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PRACTICA DE LABORATORIO – BIOQUIMICA METABOLICA

PRESENTADO POR:

YARLIN MAITE PANTOJA MARTINEZ CC: 1004771526

PRESENTADO A:

TUTOR: JORJE ANIVAL MAYA

GRUPO:

352001_30

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA (UNAD)

BIOQUÍMICA METABÓLICA

OCTUBRE

2019

Introducción

La bioquímica es la ciencia que estudia los componentes químicos de los seres vivos,
especialmente las proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos nucleicos, además de otras
pequeñas moléculas presentes en las células. la bioquímica se basa en el concepto de
que todo ser vivo contiene carbono y en general las moléculas biológicas están
compuestas principalmente de carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, fósforo y
azufre. es la ciencia que estudia la mismísima base de la vida: las moléculas que
componen las células y los tejidos, que catalizan las reacciones químicas de la
digestión, la fotosíntesis y la inmunidad, entre otras. 

En los contenidos de las guías para la realización de los laboratorios se revisan


procedimientos experimentales de importancia para el trabajo en el laboratorio como
análisis de ureasa: suelo, determinación de materia orgánica y análisis de
carbohidratos no estructurales. Para lo cual se estudió previamente todas las guías y
los procedimientos a realizar.

Las actividades de laboratorio constituyen una parte importante del aprendizaje de la


bioquímica y complementan las actividades de la materia impartidas en el aula.
Es de importancia la asistencia puntual, así como la participación activa, la recolección
de resultados de los experimentos y la entrega de reportes de los mismos.
Es de la mayor importancia cumplir meticulosamente con las medidas de seguridad
tanto en comportamiento, accesorios como guantes, anteojos de protección o tapa
bocas, bata larga.

PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES

Análisis de ureasa: suelo

La Ureasa es una enzima amidohidrolosa de peso molecular: 480.KD, punto isoelecteico:5.0 y


PH OPTIMO entre 6 y 7, cataliza la hidrolisis de la urea produciendo gas carbónico, hidróxido
de amonio según la reacción.
MATERIALES

● Tubos de Ensayo con Gradilla


● Pipetas 5 y 10 mL
● Pinzas para bureta
● Baño de María
● Erlenmeyer 125 mL
● Beaker 400 mL
● Bureta 25 mL
● Soporte Universal

EQUIPO REACTIVOS

● Buffer Fosfato de pH = 7
● Ureasa al 0,1%
● Urea 0,25 M
● HCl 0.1N
● HgCl2 al 1%
● Indicador de Tashiro

Extracción y cuantificación

Como primer paso para el análisis de ureasa pesamos 1 gramo de muestra de suelo en una
balanza analítica, posteriormente lo añadimos a un tubo de ensayo, igualmente adicionamos 10
ml de Nacl al 15, agitamos por 5 minutos.
Como segundo paso colocamos nuestra muestro de suelo en la centrifuga por 5 minutos, (3500
RPM) en la cual se separa el líquido del sólido.

En un soporte universal, colocamos un aro de metal y sobre el un embudo con su respectivo filtro
en el cual extraemos la muestra y medidos el volumen: VF: 6
Rotular 3 tubos a los cuales adicionaremos lo siguiente:
Luego de adicionar los respectivos reactivos, agitaremos por 10 segundos, y procedemos a
llevarlos a baño maría a una temperatura de 37 grados centígrados por un tiempo de 20 minutos
y procedemos a titular:

Titulación:

Pasamos la solución a B, S Y M a Erlenmeyer, luego Adicionamos 3 gotas de indicador


tashiro, obteniendo los siguientes resultados:

Blanco: verde

Estándar: verde

Muestra: verde
Al obtener un color azul- verdoso indica que es Positivo para ion amonio (NH4).

Posteriormente Procedemos a titular con ácido clorhídrico 01 M el cual lo adicionamos


lentamente hasta notar el cambio de color, obteniendo los siguientes resultados:

Blanco: 06 ml con un color morado violeta

Estándar: 07 con color Rosa Violeta

Muestra: 07 con un color Rosa Violeta.


Se identificó de acuerdo a los estos resultados que dio positivo para Ion Amonio y se logra
extraer la enzima Ureasa por el cambio de color.

Finalmente cuantificamos los resultados:


DETERMINACION DE MATERIA ORGANICA
La materia orgánica es uno de los componentes del suelo, en pequeña porción, formada por los
restos vegetales y animales que por la acción de la microbiana del suelo son convertidos en una
materia rica en reservas de nutrientes para las plantas, asegurando la disponibilidad de macro y
micronutrientes. Cuando son agregados restos orgánicos de origen vegetal o animal, los
microorganismos del suelo transforman los compuestos complejos de origen orgánico en
nutrientes en forma mineral que son solubles para las plantas; pero este proceso es lento, por lo
tanto, la materia orgánica no representa una fuente inmediata de nutrientes para las plantas, sino
más bien una reserva de estos nutrientes para su liberación lenta en el suelo.
1. Precalentar horno a 115ºc
2. Tomar la muestra de Forraje, suelo, madera, alimento, granos o concentrado y picarlo hasta
alcanzar tamaños de partícula entre 10 y 15 mm.
Trabajamos con una muestra de suelo
3. Tomar muestra en un crisol e introducir a horno o estufa de aire forzado por 1 hora a 115ºc

4. Precalentar Mufla a 550ºc


Los crisoles permanecieron en la mufla a
600 °C, luego pasaron a 100°Cpor 20
minutos, seguidamente al desecador donde
deben tener un color azul el sulfato, por 20
minutos para así absorba toda la humedad.

5. Al sacar la muestra moler o picar


nuevamente hasta alcanzar un tamaño de partícula menor.
6. Pesar crisoles de mufla y registrar los pesos marcando los crisoles en la parte inferior y lateral
con marcador indeleble (también tener presente el lugar donde queda ubicado el crisol antes de
introducir a mufla) = Wc

Lo realizamos con dos crisoles:


Crisol 1: 16,9457g + 1g suelo 1,0042g Wc:18g
Crisol 2: 21,8238g + 1g suelo 1,0021g Wc:22,8259
7. Pesar 1g de muestra y almacenarlo en un crisol de Mufla = Wm
Después de haber estado en la mufla el peso de los crisoles fue:
Crisol 1: Wm:17,7639g
Crisol 2: Wm:22,5877g
8. Introducir crisoles y tomar registro de su ubicación para posteriores cálculos
9. Dejar reposar crisoles durante 45 minutos a temperatura ambiente
10. Pesar crisol y muestra = Wcm
Crisol 1: Wcm:0,2661g
Crisol 2: Wcm:0,2382g
Para determinar el contenido de materia orgánica:

Materia orgánica crisol 1:


( 18 g +17,7639 g )−0,2661
MO ( % )=1−
( 18 g+17,1639 g )
35,7639 g−0,2661
MO ( % )=1−
35,7639 g
35,4978 g
MO ( % )=1−
35,7639 g
MO ( % )=1−0,9925
MO ( % )=0,0075
Materia orgánica crisol 2:
( 22,8259 g +22,5877 g )−0,2382
MO ( % )=1−
( 22,8259 g+22,5877 g )
45,4136 g−0,2661
MO ( % )=1−
45,4136 g
45,1475
MO ( % )=1−
45,4136 g
MO ( % )=1−0,9941
MO ( % )=0,0059

En teoría, absolutamente todas las biomoléculas que se encuentran en una muestra cualquiera del
eje SPA al estar bajo las condiciones de la mufla (550ºc por 4 horas), se desnaturalizan y el
remanente (denominado cenizas, por obvias razones) es una representación relativamente
cercana al contenido de minerales de la muestra analizada.
En este sentido;
% Minerales = 100 - % MO

Minerales crisol 1:

%Minerales=100−0,0075
%Minerales=99,9925
Minerales crisol 2:

%Minerales=100−0,0059
%Minerales=99,9941
ANALISIS DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES.

MATERIALES Y EQUIPO REACTIVOS

● Balanza analítica
● Baño de María
● Agitador de vidrio
● Vaso de precipitados

REACTIVOS
● NaOH 0,6N
● Fenol al 5%
● Glucosa al 1%
● HCl 0,6N
● H2SO4 concentrado

PROCEDIMIENTO EXTRACCION – CUANTIFICACIÓN – LECTURA ESPECTROFOTOMETRICA

- El primer paso que debemos hacer es pesar 2g de la muestra en la balanza analítica en este caso
concentrado.
Peso de la muestra = 2,024

- Luego aplicamos a los 2,024g de la muestra 50ml de HCL 0,6N Ácido clorhídrico y agitamos por 3
minutos.
- Después se lleva a baño maría a 90°c durante 20 minutos.

- Ya que pasan los 20 minutos en el baño maría lo enfriamos durante 5 minutos.

-
-
-
-
-
-
- Cernimos para separar lo solido de lo liquido lo cual se hace en un soporte universal,
colocamos un aro de metal y sobre el un embudo con su respectivo filtro en el cual
extraemos la muestra y medidos el volumen:
VF= 48ml.

- De los 48ml de filtrado de la muestra tomamos 5ml en un tubo de ensayo y adicionamos


de NaOH 0,6N hidróxido de sodio y agitamos por 15 segundos.

- El siguiente paso es rotular 3 tubos de ensayo y adicionar en cada uno las siguientes
proporciones que indica la tabla.
- Después de adicionar a cada tubo las proporciones indicada en la tabla, a cada tubo lo agitamos
durante 20 segundos.
- Llevamos los tres tubos de ensayo rotulados a baño maria a una temperatura de 90°C durante
10m.
- Pasados los 10 minutos en el baño maria los sacamos los tubos de ensayo los agitamos por 10
segundo y enfriamos para hacer el siguiente paso.

- El último paso es leer la absorbancia de los tres tubos


donde se lleva cada tubo al equipo
espectrofotómetro donde :

Y obtenemos los siguientes resultados:


Blanco (B)= 485mn

Estándar (S) = 1.342

Muestra (M) = 2.339

CALCULOS
Para calcular el contenido de CNE (%) se debe Hallar el factor de dilución (Fd) y luego aplicar la siguiente
ecuación.

Donde;
Am = Absorbancia de la solución muestra
Ast = Absorbancia de la solución Estándar
Fd = Factor de dilución
Vf = Volumen del filtrado de muestra
Wm = Peso de Muestra

Absorcion muestra:2.339
absorcion estandar: 1.342

Primero que todo encontramos Fd con la siguiente formula

5 ml
∗25
2 ml
∗100
48 ml
Fd= =65.104
2 G 7 ML

2.339
%CNE= ∗0.01∗65.104=1.134
1.342

El contenido de CNE= 1.134 %

Conclusión

Se concluye que al aplicar estas técnicas analíticas instrumentales se determina el análisis de


presencia de ureasa y de ion amonio al presentar color verdoso en las muestras y cuantificar la
concentración de estos valores.
Bibliografía:

Cuervo W. (2016). Carbohidratos Estructurales (C.E) No Estructurales (C.N.E). Recuperado


de https://repository.unad.edu.co/handle/10596/10841

Universidad de Navarra (2008). Principios generales de metabolismo, respiración y


fermentación. Recuperado de https://www.academia.edu/24413897/Tema_4.-
Principios_generales_de_metabolismo_respiraci%C3%B3n_y_fermentaci%C3%B3n

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