dos?

Calibración y patrones

Los métodos de cuantificación que principalmente se utilizan en cromatografía

son las rectas de calibrado obtenidas a partir de series de patrones (calibración
externa), el método del patrón interno, el de normalización de áreas y el de
adición estándar.

Calibración externa con patrones

La fuente de error más importante en los análisis es por lo regular la

incertidumbre en el volumen de la muestra.
Método de patrón interno

Se añade a los patrones y a la muestra una cantidad exactamente medida de un

componente puro (Patrón interno, Pi), ausente en la muestra, utilizándose como
parámetro analítico la relación de áreas de pico del analito y del patrón interno.

La concentración del patrón se mantiene constante mientras las áreas de los

patrones de referencia van a aumentando.

Área analito/área Pi vs Concentración analito/concentración Pi

Masa variable del analito
El método de normalización de áreas

Permite establecer el porcentaje de cada componente en la muestra. Se calcula

dividiendo el área de cada componente (Ax) entre el área total de los picos (ΣAi) y
multiplicando por 100.

Para mayor precisión, se debe cumplir que todos los analitos eluyan, se detecten
y tengan la misma sensibilidad bajo el detector. Normalmente, sólo se aplica a
compuestos de una serie homóloga.