Procedimiento para Análisis de Coliformes Fecales

Filtración a través de membrana

El número de coliformes tecales presentes en el agua se determina mediante la filtración de

volúmenes específicos de la muestra a través de filtros de membrana. Por lo general, están
compuestos de ésteres de celulosa, típicamente con poros de 0,45 mm de diámetro que retienen los
coliformes fecales y otras clases de bacterias presentes en la muestra.

Material y equipo

 Membranas filtrantes de 0,45 µm de tamaño de poro

 Soporte del filtro con embudo
 Rampa de Filtración
 Sistema de bombeo
 Pipetas estériles de 10 y 1 mL.
 Incubadora de cultivo
 Pinzas estériles
 Medio de cultivo m-fc Broth

Técnica de filtración por membrana

1. Desenvolver el filtro de la envoltura con la que se ha esterilizado.

2. Separar el embudo de la base del filtro.

3. Colocar el embudo sobre la base, teniendo cuidado de no lesionar la membrana y que esta
quede bien centrada. La membrana filtrante queda ahora situado entre el embudo y la base-
soporte del filtro.

4. Colocar la membrana filtrante de 0,45 µm de tamaño de poro sobre el portafiltros de las

base del mismo.

El manejo de las membranas se debe realizar con pinzas de punta plana o guantes de goma
para no lesionarlas.

5. Filtrar 100 mL de la muestra de agua a través del filtro. Poner en marcha el sistema de vacio.

Una vez filtrada toda la muestra, parar el sistema de vacío y separar el embudo de la base del
filtro.

6. Se deposita en placas de cultivo que llevan una almohadilla absorbente el medio de cultivo
m-fc broth, aproximadamente 2 ml por placa.
7. Colocar la membrana sobre la placa con la almohadilla absorbente y el medio de cultivo, de
forma progresiva para evitar que queden burbujas entre la membrana y el medio y que
quede asegurado el contacto entre la membrana y el medio.

8. Colocar la tapa de la placa de Petri, invertir la placa e incubar en estufa a 45,5 °C durante 24
horas

9. En este medio todos los coliformes fecales crecen formando colonias de color azul oscuro
con el característico brillo metálico

Los resultados se expresan en UFC/100 mL.