Investigación Internacional de Conservación de

Suelos y Aguas
Volumen 6, Número 3 , septiembre de 2018 , páginas 253-260

Artículo de Investigación Original

Los efectos de la aireación y el aserrín

como material estructural en la
biorremediación de suelos ácidos arcillosos
contaminados con diesel.
Vínculos a autores panel de superposición abiertoGabriela Menta Alvim Patrícia
Procópio Pontes
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https://doi.org/10.1016/j.iswcr.2018.04.002Obtenga derechos y contenido

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Resumen
La contaminación del suelo , debido a la fuga de petróleo o sus derivados , es motivo
de preocupación en la actualidad. Se han desarrollado tecnologías, como
la biorremediación , para eliminar estos contaminantes del medio ambiente. El
objetivo de este trabajo es evaluar
la biorremediación de suelos arcillosos contaminados con aceite diesel , comparando
el efecto del uso de la aireación y la adición de diferentes proporciones
de aserrín (5% y 10%) como material de carga. Esta investigación se desarrolló en
tres fases, con experimentos de (a) atenuación natural (procesos exclusivamente
 naturales), (b) suelo modificado con aserríny (c) aireación combinada con adición
de aserrín . La prueba de respirometría manométrica se aplicó para  controlar
laproducción deCO2durantelosexperimentos de biodegradacióny se usó hidróxido de
sodio (NaOH) como solución absorbente . La contaminación de las muestras se
llevó a cabo mediante la adición de aceite diesel (5% p / p (gg- 1)) en el suelo. Los
resultados indicaron que la atenuación natural presentaba un proceso de
biorremediación más lento en comparación con los tratamientos con adición de
aserrín. La adición del 5% de aserrín fue beneficiosa para la actividad
microbiana.del suelo, pero una proporción superior al 5% causó un efecto negativo
en las muestras, reduciendo la actividad microbiana . El análisis estadístico ( prueba
de Kruskal-Wallis ) mostró importantes eliminaciones de petróleo en
experimentos con la combinación de aserrín y aireación. La aireación se
consideró el principal agente para aumentar la biodegradación del aceite en el
suelo. Las reacciones de velocidad de degradación siguieron un modelo lineal de orden
cero . La mayor tasa de degradación de contaminantes se observó en las muestras
con un 5% de aserrín y aireación (24,79 mgO 2kg−1día de suelo seco−1), que
también mejoró la actividad microbiana y la eliminación de aceite diesel.
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Palabras clave

Biorremediación
Gasóleo
Suelo contaminado
Serrín
Aireación

1 . Introducción
El uso intenso del petróleo provoca la liberación de sus derivados en el medio
ambiente debido a accidentes y combustible que involucran actividades, que es una
de las principales causas de la contaminación del agua y del suelo (Atlas y Cerniglia,
1995,Das y Chandran, 2011 ). De acuerdo con las internacionales de
Petroleros propietarios Contaminación Federación ( ITOPF, 2016), la cantidad total
de aceite perdido en el medio ambiente debido a los incidentes de petróleo en
2000 fue de 208.000 toneladas y 6.000 toneladas en 2016.
Un accidente extremadamente grave ocurrió en el año 2000 en Brasil , donde se
derramaron 1,3 millones de litros de fuel oil en la bahía de Guanabara desde
una tubería ( Taam, 2002 ). A pesar de los grandes accidentes con combustible,
la Agencia de Protección Ambiental del Estado de São Paulo ( CETESB, 2012 )
informó que la principal fuente de contaminación del gasóleo en el estado de São
Paulo se debe a las pequeñas fugas que se producen en las estaciones de servicio
en las regiones metropolitanas.
Según la Agencia, los principales compuestos observados en
lasáreascontaminadas(CETESB, 2012)fueron los disolventes aromáticos y
halogenados , los combustibles líquidos , los metales y los hidrocarburos aromáticos
policíclicos (HAP). Estos compuestos están asociados con el aumento de
la incidencia de cáncer en losseres humanosy se reportan comomutágenos potentes,
además de los sistemas pulmonar, gastrointestinal, renal y dermatológico que se
vieron afectados después de la exposición crónica ( ATSDR, 2012).
Teniendo en cuenta los efectos negativos sobre el medio ambiente y la salud
humana causados por el gasóleo en el suelo , se han desarrollado tecnologías para
la eliminación decontaminantesdel medio ambiente (Meneghetti, 2007). Uno de los
ejemplos es el proceso de biorremediación , que es una técnica que permite la
transformación de la contaminación en productos no
tóxicos por elmetabolismo microbiano (Atlas y Cerniglia, 1995 ). Esta técnica se
puede mejorar alterando las condiciones ambientales como la temperatura, el pH yla
humedad del suelo., concentración de oxígeno y nutrientes , que puede influir en el
desarrollo de microorganismos en el suelo ( Andrade et al., 2010,Baptista, 2007,Jacques
et al., 2007,Providenti et al., 1993,Vidali, 2001).
La adición de materiales voluminosos como arena , grava , bagazo de caña de
azúcar , cáscara de coco , paja , aserrín , paja y astillas de madera ha mostrado
mejoras en las propiedades del suelo ( Armendáriz, Corral, Linares, García y Vázquez,
2004;Rodríguez-Rodríguez, Marco -Urrea, & Caminal, 2010;Kriipsalu, Marques,
Nammari, y Hogland, 2007;Li et al., 2004;Meysami y Baheri, 2003;Rhykerd, Crews,
McInnes, y Weaver, 1999 ) como una disminución en la densidad del suelo
y mejoraen la porosidad , permeabilidad, difusión de oxígeno y reducción
del tiempo de biodegradación del suelo(Boodoosingh, Swan, Desmarais y Beckles,
2010).
Además, el uso de la aireación forzada puede mejorar el crecimiento microbiano ,
según Teng et al. (2010) y Vendramel, Dezotti y Sant'anna (2004) ,
la biorremediación con aireación forzada presentó una mejor tasa de degradación de
contaminantes .
Sin embargo, faltan estudios comparativos sobre el efecto del uso de materiales
voluminosos y la aireación en la biodegradación del aceite diesel en el
suelo. Además, numerosas investigaciones se centran en el petróleo crudo , no en
el aceite diesel y los suelos arcillosos, que es un suelo típico del sureste de
Brasil. Por lo tanto, este estudio propone evaluar la biorremediación
de suelos arcillosos contaminados con gasóleo y comparar el efecto de diferentes
condiciones experimentales (atenuación natural, adición de aserrín como material
estructural y el uso de la aireación) en la eficiencia del proceso.

2 . material y métodos
2.1 . Caracterización del suelo.

Las muestras de suelo (4 kg) utilizadas en este estudio se tomaron

del área metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais (APCBH,
2011 ). La caracterización química del suelo se realizó de acuerdo con los Métodos
Estándar para el Examen de Aguas Residuales y Aguas Residuales (APHA / AWWA /
WEF, 2005 ) para la determinación
de nitrógeno , fósforo total y aceite residual (método 5520 D). La determinación de
hierro total se realizó mediante espectrofotometría de absorción atómica ( APHA /
AWWA / WEF, 2005 ) y los análisis de carbono orgánico total , pHy la humedad se
realizó de acuerdo con los Métodos del Manual de Análisis de Suelos de
la CorporaciónBrasileña de Investigación Agropecuaria ( EMBRAPA, 2011).
Para la caracterización microbiológica del suelo,
las bacterias heterótrofas (método 9215 B), mohos y levaduras (CFU / g) se
determinaron de acuerdo con los Métodos Estándar para el Examen de Aguas y
Aguas Residuales ( APHA / AWWA / WEF, 2005 ). El carbono microbiano de la
biomasa del suelo (MBC) se determinó utilizando el método de Silva, Azevedo y
Polli (2007) para muestras de suelo con y sin aserrín .

2.2 . Experimentos de biorremediación

Para llevar a cabo los experimentos de biorremediación , se eliminaron

los residuos de las muestras y el suelo se desintegró y se tamizó en un  tamiz
de malla 10 (2 mm). La humedad de la muestra se corrigió al 21%.
Los experimentos se llevaron a cabo por triplicado, utilizando 50 g de suelo
en botellas de 250 ml y las muestras se mantuvieron a 25 ºC en una
incubadora. Dado que el objetivo de la presente investigación es desarrollar un
estudio sobre la biorremediación de un suelo típico en el sureste de Brasil , no se
agregaron nutrientes ni se corrigió el pH en las muestras.
La contaminación de la muestra se realizó agregando aceite diesel (S500) en
una relación de peso aceite: suelo de 1:20 (5% p / p (g g -1 )). El proceso
de biodegradación se monitorizó mediante respirometría manométrica utilizando el
sistema OxiTop-C® (OECD 301f), que mide la diferencia de presión a
un volumen constante mientras se consume el oxígeno (O 2 ) y se produce
el dióxido de carbono (CO 2 ) ( OECD, 1992 ). Se utilizó una solución de hidróxido de
sodio (NaOH, 0.05 M) como absorbente para el CO 2producido durante el proceso
de biodegradación .
Para evaluar el efecto de la adición de aserrín en el proceso de biorremediación, se
realizaron experimentos sin aserrín ni aireación (atenuación natural) y con el
material de carga en una relación de aserrín: peso del suelo de 1:20 (5% p / p (g
g -1) )) y una relación de peso de aserrín: suelo de 1:10 (10% p / p (gg −1 )). Para
verificar el efecto de la aireación en el proceso de biorremediación, se realizaron
los experimentos con aserrín y aireación. En estos experimentos, el suelo se agitó
durante 30 s con una espátula de metal dos veces por semana. Las condiciones
experimentales se presentan en la Tabla 1 .
Tabla 1 . Experimentos de biorremediación .

Muestra Descripción
1 Suelo (control)
2 Suelo + Diesel oil (atenuación natural)
 Muestra Descripción
3 Suelo + 5% de Serrín (5% S)
4 Suelo + 10% de Serrín (10% S)
5 Suelo + Diesel oil + 5% de aserrín (5% S)
6 Suelo + aceite diesel + 10% de aserrín (10% S)
7 Suelo + Diesel oil + 5% de aserrín (5% S) + aireación
8 Suelo + Diesel oil + 10% de Serrín (10% S) + aireación

El CO 2 cuantificación se realizó mediante la determinación del cambio de presión

(Delta m) en las botellas del sistema OxiTop-C® como se muestra en la
Ec. (1) ( Platen & Wirtz, 1992 ).
(1)∆metro=∆pagVfrMETROrR′T

Δp [J L −1 ] es la variación de presión registrada por OxiTop-C® en el modo

"Presión P"; Vfr [L] es el volumen de gas libre; Mr es la masa molar de CO 2 [g /
mol]; R 'es el CO 2 constante medida a 273K y 1013 hPa (8,2502 J mol -1 K -1 ); T
es la temperatura ambiente [K]. El volumen de gas libre (Vfr) utilizado en la
ec. (1) se puede calcular a partir de la ec. (2) ( Platen & Wirtz, 1992 ).
(2)Vfr=Vges-VAG-VA.m-VBf

Vges [L] representa el volumen total del recipiente de medición cerrado, sin
suelo y el recipiente absorbente; V AG [L] es el volumen del recipiente utilizado por
el agente absorbente; V AM [L] representa el volumen de absorbente
utilizado; V Bf [L] es el volumen del suelo húmedo.
La respiración del suelo (BA) [mgO 2 / kgTS] se puede calcular utilizando la
ecuación. (3) ( Platen & Wirtz, 1992 ).
(3)licenciado en Letras=Señor(O2)Vfr∆pagRTmetroBt

m Bt (kg) es la masa de suelo seco utilizado y R es 83.1441 L hPa mol −1 K −1 . La

masa de suelo seco utilizado se puede determinar utilizando la
ecuación. (4) ( Platen & Wirtz, 1992 ):
(4)metroBt=metroBf*TS100%

m Bf, (kg) es la masa del suelo húmedo utilizado y TS es el contenido de suelo

seco en%. La demanda de oxígeno bioquímico del aceite (DBO [g g- 1 ]) se calcula
utilizando la ecuación. (5) ( Roppola, 2009 ).
(5)CuerpoElsolsol-1]=∆metrometromuestra

Δm es la cantidad de oxígeno consumido [g] y m muestra es la masa

del contaminante aplicado en el experimento, por ejemplo, diesel ( Karhu et al.,
2009 , Roppola, 2009 ).
El grado de biodegradación del gasóleo, en porcentaje, se puede calcular de
acuerdo con la ecuación. (6) ( Karhu et al., 2009 ).
(6)Grado de biodegradación=CuerpoTOD*100%

ThOD es la demanda teórica de oxígeno para la degradación aeróbica del

contenido de carbono en el combustible diesel , que puede determinarse por
la estequiometría de la reacción de oxidación y es 3.5 g de O 2 por gramo de diesel
(hexadecano) consumido ( Albertus, 2012 , American Petroleum Instituto (API),
2012 , Komilis et al., 2009 ).

2.3 . Caracterización final del suelo

El contenido de aceite restante (método 5520 D) se determinó al final del

experimento de acuerdo con los Métodos estándar para el examen de agua y
aguas residuales ( APHA / AWWA / WEF, 2005 ). El recuento total
de bacteriasheterotróficas , mohos y levaduras se realizó al final del experimento
para analizar el comportamiento microbiológico del suelo ( APHA / AWWA / WEF,
2005 ).

2.4 . Cinética de degradación

A medida que la concentración de oxígeno en el proceso de biodegradación se

vuelve limitante, se llevó a cabo el estudio cinético de la tasa de consumo de gas
en las muestras. El modelo general de la cinética de biodegradación se puede
describir de acuerdo con la ecuación. (7) ( Komilis, Vrohidou y Voudrias, 2009 ), con
D como la concentración de aceite (mg de aceite / kg de suelo seco), k como la
constante de degradación, O 2 como la concentración de oxígeno en la muestra
(mg / kg suelo seco), m y n como los índices de orden de la reacción.
(7)dDdt=-k.remetro.⌈O2⌉norte
El consumo bruto de oxígeno restante (ROCt) se determina mediante la
ecuación. (8) , que es la diferencia entre el consumo bruto final de oxígeno al
final de cada experimento (FOC) y el consumo bruto de gas en un
instante t(AOCt).
(8)ROCt=FOC-AOCt

Según Komilis et al. (2009) , la tasa de biodegradación, en función del consumo de

oxígeno, se puede describir en la ecuación. (9) .
(9)re⌈ROC⌉dt=-k.⌈ROC⌉norte

La linealización de la ec. (9) se puede lograr a través de su integración, lo que

resulta en la ecuación. (10) , general para todos los casos con n ≥ 0 y n ≠ 1
( Yudono, Said, Sabaruddin, Napoleon & Fanani, 2011 ; CHAPRA, 1997).
(10)ROC-norte+1=FOC-norte+1+(norte-1).k.t

2.5 . análisis estadístico

Los análisis estadísticos se evaluaron para la distribución normal mediante

la prueba de Kolmogorov-Smirnov y, para la presencia de valores atípicos ,
mediante la prueba de Grubbs . Los datos que asumieron una distribución
normal se enviaron a la prueba ANOVA de una vía , seguida de las pruebas de
comparación múltiple de Tukey para análisis con más de dos grupos. Los datos
que asumieron una distribución no paramétrica se analizaron mediante la prueba
de Kruskal-Wallis , seguida de la prueba de comparaciones múltiples
de Dunns para análisis con más de dos grupos. Los análisis se realizaron
utilizando el software GraphPad Prism 7.03 (GraphPad Software , San
Diego, California , EE. UU.), Considerando el 95% como un intervalo de
confianza (p ≤ 0, 05).

3 . Resultados y discusión
3.1 . Caracterización inicial del suelo.
Los resultados de la caracterización del suelo ( Tabla 2 ) indicaron un sueloácido con
bajo contenido de materia orgánica y nutrientes , y estos valores se compararon con
un típico "Cerrado Biome" ( suelo de sabana brasileña ).
Tabla 2 . Caracterización del suelo .

Parámetro Resultado
pH 5.0
Materia orgánica 0.76%
Carbono organico total 1.14%
Nitrógeno total 0.910 g / kg
Fósforo 531.8 mg / kg
Bacterias heterotróficas totales 4.1 × 10 4 UFC / g
Moldes y levaduras. 2.7 × 10 ³ UFC / g

De acuerdo con las condiciones más adecuadas para la biodegradaciónpresentadas

por Vidali (2001) , el pH del suelo utilizado en el estudio fue inferior al ideal (pH
6.5–8.0). Pulrolnik, Barros, Silva, Novais y Brandani (2009) caracterizaron el suelo
“Cerrado” del valle de Jequitinhonha (0–20 cm de la capa del suelo) en Minas
Gerais, Brasil y observaron un pH 4.8 con nitrógenototal de 1.42 gN / kg , que son
compatibles con los resultados ( Tabla 2 ).
Lopes y Cox (1977) realizaron análisis en 518 muestras de superficie (0–15 cm) en
la región central de Brasil y determinaron los estándares de algunas propiedades
del suelo "Cerrado" . De acuerdo con estas medidas, la muestra de suelo analizada
en el presente estudio puede caracterizarse por tener un nivel de acidez medio (pH
5.0–5.9), bajo contenido de fósforo (0–10 µg / mL) y contenido de materia
orgánica (0–1.5%). Lopes y Guilherme (1994) indicaron, en un estudio sobre
el manejo de la fertilidad en "Cerrado", que el fósforo es típicamente el nutriente
más deficiente en este tipo de suelos, lo que concuerda con los resultados de la
muestra de suelo ( Tabla 2 ).
El comportamiento de la microbiota en muestras de suelo con y sin aserrín(2%, 5% y
10% de aserrín) ( Fig. 1 ) se verificó en el análisis del carbono microbiano
microbiano del suelo (MBC), representando así la fracción viva de Materia
presente en el suelo ( Souza et al., 2010 ). Por lo tanto, los valores altos de MBC
 indican una actividad microbiana más intensa . Las barras verticales en la Fig. 1 ,
indican los errores estándar de experimentos duplicados.

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Fig. 1 . Valores medios del carbono microbiano de la biomasa del suelo (MBC).

Se puede observar que las muestras con la biomasa más activa fueron aquellas con
2% (1,385 mgC / kg) y 5% (1,243 mgC / kg) de aserrín . Por lo tanto, se verifica
que la actividad microbiana aumentó al agregar hasta un 5% de aserrín y se redujo
con el aumento de la proporción de material de carga por encima de este valor.
Nguyen y Marschner (2017) presentaron resultados similares, quienes observaron
que el aserrín modificado en el suelo (1% p / p (g kg- 1 )) tenía una
mayor producción acumulada de CO 2 , lo que muestra que los microbios eran más
activos, mientras que Seabra (2005) observó que un exceso de aserrín (10% v / v)
podría tener efectos tóxicos debido a un desarrollo intensivo de hongos que
reduciría la actividad microbiana y causaría una inhibición del crecimiento de
la vegetación en el suelo. Comparativamente, el suelo que no recibió el material de
carga no presentó ningún crecimiento de hongos. Małecka y Kwaśna (2015) ,
muestran que al aumentar los hongosla proliferación en el suelo, contribuye a una
competencia con las bacterias , que pueden ser responsables de la degradación
del petróleo .
Lee, Oh y Kim (2008) también observaron un aumento en el MBC de los suelos
modificados con una proporción de peso del aserrín del 5% (p / p) al comienzo
del proceso de biodegradación . Tanto la respiración como la biomasa
microbiana fueron significativamente mayores en el suelo modificado
con compost que en otros tratamientos. Algunos estudios también mostraron que
el aserrín tenía una alta concentración de lignina ( Hasbullah y Marschner, 2014 ), lo
que reduce la descomposición en el suelo ( Fog, 1988 ). Por lo tanto, la mayor
 proporción de aserrín (10%) en el presente estudio podría haber causado un
efecto negativo en las muestras, reduciendo la actividad microbiana.

3.2 . Experimentos de biorremediación

El efecto del aserrín en la biorremediación del gasóleo se evaluó comparando

los valores de DBO (g kg -1 ) durante los experimentos de atenuación natural(suelo +
gasóleo) y con la adición de aserrín (5% y 10% (p / p) ). La figura 2muestra que
las curvas de DBO (g kg- 1 ) para los experimentos con aserrín tienen un
comportamiento similar al de las curvas de crecimiento microbiano, en las que se
pueden observar la fase exponencial (tasas máximas de respiración) y la fase
estacionaria (estabilización de la respiración). Curvas similares también se
obtuvieron por Ferro (2013) en un estudio de cuerobiodegradación mediante el
OxiTop-C® de medición Sistema que indica que cuando el oxígeno se vuelve
limitante, el proceso tiende a estancarse.

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Fig. 2 . DBO (g kg -1 ) de aceite diesel en suelo con y sin aserrín (5% y 10%).

Hubo un alto consumo de O 2 durante los primeros días de incubación (fase

exponencial), que alcanzó un máximo en el quinto día del experimento con un
5% de aserrín y aceite. Se obtuvo la misma curva de forma para el experimento
con 10% de aserrín y aceite, sin embargo, con valores más bajos de consumo de
oxígeno. Los resultados estadísticos de la prueba de Kruskal-Wallismostraron
una diferencia significativa entre el quinto día de valores de DBO (g kg −1 ) en las
muestras de atenuación natural (suelo + diesel) y en las muestras con 5% de
aserrín (p <0,0001) .
La forma de la curva para las muestras con aserrín muestra la ausencia de la fase
de retraso, que es la fase de la adaptación de los microorganismos a una nueva
fuente de carbono ( Karhu et al., 2009 ). Según Swinnen, Bernaerts, Dens, Geeraerd, y
Van Impe (2004) y Santos (1982) , la ausencia de la fase de retraso sugiere una
buena aclimatación inicial de la microbiota en el experimento y puede justificarse
por cambios en el sustrato o las condiciones ambientales , como el contenido de
oxígeno en el suelo.
Desde el séptimo día de incubación, hubo una reducción en el consumo de
oxígeno en la respiración del suelo en los experimentos con aserrín, seguidos de
la estabilización . Sugiere que la degradación que se produce en la mayoría de las
fracciones lábiles del gasóleo en los períodos iniciales de disponibilidad de
nutrientes u oxígeno en las muestras ha disminuido. Costa (2010) y McGill, Rowell
y Westlake (1981) observaron resultados similares en estudios sobre la degradación
del petróleo crudo utilizando el sistema de medición OxiTop-C®.
El experimento de atenuación natural (suelo + aceite diesel) presentó valores más
altos de DBO (g kg- 1 ) solo después del día 18 de incubación, lo que sugiere que
este tratamiento sea más lento que aquellos con adición de material
voluminoso. También se encontraron resultados similares en Costa
(2010) sobre la biodegradación del petróleo en estudios
de suelos de manglar . Según el estudio, con un pequeño derrame accidental
de petróleo , el contaminante se degradaría en el medio ambiente por atenuación
natural; sin embargo, para escalas de contaminación más grandes , tal tratamiento
sería impracticable debido a la lentitud que presenta.
El efecto de la aireación en el proceso de biorremediación se evaluó comparando
los valores de DBO (g kg- 1 ) en el experimento del suelo con aserrín y con
aireación. La figura 3 muestra que la adición de aserrín combinado con la
aireación incrementó el consumo de oxígeno de las muestras y la adición de 5%
de aserrín fue más efectiva con este aumento. Por lo tanto, en este caso, la
aireación fue el factor principal para aumentar el proceso de biodegradación.
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Fig. 3 . DBO (g kg −1 ) de aceite diesel en suelo con aserrín (5% y 10%) y aireación.

Se puede observar que los valores de DBO (g kg −1 ) son compatibles con los
resultados de MBC porque revelan valores de respiración reducidos y actividad
microbiana más baja para aquellas muestras con un 10% de aserrín. Este
resultado corrobora el posible efecto negativo sobre la actividad microbiana
causada por las altas proporciones de aserrín agregado.
De la relación BOD / ThOD ( Fig. 4 ), las muestras de aserrín con 5% y 10%
combinadas con aireación presentaron los mejores resultados, alcanzando 20% y
16% después de 26 días. Las otras muestras obtuvieron valores cercanos al 1%,
que muestran una degradación no efectiva.

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 Fig. 4 . BOD / DTO valores para diesel de petróleo en tierra con y sin aserrín (5% y 10%) y
aireación.

Se observaron resultados similares para la relación BOD / ThOD (%) en Karhu et

al. (2009) con un estudio de biodegradación de combustibles ligeros en el suelo a
través del método manométrico. En ese estudio, los valores de DBO / TOD
alcanzaron cerca del 20% después de 30 días de incubación.
En estudios realizados por Kaakinen, Vahaoja, Kuokkanen y Roppola (2007) y Roppola
(2009) , las tasas de biodegradación se compararon en suelos contaminados con
aceite de cadena y aceite lubricante a diferentes condiciones de pH y
concentraciones de nutrientes durante 30 días de experimento. Los gráficos
BOD / ThOD (%) son similares a los presentados en este trabajo en lo que parece
tener un aumento exponencial de la degradación de contaminantes. Esto sugiere
que sería posible alcanzar valores más altos si el período experimental fuera más
largo de 26 días.

3.3 . Caracterización final del suelo

El comportamiento microbiológico del suelo con diferentes condiciones

experimentales se analizó mediante el conteo total de bacterias heterótrofas ,
mohos y levaduras después del experimento de biodegradación ( Fig. 5 ).

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Fig. 5 . Análisis microbiológico .

En las muestras con un 5% de aserrín, el aceite diesel actuó como una fuente de
carbono para la microbiota, a pesar de la toxicidad de los contaminantes , lo que
 provoca un aumento en la población de bacterias, mohos y levaduras
heterotróficas totales. No se observó un desarrollo excesivo de mohos y
levaduras en las muestras, a diferencia del presentado por Seabra (2005) , que
verificó un aumento de las poblaciones de hongos con el incremento de la
proporción de material estructurante utilizada.
El recuento de microbios aumentó con la aireación y la adición de aserrín, y fue
mayor en los experimentos que combinaron el 5% de aserrín y aireación. Agregar
un 10% de aserrín redujo el conteo de microbios, un resultado consistente con
los valores de DBO (g kg- 1 ) y MBC, que muestran una reducción de la actividad
microbiana en muestras con esa cantidad de aserrín.
Por lo tanto, en el presente trabajo, el efecto tóxico con la mayor proporción de
aserrín no fue causado por estos microorganismos. Esto puede indicar el posible
efecto tóxico de las resinas solubles , los taninos o los terpenospresentes en el
aserrín o producidos durante su degradación, o incluso los antibióticos producidos
por microorganismos estimulados con aserrín, como lo sugieren  Małecka y Kwaśna
(2015) . Por lo tanto, la proporción de aserrín (10%) en el presente estudio podría
haber causado toxicidad en las muestras, reduciendo la población de
microorganismos, la respiración de las bacterias y la actividad microbiana.
La eliminación del aceite diesel al final de los 26 días de incubación se puede ver
en la Fig. 6, donde las barras verticales indican los errores estándar de los
experimentos por triplicado. La mayor extracción fue presentada por la muestra
con un 5% de aserrín y aireación.

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Fig. 6 . Retirada media del gasóleo al día 26.
Se observó una diferencia significativa entre la extracción de aceite diesel en las
muestras con 5% y 10% de aserrín y aireación (de la prueba estadística
de Kruskal-Wallis ) en comparación con la atenuación natural (p = 0,0036 para
5% y 10% de aserrín y aireación). Por lo tanto, las importantes eliminaciones de
petróleo resultaron de la combinación de aserrín y aireación. Los resultados
indican la importancia de la aireación en el proceso de biorremediación, ya que la
degradación inicial de los hidrocarburos del petróleo requiere la actividad de las
enzimas de oxígeno (dioxigenasas y monooxigenasas), lo que hace que el oxígeno
sea un factor limitante para la degradación en muchos procesos ( Atlas,
1981 , Boopathy, 2000 ).
Resultados similares fueron obtenidos por Teng et al. (2010) . Los investigadores
observaron que el contenido de humedad del suelo y la agitación modificaron la
aireación del suelo, lo que afectó los números y tipos
de microorganismos del suelo . Por lo tanto, la humedad y las condiciones de
aireación podrían mejorar y acelerar la degradación de la HAP en suelos
contaminados.
Crocetti, Head y Ricciardelli (1992) presentaron resultados comparables que
evaluaron la biodegradación del combustible diesel en suelos contaminados (1.000
a 10.000 ppm del contenido total de hidrocarburos de petróleo ) de untanque
de almacenamiento subterráneo . La biodegradación se evaluó mediante un método
respirométrico, controlando el dióxido de carbonoproducido. El suelo se
biorremediado con éxito in situ mediante aireación forzada, siendo el contenido
de oxígeno un factor limitante para el tratamiento y la adición de nutrientes se
determinó como innecesaria.

3.4 . Cinética de degradación

Las órdenes de reacción (n) se probaron, considerando los límites de 0.0–2.0,

como se indica en Chapra (1997) como los valores más utilizados. La velocidad de
reacción cinética (k) se calculó a partir de la ecuación. (10) . Las mediciones
de n y k seleccionadas fueron aquellas con el R 2 más alto (coeficiente de
correlación) entre los valores del consumo bruto de oxígeno restante (ROC)
calculados (Ec. (10) ) y los valores de ROC obtenidos por experimento ( Figs.
 7 y 8 ). La tabla 3 presenta los valores de n y k con los mejores resultados
de correlación (R2 ).

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Fig. 7 . Resultados de la modelación cinética. El consumo bruto de O 2 restante en función
del tiempo se muestra para muestras sin aireación.

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Fig. 8 . Resultados de la modelación cinética. El consumo bruto de O 2 restante en función
del tiempo se muestra para muestras con aireación.

Tabla 3 . Los mejores valores de ajuste para orden (n) y constantes cinéticas (k) se basan en
la ecuación. (10) .

Orden de Constante cinética (k) (mg O 2 kg −1 suelo

Muestra R 2
ecuación (n) seco día −1 )
Suelo + Aceite 0 0.261 0.9769
Suelo + 5% S + Aceite 0 0.895 0.9839
Suelo + 10% S + Aceite 0 0.643 0.9764
Suelo + 5% S + Aceite +
0 24.79 0.9889
Aireación
 Orden de Constante cinética (k) (mg O 2 kg −1 suelo
Muestra R 2
ecuación (n) seco día −1 )
Suelo + 10% S + Aceite +
0 20.53 0.9793
Aireación

Los valores de n = 0 muestran que las reacciones de biodegradación siguieron

un modelo lineal de orden cero , que muestra una tasa constante de degradación de
contaminantes por unidad de tiempo. Los valores con alta correlación (R 2 ) que
utilizan n = 0 también fueron obtenidos por Komilis et al. (2009) , en el análisis de
cinética de degradación en suelos arenososcontaminados con gasóleo. En este
estudio, la degradación del aceite diesel se determinó mediante mediciones
del consumo de O 2 y el estudio cinético se realizó utilizando las tasas de este
consumo de gas.
Bekins, Warren y Godsy (1998) realizaron un estudio comparativo entre los modelos
de primer orden, orden cero y Monod para representar la biodegradación de
contaminantes en los acuíferos . A partir de simulaciones numéricas, se observó
que cuando las concentraciones observadas en el campo son más altas que la
constante de saturación del medio (Ks), el mejor modelo para la degradación se
obtiene utilizando la tasa de decaimiento de orden cero .
Teniendo en cuenta los valores de las tasas de degradación del aceite (k)
presentadas en la Tabla 3 , se verificó que la adición de 5% de aserrín (k = 0,895)
mejoró la tasa de degradación del aceite en comparación con el 10% de la adición
de aserrín (k = 0,643) . También se observó que la muestra con 5% de aserrín y
aireación tenía la degradación más rápida del contaminante y la tasa de
degradación más alta (24,79 mg O 2 kg −1 día de suelo seco −1 ).

4 . Conclusiones
Los resultados indican que la atenuación natural (suelo + aceite diesel) es un
posible tratamiento para una pequeña escala de contaminación , pero presenta
un proceso de biorremediación más lento en comparación con los tratamientos con
la adición de aserrín .
Se obtuvieron los mejores resultados para la biorremediación experimento con 5%
de serrín y la aireación, que muestra más altos  de microorganismos recuentos, la
actividad microbiana , diesel aceite de eliminación y las tasas de respiración y la
degradación (24,79 mg O 2 kg -1 seco suelo día -1 ) con La cinética de orden cero.
Las actividades microbianas y las tasas de degradación más altas se obtuvieron al
agregar hasta el 5% del aserrín y estos factores se redujeron con el aumento de la
proporción de materiales de carga por encima de este valor. La adición de aserrín
sin aireación incrementó la actividad microbiana del suelo , pero no hizo que la
degradación del aceite diesel fuera más efectiva. Por lo tanto, se puede verificar
que la biodegradación efectiva del aceite diesel ocurrió en las muestras con
aireación, que fue el factor principal para aumentar el proceso
de biodegradación del aceite .

Expresiones de gratitud