UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA 

DE MÉXICO 
  
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES 
CUAUTITLÁN C-1 
  
Carrera: Química industrial 
  
Asignatura: Química Analítica IV 2601 AB 
  
  
Reporte práctica 8 
CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE 
ALTA RESOLUCIÓN DETERMINACIÓN DE 
SUSTANCIAS QUE ACTÚAN COMO 
FILTROS UV EN CREMA CORPORAL 
 
EQUIPO 2 
 
· Aguirre Vega Alina María 
· Espinoza García Xochitl Anaid   
· González Jiménez Nelly  
· Torres Salazar Mariane Jahel  
 
 
FECHA: 8, Mayo 2019.  
 
OBJETIVOS  
•Conocer  los  componentes  básicos  del  cromatógrafo  de  líquidos  de  alta 
resolución, así como su manejo y cuidados necesarios.  
•Seleccionar  las  condiciones  instrumentales  óptimas  para  la  separación  y 
cuantificación de los analitos oxibenzona, octocrileno y avobenzona.  
•Aplicar  los  conocimientos  teóricos  adquiridos  para  efectuar 
adecuadamente  la  cuantificación  de  los  analitos  mediante  el  método  del 
estándar interno. 
 
INTRODUCCIÓN 
En  una  primera  etapa  la cromatografía de líquidos se realizaba en columnas 
de vidrio con diámetros de 1 a 5 cm y longitudes de 50 a 500 cm. En este tipo 
de  columnas  realizó  Tswett  sus  trabajos  originales.  Para  asegurar  unos 
caudales  razonables,  el  diámetro  de  las  partículas  de  la  fase  estacionaria 
sólida  por  lo  general  era  de  150  a  200  µm.  Incluso  así,  los  caudales  eran 
bajos,  llegando  a  unas  pocas  décimas  de  mililitro  por  minuto.  En 
consecuencia,  los  tiempos  de  separación  eran  largos  -a  menudo  de  varias 
horas-.  Los  intentos  para  acelerar  el  procedimiento  clásico  mediante  la 
aplicación  de  vacío,  o  por  bombeo  no  resultaron  efectivos,  puesto  que  el 
aumento  de  caudal  origina  un  aumento  de  la  altura  de  plato  por  encima 
del mínimo característico que se observa en las gráficas de la altura de plato 
frente al caudal y el resultado era una menor eficacia.  
 
Esta  tecnología  requiere  una  instrumentación  sofisticada,  que  contrasta con 
las  simples  columnas  de  vidrio  de  la  cromatografía  de  líquidos  clásica.  Para 
distinguir  estos  procedimientos  más  nuevos  de  los  métodos  básicos,  que 
todavía  se  utilizan  con  fines  preparativos,  se  emplea  la  denominación  de 
cromatografía  de  líquidos  de alta resolución (HPLC). Es incuestionable que la 
cromatografía  de  líquidos  de  alta  resolución  es  la  técnica  de  separación 
más  ampliamente  utilizada,  con  unas  ventas  anuales  de  equipos  de  HPLC 
que  se  aproximan  a  la  cifra  de  cientos  de  miles  de  millones  de  pesetas.  Las 
razones  de  la  popularidad  de  esta  técnica  son  su  sensibilidad,  su  fácil 
adaptación  a  las  determinaciones  cuantitativas  exactas,  su  idoneidad  para 
la  separación  de  especies  no  volátiles  o  termolábiles  y,  sobre  todo,  su  gran 
aplicabilidad  a  sustancias  que  son  de  primordial  interés  en  la  industria,  en 
muchos  campos  de  la  ciencia  y  para  la  sociedad  en  general.  Algunos 
ejemplos  de  estos  materiales  incluyen  los  aminoácidos,  proteínas,  ácidos 
nucleicos,  hidrocarburos,  carbohidratos,  drogas,  terpenoides,  plaguicidas, 
antibióticos  esteroides,  especies  organometálicas  y  una  cierta  variedad  de 
sustancias inorgánicas.  
METODOLOGÍA EXPERIMENTAL  

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 RESULTADOS  
 
Disoluci Fase  Analito  tr(min Área  W1/2  N  Rs  Wb 
ón   Móvil  ) 

MF  100%  OX  1.838  245237  3.9   4429.69  -  0.11 

MeOH 
OC  2.074  182068  4.4  4435.26  2.0119  0.1246 

AV  2.677  109806  5.3  5091.96  4.3802  0.1501 

MF  95%  OX  2.123  142840  4.8  3901.48  -  0.136 

MeOH 
OC  2.874  100365  6.2  4288.27  4.8187  0.1757 

AV  3.965  63088  8.3  4553.56  5.3115  0.2351 

MF  90%  OX  2.499  252504  5.9  3580.43  -  0.1671 

MeOH 
OC  4.542  168818  10.2  3954.63  8.9585  0.289 

AV  6.584  101085  13.6  4961.85  6.0566  0.3853 

EI    4-MBC  3.977  426778  8.5  4370.13  -  0.2408 

Tabla 1. Optimización de la separación 
 
Disoluci Ana tr(min)  Área  W1/2  N  Rs  Wb  Fr 
ón  lito 

F + EI  OX  2.484  120975  5.7  3787.61   -  0.1615   

OC  4.516  86000  10.2  3909.48  9.02  0.289   

AV  6.476  219098  13.4  4672.12  5.8630  0.3796   

EI  3.961  213364  8.4  4434.69  -  0.238   

D2+ EI  OX  2.484  359240  5.8  3633.03  -  0.1643   

OC  4.532  550854  10.2  3997.23  9.03  0.289   

AV  6.515  755088  13.5  4644.87  5.9061  0.3825   

EI   3.975  180690  8.6  4262.76  -  0.2436   

Tabla 2. Análisis de la muestra por Factor respuesta (Fr) 
 
 
 
 
 
 
Análisis de resultados 
Los  protectores  solares  también  contienen  moléculas  con  carbono  que 
absorben  la  luz,  como  oxibenzona,  octinoxato,  octisalato  y  avobenzona.  ​El 
foto  estabilizador  más  común  es  el  octocrileno.  Éste  impide  que  el  filtro 
químico  se  degrade  y  llegue  a  penetrar  en  la  piel,  evitando  así  posibles 
intolerancias. 
Se  seleccionaron  las  condiciones  instrumentales  óptimas  para  la  separación 
y  cuantificación  de  los  analitos:  oxibenzona,  octocrileno  y  avobenzona  en 
un bloqueador Banana Boat FPS 30. 
La  técnica  de  HPLC  es  utilizada  normalmente  en  la  industria  para  la 
separación  de  componentes  en  una  mezcla,  para  aislar  compuestos 
deseados  en  extractos  naturales,  al  igual  que  la  identificación  y 
cuantificación  de  compuestos  desconocidos.  En  la  metodología  de  trabajo 
se implicó realizar los cromatogramas individuales para la mezcla de los filtros 
UV  (Oxibenzona,  Octocrileno,  Avobenzona)  y  el  Estándar  Interno  (4-MBC) 
con el fin de conocer los tiempos de retención, además de predecir el orden 
de elución de los compuestos que se estarán trabajando en adelante. 
El  número  de  platos  teóricos  (N)  es  la  capacidad  que  tiene  la  columna  de 
separar  los  analitos;  la  resolución  (Rs)  es  el  grado  de  separación  que  existe 
entre los picos cromatográficos. 
En  la  práctica  se  manejaron  diferentes  proporciones  de  nuestro  disolvente, 
con  la  finalidad  de  conocer  el  papel  fundamental  que  desempeña  la 
polaridad  de  este,  en  cada  una  de  las  lecturas  y  de  esta  forma  determinar 
las  condiciones  óptimas  tanto  de  presión  y  proporción  del  disolvente  lo cual 
se  ve  reflejado  en  la  resolución  de  los  picos  en  los  cromatogramas 
obtenidos. 
Analizando  los  datos  de  la  tabla  1  para  la  optimización  de  la  separación, 
consideramos  que  la  cantidad  óptima  de  MeOH  a  utilizar  es  el  90%,  ya  que 
contiene  un  mayor  número  de  platos teóricos, mientras que la resolución fue 
determinada  por  el  grado  de  separación  entre  2  picos  adyacentes  (Rs), 
estos datos, N y Rs, definen la eficiencia del proceso. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tabla. Estructura de los analitos. 
 
Analito  Estructura  log P 

Oxibenzona  3.79 

Octocrileno  6.1 

Avobenzona  4.51 

 
 
Según  la  tabla  anterior  y  al  haber  utilizado  una  columna  no  polar,  al 
aumentar  el  valor  de  log  P  también  aumenta  el  tiempo  de  retención  en  la 
columna.  El  primer  analito  en  eluirse  fue  la  oxibenzona  al  tener  un  log  P  de 
3.79  lo  que  demuestra  que  es  el  analito  más polar, siguiendo esta tendencia 
se  esperaría  que  el  segundo  analito  en  eluirse  fuera  la  Avobenzona,  sin 
embargo  el  octocrileno  que  es  el  analito mas no polar y tiene el valor de log 
P  más  alto  ocupa el segundo lugar, esto de debe al grupo que se encuentra 
en  su  estructura  el  cual  está  polarizado  de  tal  forma  que  el  átomo  de 
carbono  es  el  extremo  positivo  del  dipolo  y  el  nitrógeno  el  negativo 
aumentando  la  polaridad  y  haciendo que la columna no logre retenerlo por 
mayor tiempo. 
 
Con  la  condición  cromatografía  seleccionada  como óptima (90% MeOH) se 
registran  tr,  área  de  los  picos  y  de  acuerdo  a  la  tabla  2  de  resultados  se 
calcula  el  Fr  para  cada  analito  presente  en  las  muestras​,  así  mismo  se 
calcula  el  contenido  de  cada  analito  en  la  muestra  original  de  cada 
muestra de crema. 
Para calcular el factor respuesta se hace uso de la siguiente ecuación: 
 
ASE
ASI
= F R (SE)
(SI)
 
 
(SE) = ​Ox, OC y AV 
(SI)=​EI 
Donde: 
(100ppm)(1ml)/10ml=10ppm 
 
(SE)=10 ppm  
 
(SI)= 10 ppm 
 
por lo tanto: 
 
ASE
ASI
= F R(1)  
 
Con las áreas obtenidas se calcula Fr: 
Disolución  Analito  FR 

F+EI  Ox  0.567 

F+EL  OC  0.4031 

F+EI  AV  1.027 

D2+EI  OX  1.988 

D2+EI  OC  3.048 

D2+EI  AV  4.179 

 
Comparando  los  datos  obtenidos  experimentalmente  con  los  datos 
reportados,  tenemos  que  la  concentración  de  oxibenzona  en  la  muesta  es 
de  17.53%,  para  avobenzona  es  de  20.34%  y  37.7%  para  octocrileno,  lo  cual 
indica  un  exceso  considerable  en  los  compuestos  de  protección  solar  de 
Banana Boat Ultra Defense. 
 
 
Aproblema(Ox,AV ,OC)
ASI
= F R 10[Ox]
ppm
 
 
Para concentración de Ox: 
359240
180690
= 0.567 10[Ox]
ppm
 
 
[Ox] = 35.06 ppm  
 
35.06 ppm ( 0.5ml
1 ml
) = 70.12 ppm ( 10ml
1ml
) = 701.2 mg/L  
 
1g
701.2 mg/L (0.025 L)=17.53 mg ( 1000mg ) = 0.01753 g de Ox  
 
0.01753 g de Ox
%p/p = 0.1 g muestra
x100 = 17.53%  
 
Para AV se sigue el mismo procedimiento: 
 
AV ]
755088
180690
= 1.027 10[ ppm  
 
[AV ] = 40.69 ppm  
 
40.69 ppm ( 0.5ml
1 ml
) = 81.38 ppm ( 10ml
1ml
) = 813.8 mg/L  
 
1g
813.8 mg/L (0.025 L)=20.345 mg ( 1000mg ) = 0.0203 g de AV  
 
0.0203 g de AV
%p/p = 0.1 g muestra
x100 = 20.34%  
 
Para OC:  
 
OC ]
550854
180690
= 0.4031 10[ ppm  
 
[OC ] = 75.63 ppm  
 
75.63 ppm ( 0.5ml
1 ml
) = 151.25 ppm ( 10ml
1ml
) = 1512.5 mg/L = 1.51 g/L 
 
1.51 g/L(0.025L)=0.0377 g de OC 
 
0.0377 g de OC
%p/p = 0.1 g muestra
x100 = 37.7%  
 

 
Por lo que el contenido de octocrileno, avobenzona y octocrileno es mayor. 
 
CONCLUSIÓN 
Se  logró  llevar  a  cabo  la  cuantificación  de  los  analitos  oxibenzona, 
octocrileno  y avobenzona que acatan como filtros UV presentes en muestras 
de  crema  corporal  mediante  el  método  del  estándar  interno.  Se  concluye 
que  mediante  una  selección de las condiciones instrumentales óptimas para 
la  separación  de  los  compuestos,  una  vez  elegida  la  mejor  condición  de 
análisis,  se  predice  el  orden  de  elución  de  los  compuestos  en  función 
de sus características estructurales y polaridad, principalmente. 
 
Se  tiene  una  mayor  concentración  del  activo  avobenzona,  octocrileno  y 
oxibenzona.  Finalmente  es  importante  mencionar  que  estos  3  componentes 
son  de  vital  importancia  para  la  crema  corporal  ya  que  estos  actúan  como 
filtros UV para la protección de los rayos solares. 
 
BIBLIOGRAFÍA 
 
Abaychi,  J.  K.  &  Riley,  J.  P.  (1979)  The  determination  of  phytoplankton 
pigments  by  high-  performance  liquid  chromatography.  Analytica  Chemical 
Acta  107Comparando  los  datos  obtenidos experimentalmente con los datos 
reportados,  tenemos  que  la  concentración  de  oxibenzona  en  la  muesta  es 
de  17.53%,  para  avobenzona  es  de  20.34%  y  37.7%  para  octocrileno,  lo  cual 
indica  un  exceso  considerable  en  los  compuestos  de  protección  solar  de 
Banana Boat Ultra Defense., 1-11.