UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA- XOCHIMILCO

CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD

QUÍMICO FARMACÉUTICO BIOLÓGICO

MÓDULO: OBTENCIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS DE

INTERÉS FARMACÉUTICO

REPORTE DE LABORATORIO
AISLAMIENTO DE LA PIPERINA A PARTIR DE LA PIMIENTA
NEGRA ​PIPER NIGRUM

DOCENTE: DR. PALACIOS ESPINOSA JUAN FRANCISCO

ALUMNOS:
Cazares Muñoz Elizabeth
Gómez García Juan Manuel
Ramírez Gómez Carlos Iván
Salinas Pérez Leslie Concepción
Viadas López Hugo

Grupo: BE51Q
 ÍNDICE

1.​INTRODUCCIÓN 2

2.​OBJETIVOS 2
2.1 Objetivo general 2
2.2 Objetivos particulares 2
3.​MARCO TEÓRICO 3
3.1 Piperina 3
3.2 Biosíntesis de la piperina 4
3.3 Importancia biológica de la piperina. Aplicaciones 5
3.4 Aislamiento de piperina 6
3.4.1 Reflujo convencional 6
3.4.1 Soxhlet convencional 7
3.5 Propiedades de los reactivos utilizados 7
4.​MARCO EXPERIMENTAL 9
4.1 Materiales y reactivos 9
4.2 Metodología 10
4.3 Diagrama de flujo 12
5.​RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS 13

6.​CONCLUSIONES 13

7.​REFERENCIAS 13

8.​ANEXOS 15
8.1 Evidencias 15

1
 1. INTRODUCCIÓN

Piper nigrum (​P.nigrum​) L. es un miembro de la familia ​Piperaceae ​. El género ​piper ​tiene más
de 1000 especies, pero las especies más conocidas son ​P.nigrum​, ​P.longum ​y ​P.betle, ​se cultiva
en todo el mundo y es nativa de las regiones tropicales y subtropicales de la India. Su fruto,
​ .
generalmente se seca y se usa como especia y condimento​ (1-2)​
Se ha reportado que los principales constituyentes del aceite esencial en ​P.nigrum ​contiene
hidrocarburos terpénicos como: β-pineno, sabineno, 3-careno, limoneno, cariofileno y
felandreno. El componente más activo en ​P. nigrum, ​es el alcaloide picante piperina [1- [5-
[1,3-benzodioxol-5-il] -1-oxo-2,4, pentadienil] piperidina]. La piperina ha sido históricamente
un componente de la dieta humana, y es responsable del característico efecto sensorial acre de la
pimienta. Se ha documentado que la piperina tiene varias funciones farmacológicas, como
antidepresivo, antiepiléptico, antiinflamatorio, antioxidante y propiedades anticonvulsivas​ ​(3-7)​.

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo general

1. Aislar al alcaloide piperina a partir de la pimienta negra (​P.nigrum​), empleando las

técnicas de extracción por reflujo y Soxhlet.

2.2 Objetivos particulares

2. Emplear la técnica de extracción por reflujo para la extracción de sustancias.

3. Emplear la técnica de extracción por Soxhlet para la extracción de sustancias.
4. Comparar ambos procedimientos.
5. Discutir la importancia de este producto natural en la salud humana.

3. MARCO TEÓRICO

3.1 Piperina

La piperina (1-piperoil piperidina) es un alcaloide que contiene nitrógeno, derivado de los frutos
de la pimienta larga (​Piper longum)​ , la pimienta negra (​Piper nigrum​) y otras especies de ​Piper

2
(familia: ​Piperaceae​), según se informa, el contenido de piperina en la baya entera varía de 2%
a hasta 9%, dependiendo de la variedad (3,8)​
​ .
La piperina fue aislada por primera vez del extracto de pimienta por Hans Christian Ørsted en
1819 y se extrajo como un compuesto cristalino amarillo. Se descubrió que la piperina es una
base muy débil, que por hidrólisis ácida o alcalina se descompone en una piperina básica volátil,
conocida como piperidina (C​5​H​11​N) y ácido piperico (C​12​H​10​O​4​). La 1-piperoilpiperidina
(piperina) existe como 4 estructuras isoméricas: piperina, isopiperina, chavicina e isochavicina,
como se ilustra en la Fig 1 (6-8)​
​ .

Figura 1. Estructura química de piperina y sus isóme​ros.

Las principales características físico-químicas de la piperina se encuentra listadas en la tabla 1

(9-10)​
.
Tabla 1. Características físico-químicas de piperina.

CARACTERÍSTICAS PIPERINA
FÍSICO-QUÍMICAS

Fórmula molecular C​17​ H​19​ NO​3

Nombre IUPAC (2E, 4E) -5- (1,3-benzodioxol-5-il) -1-piperidin-1-ilpenta-2,4-dien-1-ona

Número CAS Registry Number 94-62-2

Peso molecular 285.34 g/mol

Estado físico Sólido

Punto de fusión 131.5 °C

Punto de ebullición (predicción) 498.5±40.0 °C | Condition: Press: 760 Torr

3
Densidad (predicción) 1.211±0.06 g/cm3 | Condition: Temp: 20 °C Press: 760 Torr

pKa (predicción) -0.93±0.20 | Condition: Most Basic Temp: 25 °C

3.2 Biosíntesis de la piperina

La piperina pertenece a la clase alcaloide del metabolito secundario cuya biosíntesis es

probablemente iniciada por una secuencia de reacciones, es decir, condensación,
descarboxilación, desaminación oxidativa y ciclación. Las diversas investigaciones
sugieren que la ruta biosintética en ruta hacia la piperina involucraría al precursor de
​
aminoácidos L-lisina (14-15)​ .

Figura 2. (a) Biosíntesis de piperidina a partir de L-lisina (b) Reacción catalizada por piperidina
piperoiltransferasa de ​Piper nigrum​.

Esta biosíntesis no se ha probado; por lo que se han llevado a cabo varios estudios
enzimáticos basados ​en la biosíntesis de compuestos análogos, como la
cumaroilagmatina y la feruloiltiramina, lo que presenta una clara evidencia de que la
formación de este tipo de enlaces de amida ácida se puede cumplir a través de
​
intermedios derivados de acil-CoA (14-15)​ .

4
3.3 Importancia biológica de la piperina. Aplicaciones

La pimienta negra (​P. nigrum)​ se usa comúnmente como especia en las dietas humanas, pero
también se usa como medicina, conservante y perfume en muchos países asiáticos. Se sabe que
un extracto del componente fenólico activo, la piperina, proporciona efectos fisiológicos
beneficiosos. La piperina tiene diversas actividades biológicas y terapéuticas. Puede aumentar
dramáticamente la absorción de selenio, vitamina B y β-caroteno, así como otros nutrientes.
Puede estimular las enzimas digestivas pancreáticas e intestinales y también aumenta la
secreción de ácidos biliares biliares cuando se administra por vía oral. Tiene actividades
antiinflamatorias, antioxidantes, termogénicas, antipiréticas, analgésicas, insecticidas,
inmunomoduladoras, antitumorales, antidepresivas, antiapoptóticas, antitiroideas y quimio
preventivas. Además y aumenta la biodisponibilidad de una serie de medicamentos terapéuticos
(Fig. 3) (8-12-13)​
​ .

Figura 3. Efectos fisiológicos de la pimienta negra y la piperina.

3.4 Aislamiento de piperina

La piperina se obtiene mediante la extracción repetida de pimienta molida por disolventes

orgánicos volátiles, como etanol, acetona, éter, dicloroetano o acetato de etilo, y la posterior
eliminación del solvente bajo presión reducida a niveles lentos. En general, un método de
extracción ideal debe ser integral, rápido, simple y barato. Los métodos tradicionales de
extracción con solventes incluyen maceración, reflujo convencional y extracción Soxhlet. Estos

5
métodos generalmente requieren un tiempo de extracción prolongado y / o temperaturas
elevadas que imponen el riesgo de degradación térmica de los compuestos bioactivos
termosensibles . Además, el uso de una gran cantidad de solvente y una pobre selectividad de
extracción pueden agregar las desventajas de las técnicas de extracción convencionales. Las
técnicas modernas para la extracción de piperina son la extracción supercrítica de dióxido de
carbono (CO2), la extracción asistida por ultrasonido (UAE) y la extracción asistida por
microondas (MAE) (8,13)​
​ .

3.4.1 Reflujo convencional

En un montaje para reflujo se efectúa acoplando a la boca (o a una de las bocas) del matraz que
contiene la reacción un refrigerante de reflujo. A medida que se procede a la calefacción del
matraz, la temperatura aumenta evaporando parte del disolvente. Los vapores del mismo
ascienden por el cuello del matraz hasta el refrigerante, donde se condensa (por acción del agua
fría que circula por la camisa exterior) volviendo de nuevo al matraz. Esto establece un reflujo
continuo de disolvente que mantiene el volumen de la reacción constante (16)​
​ .

3.4.1 ​Soxhlet convencional

En la extracción por Soxhlet convencional, la muestra se coloca en un dedal -titular y durante la

operación se llena gradualmente con solvente fresco condensado de una destilación. Cuando el
líquido alcanza un nivel de exceso, un sifón aspira todo el contenido del portacartuchos y lo
descarga de nuevo en la destilación, llevando los analitos extraídos en el líquido a granel (17)​
​ .

(a) (b)
Figura 4. (a) Equipo para extracción por reflujo. (b) Equipo para extracción por Soxhlet.

6
3.5 Propiedades de los reactivos utilizados

A continuación se enlistan en las ​tablas 2 ​y ​3, ​las principales características físico- químicas de
los reactivos utilizados para obtener el aceite esencial por hidrodestilación de ​Piper nigrum,​
obtenidas de la base de datos de SciFinder y Pubchem.
➢ Diclorometano
Tabla 2. Características físico-químicas de diclorometano.

CARACTERÍSTICAS DICLOROMETANO
FÍSICO-QUÍMICAS

Fórmula molecular CH​2​Cl​2

Número CAS Registry Number 75-09-2

Peso molecular 84.93 g/mol

Estado físico Líquido

Punto de fusión 40 °C

Punto de ebullición -95 °C

Densidad 1.3255 20 °C/4 °C

13,200 mg/L at 25 °C
Solubilidad
Miscible en etanol, éter y dimetilformamida.

Reactividad Estable bajo condiciones ordinarias de uso y almacenamiento

Estabilidad Estable bajo condiciones normales.

Oxidantes fuertes, cáusticos fuertes, plásticos, caucho, ácido nítrico,

Incompatibilidad Metales químicamente activos, tales como aluminio y polvo de
magnesio, sodio, potasio y litio.

Figura 5. Estructura química y rombo de seguridad de diclorometano.

➢ Eter
Tabla 3. Características físico-químicas de éter.

CARACTERÍSTICAS ÉTER
FÍSICO-QUÍMICAS

7
Fórmula molecular (C​2​H​5​)​2​O

Número CAS Registry Number 60-29-7

Peso molecular 74.12 g/mol

Estado físico líquido

Punto de fusión -116 °C

Punto de ebullición 35 °C

Densidad 0.7134 a 20 °C/4 °C

pKa (predicción) -3.59

Miscible con alcoholes alifáticos inferiores, benceno, cloroformo, éter

Solubilidad de petróleo, solventes grasos, muchos aceites, acetona y etanol.

Reactividad Estable bajo condiciones ordinarias de uso y almacenamiento

Estabilidad Estable bajo condiciones normales.

Este compuesto forma peróxidos inestables en presencia de aire y luz

Incompatibilidad solar, los cuales explotan espontáneamente, especialmente cuando se
concentran durante una destilación.

Figura 6. Estructura química y rombo de seguridad de éter.

4. MARCO EXPERIMENTAL

4.1 Materiales y reactivos

En las ​Tablas 4-6 ​se encuentran los reactivos, materiales y equipos utilizados para realizar la
​
extracción de piperina de pimienta negra ​(Piper nigrum).(15,16,17)
La pimienta negra fue obtenida en El Mercado de Sonora, localizado justo al sureste del Centro
Histórico de la Ciudad de México en la colonia Merced Balbuena.
Tabla 4. Reactivos.

Reactivos

Pimienta negra Diclorometano Eter

8
Tabla 5. Equipos.

Equipos

Báscula digital Canastilla de calentamiento para matraz redondo

(Ohaus ® Scout- Pro. Modelo: SC2020. Serie: (Sin marca)
XNE20151053

Reóstato Parrilla de calentamiento y agitación

(Thermolyne. Barnstead International. Modelo: (Thermo scientific ® . Modelo: SP142020-33Q.
CN45515. Serie: 455051115569) Serie: 10164673)

Rotavapor
((mrc) Laboratory Equipment Manufacturer ® .
Modelo: ROVA-N2L. Serie: 15070107)

*Las marcas, series y modelo de los equipos se encuentran nombrados entre paréntesis.

Tabla 6. Materiales.

Materiales

1 Matraz bola de 250 mL 1 T de destilación

1 Refrigerante con mangueras 2 Matraces Erlenmeyer de 250 mL

1 Embudo Buchner 2 Vasos de precipitados de 250 mL

1 Matraz Kitasato de 250 mL 1 Probeta graduada de 25 mL

1 Varilla de vidrio 1 Pipeta Pasteur con bulbo de succión

Perlas de ebullición 1 Microespátula

1 Canastilla de calentamiento con Reostato 1 Recipiente para baño maría

1 Agitador magnético 1 Parrilla de calentamiento y agitación

magnética

1 Vaso de precipitado de 100 mL Cubreobjetos redondos

1 Mortero con pistilo

9
4.2 Metodología

Para llevar a cabo esta práctica, se determinó que los equipos 1 y 2 realizarían la técnica de
extracción con equipo Soxhlet y el equipo 3 la técnica por reflujo convencional, para al final
comparar los resultados obtenidos.
a) Técnica por reflujo convencional.
1. Se pesaron y se colocaron en el matraz bola de 250 mL redondo, 25 gramos de pimienta
negra finamente molida previamente con ayuda del mortero, se adicionaron 50 mL de
diclorometano (DCM) (se agregaron cuerpos de ebullición para regular el reflujo).
2. Se colocó el matraz bola en una canastilla de calentamiento con reóstato sobre una
parrilla de agitación. Colocar un refrigerante en posición de reflujo.
3. Se mantuvo el reflujo por 20 minutos. Una vez transcurrido ese tiempo, se dejó enfriar a
temperatura ambiente.
4. Con ayuda de un embudo Büchner, se filtró con vacío moderado para separar el material
vegetal.
5. Se realizar un par de lavados a la pimienta con porciones de 5 mL de DCM.
6. El filtrado se transfirió a un matraz bola de 100 mL y se concentra el extracto a
sequedad con rotaevaporador.
7. El residuo obtenido se colocó sobre un baño de hielo, y posteriormente se le agregó por
goteo y agitación constante de 10 a 15 mL de éter frío.
8. No se observó precipitación por lo que se siguió dejando en baño de hielo.

Nota 1 : ​Ya que no precipitó nada después del punto 7, se dió por terminada la práctica.

10
4.3 Diagrama de flujo

Diagrama de flujo 1. Aislamiento de piperina de la pimienta negra (​Piper nigrum)​ . Extracción por reflujo.

11
 5. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

Después de la extracción con reflujo convencional se obtuvo un aceite viscoso de color café
olivo, sin embargo no se logró aislar la piperina, esto pudo deberse a que los reactivos no se
encontraban en condiciones óptimas (sobre todo el éter) o no eran los adecuados para la técnica
empleada; debido probablemente a que en el extracto obtenido predominaron resinas existentes
en la pimienta negra; las cuales tendrían que eliminarse con lavados de n-hexano en el equipo de
reflujo antes del proceso de extracción con DCM, según lo descrito en otros métodos de
extracción encontrados en la literatura.
Con la extracción con equipo de Soxhlet tampoco se logró aislar la piperina y de igual manera
solo se obtuvo un aceite viscoso color café con apariencia gomosa, que después de ser tratado
con KOH no se sometió a una última filtración lo que suponemos afectó a toda la parte práctica
del aislamiento deseado; debido a que no pudo cristalizar aún cuando se dejó aproximadamente
una semana de reposo a sequedad, dejando como resultado dos fases acuosas, una más densa de
color café intenso y la otra de una tonalidad café-verde acuosa, se descartó totalmente la materia
obtenida sin éxito.
De manera general solo se pudo comparar el tiempo que tardan ambos procedimientos, siendo
más lenta la extracción con equipo de Soxhlet, que duró 1 hora, mientras que la extracción con
reflujo duró únicamente 20 min.

6. CONCLUSIONES

De acuerdo a los objetivos, no se logró aislar al alcaloide piperina con ninguna de las técnicas
empleadas. Se conoció de manera práctica los procedimientos del montaje usualmente
utilizados de las técnicas de reflujo y soxhlet, sin embargo no se pudo comparar cuál método
resulta más eficiente para obtener piperina.
Se revisó por medio de bibliografía la importancia de la piperina y sus diversas aplicaciones en
la industria alimentaria y farmacéutica como antidepresivo, antiinflamatorio, antioxidante y
propiedades anticonvulsivas.

7. REFERENCIAS
1. Ahmad, N., Fazal, H., Abbasi, B. H., Farooq, S., Ali, M., & Khan, M. A. Biological role of Piper
nigrum L. (Black pepper): A review. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2012; 2(3).

12
2. Ahmad N, Abbasi BH, Fazal H. Effect of different in vitro culture extracts of black pepper
(Piper nigrum L.) on toxic metabolites-producing strains. Toxicology And Industrial Health.
2016;32(3):500–6.
3. Shiyao Hua, Jiayue Liu, Yiwei Zhang, Juan Li, Xinhui Zhang, Lin Dong, et al. Piperine as a
neuroprotective functional component in rats with cerebral ischemic injury. Food Science &
Nutrition 2019;(11):3443
4. Ahmad, N., Fazal, H., Abbasi, B. H., Farooq, S., Ali, M., & Khan, M. A. Biological role of Piper
nigrum L. (Black pepper): A review. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2012; 2(3),
S1945–S1953.
5. El Hamss R, Idaomar M, Alonso-Moraga A. Antimuta-genic properties of bell and black
peppers. Food and Chemical Toxicology. 2003;41:41-7.
6. Pathak N, Khandelwal S. Cytoprotective and immuno-modulating properties of piperine on
murine spleno-cytes: an in vitro study. Eur J Pharmacol. 2007;576:160-70.
7. Meghwal, M., & Goswami, T. K. Piper nigrumand Piperine: An Update. Phytotherapy Research.
2013; 27(8), 1121–1130.
8. Gorgani, L., Mohammadi, M., Najafpour, G. D., & Nikzad, M. ​Piperine-The Bioactive
Compound of Black Pepper: From Isolation to Medicinal Formulations. Comprehensive
Reviews in Food Science and Food Safety, 2016, 16(1), 124–140.
9. National Center for Biotechnology Information. PubChem Database. Piperine, CID=638024,
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Piperine
10. SciFinder. A Cas Solution.
​https://bidi.uam.mx:3273/scifinder/view/scifinder/scifinderExplore.jsf
11. Bang JS, Oh DH, Choi HM, Sur BJ, Lim SJ, Kim JY, Yang HI, Yoo MC, Hahm DH, Kim KS.
Anti-inflammatory and antiarthritic effects of piperine in human interleukin 1beta-stimulated
fibroblast-like synoviocytes and in rat arthritis models. Arthritis Res Ther. 2009;11(2):R49.
12. Srinivasan, K.. ​Black Pepper and its Pungent Principle-Piperine: A Review of Diverse
Physiological Effects. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2​ 007, ​47(8), 735–748.
13. Vasavirama, K., Upender, K. Piperine: A Valuable Alkaloid From Piper Species. Int J Pharm
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14. Geissmann, T.A.; Crout, D.H. Organic Chemistry of Secondary Plant Metabolism; Freeman,
Cooper & Company: San Francisco, 1969, p.170.
15. Simon, K.O.; Henry, O.; Piperine-Type Amides, E. Review of the Chemical and Biological
Characteristics. Int. J. Chem., 2013, 5(3), 99-122.
16. H. D. Durts and G. W. Gokel. Editorial Reverté. Química Orgánica Experimental. 2010
17. Luque de Castro, M. D., & García Ayuso, L. E. (2000). ENVIRONMENTAL APPLICATIONS |
Soxhlet Extraction. Encyclopedia of Separation Science, 2701–2709.

13
 18. ANEXOS

8.1 Evidencias

Figura 7. Extracción por reflujo. Figura 8. Aceite viscosa café-olivo.

14