Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas

Escuela de Biología
AISLAMIENTO DE GLUCOGENO
Arauz Anyeliz, Brown Yaney, Candanedo Juan, Salazar Lorena

I. Resumen

Con el objetivo de extraer glucógeno de una muestra de hígado se procedió a

extraer el mismo mediante un tratamiento con KOH más calor, con este
tratamiento, las proteínas y lípidos complejos son hidrolizados, pero no el
glucógeno. Posteriormente, cuando se adiciona etanol, el glucógeno se hace
insoluble y los otros compuestos permanecen en solución. El glucógeno insoluble
es luego separado por centrifugación y determinado como glucosa, sin previa
hidrólisis. Se ha demostrado que en tejidos con alto contenido de glucógeno como
hígado, este polisacárido puede ser determinado en presencia de proteínas y sin
hidrólisis. Esto representa una ventaja sobre otros métodos en los cuales hay que
precipitar el glucógeno y someterlo a un proceso de hidrólisis larga.
enlace α (1-4) y ramificaciones α (1-6)
El glucógeno actúa como regulador
II. Objetivos de la glucosa sanguínea,
 Extraer el glucógeno presente almacenándola como glucógeno
en una mezcla de hígado de durante una buena alimentación
pollo. (gluconeogénesis) y liberándola por
fosforolisis (glucogenolisis) durante el
 Caracterizar mediante pruebas ayuno, ya que en esta situación no
químicas el glucógeno extraído hay absorción intestinal. La duración
III. Marco Teórico del glucógeno hepático en ayunas es
de aproximadamente 24h. A partir de
El glucógeno consta de cadena de ese momento, la concentración en
glucosa unidas por enlaces sangre se mantiene por síntesis de
glicosidicos α (1-4) y ramificaciones, glucosa a partir de sustancias
cada 8 o 10 unidades, de glucosa distintas de carbohidratos
mediante enlace glicosidicos α (1-6). (gluconeogénesis). En estos
El glucógeno es la forma de mecanismos de control, actúan la
almacenamiento de la glucosa en los adrenalina y el cortisol. (L. Díaz 2002)
tejidos animales. Se encuentra
El glucógeno se libera de los tejidos
principalmente en el hígado y en el
que lo contienen por calentamiento
musculo representado hasta un 10%
con una base fuerte (KOH) hasta la
y un 1-2% de su peso húmedo,
destrucción total del tejido. La
respectivamente. Está formado por
unidades de glucosa unidas por
separación del glucógeno del tejido
se
Reactivos Toxicidad
consigue mediante la adición de
etanol (Precipita polisacáridos y
KOH al Hidróxido de potasio: DL50 365 mg/kg en
elimina monosacáridos solubles) y 50% rata. La
sulfato de sodio (Precipitante). Así se gravedad del daño al tejido depende de
la concentración del producto, la
produce un precipitado que contiene prolongación del
una mezcla de glucógeno, proteínas, contacto con el tejido y el estado del
tejido local. Después de la exposición
ácidos nucleicos, que han resistido el puede pasar un
calentamiento anterior. El tratamiento tiempo antes de que aparezca la
posterior con ácido hace que irritación u otros efectos. Este material es
un fuerte
precipiten proteínas y ácidos irritante y es corrosivo para la piel, ojos y
nucleicos de la muestra. El glucógeno membranas mucosas.
Etanol al Inhalación: Los efectos no son serios
aislado se vuelve a precipitar con 95% siempre que se use de manera
etanol, obteniéndose una preparación razonable. Una inhalación
prolongada de concentraciones altas
con un alto grado de pureza. El (mayores de 5000 ppm) produce
tratamiento que contiene (H2SO4) es irritación de ojos y tracto
un método rápido para la respiratorio superior, náuseas, vómito.
Contacto con ojos: Se presenta irritación
determinación de las hexosas y a lo solo en concentraciones mayores a 5000
pentosas constituyentes de un a 10000
ppm. Contacto con la piel: El líquido
polisacárido. (M. Rouse 2005) puede afectar la piel, produciendo
dermatitis caracterizada por
Mediante este método, el glucógeno resequedad y agrietamiento.
es hidrolizado por un ácido H2SO4 Ingestión: Dosis grandes provocan
envenenamiento alcohólico, mientras
hasta sus unidades elementales que su ingestión constante, alcoholismo.
(Monosacáridos), que pueden ser Reactivo Provoca mareos, náuseas, Dolor
de Molish abdominal, anemia hemolítica, Diarrea.
luego deshidratadas dando furfural, la Al ser ingerido y al contacto con la piel
prueba da positiva cuando se forma provoca peladuras.
un anillo de color violeta.
IV. Materiales y Reactivos
V. Fase Experimental
Descripción Cant. Capacidad
Matraz 1 250 mL y
Erlenmeyer 500 mL.
Probetas 1 de 25 mL,
50 mL, 100
mL.
Baño María. 1
Centrifugadora 1
.
Vasos 2 50ml
químicos.
Tubos de 2 10ml
centrifuga
 Calentamos en centrifugación,
un esto ocasiono que no se
Se corto en trozos
erlemeyer 36ml pudiera
de KOH hacer la prueba de Molish para
pequeños los 50 g de
higado de pollo observar la presencia de glucógeno.
al 50% y adicione
inmediatamente los
previamente pesados
A continuación una imagen de lo que se
trozos de higado.
debió observar.
Pasados 40 min
Luego se caleno en baño adicionas 30 ml de agua
maria por 40 min y 70 ml de alcohol y
agitandolo agitamos, y se dejo
reposar por 10 min.

Adcionamos la mezlca
en tubos de centrifuga
para pasar a 5 min de
centrifugacion y Realizar
la Prueba de Molish

VI. Resultados y Discusiones

Fig 1. La
mezcla luego
de los 40
minutos de
centrifugación y
los 10 minutos
de reposo.

Fig 2. Tubos
luego de pasar
por 5 minutos
de
centrifugación

Nota: En los resultados presentados no se

observó el precipitado luego de pasar a
 solubles en medio alcalinos. El
Fig 3. Prueba de posterior se realiza con el
tratamiento
Molishreactivo
da positivode Molish dando positivo
para glucógeno
por la formación pues toda muestra en
presencia
de un anillo rojo- de carbohidratos a la cual
violáceo queagrega el reactivo de Molish, da
se le
positivo (violeta). Como se observa
indica la
en nuestros
presencia de resultados no se pudo
realizar la prueba de Molish por
glucógeno.
que no se formó el precipitado
luego de ser centrifugado, lo que
pudo ocasionar que no se formara
VII. Discusión el precipitado fue que se pesó en
vez de 50g fueron 18g que era la
Para aislar el glucógeno del tejido cantidad de hígado que se trajo,
animal se utilizó hígado de pollo. El además se agregó 30 ml de agua y
hígado como ya se mencionó 70ml de alcohol que estaba
contiene un mayor porcentaje de estipulado para un floculado de
glucógeno de reserva. El glucógeno 50g de hígado. Talvez si se hubiera
se libera de los tejidos que lo añadido menos agua y alcohol se
contienen por calentamiento con una podía obtener un mejor resultado.
base fuerte (KOH) hasta la
destrucción total del tejido, esto se
logra colocándolo en baño María VIII. Conclusión
hirviente durante 45 minutos. El
hidróxido de potasio al calentarse en Se realizó el aislamiento del glucógeno a
agua hirviendo alcaliniza el medio ya partir del hígado de pollo, este es un
que es una base fuerte. El glucógeno proceso de homogenización del tejido y
es estable en este medio en ruptura celular, así como de extracción y
comparación a los demás la eliminación de las proteínas. El
componentes que se hidrolizan. La glucógeno puede separarse de los
separación del glucógeno del tejido monosacáridos y otros compuestos
se consigue mediante la adición de hidrosolubles por precipitación con el
etanol (precipita polisacáridos y etanol.
elimina los monosacáridos solubles).
Así, se produce un precipitado que El glucógeno se libera de los tejidos
contiene una mezcla de glucógeno, mediante el calentamiento con una base
proteínas y ácidos nucleicos, que han fuerte (KOH) hasta la destrucción total del
resistido el calentamiento anterior. Se tejido. Es importante saber que Una sola
procedió a centrifugar por 5 minutos molécula de glucógeno puede contener
para precipitar el tejido fibroso no más de 120.000 moléculas de glucosa.
digerido y dejar en el sobrenadante el
glucógeno más las proteínas solubles El reactivo de Molish da positivo en
en medio alcalinas. Aún no se tiene presencia de carbohidratos presentando
glucógeno concentrado, así que se una coloración violeta esto demuestra la
procede a extraer cuidadosamente el presencia de glucógeno.
sobrenadante que contiene
polisacáridos, monosacáridos La importancia de que el glucógeno sea
una molécula tan ramificada es debido a
 que su ramificación aumenta su
solubilidad y a que la ramificación permite
la abundancia de residuos de glucosa,
que al estar unidos entre si no poseen
extremos reductores libres, que van a ser
los lugares de unión de las enzimas
glucógeno fosforilasa y glucógeno
sintetiza, es decir, las ramificaciones
facilitan tanto la velocidad de síntesis
como la de degradación del glucógeno.

IX. Bibliografía
• L. Díaz. Identificación de
carbohidratos. Universidad de
colorado.2002
• R. Rouse. Polisacáridos.
Universidad de Colorado.2005
• Lehninger. Principios de
Bioquímica. 3ª ed. Nelson D. y Cox,
M. Editorial Omega (2002). 1 vol.
• Adams, Johnson and wilcon
(1979). Laboratory experiment and
organic chemistry 7º ed Chicago