BIOTECNOLOGIA VEGETAL

Isidro E. Suárez, Ph. D.

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA AGRONÓMICA Y DESARROLLO
RURAL
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADA PARA EL CARIBE - IBAC
2020
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA AGRONÓMICA Y DESARROLLO RURAL
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADA PARA EL CARIBE - IBAC
2020
 EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA

Definición: Propagación in
vitro de plantas a partir de
embriones originados en
células diferentes al zigoto.

Embrión: Es un nuevo
individuo vegetal, de carácter
bipolar que carece de
conexiones vasculares con la
planta madre.

Embriogénesis: Secuencia de
eventos morfogenéticos que
conducen a la formación de un
embrión a partir de una célula
zigótica o somática.
 EMBRIOGENESIS
• Zigotica
Formación de embriones a
partir del zigoto resultante
de la fertilización de la
ovocélula presente en el
saco embrionario.

• Somática:
Formación de embriones a
partir de células diferentes
al zigoto.

• Estados morfogénicos de
la embriogénesis:
Proembrión, Globular,
corazón, torpedo,
cotiledonar.
 TIPOS DE EMBRIOGÉNESIS NO ZIGÓTICA

Embriogénesis Partenogenética:
Desarrollo de embriones a partir de la
ovocélula o núcleos de saco sin
fertilización por parte del núcleo
generativo (Apomixis).

Embriogénesis Androgenética:
Desarrollo de embriones a partir de
microsporas.

Embriogénesis somática: Desarrollo de

embriones a partir de células somáticas
(asexuales 2n) en condiciones in vivo o
in vitro.
 EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA

• Protocolo

• 0. Preparación de plantas madres

• I. Inducción de Tejidos
Embriogénicos
• II. Multiplicación de Material
Embriogénico
• III. Desarrollo de Embriones
Somáticos
• IV. Maduración de Embriones
Somáticos
• V. Recuperación de Plantas
(Conversión)
• VI. Adaptación de plantas a
condiciones ex vitro.
 I. INDUCCIÓN DE TEJIDOS EMBRIOGÉNICOS
• Formación y desarrollo cultivos compuestos
por células embriogénicas.

• La inducción ocurre en medio semi sólido a

partir del explante

• Puede ocurrir de dos formas

• Permisiva (Directa)
• Dirigida (Indirecta).

• Los tejidos induidos pueden estar formados

por dos tipos de estructuras:
• Embriones somáticos.
• Masas de células proembriogénicas (MPEs).

• Tanto el tipo de inducción como el tipo de

estructuras van a depender del potencial
embriogénico que tengan las células del
explante.
 EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
DIRECTA (PERMISIVA)

• Formación directa de
embriones a partir de las
células presentes en el
explante sin proliferación de
tejido celular desorganizado.

• Esta inducción es posible en

explantes de tejidos juveniles
(nucelo, embriones inmaduros,
cotiledones, hipocotilos, etc.)
que contienen células con alto
potencial embriogénico
(Células embriónicamente
predeterminadas - CEPD).

• El medio de cultivo no requiere

de la adición de auxinas para
que ocurra la inducción.
 EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
INDIRECTA (DIRIGIDA)
• Ocurre en explantes con células
diferenciadas: hojas, pecíolos, etc.,
que tienen poco potencial
emrbiogénico.

• El explante debe ser cultivado en un

medio suplementado con auxinas de
efectos fuertes (2,4-D y picloram)
para inducir multiplicación célular y
adquisición del potencial
embriogénico.

• Con cada ciclo de multiplicación

celular, las nuevas células que se
forman adquieren mayor potencial
embriogénico por eso se denominan
células embriónicamente inducidas
(CEI).
 TIPOS TEJIDOS EMBRIOGENICOS
• Embriones somáticos
• Son embriones en diversos estados
de desarrollo que se multiplican por
embriogénesis repetitiva, es decir
nuevos embriones se forman a
partir de embriones previos.
• Son frecuentes en CED.

• Masas proembriogénicas:
• Células embriogénicas que debido
a el efecto de las auxinas presentes
en el medio, pierden la capacidad
de convertirse en embriones
individuales resultando en una
multiplicación continua de células.
• Producto de CEI.
II. MULTIPLICACIÓN DE TEJIDO EMBRIOGÉNICO
• Multiplicación del tejido inducido
en medio de cultivo semisólido o
líquido.

• Los embriones somáticos se

cultivan en medio semisólido
tienen bajas tasas de
multiplicación.

• Las MPEs son sometidas a

subcultivos periódicos en medio
semisólido o líquido con
suplemento de auxinas (2,4-D,
Picloram) fuertes para aumentar la
multiplicación celular y prevenir la
formación de embriones.
 II. MULTIPLICACIÓN DE MATERIAL
EMBRIOGÉNICO
Efecto de las auxinas (2,4-D;
Picloran, 2,4,5-T) en los tejidos
embriogénicos:

• Eliminan la polaridad celular

evitando que la célula se
convierta en embrión,
silenciando los genes que
codifican proteínas necesarias
para la formación del embrión.

• Aumentan el potencial
embrionario.

• Favorecen la multiplicación
celular.
 III. DESARROLLO DE EMBRIONES
SOMÁTICOS
Tejidos formados por embriones
somáticos completan el desarrollo en
en el medio de inducción.

MPEs son inducidas a completar el

proceso de embriogénesis:
Se transfieren del medio de
multiplicación con auxinas a un medio
semisólido sin suplemento de auxinas.
La ausencia de auxinas reestablece la
polaridad celular y la síntesis de
proteínas necesarios para el desarrollo
embrionario.
Se inicia el proceso morfogénico para
la formación del axis polar que termina
meristemo apical y radica que termina
con el desarrollo del embrión y
crecimiento de los meristemos apical y
radical.
 IV. MADURACIÓN DE
EMBRIONES SOMÁTICOS
• El procesos de embriogénesis
comprende una fase de desarrollo
morfológico y una de desarrollo
fisiológico similar a la formación y
desarrollo de la semilla.

• La etapa de desarrollo fisiológico

es similar a la última etapa de
formación de la semilla sexual,
denominada maduración de la
semilla.

• Los embriones somáticos son

transferidos en un medio de
cultivo semisólido adicionado con
ABA (Ácido absísico).

• El ABA contribuye a una completa

formación del axis polar y
acumulación de proteínas de
resistencia para la conservación
del embrión.
 V. RECUPERACIÓN DE PLANTAS
(CONVERSIÓN)
• Embriones somáticos no tienen cubiertas
por lo tanto no ocurre un verdadero
proceso de germinación.

• Los embriones son cultivados en un

medio de cultivo suplido con ácido
giberélico (GA3) con el fin de inducir el
crecimiento de la raíz y el tallo a partir de
los meristemos radical y apical.

• Cuando se producen solo ápices

caulinares, estos son micropropagados
como explantes con meristemos pre-
existentes o microinjertados en plántulas
recién germinadas.

• Embriones somáticos son recalcitrantes

independiente de la especie.
 VENTAJAS DE LA
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
• Alto potencial de multiplicación por su
origen unicelular y la posibilidad de usar
biorreactores para incrementar el
número de células.

• Presencia de tallos y raíces en una

misma estructura que evita la
realización de la etapa de
enraizamiento.

• Los tejidos embriogénicos son muy

útiles para utilizarlos en
almacenamiento de germoplasma.

• Como método de propagación tiene la

posibilidad de combinar la eficacia de
las semillas con la propagación clonal.

• Gran potencial para ser utilizada en la

producción de semilla sintética (Semilla
clonal).
 LIMITANTES DE LA
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
• Los porcentajes de conversión de embriones
somáticos en plantas han sido bajos en todas
las especies (<50%) sin poder superar a los de
semilla sexual.

• El proceso tiene una alta producción de

embriones deformes donde falta uno o ambos
de los dos meristemos, lo que afecta la
eficiencia del proceso.

• Los embriones producidos no tienen los

mismos grados de desarrollo causando poca o
nula sincronización del crecimiento de las
plántulas obtendias.

• Los tejidos muestran una rápida pérdida del

potencial embriogénico después de varios
ciclos de multiplicación.

• El manejo físico de los embriones somáticos es

difícil por la ausencia de cubiertas protectoras

• Se presentan altos niveles de variabilidad

genética en la población de plantas producidas.
 TRABAJO

• 1. Presentar en forma de ensayo.

• Proceso de producción de semilla sintética a partir de embriones somáticos.
• Tipos o formas de semilla sintética.
• Especies donde se ha producido semilla sintética y que resultados se han obtenido.
• Potencial de la semilla sintética en cultivos comerciales.