Proporcionar los lineamientos que permitan guiar de manera práctica y concreta
la realización de las validaciones de metodologías analíticas en LABORATORIO FARMACEUTICO, sean estas realizadas por HPLC o Espectrofotometría.
Definir un esquema general para la validación de dichas técnicas analíticas, los
requerimientos particulares de validación de técnicas analíticas empleadas, parámetros y criterios de aceptación o rechazo de la validación.
2. ALCANCE
Estos lineamientos aplican a la validación de las técnicas analíticas por HPLC y
Espectrofotometría, desarrolladas y/o empleadas en LABORATORIO FARMACEUTICO. De la siguiente forma:
Ensayos cuali-cuantitativos para la determinación del contenido de principio
activo, productos de degradación y/o subproductos de síntesis de materias primas.
Ensayos cuantitativos para determinar el contenido de él (los) principio (s) de
nuevos productos.
Determinación de trazas.
La persona encargada de llevar a cabo la elaboración del protocolo de validación,
evaluará y determinara los parámetros que considere necesarios para llevar a cabo la validación de la técnica analítica. 3. DEFINICIONES
ANALITO: Compuesto químico a determinarse cualitativa y cuantitativamente en
una muestra.
BLANCO: Consiste en la matriz de la muestra a analizar, sin la presencia del
principio activo, sometido a los mismos procesos de manipulación y preparación de las muestras de interés.
COEFICIENTE DE VARIACIÓN O DESVIACIÓN ESTANDAR RELATIVA: Es la
desviación estándar expresada como función de la media.
DESVIACIÓN ESTÁNDAR: Estadístico básico indicativo de la dispersión o
variabilidad de los resultados.
ENSAYOS DE IDENTIFICACION: Están diseñados para asegurar la identidad
de un analito en la muestra, esto se logra normalmente por comparación de una propiedad de la muestra (Espectrofotométrica, comportamiento cromatográfico, reactividad química, etc.), con la misma propiedad del estándar de referencia.
ENSAYOS DE CUANTIFICACION: Su propósito es medir el contenido del
analito presente en la muestra dada.
ENSAYOS DE PRODUCTOS DE DEGRADACION: Estos ensayos podrán ser
ensayos cuantitativos o ensayos límite, dependiendo de las especificaciones existentes para los productos de degradación al cumplimiento de la vida útil del producto. El propósito de los dos ensayos es reflejar con exactitud el contenido de los productos de degradación o que su concentración no sobrepasa el límite máximo especificado. Se requieren diferentes características de validación en un ensayo cuantitativo que en un ensayo limite de productos de degradación, por lo que se debe especificar al inicio del proyecto de que ensayo se trata.
ESPECIFICIDAD: Es la capacidad del método para identificar y valorar
exclusivamente un compuesto de interés aún en presencia de otros componentes (otro analito o excipientes de formulación) que no afecten el resultado.
EXACTITUD: Es la proximidad entre los resultados de la prueba obtenidos
mediante ese método y el valor verdadero.
INCERTIDUMBRE DE UNA MEDIDA: Estimación del intervalo dentro del cual
se encuentra el valor verdadero de la cantidad medida una vez efectuadas las correcciones debidas a errores sistemáticos.
INTERVALO DE CONFIANZA O LIMITES DE CONFIANZA: Intervalo en torno
al valor estimado que contiene el valor real con una probabilidad determinada. Se aplica en diversas situaciones: límites de confianza de una determinación individual, de una media de resultados, de una varianza, de una recta de regresión. FACTOR DE ASIMETRIA (Tailing Factor o asym): Mide el grado de asimetría de un pico cromatográfico. Un valor de 1 indica un pico completamente simétrico. El valor se incrementa al aumentar las colas de los picos.
FACTOR DE RETENCION (k): Es la medida del tiempo que permanece el
analito en la fase estacionaria relativo al tiempo que permanece en la fase móvil. Representa el tiempo que un compuesto en la muestra es retardado por la fase estacionaria al atravesar la columna a la velocidad de flujo de la fase móvil.
FACTOR DE SEPARACION (a): Es el valor de retención relativo calculado para
dos picos adyacentes.
LIMITE DE DETECCION: Es la menor concentración del analito que puede
detectarse, pero no necesariamente cuantificarse en una muestra, en las condiciones establecidas.
LIMITE DE CUANTIFICACION: es la mínima cantidad inyectada que da lugar a
una medida reproducible de áreas de pico.
LINEALIDAD: Capacidad del método analítico de obtener resultados que sean
directamente, o mediante transformaciones matemáticas perfectamente definidas, proporcionales a las concentraciones de los analito en las muestras, dentro de un rango determinado.
METODOLOGIA ANALITICA: Información escrita necesaria que define nuevos
ensayos y lineamientos a seguir con el fin de conocer las características y composición de una muestra.
METODOLOGÍA INDICATIVA DE ESTABILIDAD: Métodos analíticos
cuantitativos validados para detectar los cambios con el tiempo (Físico y Químico) o propiedades microbiológicas de materias primas y productos que son específicos para el contenido de ingrediente activo, productos de degradación y productos de interés que pueden ser medidos sin interferencia.
MUESTRA: Mezcla a analizar, compuesta por varios componentes, los cuales
se intentan separar, identificar y/o cuantificar.
NUMERO DE PLATOS TEORICOS(N): Medida de la eficiencia de la columna
cromatográfica expresado como:
N=16 (t/W)2 ò N= 5.54 (t/Wh/2)2
Donde: t= tiempo de retención del pico. W= ancho de pico medido a la línea base. W h/2= ancho pico medido a la mitad de la altura de este.
PICO CROMATOGRÁFICO: Representación gráfica en el cromatograma de la
respuesta de un detector diferencial cuando un compuesto simple es eluido de la columna. PLACEBO: Mezcla homogénea de los excipientes de un producto sin el (los) principio (s) activo (s), con las mismas proporciones declaradas que formalicen el mismo.
PRECISION: Es el grado de concordancia entre una serie de medidas obtenidas
por un muestreo múltiple a partir de una misma muestra homogénea, analizadas bajo las condiciones descritas en la técnica de análisis.
• Repetitividad: Es la medida de la precisión de un método efectuado en las
mismas condiciones, sobre la misma muestra, por un mismo analista, con los mismos equipos y en el curso de la misma serie de análisis efectuados en un corto intervalo de tiempo. • Reproducibilidad: Es la medida de la precisión de los resultados de un método efectuado sobre la misma muestra pero en condiciones diferentes (diferentes analistas, equipos, días, infraestructura, etc). • Robustez: Es la medida de capacidad del método que evalúa los efectos pequeños en los parámetros del método y suministra una indicación sobre su confiabilidad durante el uso rutinario.
PROTOCOLO: Plan escrito en el que se indica cómo se debe conducir la
validación, incluye parámetros, descripción y características del sujeto de la validación, pruebas a ejecutar para cada una de las variables críticas y los criterios de aceptación.
RELACION SEÑAL RUIDO: Se expresa como:
s/n= 2h/hn
Donde: h= altura máxima del pico hn= altura mayor observada de la fluctuación del ruido obtenido en una región 20 veces al ancho de pico de media altura, alrededor del tiempo de retención del pico esperado.
RESOLUCIÓN (R): Medida de la separación de dos picos cromatográficos
Donde: t1 y t2= tiempo de retención de los dos picos. W1 y W2= ancho de los dos picos medidos a la línea base. W1 H/2 y W2 H/2= ancho de los picos medidos a la mitad de la altura de estos.
RANGO: El rango de un método analítico es el intervalo entre el nivel superior e
inferior (incluyendo estos niveles) de concentración del analito, para el cual se ha demostrado que el mismo se determinara con precisión, exactitud y linealidad utilizando el método como se ha descrito. REVALIDACION: Repetición de la validación, necesaria después de que alguno de los parámetros de la técnica analítica se haya modificado significativamente.
ROBUSTEZ: Indicación de la resistencia de la técnica de análisis a variaciones
típicas de operación por ejemplo cambios de analistas, diferentes instrumentos y diferentes lotes de reactivos.
SELECTIVIDAD O ESPEFICIDAD: Capacidad de evaluar de manera inequívoca
el analito en presencia de aquellos componentes cuya presencia resulta previsible, como impurezas, productos de degradación conocidos y/o probables y componentes de la matriz.
TEST DE IDONEIDAD DEL SISTEMA: Proceso de comprobación de las
especificaciones del rendimiento de un sistema , a menudo denominada validación de un método cuando se aplica a una separación determinada y denominado validación del sistema cuando se aplica un sistema de separación utilizado rutinariamente.
TOPOGRAMA: Representación gráfica tridimensional de los parámetros de
tiempo, longitud de onda y absorbancia en un detector de arreglo de diodos.
VALIDACION: Proceso para establecer que las características de
funcionamiento del método analítico son adecuadas para la aplicación que se pretende, considerando todas las variables del método, tales como el muestreo, preparación de la muestra, separación cromatográfica o aplicación de la técnica de análisis, detección de los analitos y evaluación de los datos, utilizando la misma matriz que la de la muestra.
RESPONSABILIDADES
Deben establecerse las responsabilidades de los departamentos responsables
del cumplimiento del protocolo de validación, en cuanto a la elaboración, revisión, aprobación y ejecución del mismo.
Estas responsabilidades se encuentran descritas en la parte correspondiente a
