CLASIFICACIÓN DE LAS

TÉCNICAS
CROMATOGRÁFICAS
 Por la naturaleza de sus fases:

• Cromatografía líquido - líquido

• Cromatografía gas - líquido

• Cromatografía líquido -sólido

• Cromatografía gas - sólido

Con base en la naturaleza del soporte en el que
se aloja la fase estacionaria

Cromatografía plana:
• Cromatografía en papel
• Cromatografía en capa fina (TLC)

Cromatografía en columna:
• Cromatografía de gases (GC)
• Cromatografía líquida (LC)
- cromatografía líquido – líquido
- cromatografía sólido – líquido
 HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

Se basa en los mismos principios que la cromatografía a baja

presión. Tiene mejor resolución, tiempos menores, mejor
reproducibilidad.

El material empacado en las columnas está formado por

pequeñas partículas de tamaño muy uniforme y gran rigidez

Permite trabajar con flujos altos para lo que se requiere

aplicar presión
Atendiendo al proceso químico-físico que va a
protagonizar el proceso de separación:

• Cromatografía de Adsorción (líquido - sólido o

cromatografía de fases normal).

• Cromatografía de Reparto (o líquido - líquido)

• Cromatografía de Intercambio iónico.

• Cromatografía de Exclusión
 MECANISMOS GENERALES DE SEPARACIÓN

a) Separación por Adsorción: Diferente afinidad de

los componentes de la muestra sobre la superficie
de un solido activo (componentes con polaridad
baja o media)

b) Separación por Reparto: Diferente solubilidad

en fases estacionaria y móvil (Componentes con
polaridad media o alta)

Coeficiente de Reparto= Kd=

[A] Fase móvil / [A] Fase estacionaria

c)Separación por Tamaño Molecular
(Exclusión):

Las moléculas pequeñas

penetran en los poros de las
partículas de gel, por lo que
necesitan mas tiempo para salir
al final de la columna. Las
moléculas grandes, en cambio,
al no penetrar en las partículas
de gel se mueven con el
disolvente a una velocidad de
elución y salen antes de la
columna
d) Separación por Intercambio Iónico: La separación
se basa principalmente en la diferente afinidad para el intercambio de
iones de los componentes de muestra

Las especies cargadas

negativamente se unen
a la matriz solida
cargada positivamente y
son retenidas, mientras
que las especies
positivas son
rechazadas. De esta
manera en función de la
carga las especies se
eluyen a distintos
tiempos dando a la
correspondiente
separación
Clasificación con base en el tipo de interacción

a) Cromatografía de fase normal (NP)

b) Cromatografía de fase reversa (RP)

c) Cromatografía de Interacción hidrofóbica (HIC)

d) Cromatografía de Afinidad

e) Cromatografía Líquida de Interacción

Hidrofílica (HILIC)
Técnicas basadas en dipolos (polaridad):

a) Cromatografía de fase normal (NP)

fase estacionaria: polar Analito
fase móvil: apolar polar

b) Cromatografía de fase reversa (RP)

fase estacionaria: apolar
Analito
fase móvil: polar (moderada) apolar
Técnica basada en hidrofobicidad

c) Cromatografía de Interacción hidrofóbica

(HIC)

fase estacionaria: cadenas alifáticas de 2 a 10

carbonos u otros grupos
hidrofóbicos

fase móvil: alta concentración de sales

((NH4)2SO4 2 M – 4 M)

Para la elución se disminuye la concentración de

sales en la fase móvil
 Técnica basada en interacciones biológicas
específicas

d) Cromatografía de Afinidad

Ejemplos de interacciones:
Enzima-sustrato
Anticuerpo-antígeno
Enzima-coenzima
Proteína-ligando específico

La elución se puede lograr agregando el ligando (el que

está unido a la columna) a la fase móvil o mediante
cambios en la misma que sean capaces de debilitar la
interacción
Técnica basada en hidrofilicidad

e) Cromatografía Líquida de Interacción

hidrofílica (HILIC)

fase estacionaria: altamente polar

fase móvil: mezcla de un solvente orgánico con

agua

Para la elución se aumenta el contenido de agua

en la fase móvil