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Crecimiento en procariotes

En Procariotes, la palabra crecimiento se define como un aumento


en el número de células, en la mayoría de ellos el crecimiento se
realiza por fisión binaria.
Crecimiento celular en procariotes

En la mayoría de los
procariotas el crecimiento
ocurre por fisión
binaria,aunque en pocos
casos ocurre gemación y
formación de
conidias(Actinomicetos)
Fisión binaria

Durante el ciclo de
crecimiento todos los
componentes celulares
aumentan. De modo que
cada célula hija recibe un
cromosoma completo y
suficientes copias de
macromoléculas, etc. para
sobrevivir de manera
independiente
Proteínas Fts

Durante la división celular intervienen varias


proteínas que han sido llamadas: Fts,
filamentous temperature sensitive
Se encuentran ampliamente distribuidas en
procariotas incluyendo Arqueas
FtsZ tiene una estructura similar a la tubulina
(división celular de eucariotas).
Proteínas Fts
Estas proteínas
forman en la
célula un aparato
de división que se
denomina
divisoma, cuya
formación
comienza con la
unión de las
moléculas FtsZ
formando un anillo
alrededor del
cilindro celular
hacia el centro de
la célula
Anillo Ftz

Durante la división celular una amplia cantidad de proteínas


citoplasmáticas se reclutan en el ecuador bacteriano e inician su
interacción lo que conduce a la formación de un anillo FtsZ. La
imagen representa el orden de reclutamiento siendo FtsA y ZipA las
primeras en reclutarse y AmiC la ultima
FtsZ se encuentra en diferentes
puntos del citoplasma y
desaparece de éste en el
momento de la división celular
ubicándosele en el centro
formando el anillo
Anillo Ftz

FtsZ tiene actividad enzimática y es capaz de


hidrolizar GTT para liberar energía para
polimerizar y despolimerizarse.
Actualmente existen numerosas
investigaciones sobre estas proteínas
tendientes a desarrollar nuevos compuestos
para inhibir su actividad.
Cuando la célula se alarga se sintetiza la nueva pared celular. Este
material se añade a la pared preexistente sin que se pierda la
integridad celular.
En la zona del anillo FtsZ se forman poros que son creados por
autolisinas presentes en el divisoma. El nuevo material se
añade a través de estas aberturas.
A medida que progresa la elongación celular las dos copias del cromosoma
se separan y cada uno termina en una célula hija. Cuando ocurre la
constricción, el anillo FTsZ comienza a despolimerizarse y se dispara la
síntesis de pared celular para sellar una región con la otra.
La unión entre el
peptidoglucano
nuevo y antiguo
forma un borde en
las bacterias Gram
positivas similar a
una cicatriz
Proteínas Min La replicación del DNA ocurre
antes de que se forme el anillo
FTsZ, el cese de esta síntesis
parece ser la señal para la
formación del anillo y esta
estructura aparece precisamente
en el espacio situado entre los
dos nucleoides.
La localización del punto medio
real parece ser debida a una
serie de proteínas llamadas Min,
especialmente MinE
A medida que progresa la
elongación celular las dos copias
del cromosoma se separan y
cada uno termina en una célula
hija.
CITOESQUELETO EN PROCARIOTES

De la misma manera que existen proteínas que dirigen la división


celular, existen proteínas específicas que determinan la forma celular,
dentro de ellas se encuentra las proteínas MreB y CreS
MreB es una especie de actina que forma filamentos dinámicos y se
localiza en la cara interna de la membrana celular.
El sistema Mre BCD son proteínas que participan en la segregación del
material genético celular durante el crecimiento
CITOESQUELETO EN PROCARIOTES

MreB forma polímeros


sólo si se encuentra en
presencia de ATP o GTP
en forma similar a actina,
se requieren 8000
moléculas de MreB para
ensamblar un polímero
de 41 micrómetros de
longitud.
Crescentina

Caulobacter crescentus
Proteína ParM

Particionan los plásmidos de DNA en la división bacteriana,


en un mecanismo análogo al de los microtúbulos en la
mitósis de eucariotes.
Crecimiento celular en bacterias
• Crecimiento es el aumento en el número de células
microbianas de una población y puede medirse como un
incremento de la masa celular.

• La velocidad de crecimiento: es el cambio en el número de


células o masa celular por unidad de tiempo

• Tiempo de generación: es el tiempo que tardan en formarse


dos células a partir de una.
El tiempo necesario para completar un ciclo de crecimiento
celular depende tanto de factores nutricionales como
genéticos. (E. coli 20 min. Mycobacterium 24.6 h).
Crecimiento en procariotes

• Temperatura

Condiciones para • Requerimientos de


el desarrollo de oxígeno
los
microorganismos • pH

• Concentración de
solutos (Nutrientes,iones
etc.)
Temperatura

• Psicrófilos:
Microrganismos cuya
temperatura óptima
de crecimiento es
<15°C.

• Psicrotolerantes:
Microorganimos que
crecen a 0°C pero
cuya temperatura
óptima de crecimiento
es de 20-40°C.
(Bacterias, algas ,
hongos,
protozoarios).
Temperatura

• Mesófilos
Microorganismos
cuya temperatura
óptima es de 35°C. Se
desarrollan en un
intervalo de 9-45°C
• Se encuentran en
animales de sangre
caliente acuáticos o
terrestres.
Temperatura

• Termófilos
Son microorganismos
cuya temperatura
óptima de crecimiento
es > 45°C, se
desarrollan en un
intervalo de 45-80°C.
Se encuentran en aguas
termales.
Temperatura

• Hipertermófilos: son
microorganismos
cuya temperatura
óptima de crecimiento
es >80°C
• Microorganismos que
se encuentran en
Geisers, chimeneas
submarinas, etc.
Temperatura
Requerimientos de oxígeno

Los microorganismos muestran una gran


diversidad en cuanto a su capacidad para utilizar
el oxígeno libre (O2) durante la respiración
celular.
Estas variaciones en cuanto a los requerimientos
de oxígeno refleja las diferencias que presentan
en cuanto a sus sistemas bioxidativos.
• Aerobios (21% O2 o más)

• Microaerofilicos (2-10 % O2)

Requerimientos • Anaerobios facultativos


de oxígeno
• Anaerobios aerotolerantes

• Anaerobios estrictos
Microorganismos aerobios

• Necesitan el oxígeno
atmosférico para
poder crecer.
• Emplean el oxígeno
como último aceptor
de electrones durante
la respiración
• Ejemplos: Bacillus,
Pseudomonas, etc
Microorganismos microaerofílicos
• Requieren poca cantidad
de oxígeno para su
desarrollo (2-10 % O2).
• Un exceso de oxígeno
bloquea la actividad de
sus enzimas y provoca
la muerte de los
microorganismos.
• Ejemplo:
Campylobacter jejuni,
Neisseria,
Mycobacterium, etc
Microorganismos anaerobios facultativos

• Estos microorganismos
crecen en tanto en
presencia como en
ausencia de oxígeno,
empleándolo durante la
respiración aerobia.
• En ambientes carentes
de oxígeno realizan
respiración anaerobia
utilizando NO3- y SO4 2-
como aceptores finales
de electrones.
• Ejemplos: Las
enterobacterias
Microorganismos anaerobios
aerotolerantes
• Son microorganismos
que crecen en presencia
de oxígeno, pero no lo
utilizan para su
desarrollo. Emplean
compuestos orgánicos
como aceptores de
electrones.
• Fermentan los
carbohidratos a ácido
láctico
• Ejemplo Lactobacillus,
Streptococcus.
Reducción del oxígeno

Durante el metabolismo normalmente se producen


especies reactivas de oxígeno
Microorganismos aerobios y aerobios
facultativos
Superóxido
2O2- + 2H+ H 2O 2 + O 2
dismutasa

Superóxido
O2 1- +2H+ + Cit.c. red. H2O2 + Cit.c.ox.
reductasa
Microorganismos aerobios y aerobios
facultativos
Peroxidasa
H2O2 + NADH + H+ 2H2O + NAD

Catalasa
2H2O2 2H2O + O2
Los anaerobios carecen de estas enzimas por lo que
cantidades pequeñas de oxígeno resultan letales para
estos microorganismos ,Ejemplos: Clostridium.

Clostridium Clostridium Clostridium


cadaveris sporogenes bifermentans
Requerimientos de oxígeno

a.Aerobios estrictos

b. Anaerobios

c. Aerobios facultativos

d.Microaerofílicos

e.Anaerobios aerotolerantes
Requerimientos de oxígeno

Para el cultivo de anaerobios estrictos se utilizan cámaras


saturadas de CO2 ó N2 .
Efecto del pH
• Acidófilos (3-6.5)

pH
• Neutrófilos (7-7.5)
Óptimo de
crecimiento
• Alcalófilos (7.6 –10)

Acidófilos: Acidithiobacillus, Thermoplasma y Ferroplasma

Neutrófilos: La mayoría de las bacterias

Alcalófilos: La mayoría pertenecen a Archea y algunas


especies de Bacillus
Casi no existen microorganismos que crezcan a pH < 2 ó >10
pH

Spirullina platensis
Efecto de la presión osmótica

• Halófilos discretos S. aureus


Concentración de (1-7.5 % NaCl)
solutos (NaCl) • Halófilos moderados ( 6-15%
NaCl)
• Halófilos extremos (Mayor
15% NaCl)

Dunaniella salina
Efecto de la presión osmótica

Halófilos: Organismos cuyo aw óptimo es parecido


al del agua de mar (0.98).Requieren NaCl para
crecer.
Halotolerantes: Soportan alguna reducción de su
aw óptimo, no requieren NaCl para crecer pero lo
pueden hacer en su presencia

Osmófilos: Organismos capaces de crecer a altas


concentraciones de azúcares
Saccharomyces
boulardii

Xerófilos: Organismos capaces de crecer en


ambientes muy secos (aw 0.7 )
Efecto de la disponibilidad de agua

Actividad de agua (aw): Disponibilidad del agua

Presión de vapor del aire en


equilibrio con una sustancia

Actividad de agua =
aw Presión de vapor del agua pura a la
misma temperatura
Xeromyces bisporus
Crecimiento celular en procariotes

Condiciones para el desarrollo de


los microorganismos
Medidas de crecimiento microbiano

Recuento de células totales Recuento de células


(Directos) viables (Indirectos)

• Conteo microscopico • Recuento en placa


• Método de Breed • Extensión superficial
• Cámara de Petroff Hausser • Vertido en placa
• Nefelométrico (Turbidimétrico) • Miles-Misra
• Contadores electrónicos • Número más probable(NMP)
• Biomasa
• Filtración
Conteo microscópico
Método nefelométrico
Extensión superficial
Vertido en placa
Vertido en placa
Desventajas:
•Poca cantidad de
bacterias en la
muestra.
•Diluciones mal
hechas.
•Medio muy
caliente.
•Mala
homogenización.
•Error al contar.
•Error en los
cálculos.
Cuentacolonias
Es necesario tener
entre 30 y 300
colonias para que el
conteo sea confiable,
la cuadrícula del
aparato nos hace
más fácil y
sistemática la
cuenta.
En este ejemplo, no
se tiene éste número
de colonias, por lo
que se reporta
incontables y se
realizan diluciones
de la muestra.
En este ejemplo, no se realizó una distribución homogénea de la
muestra, se tiene el crecimiento sobra las orillas de la caja y en películas
que no permiten el conteo de UFC, se debe repetir el ensayo.
En este ejemplo,
no se realizó una
distribución
homogénea de la
muestra, se tiene el
crecimiento en el
centro, en una
película que no
permite el conteo
de UFCs, se debe
repetir el ensayo.
Conteo de UFC

10-5
10-4

En este ejemplo, el
ensayo se realizó
correctamente, la caja
que se elige es la de la
dilución 10 -5, se
reporta: 87x105
UFC/ml. 10-6
Método de Miles y Misra

Se vierten gotas de la suspensión en una caja Petri dividida


en cuadrantes, se cuentan UFC

• Gran cantidad de
microorganiamos en
la muestra.
Ventaja
• Duplicado o triplicado
en la misma caja.
• Muestras líquidas y
sólidas.
Muestras líquidas
Filtración
Sin sólidos
Baja cantidad de
microorganismos
12 UFC/100 ml
NÚMERO MÁS PROBABLE NMP

En esta técnica a través de un modelo estadístico


de probabilidad, se realiza la determinación del
número más probable de microorganismos viables
en una muestra. Se aplica al análisis de muestras
de agua, hielo y otros alimento donde se considera
que la carga microbiana es muy baja.
NÚMERO MÁS PROBABLE NMP
NMP

El resultado de tubos positivos del ensayo descrito se


interpola en la siguiente tabla para dar el resultado final:
Otras medidas de crecimiento
microbiano
•Determinación de peso húmedo
•Determinación de peso seco
•Determinación de nitrógeno total
•Determinación química de un ácido nucleico
•Incorporación de precursores radiactivos
Curva de crecimiento

Cuando se grafica el logaritmo base 10 de la velocidad de


crecimiento de un cultivo contra el tiempo, se obtiene la curva ce
crecimiento del cultivo, en la que se observan sus diferentes fases.
Fases del crecimiento
• Latencia: Puede ser breve o larga depende de las
condiciones de crecimiento y de tipo de célula. Durante
esta fase existe un aumento en el metabolismo.

• Exponencial: ocurre la división celular (duplicación) esta


influenciada por factores ambientales (temperatura,
composición del medio, etc.

• Estacionaria: No hay aumento ni descenso de la población


celular. En ocasiones puede haber un lento crecimiento
celular y muerte celular (equilibrio). Disminuye el nutriente
esencial y hay acumulación de productos.

• Muerte: Puede ir acompañada de lisis celular


(a) Datos de una población que se duplica cada media hora (g=30 min).
(b) Datos representados en una escala aritmética (curva verde, ordenada de la izquierda) y en
una escala semilogarítmica (curva roja, ordenada de la derecha). Es más cómodo usar la
escala semilogarítmica..
# de # de
log2N log10N
generaciones bacterias
0 1 or 20 0 0
1 2 or 21 1 .301
2 4 or 22 2 .602
3 8 or 23 3 .903
4 16 or 24 4 ...
5 32 or 25 5 ...
n 2n n .301n

n= 9-3 = 19.93
0.301

n = Número de generaciones
Nf = Concentración final de células (ejem. 109/ml)
No = Concentración inicial de celulas (ejem. 103/ml)

0.301 es el factor de conversión de log2 a log10


Cultivo cerrado

• El cultivo cerrado se realiza en


sistemas con medio de cultivo en
volumen fijo no renovado.
Es decir el crecimiento ocurre hasta
que el medio de cultivo modificado
por los microorganismos ya no
permite su desarrollo.

• En cultivos cerrados la concentración


de nutrientes afecta la velocidad de
crecimiento
Cultivos continuos:Quimiostato

• Para el cultivo continuo se utiliza un


sistema abierto con volumen constante al
que se adiciona medio de cultivo fresco
para renovar el que ha sido usado por los
microorganismos.

• En éste tipo de cultivo se trata de conservar


la población en constante crecimiento ,es
decir en fase logarítmica.

• El quimiostato es el aparato que se utiliza


para obtener un cultivo continuo, controla la
densidad celular y la velocidad de
crecimiento.
Cultivos continuos: Quimiostato

a) La velocidad de dilución

Factores a b) La concentración del


considerar nutriente que actúa como
factor limitante (Fuente de C
ó N).
Cultivos continuos: Quimiostato

Ventajas :
•Permite mantener al
cultivo en fase exponencial
durante días e incluso
semanas.
•Pueden aislarse
microorganismos.

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