BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR.

1. ¿QUÉ SON LOS CORONAVIRUS?

Los coronavirus son una extensa familia de virus que se descubrió en la década de los 60
pero cuyo origen es todavía desconocido pueden causar enfermedades tanto en animales
como en humanos. Sus diferentes tipos provocan distintas enfermedades, que pueden ir
desde el resfriado común hasta enfermedades más graves como el síndrome
respiratorio de Oriente Medio (MERS) y el síndrome respiratorio agudo severo (SRAS),
se pueden adquirir en cualquier época del año, aunque son más frecuentes en otoño o
invierno. Gran parte de los coronavirus no son peligrosos y se pueden tratar de forma eficaz
de hecho, la mayoría de las personas contraen en algún momento de su vida un coronavirus,
generalmente durante su infancia. El coronavirus debe su nombre al aspecto que presenta, ya
que es muy parecido a una corona o un halo. Muchos de ellos infectan a los animales, pero
algunos coronavirus en animales pueden evolucionar (cambiar) e infectar humanos,
contagiándose de persona a persona.
Los coronavirus (CoV) constituyen un amplio grupo de virus que se encuadran
taxonómicamente en la subfamilia Coronavirinae dentro de la familia Coronavirinae; se
designan bajo el término coronavirus todas las especies pertenecientes a los géneros:
Alphacoronavirus, Betacoronavirus, Gammacoronavirus, Deltacoronavirus.
Se trata de virus cuyo genoma está formado por una única cadena de ARN con polaridad
positiva y de aproximadamente 30.000 pares de bases, que presentan una capucha
metilada en el extremo 5' y una cola poliadenilada en el extremo 3', dándole un gran
parecido al ARN mensajero del hospedador. Los coronavirus son virus zoonóticos,
pueden transmitirse entre animales y humanos. En líneas generales, se acepta que los
alfacoronavirus y los betacoronavirus son capaces de infectar a mamíferos, mientras que
los gammacoronavirus y los deltacoronavirus pueden infectar a pájaros (aunque algunos
de ellos también a mamíferos). Así, se ha descrito que muchos coronavirus pueden usar
a los mamíferos como reservorios u hospedadores intermediarios, destacando entre
ellos los murciélagos, en los que se facilita la recombinación y los eventos mutagénicos
conducentes a una mayor diversidad genética de los virus, hasta ahora, solo se
conocían 6 especies de coronavirus que podían infectar a humanos (HCoV) y causar
enfermedades respiratorias: HCoV-229E, HCoV-NL63 ( alfacoronavirus ), HCoV-OC43
y HKU1 (betacoronavirus) provocan infecciones leves del tracto respiratorio superior;
solo en casos raros pueden provocar infecciones graves en población pediátrica y
adultos de edad avanzada.
Según las investigaciones detalladas sobre los mismos concluyeron que el SARS-CoV
se transmitió por primera vez a humanos desde una especie de gato oriunda del sudeste
asiático y el MERS-CoV desde dromedarios. Esto es lo que sucedió con el nuevo
coronavirus actual conocido como SARS-CoV2, el cual causa la enfermedad del COVID-
19 las enfermedades por coronavirus en personas típicamente ocasionan una
enfermedad los síntomas aparecen entre dos y catorce días en casos graves se
caracteriza por producir neumonía, síndrome de dificultad respiratoria aguda, que
conduce a los infectados a la muerte.

2. ¿DÓNDE SE ORIGINO LA EPIDEMIA Y QUE MEDIDAS ADAPTARON PARA

PREVENIRLA?

El coronavirus humano más conocido era el SARS-CoV, que infecta el tracto respiratorio
tanto en su parte superior como inferior y fue identificado por primera vez a finales de
febrero del 2003, tras el brote del Síndrome Respiratorio Agudo y Severo (SARS)1, que
había comenzado el año 2002 en Asia. Provocó un brote en el que más de 8.000
personas se infectaron, entre el 20-30% de pacientes requirieron ventilación mecánica y
tuvo una mortalidad cercana al 10% (personas ancianas y con comorbilidades),
motivando que la Organización Mundial de la Salud (OMS) emitiera una alerta sanitaria
global. La enfermedad se propagó a más de dos docenas de países en Norteamérica,
América del Sur, Europa y Asia antes de que se pudiera contener el brote; desde el año
2004, no ha habido ningún caso conocido.

Posteriormente, en septiembre de 2012, se identificó en Arabia Saudí un nuevo tipo de

coronavirus que fue a la postre bautizado como coronavirus del Síndrome Respiratorio
de Oriente Medio (MERS)2 y que motivó la emisión de otra alerta sanitaria mundial por
parte de la OMS. Parecía que el virus MERS no se transmitía fácilmente de persona a
persona, y la mayoría de personas infectadas (con origen zoonótico) no transmiten el
virus; sin embargo, se reportaron algunos casos de transmisión entre humanos en
Francia o Túnez, a mediados de 2014, se reportaron 2 casos de infección por este virus
en EE.UU. (en profesionales de la salud que habían estado en Arabia Saudí y volvieron
a América) y a mediados de 2015, también se registró un brote importante en Corea del
Sur (uno de los mayores fuera de Oriente Medio).

El 31 de diciembre del 2019, la Comisión Municipal de Salud y Sanidad de Wuhan

(provincia de Hubei, China) informó sobre un grupo de 27 casos de neumonía de
etiología desconocida, con una exposición común a un mercado mayorista de marisco,
pescado y animales vivos en la ciudad de Wuhan, incluyendo siete casos graves. El
inicio de los síntomas del primer caso fue el 8 de diciembre del 2019. El 7 de enero del
2020, las autoridades chinas identificaron como agente causante del brote un nuevo tipo
de virus de la familia Coronavirinae que posteriormente ha sido denominado SARS-CoV-
 2, cuya secuencia genética fue compartida por las autoridades chinas el 12 de enero del
2020. El día 11 de marzo, la OMS declaró la pandemia mundial.
¿CÓMO PUEDE PREVENIRSE LA INFECCIÓN POR CORONAVIRUS?

Puesto que aún no se dispone de tratamiento ni vacunas eficaces, la mejor estrategia

colectiva para hacer frente a la infección por coronavirus consiste en controlar la fuente
de infección y sobre todo, alcanzar un diagnóstico temprano que permita notificar los
casos, aislar a los pacientes (y sus contactos directos), aportar el tratamiento sintomático
y de soporte oportuno y publicar la información epidemiológica de manera que se evite,
en la medida de lo posible, un pánico sanitario innecesario en la sociedad.

A nivel individual, normas adecuadas de higiene, la ventilación de interiores y la

evitación de lugares donde haya acumulaciones de personas contribuirán a prevenir la
infección por SARS-CoV-2.
Evitar el contacto directo con personas que padezcan sintomatología de infecciones
respiratorias agudas (tos o estornudos), manteniendo con ellos una distancia prudencial
al menos 1 metro.
Lavarse las manos con frecuencia con agua y jabón o soluciones hidroalcohólicas,
especialmente después del contacto directo con personas enfermas o su entorno, antes
de comer y tras usar el baño, el trasporte público o tocar superficies sucias. Evitar
tocarse ojos, nariz y boca con las manos.
Las personas con síntomas de una infección respiratoria aguda deberían, por su parte,
mantener cierta distancia con los demás, cubrirse nariz y boca con pañuelos
desechables o ropa (con el codo flexionado) al estornudar o toser y lavarse las manos.
La población general sana no necesita utilizar mascarillas, las cuales solo están
recomendadas en situaciones muy concretas y para profesionales sanitarios en aquellas
situaciones en las que se considere necesario por el riesgo de contacto con aerosoles
contaminados.
3. ¿DE QUÉ FORMA SE PUEDE ADQUIRIR LA INFECCIÓN?
Se adquiere la infección coronavirus a través de las secreciones (gotitas que expulsa una
persona enferma al hablar, toser o estornudar) de personas infectadas, principalmente por
contacto directo con gotas respiratorias de más de 5 micras (capaces de transmitirse a
distancias de hasta 2 metros) y las manos o los fómites contaminados con estas
secreciones seguido del contacto con la mucosa de la boca, nariz u ojos. El SARS-CoV-
2 se ha detectado en secreciones nasofaríngea, incluyendo la saliva en superficies de
cobre, cartón, acero inoxidable y plástico ha sido de 4, 24, 48 y 72 horas,
respectivamente cuando se mantiene a 21-23 ºC y con 40% de humedad relativa.
Además, se ha observado que los infectados asintomáticos, o bien aquellos que todavía no
han desarrollado síntomas, pueden transmitir el virus, por eso conocer cómo se transmiten
es fundamental para establecer medidas de prevención.

IMAGEN DEL CORONAVIRUS MERS-COV, OBTENIDA

MEDIANTE MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA.

LUSTRACIÓN REALIZADA POR LOS CENTROS PARA EL CONTROL Y PREVENCIÓN

DE ENFERMEDADES (CDC) DE ESTADOS UNIDOS QUE MUESTRA LA MORFOLOGÍA
CARACTERÍSTICA DE LOS CORONAVIRUS
 HISTORIA PCR
La PCR, siglas en inglés de ‘Reacción en Cadena de la Polimerasa’, Origen de la
técnica de PCR surgió en 1971, cuando Gobind Khorana describe la técnica al explicar
la replicación de un fragmento de ADN usando dos iniciadores. Pero fue en 1983
cuando Kary Mullis y sus compañeros de la compañía californiana Cetus Corporation la
llevaron a cabo por primera vez mientras trabajaban en la fabricación de
oligonucleótidos y en el uso de iniciadores para la secuenciación de ADN. Mullis y
colaboradores usaron dos iniciadores que se alineaban con cada una de las hebras del
ADN, adicionaron ADN polimerasa I de Escherichia coli y nucleótidos trifosfatados.
Como resultado obtuvieron la replicación exponencial del fragmento de ADN
flanqueado por los iniciadores. La gran utilidad de esta técnica se difundió a principios
de los ochenta por toda la comunidad científica, Kari Mullis y Michael Smith en
1993 recibieron el Premio Nobel de Medicina.
4. ¿CÓMO SE REALIZA LA TECNICA DEL PCR?
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio común
utilizada para hacer muchas copias (millones o miles de millones) de una región
particular de ADN. Esta región de ADN puede ser cualquier cosa que le interese al
experimentador. La PCR, es una prueba que permite detectar un fragmento del
material genético de un patógeno o microorganismo para el diagnóstico de una
enfermedad. Por ejemplo, podría ser un gen cuya función quiere entender un
investigador o un marcador genético usado por científicos forenses para relacionar el
ADN de la escena del crimen con los sospechosos. Durante las últimas semanas, esta
prueba se ha estado usando para referenciar positivos en la pandemia del coronavirus
Covid-19.
Por lo general, el objetivo de la PCR es producir suficiente ADN de la región blanco
para que pueda analizarse o usarse de alguna otra manera, el ADN amplificado por
PCR se puede secuenciar, visualizar por electroforesis en gel o clonar en un plásmido
para otros experimentos.
LOS PASOS PARA REALIZAR LA TÉCNICA DEL PCR.
Los ingredientes clave para una reacción de PCR son Taq polimerasa, cebadores, ADN
molde y nucleótidos (los bloques básicos del ADN). Los ingredientes se colocan en un
tubo, junto con los cofactores que necesite la enzima, y se someten a ciclos repetidos
de calentamiento y enfriamiento que permiten la síntesis del ADN.
A. DESNATURALIZACIÓN. - En esta etapa, las cadenas de ADN son calentadas y
separadas a una temperatura de 95 °C durante 20-30 segundos; el tiempo depende
de la secuencia del templado, es decir, si la cantidad de G-C es alta, será necesario
más tiempo para romper sus uniones debido a que el apareamiento de estas bases
está formado por tres enlaces, uno más que las bases de A-T. Además, depende de
la velocidad en la que el termociclador aumenta la temperatura, esto varía de
acuerdo al modelo del equipo. Al final de esta etapa tendremos las cadenas
separadas que servirán como templado para el siguiente paso.

B. ALINEAMIENTO O UNIÓN DEL CEBADOR.- A continuación se producirá

la hibridación del cebador, es decir, el cebador se unirá a su secuencia
complementaria en el ADN molde. En esta etapa, los primeros se alinean al extremo
3’ del templado previamente separado e hibridan con su secuencia complementaria.
Para ello es necesario bajar la temperatura a 40-68 °C durante 20-40 segundos
(según el caso), permitiendo así el alineamiento. Los puentes de hidrógeno estables
entre las cadenas de ADN (unión ADN-ADN) solo se forman cuando la secuencia del
cebador es muy similar a la secuencia del ADN molde. La polimerasa une el híbrido
de la cadena molde y el cebador, y empieza a sintetizar ADN. Los cebadores
actuarán como límites de la región de la molécula que va a ser amplificada.

C. EXTENSIÓN O ELONGACIÓN DE LA CADENA. - Actúa la polimerasa, tomando el

ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como
soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN. La polimerasa sintetiza una
nueva hebra de ADN complementaria a la hebra molde añadiendo los dNTP
complementarios en dirección 5'→ 3', uniendo el grupo 5'-fosfato de los dNTP con el
grupo 3'-hidroxilo del final de la hebra de ADN creciente (la cual se extiende). La
temperatura para este paso depende del ADN polimerasa que usemos. Para la
polimerasa Taq, la temperatura de máxima actividad está en 75-80 °C (comúnmente
72 °C). El tiempo de extensión depende tanto del ADN polimerasa usada como de la
 longitud del fragmento de ADN que se va a amplificar. Hay una regla comúnmente
usada: en su temperatura óptima, la polimerasa de ADN polimerizará mil bases en
un minuto.
D. ELONGACIÓN FINAL. - Etapa única que se lleva a cabo a una temperatura de 70-
74 °C durante 5-15 minutos tras el último ciclo de PCR. Con ella se asegura que
cualquier ADN de cadena simple restante sea totalmente ampliado.
5.- ¿EN QUÉ INSTITUCIONES DE NUESTRO PAIS SE REALIZA EL PCR?
Las instituciones que se realizan el PCR y están validadas por el gobierno cumpliendo los
protocolos de salud son:
- INSTITUTO NACIONAL DE SALUD (INS) – LIMA - COVID-19
- MINSA (HOSPITAL NACIONAL DOS DE MAYO) - LIMA - COVID-19
- SENASA SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD AGRARIA - LIMA.
- UNIDAD DE EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR (UEM) - LIMA
- INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL ALEXANDER VON HUMBOLDT
(IMTAVH) – LIMA.
- UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA (UPCH) - LIMA.
- UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN MARCOS - LIMA.
- CENTRO INTERNACIONAL DEL PAPA - LIMA.
- UNIVERSIDA NACIONAL SAN MARTIN DE PORRES - LIMA.
- UNIVERSIDA NACIONAL DE CIENCIAS APLICADAS - LIMA.
- UNIVERSIDAD CIENTIIFCA DEL SUR - LIMA.
- UNIVERSIDAD DE INGENIERIA Y TECNOLOGIA - LIMA.
- UNIVERSIDA NACIONAL DE TUMBES.
- INCABIOTEC/VISION BIOTEC – TUMBES.
- UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA - AMAZONAS.
- UNIVERSIDAD NACIONAL DE AMAZONIA PERUANA - LORETO.
- UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL PERU – LORETO.
- INSTITUTO DE INVESTIGACIONES DE LA AMAZONIA PERUANA (IIAP) –
LORETO.
- UNIVERSIDA NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA – AMAZONAS.
- UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUMBES.
- UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL PERU – LORETO.
- HOSPITAL REGIONAL DE PIURA.
- HOSPITAL REGIONAL DE LAMBAYEQUE.
- HOSPITAL REGIONAL LA LIBERTAD.
- HOSPITAL REGIONAL DE SAN MARTIN.
- HOSPITAL REGIONAL DEL CUSCO
- HOSPITAL REGIONAL DE JAEN.
- HOSPITAL REGIONAL DE CUSCO
- UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO DE ABAD - TRUJILLO.
- UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
- UNIVERSIDA PRIVADA UPAO – TRUJILLO.
- UNIVERSIDAD NACIONAL SANTIAGO ANTÚNEZ DE MAYOLO – ANCASH.
- UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA.
- UNIVERSIDA NACIONAL DE HUAMANGA AYACUCHO.
- UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN DE AREQUIPA.
- LABORATORIOS ROE (CONFIEP) - LIMA - COVID-19.
- LABORATORIOS UNILABS (CONFIEP) – LIMA - COVID-19.
- CLINICA AMERICA ECONOMIA CLUSTER SALUD – LIMA.

Son algunas Instituciones referenciales donde se practican las pruebas de

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a nivel nacional, además
tenemos algunas clínicas y laboratorios.
 6. ¿EL PCR AYUDA EN EL DIAGNOSTICO DE QUE ENFERMEDADES?
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es de gran ayuda para el desarrollo de
diversos sistemas de diagnóstico genético basados en la formación de un híbrido de
ADN entre el ácido nucleico de un organismo con una sonda de ADN específica los
métodos basados en este principio, la técnica de la Reacción en Cadena de la
Polimerasa (PCR) es sin duda el más utilizado. La técnica de PCR permite amplificar
de manera selectiva fragmentos del ADN de un determinado microorganismo, situados
entre dos regiones cuyas secuencias son conocidas, ha pasado a ser complementada
con la aplicación de métodos moleculares de diagnóstico.
Las PCR se utilizan cada día en miles de laboratorios de todo el mundo para
determinar paternidades, identificar cadáveres y detectar enfermedades; en este caso,
para diagnosticar la infección por SARS-CoV-2, el virus que causa el COVID-19.
Algunas de ellas que a través del PCR, se han logrado encontrar como:
 INFECCIONES BACTERIANAS, como la sepsis, un problema grave que a veces
pone en peligro la vida.
 UNA INFECCIÓN POR HONGOS.

 ENFERMEDAD INTESTINAL INFLAMATORIA, que causa hinchazón y sangrado

en los intestinos.
 UNA TRASTORNO AUTOINMUNE, como lupus o artritis reumatoide

 UNA INFECCIÓN DEL HUESO LLAMADA OSTEOMIELITIS.

 ESCHERICHIA COLI, pueden afectar al tracto gastrointestinal (este
microorganismo es una de las causas principales de brotes de diarrea, colitis
hemorrágica y síndrome hemolítico-urémico), meningitis, septicemia o infecciones
del tracto urinario.

 ENDOCARDITIS, bacteriemia e infecciones del tracto urinario.

 STAPHYLOCOCCUS, infecciones del tracto urinario en mujeres jóvenes

sexualmente activas.

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