Ejercicios de revisión

1. Defina, con sus palabras, biotecnología y la diferenciación de ingeniería genética?

2. Cite tres beneficios generados o objetivos a ser alcanzados por la biotecnología en el área de la
salud humana o en la agropecuaria.
3. Comente la siguiente afirmación: "La biotecnología es el área del conocimiento que trabaja
exclusivamente con los organismos genéticamente modificados"
4. ¿Cuál es el interés en la construcción de moléculas de ADN recombinante?
5. Esquema de los pasos del proceso de clonación génica, a partir de un gen aislado, para su
expresión en bacterias.
6. En el proceso de clonación génica, ¿cuáles son las características deseables de un buen vector y
de un buen huésped?
7. Señale V o F respecto a los vectores y hospedadores utilizados en el proceso de clonación
génica, corrigiendo las alternativas falsas:
( ) Los plasmodios son vectores que comporta un segmento de ADN (inserto) de tamaño mucho
mayor que los cosmidios y cromosomas artificiales.
( ) Un plásmido puede replicarse en un huésped sólo si tiene el origen de la replicación apropiada
para el huésped.
( ) Un vector de clonación es útil para producir el RNA mensajero del gen de interés en el huésped
elegido.
( ) Un vector de expresión es empleado cuando queremos producir muchas copias de la molécula
de ADN recombinante (amplificación) para posterior extracción y almacenamiento.
( ) Un vector de expresión debe contener la región promotora y terminadora de la transcripción
alrededor del lugar en que el gen de interés será ligado. Este promotor y terminador deben ser los
mismos del gen que será clonado.
( ) Los hospedadores bacterianos poseen algunas desventajas, tales como el hecho de no realizar
el procesamiento de ARN y de las modificaciones post-traducción en la proteína ser diferentes de
las que ocurren en los organismos eucarióticos.
( ) Bacterias gram positivas, como el Bacillus subtilis, son importantes como anfitriones pues
pueden secretar la proteína recombinante para el medio de cultivo, aumentando así el
rendimiento del proceso, la rapidez y la facilidad de purificación del producto.
( ) Las levaduras son buenos anfitriones, pues realizan el procesamiento del ARN y pueden
secretar el producto recombinante para el medio de cultivo. Además, son carentes de proteasas
que podrían degradar nuestra proteína de interés.
( ) Los bacteriófagos son vectores que pueden infectar las bacterias y así transmitir la molécula de
ADN recombinante hacia el interior del huésped.
 ( ) Los cromosomas artificiales son vectores que poseen todos elementos cromosómicos. Por
ejemplo, para eucariotas, poseer: centrómero, dos telómeros y origen de replicación.
( ) Los vectores deben poseer alguna estrategia que permita la selección de las células que
recibieron la molécula de ADN recombinante. En las bacterias, este marcador de selección, puede
ser un gen de resistencia a los antibióticos.
8. Las enzimas de restricción son las herramientas moleculares utilizadas para clivar segmentos de
ADN. Estas enzimas reconocen secuencias específicas de ADN. Observe el mapa de restricción de
un gen siguiente y señale V o F:
( ) Para realizar la clonación de ese fragmento de ADN conteniendo el gen de interés, tanto el
fragmento como el vector deberán ser clivados con la enzima DraI. Sin embargo, esta enzima
genera extremidades ciegas y esto dificulta la clonación (en comparación con las extremidades
cohesivas.)
( ) Si se separa el fragmento de ADN con la enzima DraI, después de la unión en el vector, será
necesario conferir la orientación del inserto, si nuestro objetivo es la expresión del gen.
( ) Para facilitar la clonación de ese fragmento de ADN, podemos clivar fragmento y vector con la
enzima XhoI, que genera extremidades cohesivas y así facilita la unión.
( ) Para realizar la clonación de ese fragmento de ADN podemos cliva con la enzima EcoRI, que
genera extremidades cohesivas y facilita la clonación.
( ) Si clivamos esta molécula de ADN con las enzimas XhoI y EcoRI en la misma reacción,
obtendremos 6 fragmentos de ADN de tamaños aproximados: 251 pares de base; 94 pares de
bases; 51 pares de base; 464 pares de base; 154 pares de base.
9. Para realizar la expresión de la proteína codificada por el gen de interés, en bacterias, se eligió
el siguiente vector plasmidial:
a) ¿Cuál es el tamaño de este pláspido?
b) Para clonar el fragmento de ADN del ejercicio anterior, con qué enzima debemos clivar ese
vector? ¿Por qué?
c) ¿Cuál es el tamaño de la molécula de ADN recombinante formada después de la unión del
fragmento de ADN en el vector?
d) Después de que la molécula de ADN recombinante esté construida, ¿cuáles son los próximos
pasos en la etapa de clonación génica?
e) Para confirmar la construcción correcta, represente en el gel de agarosa, el mapa de restricción
del plasmídio vacío y del plastido que contiene el gen de interés:
a) clivándolos con una enzima de restricción que corte en un solo punto en el vector.
b) clivándolos con una enzima de restricción que corte en un solo punto en el inserto
c) clivándolos con dos enzimas de restricción, una que corte en el vector y otra que corte en el
inserto.
 f) Para realizar la confirmación de la orientación correcta del inserto en el vector, se realizó una
división con las enzimas PstI y XhoI al mismo tiempo. Después de la clivación enzimática, se
procedió una electroforesis en gel de agarosa de los varios clones analizados, cuyo resultado está
mostrado a continuación. ¿Qué se puede concluir acerca de la orientación del inserto? ¿La
expresión del gen de interés es correcta? ¿Se obtendrá la proteína deseada?
10. ¿Cuáles son los métodos disponibles para la transformación genética de las bacterias?
Explíqueles.

11. Cite y explique dos métodos utilizados para la transformación genética de levaduras.

12. ¿Qué es una biblioteca genómica y cuál es su utilidad? Esquema de su construcción.

13. ¿Cómo podemos rastrear un gen en una biblioteca genómica si:

a) conocemos una parte de su secuencia de nucleótidos
b) poseemos un anticuerpo contra la proteína que codifica
c) este gen confiere a la célula una característica fenotípica única, como por ejemplo, emitir
fluorescencia.

14. ¿Qué es una biblioteca de cDNA? ¿Qué es el cDNA y cómo se produce? ¿Cuál es el uso de las
bibliotecas de cDNA?

15. Marque V o F:
( ) Una biblioteca genómica de un cierto tejido siempre será mayor, en número de clones, que la
biblioteca de expresión de ese tejido.
( ) Cuando queremos estudiar el gen que codifica una proteína que se expresa de forma
diferencial en algún tejido, se debe construir una biblioteca de cDNA para facilitar el trabajo. () La
enzima utilizada para convertir el RNA mensajero de una célula en cDNA es la transcriptasa
inversa.
( ) Las bibliotecas genómicas de los humanos no se construyen en los plátanos, ya que los
fragmentos son muy grandes para este tipo de vectores.
( ) Un gen que está representado en una biblioteca de cDNA puede ser rastreado por el screening
inmunológico, bioquímico y con sondas de ácidos nucléicos.
1. Considere los siguientes pasos de un proceso completo de clonación de un gen, a partir de un
fragmento de ADN genómico:
I - Conexión del inserto en el vector por medio de reacción con la enzima ADN ligasa
II - Obtención del inserto de interés por clivaje del ADN genómico con uso de enzimas de
restricción
III - Transformación genética del hospedador con la molécula de ADN recombinante
IV - Clivaje del vector con la misma enzima de restricción utilizada para digerir el fragmento de
interés.
V - Selección de los clones recombinantes que contienen la molécula de ADN recombinante por
medio de un marcador de selección, como por ejemplo la resistencia a antibióticos en bacterias.
VI- Confirmación de la construcción correcta de la molécula de ADN recombinante por medio de
un mapa de restricción
El orden correcto de los pasos es:
(a) IV-I-II-V-VI-III
(b) II-III-VI-V-I-IV
(c) II-IV-I-III-V-VI
(d) II-IV-III-I-V-VI
(e) II-IV-I-V-III-VI

2. Las enzimas de restricción del tipo II reconocen secuencias específicas de ADN, de 4 a 8

nucleótidos, que pueden ser idénticas en el sentido 5'-3'en ambas cintas. Estas secuencias reciben
el nombre de:
(a) repeticiones invertidas
(b) palíndromos
(c) regiones promotoras
(d) regiones terminadoras
(e) orígenes de replicación

3. Las secuencias de ADN en un vector, que permiten que esa molécula se replique en el huésped,
independiente de la replicación del ADN cromosómico reciben el nombre de:
(a) repeticiones invertidas
(b) palíndromos
(c) regiones promotoras
(d) regiones terminadoras
(e) orígenes de replicación

4. Las secuencias de ADN en un vector de expresión, que son responsables de la transcripción de

nuestro gen de interés en el huésped reciben el nombre de:
(a) repeticiones invertidas
(b) palíndromos
(c) regiones promotoras
(d) regiones terminadoras
(e) orígenes de replicación

5. Un vector debe poseer un gen que informe la presencia de la molécula de ADN recombinante
en un hospedador. En las bacterias, podemos utilizar un gen de resistencia a los antibióticos. En
esta situación,
(a) solamente las bacterias que contienen el vector crecer en un medio de cultivo que contiene el
antibiótico.
(b) sólo las bacterias que contienen la molécula de ADN recombinante crecerán en un medio de
cultivo que contiene antibiótico
 
(c) tanto las bacterias que recibieron la molécula de ADN recombinante como aquellas que
recibieron sólo el vector sin nuestro gen de interés crecer en un medio de cultivo que contiene
antibiótico
(d) sólo las bacterias que recibieron nuestro gen de interés sin el vector crecerán en un medio de
cultivo que contiene antibiótico
(e) sólo las bacterias que no recibieron el vector ni la molécula de ADN recombinante crecer en
medio de cultivo que contiene antibiótico.

6. Las secuencias de ADN en un vector, que poseen un alto número de sitios reconocidos por
varias enzimas de restricción que cortan el vector en un solo punto y permiten la clonación del
fragmento de ADN de interés reciben el nombre de:
(a) lugar de clonación múltiple
(b) marcador de selección
(c) regiones promotoras
(d) regiones terminadoras
(e) orígenes de replicación

7. La enzima de restricción BstZ I reconoce la secuencia de nucleótidos a continuación, realizando

la clivación en el punto indicado por la flecha.
5'- C GGCCG- 3'

(a) Esta enzima genera fragmentos con extremos ciegos

(b) Esta enzima genera fragmentos con extremidades cohesivas con 4 nucleótidos desparramados
en el extremo 5'de los fragmentos
(c) Esta enzima genera fragmentos con extremidades cohesivas con 4 nucleótidos desparramados
en el extremo 3 de los fragmentos
(d) Esta enzima genera fragmentos con extremidades cohesivas con 1 nucleótido desemparejados
en la extremidad 5'de los fragmentos
(e) Esta enzima genera fragmentos con extremidades cohesivas con 1 nucleótido desemparejados
en el extremo 3 de los fragmentos

8. Observe la siguiente secuencia de ADN:

5'- ATGCATTAGCTTTAAAATATGCGCCCATCGATGGCCTTTAAAATGCATGCC- 3'

La clivación de esta secuencia con las enzimas de restricción Cla I (AT CGAT) y la enzima Dra I
(TTT AAA) producirá:
(a) 2 fragmentos de ADN
(b) 1 fragmento de ADN
(c) 3 fragmentos de ADN
(d) 4 fragmentos de ADN
(e) 5 fragmentos de ADN
9. La separación de fragmentos de ADN de diferentes tamaños puede ser realizada por un
procedimiento denominado electroforesis. Bajo la influencia de un campo eléctrico, los
fragmentos de ADN:
(a) migran hacia el polo negativo de la cuba y los fragmentos mayores emigran más.
(b) migran hacia el polo positivo de la cuba y los fragmentos menores emigran más.
(c) migran hacia el polo negativo de la cuba y los fragmentos menores emigran más.
(d) migran hacia el polo positivo de la cuba y los fragmentos más grandes migran más.
(e) migran hacia el polo positivo o negativo, dependiendo del pH del tampón.

10. Analice las siguientes afirmaciones acerca de la electroforesis de ácidos nucleicos:

I- Bajo influencia de un campo eléctrico, los fragmentos de ADN migran hacia el polo positivo, pues
el ADN siempre está cargado negativamente debido a la presencia de los grupos fosfato ionizados.
II- La agarosa es un polímero empleado para la confección de los geles de electroforesis de ácidos
nucleicos. Sin embargo, cuando los fragmentos son muy pequeños, debemos utilizar los geles de
poliacrilamida
 
III- Siempre es importante utilizar un patrón de peso molecular, para poder estimar el tamaño de
los fragmentos de ADN separados por la electroforesis.
Son correctas:
(a) I y II
(b) I y III
(c) II y III
(d) I, II y III
(e) Ninguna

11. Después de la migración de los fragmentos de ADN en una electroforesis en gel, es necesario
utilizar un colorante que permita la visualización de las bandas de ácidos nucleicos. Las bandas
corresponden a un conjunto de moléculas de ADN de tamaños similares y pueden ser visualizadas
con el uso de colorantes como:
(a) el reactivo de la ninhidrina, que cora los aminoácidos que forman la cadena de ADN
(b) el bromuro de etileno, que se intercala entre las cadenas del ADN y emite fluorescencia cuando
se analiza bajo luz ultravioleta
(c) intercalantes de ADN como el naranja de acridina y la pro-riboflavina.
(d) el Sybr Green, un nuevo colorante fluorescente
(e) las letras (b), (c) y (d) son correctas

12. En una electroforesis de ácidos nucléicos en gel de agarosa, el gel debe ser preparado por
disolución de la agarosa en el mismo tampón utilizado en la cuba. La función del tampón es:
(a) conducir la corriente eléctrica a lo largo del gel
(b) funcionar como una red que retiene los fragmentos grandes y permite la migración de los
fragmentos más pequeños.
(c) permitir la visualización de los fragmentos de ADN bajo la acción de la luz ultravioleta
(d) todas las funciones anteriores
(e) ninguna de las anteriores

13. Las enzimas de restricción clivan fragmentos de ADN. Esta brecha es la ruptura:
(a) de las conexiones peptídicas que ocurren entre los nucleótidos de la secuencia
(b) de las conexiones glicosídicas que ocurren entre los nucleótidos de la secuencia
(c) de las conexiones fosfodiéster que ocurren entre los nucleótidos de la secuencia
(d) de las conexiones puentes de hidrógeno que ocurren entre los nucleótidos de la secuencia
(e) de las conexiones fosfodiéster que ocurren entre los aminoácidos de la secuencia

14. Cuando un plásmido se aplica en un gel de agarosa y una electroforesis se realiza podemos
visualizar hasta 3 bandas. Esto se debe:
(a) la existencia de formas con diferentes grados de enrollamiento, los cuales poseen movilidades
electroforéticas diferentes. Cuanto mayor es el grado de enrollamiento, mayor es la migración de
esa forma plasmidial.
(b) la existencia de formas con diferentes grados de enrollamiento, los cuales poseen movilidades
electroforéticas diferentes. Cuanto mayor es el grado de enrollamiento, menor es la migración de
esa forma plasmidial.
(c) a los diferentes sitios de clonación múltiple existentes en cada pláspido.
(d) al fenómeno de desnaturalización del ADN, que ocurre durante la electroforesis.
(e) al fenómeno de hidrólisis del enlace fosfodiéster entre los nucleótidos, lo que ocurre durante la
electroforesis.

15. Analizar la siguiente información:

I- Para determinar el tamaño de un plásmido comparando su migración en la electroforesis con un
patrón de masa molecular, el pláspio debe estar linealizado.
II - Para linearizar un pláspido debemos someterlo a una reacción con una enzima de restricción
que se extienda el plásmido en un solo punto.
III.- Un plastificado linealizado presentará 3 bandas en un gel de agarosa después de electroforesis,
lo que es consecuencia de los diferentes grados de enrollamiento.
Son correctas:
(a) I y II
(b) I y III
(c) II y III
 (d) Ninguna
16. Señale V o F con respecto a las afirmaciones sobre un procedimiento de reacción de restricción
y electroforesis en gel de agarosa al 0,8% del siguiente vector:

( ) Una electroforesis del plasmio no clivado podrá mostrar hasta 3 bandas, que son causadas por
las formas de diferentes grados de enrollamiento de ese vector circular.
( ) La reacción de restricción de este plátano con la enzima EcoRI producirá 2 bandas en el gel.
( ) La reacción de restricción de ese plátano con la enzima BamHI linealizará el plásmido y la
banda observada determinará el tamaño del vector en el gel de agarosa.
( ) La reacción de restricción de este plátano con las enzimas BamHI y EcoRI producirá 3 bandas
en el gel de agarosa.

17. Represente, en el gel de agarose a continuación, las bandas de las reacciones de restricción del
ejercicio 16.

En el primer canal del gel está el

patrón de peso molecular. Sus
bandas tienen los siguientes
tamaños; 21 Kb; 9 kb; 6 kb, 4,5 Kb;
2 kB; 0,5 Kb
18. Analice críticamente la información sobre los hospedadores que pueden utilizarse para la
producción de proteínas recombinantes de interés farmacéutico:
( ) En términos de crecimiento, las bacterias adquieren una biomasa considerable en horas hasta
1 día; los hongos filamentosos duran de 1 día hasta una semana; las células de mamíferos en
cultivo, semanas y las plantas, meses.
( ) El medio de cultivo para bacterias y hongos es más barato que el medio de cultivo para células
de mamíferos en cultivo.
( ) una gran desventaja de los anfitriones bacterianos son las diferencias de modificación de la
estructura de la proteína de interés después de la traducción en el ribosoma.
 
19. Con respecto a los métodos de transformación genética, señale V o F:
( ) Para la transformación genética de bacterias, los métodos más utilizados son la
electroporación, el choque térmico y el uso de los bacteriófagos.
( ) Los bacteriófagos son virus que infectan bacterias, insertando su ADN en el interior de la célula
bacteriana.
( ) La electroporación es el método de más alta eficiencia de transformación en bacterias.
( ) En la electroporación un pulso eléctrico elevado se aplica en las células, desestabilizando la
membrana y pared celular. En ese momento, existe una oportunidad para la entrada de la
molécula de ADN recombinante.
( ) Para las levaduras y otros hongos, la transformación por choque térmico en presencia de
cloruro de litio y la electroporación son métodos utilizados.
( ) En la transformación por choque térmico en bacterias, es necesario un tratamiento con calcio
para minimizar la repulsión electrostática entre la pared y la membrana celular y la molécula de
ADN recombinante. Además, el choque térmico propicia la entrada del ADN recombinante en la
célula.

20. Marque V o F:
[ ] La electroforesis en gel de agarosa es útil para el análisis cualitativo de la extracción,
identificando la presencia de ARN, proteínas y lípidos contaminantes.
[ ] El bromuro de etidio es una droga carcinogénica, por lo que todo material contaminado debe
ser tratado con NaOH 10 N y después de descartado en la basura común.
[ ] En una electroforesis en gel de agarosa, el ADN migra del polo negativo al positivo bajo
influencia de un campo eléctrico.
[ ] Cuanto mayor es la concentración del gel de agarosa, mejor es la resolución para grandes
fragmentos de ADN.
[ ] Los tapones de electroforesis conducen la corriente eléctrica entre los polos y estabilizan la
migración del ADN.
[ ] Un gel de agarosa el 0,8% se prepara disolviendo 0,4 g de agarosa en 50 mL de agua destilada y
calentado hasta la disolución.
[ ] El tapón de electroforesis debe cubrir la superficie del gel, no siendo necesario la cobertura de
los polos.
[ ] La liberación de hidrógeno en el cátodo es signo del paso de la corriente eléctrica.
Las tres formas del plépido: superenrolada, relajada y lineal tienen diferentes tamaños en pares de
base, por lo que se posicionan en alturas diferentes en una electroforesis en gel de agarosa.
[ ] La agarosa es un polímero lineal extraído de algas marinas compuesto básicamente de D y L-
Galactosa.
[ ] La velocidad de migración de fragmentos de ADN en un gel de agarosa es directamente
proporcional al tamaño del fragmento, en pares de base.
[ ] Moléculas grandes de ADN migran más lentamente debido al gran arrastre friccional generado
durante el desplazamiento y debido a la travesía menos eficiente por los poros cuando comparado
con moléculas pequeñas.
[ ] La concentración de la agarosa no influye en la migración del ADN pues no se relaciona con el
coeficiente de retardo y con la movilidad electroforética del fragmento.

21. Un estudiante realizó la electroforesis en gel de agarosa para separar fragmentos de ADN de
tamaños cercanos. Para ello, hizo dos electroforesis en las mismas condiciones de voltaje,
amperaje y tiempo de migración. Sin embargo, una fue realizada en un gel de agarosa al 0,8% y la
otra al 0,5%. Observando los geles al lado, diga a qué concentración de agarosa pertenece cada
gel. Explique.

22. ¿Por qué las bibliotecas de cDNA son siempre menores que las bibliotecas genómicas?
 
23. Si comparamos dos bibliotecas de cDNA hechas a partir de tejidos diferentes de los
organismos, ¿encontraremos diferencia? ¿Por qué?

24. Si comparamos dos bibliotecas de ADN hechas a partir de tejidos diferentes de los organismos,
¿encontraremos diferencia? ¿Por qué?