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PRINCIPALES NUCLEOS BASE

JAIRO ALVIS
MARIO CASTILLEJO
JEAN CHARRIS
PAOLA LACOMBE
KAREN MARQUEZ
ALFONSO MORENO
EDSON OJEDA
JAIME PASTOR
JOHAN RAMIREZ
ROGER RIVERA
LINSAY RODRIGUEZ
HENRY SEGURA
FABIAN SILVA
LUIS URQUIJO

Presentado al Profesor de
Fitoquímica:
CATALINO DE LA ROSA TORRES
VI SEMESTRE

FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA


UNIVERSIDAD DEL ATLANTICO
BARRANQUILLA
2004
COUMARINAS

 Definición.
Las coumarinas son metabolitos típicos de las plantas superiores y algunos pocos
microorganismos, su núcleo es benzo 2 pirona o benzo o benzo α pirona, en general son
lactonas insaturadas y comprenden otra clase de compuestos C6 C3 de los cuales una
gran cantidad derivan del ácido shikimico.
Se encuentran difundidas principalmente en las familias Apiaceae, Papilonaceae,
Rutáceas, Lamiaceae, Asteraceae, Solanáceae y Gramíneae.

 Clasificación.
Las coumarinas se clasifican en:
 Coumarinas simples.
 Coumarinas complejas. (furanocoumarinas y piranocoumarinas)
 Coumarinas diversas.

Las coumarinas simples pueden tener sustituciones oxigenadas en las posiciones C6, C7
y/o C8 como se muestra en la siguiente tabla.

R6 R7 R8 Nombre
H H H Coumarina
H OH H Umbeliferona
H OCH3 H Herniarina
OH OH H Esculetina
H OH OH Dafnetina
OCH3 OH H Escopoletina
OCH3 OH OH Fraxetina
ESTRUCTURAS

5 4
HO
3
6

7
O O2 O O
8
1 Umbeliferina
Coumarina

O O
O O O O
Psoroleno Colombianetina

OH

CH3O

O O O O O
Xantiletina
Suberosina

También se clasifican dependiendo del origen biogenético y se dividen en 3 tipos:

O O
Coumarina Normal
O O
4 Alquilcoumarina
O O
Isocoumarina
 Coumarinas normales: originadas a partir de un ácido cis-cinámico oxigenado en
C2.
 Isocoumarinas; derivan de una biosíntesis mixta aceta0to – shikimico.
 4-alquilcoumarinas: derivan de vía acetato. Son pocos frecuentes en el reino
vegetal.

Las coumarinas también se clasifican dependiendo del tipo estructural.


 Coumarinas simples (coumarinas lineales) Donde el anillo fundamental posee
otro ciclo extra, derivado del isopreno o de un aminoácido .Se subdividen en :
Furánicas: Se cierra a nivel de C6 o C7 un anillo de furano, el
cual puede tener un grupo isopropilo ocasionalmente oxigenado, el anillo de
furano esta insaturado.
Piránicas: Se cierra a nivel del C6 un anillo de pirano.

 Coumarinas angulares: Se presentan 2 clases:


Furanicas: anillo de furano cerrado en C5 o C8.
Piránicas: anillo de pirano cerrado en C5 o C8.

El anillo de pirano o de furano también puede estar situado en el doble enlace de la delta
lactona, aunque no son muy usuales.

O O
O O O O
Lineal furanica
Angular furanica

OH

O O O
Lineal piranica O O O
Agular piranica
 Característicasestructurales más usuales en las coumarinas:
 Poseen 2 o 3 grupos OH
 Es muy usual encontrar cadenas de isopreno libres o cicladas. Los isoprenos
libres pueden estas unidos directamente al núcleo de la Coumarina (enlace C-C) o
bien, mediante un puente de oxígeno.
 Varias unidades de isopreno pueden unirse entre sí o poseer grupos OH,
insaturaciones o epóxidos.
 A nivel de los carbonos C-3 y C-4 no es muy frecuente encontrar sustituyentes
diferentes a furano o pirano, excepto en el caso de coumarinas de hongos. Así
mismo, la posición C-5 raramente está sustituida.
 Raramente se encuentra coumarinas en forma de glucósidos.

 Usos.
Pese a su abundancia en la naturaleza y a su diversidad estructuras, su papel fisiológico
solo se conoce parcialmente. Puede ser anticoagulantes como el dicoumarol y la
Coumarina, espasmolíticas e hipercolesterémicas o inhibidoras del crecimiento vegetal.
Biosíntesis.
Esta se origina por vía del ácido shikimico.

O O

OH OH

HO ácido p-cumárico H2O2 HO ácido p-cumárico


H H

Perooxidasa
O
O
. . OH
OH

O .
OH
H2O
O
.
OH

OH
OH

O HO O O HO O

OH
OH

HO O O HO O O
H H

HO O O
La biogénesis de las coumarinas complejas, puede proceder de una ciclizacion de una
Coumarina simple previamente prenilada.

CH2PP
HO O O

H H

CH2
O O O

OH

O O O

NADP
HO O O O

O O O
psoroleno
Coumarinas diversas.
El dicoumarol se forma por fermentación bacteriana de treboles y pasto .Esta Coumarina
antagoniza con la protombrina y otras proteínas necesarias para la coagulación de la
sangre, presentando un problema para el ganado, es utilizado comercialmente en
venenos para ratas.

OH OH

O O O O

Dicoumarol

Todo empieza por la adición de un OH en C4 de una Coumarina sencilla, para


condensarse con formaldehído y con otra molécula de cumarina hidroxilada ven C4, para
luego enolizar el grupo ceto.
O
OH
H C H OH
OH
CH2

H2O
O O O O

OH OH
CH2

O O O O

OH O

O O O O

OH OH

O O O O

Dicoumarol
 Aislamiento.
El empleo sucesivo de disolventes de polaridad creciente ha dado buenos resultados. Así,
el éter de petróleo o el éter etílico extraen aceites que ayudan a solubilizar las
coumarinas, por lo que frecuentemente cristalizan durante las extracciones con soxhlet o
al concentrar la solución etérea. Los ácidos se pueden separar de las coumarinas
mediante soluciones de bicarbonato de sodio que la solubilizan. Las coumarinas son
solubles en soluciones acuosas o alcohólicas de hidróxido de sodio. Los glucósidos
coumarínicos se pueden extraer con metanol o etanol particularmente después de la
extracción con éter de petróleo, pudiendo cristalizar durante la concentración o después
de tratamientos especiales. Como el de las sales de plomo. Los glucósidos se pueden
hidrolizar por tratamiento con ácidos o enzimas, y recuperarse después la aglicona, al
identificar los azucares mediante la cromatografía en papel y formación de derivados.
Además deberá intentarse aislar e identificar el glucósido, aprovechando su polaridad y la
fluorescencia de las coumarinas vistas con luz ultravioleta. La técnica de sublimación solo
es recomendable cuando se sabe que la Coumarina non es termolábil.

 Obtención.
Extracción con Etanol = En Soxhlet
Extracción con Éter de Petróleo = Forma continua
Extracción con Éter etílico = En Soxhlet
Extracción con acetona =forma continua.

 Reacciones coloridas.
Las coumarinas tienen fluorescencia azul cuando se expone a la luz UV, las que tienen
oxigeno en la posición n pueden exhibir fluorescencia hasta con luz visible, cuando se
trata de con H2SO4.
Las que tienen hidroxilos fenólicos pueden unirse con las sales de diazonio, derivadas del
ácido sulfanílico o la p-nitroanilina dando compuestos coloridos.
Se colorean con el reactivo de Emerson (0,5% Na2Co3, 0,9% 4 amino antipirina, 5,4%
ferrocianuro de potasio en agua); las coumarinas son lactonas por ello se pueden disolver
en soluciones alcalinas acuosas o alcohólicas con aparición de una coloración amarilla
esta desaparece al acidular.
La presencia de un grupo furano se determina mediante la prueba Ehrlich (En una
solución al 3% de p-dimetil alaminobenzaldehido en etanol y después cloruro de
hidrógeno gaseoso, formándose una coloración naranja)

 Cromatografía.
La mayoría de las cumarinas carecen de la polaridad adecuada para separarse por CP,
pero se utiliza para algunas cumarinas se utiliza papel Whatman #1, se utiliza como FM
ácido acético-agua (98:2) v/v ó dimetilformamidaetanol (4:6) v/v. Seco se observa con luz
ultravioleta o se aplican agentes cromogénicos como el de Emerson.
También se utiliza la cromatografía en C. delgada se utiliza para determinar y aislar
cumarinas.
El adsorbente más usado ha sido la gel de sílice y los sistemas de disolventes son
variados eter de petróleo - acetato (100:3); tolueno – formiato de etilo – ácido fórmico
(5:4:1); cloroformo – metanol (9:1); cloroformo – acetato de etilo (1:1) y hexano – acetato
de etilo (3:1) v/v.
Las manchas se localizan con luz ultravioletas, con reactivos de los utilizados en la CP o
con soluciones al 10% de tricloruro de antimonio en cloroformo. El reactivo de Ehrlich, se
utiliza paralocalizar furocumarinas cubriendo, con una niebla de la solución del reactivo y
después dejándola 10 horas en una atmósfera con cloruro de hidrógeno.

 Características espectrales.
- UV.
Coumarina

O O
278 y 310 240 y 250
nm nm

En las cumarinas se han observados bandas de absorción bien definidas, al sistema de


benzo pirona a 278nm y 310nm.
Las cromonas absorben fuertemente a 240-250 nm. La presencia de grupos metilo
modifica poco al espectro, los hidroxilo poseen un fuerte efecto batocromico. Los grupos
de pirano muestran bandas a 266nm y 348nm y los de furano absorben a 240 nm, 290
nm, 342nm. En medio alcalino poseen un fuerte efecto batocrómico y uno hipercrómico.

266 y 348
nm

O O O
Santiletina

240, 290 y
348nm
O O O
Psoroleno

- IR.
El espectro infrarrojo permite localizar el grupo lactona que absorbe a 1715-1745 y 1130-
1160cm-1 junto con una banda de doble enlace conjugado con anillo aromático a 1625-
1640cm-1. Las bandas de aromáticos caen en la región de costumbre a 1600-1650cm-1 ,
la banda del enlace C-o del furano cae entre 1253-1274cm-1

O O O
1253-1274
O O
17000-1750
cm-1 - RMN H+
cm-1
El protón del C-4 absorbe a campos más bajos (7.60 ppm) el C-3 6.20 ppm, saliendo
ambos como dobletes con J = 9.0 – 10Hz; dado que en estas posiciones no es frecuente
encontrar sustituyentes.
Cuando hay 2 protones en C5 y C8 se observa dos dobletes si hay uno solo en C5 un
singlete. Cuando hay 2 protones en C5 y C6 aparecen dos dobletes.
Los dos protones del sistema furano dan dobletes en 7.57 – 7.64 y 6.77 – 6.92.
7.5-8.3

6.1-6.4

O O

RMN C13

128 143.6
118
116.4
124
160.4
113.1 153 O O
116

- Espectro de masas.
Hay una pérdida sucesiva de 2 fragmentos de masa 28 cada uno, que corresponden a la
pérdida de los 2 oxígenos de lactona.

CO CO
+
O O O
masa 146 90
118

Recopilado por: Karen Márquez. Código: 451011020


BIBLIOGRAFIA
DOMINGUEZ, Xorje Alejandro. MÉTODOS DE INVESTIGACIÓN FITOQUÍMICA. Editorial
Limusa. Arcos de Belén, México. 1973. pp. 111-116.

BRUNETON, Jean. ELEMENTOS DE FITOQUÍMICA Y FARMACOGNOSIA. Editorial


Acribia. Zaragoza, España. pp. 134, 135, 142, 143.

Hppt: //www.amart@muiscas.udea.edu.co//. MARTINEZ, Alejandro. Aceites esenciales.


Facultad de Química y Farmacia. Universidad de Antioquia. Medellín.
SESQUITERPENLACTONAS.

 Definición.

Son una clase de sesquiterpenoides con un anillo lactónico, poseen un esqueleto


fundamental con 15 átomos de carbono, que teóricamente deriva de la unión de tres
fragmentos de isopreno, unidos por cabeza y cola, y algunos productos de transposición
(pseudoguaianólidos).

Por deshidrogenación pueden formar derivados del naftaleno como ocurren los de tipo
Eudesmanólido, Germacranólido, Eremofilanólido y Drimanólido, y los de tipo Guaianólido
y Pseudoguaianólido que forman derivados del azuleno.
14
1 9
2 8
10
7
3 13
5 6
4 11

15 O 12 O
O O
Germacranólido Eudesmanólido

O R
R
O Drimanólido
Eremofilanólido (Amaranthaceae)

14

2
1 10 9
3

8
4 5
6 7
15

O 11 13
12 O

O O
Guaianólido Pseudoguaianólido
 CLASIFICACIÓN.
Se realiza con base a su esqueleto carbocíclico como derivados del Germacranólido.

O
O
Elemanólidos O Bakenólidos

O
O

O O
Eremofilanólidos
O O
Germacranólido Eudesmanólido

Ambrosanólidos
O

O
Guaianólido Xantanólidos
O

Pseudoguaianólido
O

O
 Biosíntesis.
Las sesquiterpenlactonas se originan a partir de Farnesil pirofosfato, al igual que los
sesquiterpenos.

CH3 CH2 O P P
C CH2O H3C
P P C CH
H2C C
H H H3C
Pirofosfato de isopentilo Pirofosfato de dimetilo

H3C
C CH CH2 CH2 C CH CH2OP2O4 Geranil pirofosfato
H3C CH3

+ Pirofosfato de isopentilo

Farnesil pirofosfato
(catión)
+

 Lactonización. El anillo de la lactona se forma a partir del grupo isoprenilo de un


sesquiterpeno, se produce el cierre del anillo en el C-6 o en el C-8.

8 8
Oxidación
13 7
7 11
6
6
COOH
12

8 O
O
O
7
O 6

OH en posición C-6 OH en posición C-8


La estructura del producto bicíclico, depende de la conformación inicial adoptada por el
macrociclo y de la posición de los dobles enlaces que permiten ciclaciones electrofílicas
intramoleculares variadas: la enzima implicada en la reacción actúa como matriz para el
precusor acíclico y condiciona la estereoespecificidad del proceso.
Generalmente la ruta biogenética para las sesquiterpenlactonas es desconocida, se
plantean rutas biomiméticas.

HO R
H
+
Eudesmanos

OH

+
H H R
H
Guaianos R Elemanos

+
H

R
R
H
H

Eremofilanos

Se pueden presentar variaciones secundarias en las estructuras, encontrándose:

 Sobre la cadena isopropilidénica, que puede ser el origen de una -lactona ciclada
en 6 o en 8, en cis o en trans.
 Sobre los matilos vinílicos se pueden encontrar función epóxido, aldehído, alcohol,
ácido carboxílico.

 También se pueden encontrar las insaturaciones en C-1 y en C-4 reducidas u


oxidadas.

OAc

O
O O

O O

Xantinina Xantalina

O
O
O
O
HO
O
O
Carabrona Psilostachiina
O

 Usos.
Son sustancias amargas, de farmacología poco conocida, provenientes de plantas
reportadas como medicinales. La Amatalina es usada como un analgésico y la Santonina
como amebicida. Algunas poseen acción citotóxica que está relacionada con el grupo
metilenbutenólido, el cual modifica el crecimiento de los vegetales.
O H

H
O
HO O
H O
O
Amatalina Santonina O

 Distribución y estado natural.


Se han encontrado en extractos florales o partes aéreas de la familia de las Compuestas,
aunque se han encontrado en otras pocas plantas de familias como Magnoliáceas,
Umbelíferas y Lauráceas. Ejemplo: Semen contra, Aretemisia cina Berg. Compositae.
Bardana, Arctium majus Bernh. Compositae.
Se encuentran principalmente en forma libre, sin asociarse con azúcares.

 Técnicas de obtención.
Debido a que la gran mayoría de sesquiterpenlactonas se encuentran en forma libre en
las plantas que las poseen, tienen la propiedad de solubilidad característica de la gran
mayoría de los terpenoides y son, por lo tanto solubles en solventes con mediana o baja
polaridad como el cloroformo, el diclorometano, el benceno, el éter etílico, etc., siendo el
cloroformo el más usado para su extracción.
Se obtienen usando material vegetal seco y molido macerando con cloroformo por 48
horas.
 Reacciones coloridas de identificación.

 Prueba para ésteres: Identifica - lactonas.

O O

R C O R' + NH2OH R C O R' + R'OH


ácido hidroxámico
O
R O
C
3R C O R' + FeCl3 Fe + HCl
H N
O
violeta
A la solución etanólica del compuestos e añade, solución metanólica 2N de
clorhidrato de hidroxilamina y una gota de KOH 2N. se calienta, se enfría, se acidula
con HCl 0.5N y se añade FeCl3 1%. Se observa un color violeta, si la prueba es
positiva.

 Prueba de Legal: Identifica lactosas α-β insaturadas y β- lactonas.


La sustancia se disuelve en piridina (2 o 3 gotas), se añade 1 gota de nitroprusiato de
sodio al 0.5% y se añade luego gota a gota, 4 gotas de solución de KOH 2N. se
observa coloración rosa si la prueba es positiva. Controlar el pH para evitar
isomerización.

 Prueba de Baljet: Consiste en dos soluciones: la solución A (1g de ácido pícrico en


100mL de etanol) y la solución B (NaOH 10%).
Se toman 2 a 3mg del compuesto y se añaden de 3-4 gotas de cada solución. Se
observa coloración naranja o roja oscura, si la prueba es positiva.

 Separación y análisis cromatográfico.


Las sesquiterpenlactonas pueden separarse y analizarse bien sea por cromatografía en
columna o cromatografía en capa fina, utilizando silica gel y eluentes como:

 Cloroformo: Metanol (9:1)


 Cloroformo: Éter etílico (4:1), (5:1)
 Benceno: Acetona (4:1)
 Benceno: Acetato de etilo (5:5), (1:1)

Como agentes reveladores se pueden utilizar:


 H2SO4 concentrado y calor
 Vapores de I2
 Luz UV de 254nm
 KMnO4 al 1%

También se pueden separar y analizar por HPLC.


 Características espectrales.
1. Espectro Ultravioleta. La absorción depende las insaturaciones conjugadas que
posea la molécula.
 Lactonas α-β insaturadas muestran una intensa banda terminal entre 205 y 225nm.
 La presencia de sistema de ciclohexanona (eudesmanólidos) o de ciclopentanona
origina máximos de absorción entre 214-230nm.

2. Espectro Infrarrojo.
 Lactonas saturadas: 1770cm-1
 Lactonas α-β insaturadas: 1750cm-1
 Anillo ciclopentanona: 1740-1620cm-1
 Anillo ciclohexanona: 1690cm-1
 Exometileno que forma parte de la lactona α-β insaturada: 1665, 1405, 905 y 890cm-1

5 H H H H
4

6 7
O O

O O
Sistema I Sistema II

14
9
H
O
10 8
O H
7
5
6
H 13
Sistema III Sistema IV
+ 13
3. RMN H Y C.
 Los grupos metilenos terminales aparecen como dos dobletes entre 6.0-6.2ppm
con J =3 Hz.
 El grupo metilo en C-3, exhibe un doblete a 1.14 ppm con J =7 Hz.
 En el sistema I, el protón 6 aparece como un doblete entre 2.4-5.0 ppm con J =10
Hz. El protón 7 aparece como multiplete alrededor de 3.4 ppm.
En el sistema I los protones 6 y 7 aparecen como dobletes o multipletes según el
número de protones del C-4.
 En un sistema III, los protones 7 y 8 aparecen como tripletes a 4.5 ppm.
 Los metilos unidos a carbonos secundarios aparecen como dobletes entre 1-1.2
ppm con J =7 Hz.
 Los metilos ligados a carbonos terciarios aparecen como singletes a 0.7-1.2 ppm.
 Los metilos unidos a un sistema IV aparecen como dobletes a 1.9ppm con J =1.5
Hz y el protón vinílico aparecen como un triplete a 5.5 -5.7 ppm.
 Los pseudoguaianólidos se diferencian de los guaianólidos porque el metilo
aparece como un singlete alrededor de 1.1 ppm para los pseudoguaianólidos.

4. Espectro de masa.
Los espectros de masa han sido poco utilizados para aclarar estructuras. Se ha
encontrado que generalmente la señal base es el ión molecular, siendo predominantes
los correspondientes a M-18 (OH) y M-60 (Acetoxi).
En las santoninas, la señal bases 100%, es m/e 246; de aquí se pierde un metilo (M-
15) que corresponde a un 30%, luego se pierde un CO (M-28) que corresponde a un
11%. El ion m/e 173 (M-73) corresponde a C12H13O+ es muy abundante en todas las
santoninas (60-90%) y corresponde a la pérdida del anillo lactona con un protón. El
mecanismo de fragmentación de las santoninas se toma como base para explicar la
fragmentación de otras sesquiterpenlactonas ya que son muy parecidas.

13
A continuación se presenta en espectro de masas y RMN C de la siguiente
sesquiterpenlactona: SANTONINA
 Reacciones para obtener derivados.
 Hidrogenación con Pd-BaSO4 o PtO2: reaccionan los enlaces exometilénicos.
 Acetilación con acetato de sodio y anhidrído acético: reaccionan los OH.
 Derivados de piralozona: para sistemas de lactonas -insaturadas.
 Epoxidación con agua oxigenada al 30% y NaOH.
 Oxidación de hidroxisesquiterpenlactonas con acetona más Reactivos de Jones (ácido
crómico en H2SO4 y agua).
 Ozonólisis: reaccionan los grupos exometilenos.

Recopilado por: Paola Lacombe Cudris.

BIBLIOGRAFÍA.

DOMINGUEZ, Xorje Alejandro. MÉTODOS DE INVESTIGACIÓN FITOQUÍMICA. Editorial


Limusa. Arcos de Belén, México. 1973. pp. 93-110.

BRUNETON, Jean. ELEMENTOS DE FITOQUÍMICA Y FARMACOGNOSIA. Editorial


Acribia. Zaragoza, España. Pp. 284-290.
TERPENOS.
MONOTERPENOS Y SESQUITERPENOS

 Definición.
Los terpenos son compuestos que presentan carbono (C) e hidrógeno (H), pueden ser
cíclicos o alifáticos con instauraciones. Cuando presentan en su estructura grupos OH,
aldehídicos, cetónicos, etc., se denominan Terpenoides. Su ruta biogenética es la del
acetato, que forman especies con cinco (5) carbonos, siendo la base el
isopentilpirofosfato. Todos los terpenos tienen algo esencial en común, se puede
considerar que se forman por el acoplamiento de un número entero de unidades
pentacarbonadas ramificadas del isopreno (2-metilbutadieno).
Los terpenos tienen una estrecha elación entre su estructura y origen. Los compuestos
con 10 átomos de carbono, se llaman Monoterpenos; los que tienen 15, Sesquiterpenos;
los que tienen 20, Diterpenos, etc. Es importante destacar que la mayoría de los mono y
sesquiterpenos se encuentran presentes en los Aceites esenciales,
Los aceites esenciales son las fracciones líquidas volátiles, generalmente destilables por
arrastre con vapor de agua, que contienen las sustancias responsables del aroma de las
plantas y que son importantes en la industria cosmética (perfumes y aromatizantes), de
alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacéutica (saborizantes). En un aceite
esencial pueden presentarse hidrocarburos alicíclicos y aromáticos, así como sus
derivados oxigenados; pueden tener grupos OH, aldehídicos, cetónicos, esteres, etc.,
sustancias sulfuradas o nitrogenadas.

CH2OH

CH2OH CHO

Nerol Geraniol Citronelal Limoneno


CH2 OH CH2 OH

Nerolidol Gamma-bisaboleno Alfa-cadineno


Farnesol

 Clasificación.
Las principales clases de terpenos que se encuentran en la naturaleza son los siguientes:
monoterpenos (C10), sesquiterpenos (C15), diterpenos (C20), triterpenos (C30),
tetraterpenos carotenos (C40) y politerpenos (C5)n. Existe una clase de terpenos, los
hemiterpenos, estos no existen en la naturaleza, sin embargo puede encontrarse el
elemento isoprénico en numerosas moléculas naturales: alcaloides, cumarinas,
flavonoides, etc.

 Biosíntesis.
La ruta biogenética de los terpenos es la del acetato. Estos compuestos se derivan
biogenéticamente del ácido mevalónico. La biosíntesis de los terpenos se realiza en tres
etapas:
O O O O
H3 C H2 C H3 C
SCoA SCoA CH2 SCoA
AcetilCoA AcetilCoA
AcetoacetilCoA
O
OH O
OH O H2 C
H3 C SCoA
CH2 SCoA H3 C AcetilCoA
H2 C H2 O CH2 SCoA
H2 C OH
SCoA
O
O
B-hidroxi-B-metilglutarilCoA
+
NADPH H

CoASH
NADP+
OH
H3 C OH O
CH2 OH
H2 C H3 C
OH CH2 H
H2 C OH
O NADP + NADPH H +
Ac. mevalónico O
Ac. mevaldico

1. Biosíntesis del ácido mevalónico: inicialmente se condensan dos moléculas de


acetilCoA con la participación hipotética de una  -cetotiolasa y una enzima
condensante. En seguida esta unidad es atacada por otra unidad acetilCoA que ha
perdido un hidrógeno alfa (H  ). La hidrólisis de una de las dos funciones tioéster
da lugar a la seguida de dos reducciones sucesivas con una reductasa  -hidroxi-

 -metilglutarilCoA. Una segunda hidrólisis del segundo grupo tioéster seguida de


dos reducciones sucesivas con una reductasa se llega al ácido mevalónico, de
aquí se originan las dos unidades isoprénicas básicas: isopentilpirofosfato (IPP) y
dimetilalilpirofosfato (DMAPP).
OH OH
H3 C H3 C
CH2 OH CH2 OPP
H2 C OH H2 C OH
2ATP 2ADP
O O
Ac. mevalónico Mevalonilpirofosfato

OH
HO P O P P

O
H3 C CH2
O P P OH

CH2 H3 C
CH2 OH
Isopentenilpirofosfato (IPP) H2 C O
Isomerización
O

H3 C CH
O P P
CH3 Dimetilalilpirofosfato (DMAPP)

2. Biogénesis del IPP y DMAPP. El ácido mevalónico es el precursor del IPP y del
DMAPP, que dan origen a los terpenos. Lo que ocurre inicialmente es una
fosforilación del ácido mevalónico por dos unidades de ATP para originar
mevalonilpirofosfato, que es el precursor inmediato del isopreno. Enseguida la
molécula sufre un proceso de descarboxilación o descarbonatación con la
participación de otra molécula de ATP (aquí se pierde agua). La simple
isomerización del enlace doble del IPP da origen a la unidad de DMAPP.
H
H3 C
O P P
O P P
H3C
(IPP)
(DMAPP)

O P P

OPP (IPP)
Geranilpirofosfato (C10)
(Monoterpenos)

OPP
Farnesilpirofosfato (C15)
(Sesquiterpenos)

3. Condensación cabeza-cola de IPP y DMAPP. Una unidad de IPP puede


condensarse con muchas unidades de DMAPP mediante un proceso de
condensación comúnmente denominado condensación cabeza-cola; siendo la
cabeza la función pirofosfato y la cola, el extremo donde están ubicados los
metilos (CH3). La unión entre las unidades IPP y DMAPP da origen a una molécula
con 10 átomos de carbono, llamada Geranilpirofosfato, que es el precursor
inmediato de todos los monoterpenos naturales; el Geranilpirofosfato mas otra
unidad IPP, origina un compuesto con 15 átomos de carbono, el
Farnesilpirofosfato, que es el precursor de todos los sesquiterpenos.
 Usos.
Los aceites esenciales se usan principalmente en perfumería, en la industria alimenticia o
como fuente de materias primas. Muchas drogas con aceites esenciales no se utilizan
únicamente para extraer los principios volátiles que tienen sino que también se emplean al
natural, tanto por sus propiedades medicinales, como en la alimentación.

 Distribución y estado natural.


Los aceites esenciales se encuentran ampliamente distribuidos en plantas que incluyen
las Compuestas, Labiadas, Lauráceas, Mirtáceas, Pináceas, Rosáceas, Rutáceas,
Umbelíferas, etc. Se les puede encontrar en diferentes partes de la planta: en las hojas
(ajenjo, albahaca, eucalipto, hierbabuena, mejorana, menta, pachulí, romero, salvia, etc.),
en las raíces (angélica, cúrcuma, jengibre, sándalo, sasafrás, valeriana, vetiver, etc.), en
el pericarpio del fruto (cítricos como limón, mandarina, naranja, etc.), en las semillas (anís,
cardamomo, hinojo, comino, etc.), en el tallo (canela, etc.), en las flores (lavanda,
manzanilla, piretro, tomillo, rosa, etc.) y en los frutos (nuez moscada, perejil, pimienta,
etc.).
Un aceite esencial puede localizarse en un determinado órgano vegetal, flores, hojas,
frutos y hasta raíces o en toda la planta. Los monoterpenos se encuentran principalmente
en plantas de los órdenes Violales, Primulales, y Ranunculales. Son escasos en Rutales,
Cornales, Lamiales y Asterales. Los sesquiterpenos abundan en Magniolales, Rutales,
Cornales y Asterales.

 Propiedades físicas.
Los aceites esenciales son líquidos a temperatura ambiente, muy raramente tienen color y
en general su densidad es inferior a la del agua. Solubles en alcohol y disolventes
orgánicos habituales, son liposolubles y muy poco solubles en agua, son arrastrables por
el vapor de agua.
 Extracción y aislamiento.
Los terpenoides se pueden extraer de las muestras vegetales mediante varios métodos,
como son: expresión, destilación con vapor de agua, extracción con solventes volátiles,
entre otros.
1. Expresión. El material vegetal es exprimido para liberar el aceite y este es
recolectado y filtrado. Este tipo de extracción se aplica para obtener esencia de
cítricos.
2. Arrastre-vapor. La muestra vegetal fresca y cortada en trozos pequeños, es
encerrada en una cámara inerte y sometida a una corriente de vapor de agua
sobrecalentado, la esencia así arrastrada es posteriormente condensada,
recolectada y separada de la fracción acuosa.
3. Solventes volátiles. La muestra seca y molida se pone en contacto con el solvente
tal como alcohol, cloroformo, etc. Se obtienen sustancias impuras ya que el
solvente arrastra grasas y otras sustancias (ceras).
4. Método de enflorado o enfleurage. El material vegetal (generalmente flores) es
puesto en contacto con una grasa. La esencia es solubilizada en la grasa que
actúa como vehículo extractor. Se obtiene inicialmente una mezcla (concreto) de
aceite esencial y grasa la cual es separada posteriormente por otro medios físico-
químicos. En general se recurre al agregado de alcohol caliente a la mezcla y su
posterior enfriamiento para separar la grasa (insoluble) y el extracto aromático
(absoluto). Esta técnica es empleada para la obtención de esencias florales (rosa,
jazmín, azahar, etc.), pero su bajo rendimiento y la difícil separación del aceite
extractor la hacen costosa.
5. Método de extracción con fluidos supercríticos. El material vegetal cortado en
trozos pequeños, licuado o molido, se empaca en una cámara de acero inoxidable
y se hace circular a través de la muestra un fluido en estado supercrítico (por
ejemplo CO2), las esencias son así solubilizadas y arrastradas y el fluido
supercrítico, que actúa como solvente extractor, se elimina por descompresión
progresiva hasta alcanzar la presión y temperatura ambiente, y finalmente se
obtiene una esencia cuyo grado de pureza depende de las condiciones de
extracción. Aunque presenta varias ventajas como rendimiento alto, es
ecológicamente compatible, el solvente se elimina fácilmente e inclusive se puede
reciclar, y las bajas temperaturas utilizadas para la extracción no cambian
químicamente los componentes de la esencia, sin embargo el equipo requerido es
relativamente costoso, ya que se requieren bombas de alta presión y sistemas de
extracción también resistentes a las altas presiones.

 Reacciones coloridas.
- Para averiguar la presencia de alcoholes. Se pone en un tubo bien seco unas
gotas del aceite, 0.3mL de sulfuro de carbono y 100mg de KOH triturado, se agita
por 5 minutos. Da positiva la prueba si aparece una coloración o un precipitado
amarillo.
- Aldehídos y cetonas. A una gota de la muestra se le añaden 2 gotas de etanol y
una gota de solución de 2,4-dinitrofenilhidrazina (5g de 2,4-dinitrofenilhidrazina y
60 mL de H3PO4 al 85%, diluidos en 39.5 mL de etanol). Forman un precipitado
amarillo a rojo oscuro.
Resultados: Rojo carbonilos aromáticos; Naranja carbonilos  y 
insaturados y amarillo carbonilos saturados.
- Esteres. A la muestra se le añade una solución de hidroxilamina, la cual se enfría
y luego se acidula son HCl, después se agregan gotas de FeCl3 y al diluir se
observa una coloración púrpura.
- Moléculas con dobles enlaces. 1 ó 2 gotas de muestra se disuelven en 0.5mL de
CCl4, luego se adiciona una solución de Br en CCl4 al 2% gota a gota.
- Prueba de Bayer. 1 ó 2 gotas de muestra se disuelven en 1-2mL de acetona
(previamente destilada sobre KMnO4) y se les agrega gota a gota una solución
acusa de KMnO4, se agita. Si es positiva la prueba, se observa un precipitado café
y formación de MnO2 (reducción); indica hidrocarburos insaturados u otro
compuesto fácilmente oxidable (aldehído, cetona, fenoles, alcoholes 10 ó 20, etc.)
- Prueba del Tetranitrometano. Al 1% en cloroformo revela instauraciones cuando
aparece un color amarillo a rojo. Esta prueba es positiva para aromáticos.

 Cromatografía.
Como se mencionó anteriormente, la mayoría de los mono y sesquiterpenos se
encuentran presentes en los aceites esenciales de diversas plantas, a partir de ellos se
puede realizar su aislamiento mediante la utilización de uno ó varios métodos
cromatográficos, tales como: columna, capa fina y HPLC. Para las cromatografías en
columna y capa fina se utiliza ampliamente la sílica gel como fase estacionaria. Como
fase móvil se emplean solventes apolares tales como: Tolueno-Acetato de etilo, 93:7;
Cloroformo-benceno, 75:25; 1:1; Benceno-Acetato de etilo, 95:5, entre otras. Actualmente
se emplean técnicas de separación más eficientes y rápidas como la HPLC y
Cromatografía de gases, así como combinaciones “ON LINE” PHLC- CG –EM.
Adicionalmente, la técnica acoplada CG – EM, permite obtener el espectro de masas de
cada componente con el cual se obtiene el peso molecular e información estructural.

 Propiedades espectroscópicas. Los monoterpenos y sesquiterpenos en un buen


número se pueden caracterizar químicamente a partir de los datos de cromatografía de
gases y los espectros de masas tal como se anotó anteriormente, pero cuando existen
dudas de tal caracterización se recurre a los métodos espectrales como Infrarrojo,
Ultravioleta y Resonancia Magnética Nuclear.

- UV. El espectro UV de los monoterpenos y sesquiterpenos permite el


reconocimiento de grupos funcionales y grupos cromóforos. En general, la
espectrofotometría ultravioleta tiene una utilidad limitada en el estudio de la gran
mayoría de los aceites esenciales terpénicos, ya que pocos terpenos tienen
grupos cromóforos. Sin embargo, en la fracción no volátil de los aceites esenciales
cítricos se encuentran componentes carotenoides o con núcleos heterocíclicos
oxigenados (cumarinas, furocumarinas sustituidas y polimetoxiflavonas), lo que da
a estas esencias un comportamiento característico en el UV.
Se observan las siguientes absorciones características:
Absorciones intensas a 215-250nm sistemas Insaturados.
Absorciones intensas a 202-210nm sistemas Insaturados aislados o saturados.
Absorciones moderadas a 250-270nm hidrocarburos aromáticos.
- IR. Permite detectar la presencia de grupos OH, carbonilo, anillos aromáticos,
dobles enlaces C=C cis y trans, etc. Para determinar el espectro, basta con
colocar una gota del componente en una celda de NaCl. Se observan las
siguientes absorciones típicas:
3600-3300cm-1 alcoholes, la naturaleza 10, 20 y 30 se deduce por alteraciones
entre1200 y 950cm-1.
1800-1650cm-1 aldehídos, cetonas, ésteres, saturados e insaturados.
- RMN H+. A manera de ejemplo se toma una monoterpeno, el Neral para observar
13
los picos y las señales que presenta este compuesto en el espectro de RMN Ce
IR.

Para RMN H+.

ppm Integración Asignación


190.48 898 1
163.45 508 2
133.53 508 3
128.71 847 4 25.00
122.48
122.48 1000 5 163.45
32.63 949 6 H H
8 9
27.14 949 7 128.71
3 5 2 4
25.62 898 8 O
25.00 847 9
10 7 6 1
17.70 H
17.70 661 10 133.53 190.48
27.14 32.63

Neral

- E. masas. En relación con el estudio de aceites esenciales el acoplamiento del


HRGC a la Espectrometría de Masa (GC-MS) es el que ha recibido mayor
atención desde su introducción. La técnica acoplada GC-MS permite obtener el
espectro de masas de cada componente eluído. Se obtiene el dato de su peso
molecular e información estructural. Existen bases de datos con los espectros de
masas de muchos componentes, por lo cual el Índice de Kovats (determinado en
dos columnas de diferente polaridad) y el espectro de masas son criterios para la
identificación química de muchos de los componentes de un aceite esencial, sean
monoterpenos u otros tipos de sustancias características de dichos aceites.
En el acoplamiento de GC-MS, la técnica de ionización más utilizada es la de
impacto electrónico (EI). Sin embargo la técnica de ionización química (CI) tiene
cada vez más aplicaciones, por la mayor información que permite obtener

Recopilado por: Linsay M. Rodríguez González. Código: 451002084.

BIBLIOGRAFIA.

T.A. GEISSMAN/D.H.G. CROUT. Organic chemistry of secondary plan metabolism.


Freeman, Cooper & Company. United States of America, 1969. pp. 233-237; 240-241.

BRUNETON, Jean. Elementos de Fitoquímica y Farmacognosia. Editorial ACRIBIA. 1991.


pp. 223-231; 242-243.

DOMINGUEZ, Xorge Alejandro. Métodos de investigación Fitoquímica. Editorial Limusa.


México, 1973. pp. 229-230; 233-234.

Hppt: //www.amart@muiscas.udea.edu.co//. MARTINEZ, Alejandro. Aceites esenciales.


Facultad de Química y Farmacia. Universidad de Antioquia. Medellín, 2003. pp. 3-17.

DITERPENOS

 Definición.
Los diterpenos forman un conjunto de compuestos de C20, procedentes del metabolismo
del geranilgeranilpirofosfato (GGPP). Pueden ser lineales como el fito (cadena lateral
lipófila de la clorofila), macrocíclicos como los címbranos (aislados de las Abietáceas), o
policíclicos trans una SN2 intramolecular del GGPP: es el caso de los taxanos
antitumorales.

 Clasificación.
Los diterpenos tienen una clasificación bastante sencilla, esta se refiere a la estructura de
estos compuestos:
- Tricíclicos: Ej. Pimaranos, abietanos, cassanos, clerodanos, etc.
- Tetracíclicos: Ej. Kauranos, filocladanos, gíbanos, atisanos, beyeranos, etc.

 Biosíntesis.
La gran mayoría de los diterpenos son producto de una ciclación ácido-catalizada de
GGPP similar a la que interviene en la elaboración de los triterpenos pero sin epoxidación
previa. Esta ciclación da lugar a un sistema tipo decalina (cis o trans) que evoluciona vía
eliminación de un protón hacia un intermediario importante: el pirofosfato de labdadienilo.
Este, después de la solvólisis del grupo pirofosfato, origina un carbocatión arílico que
puede sufrir el ataque del metileno exo y llegar así, por una serie de combinaciones
diversas descritas a continuación.
OPP

OPP

OPP
+

H
H

OPP OPP
H

- H+ +

H H2O

Esclareol
Diterpenos bicíclicos
H
+

H
Catión pimarenil-8

pimaradieno Ac. abiético

Origen de los diterpenos bi- y tricíclicos.

 Usos.
Los diterpenos con los constituyentes frecuentes de las resinas; se encuentran
frecuentemente en las Labiadas. Su interés terapéutico es escaso: ningún diterpeno
aislado en estado puro, se comercializa en la actualidad. Sin embargo, algunas drogas
deben toda o parte de su actividad a los constituyentes diterpénicos: ello explica que
estas drogas, sean la base de formas galénicas que se encuentran en ciertas
especialidades farmacéuticas. Principalmente son sedantes de la tos, antiespasmódicos,
algunas, sedantes del SNC, ansiolíticas. El uso de algunas de estas drogas prácticamente
se ha abandonado: es el caso del Colombo, que se utilizaba como tónico amargo, otras
sólo se conservan una utilización limitada: es el caso del Copiada, <<bálsamo>>
proporcionando por una Cesalpinoidea de América tropical, antiséptico urinario, prescrito
ocasionalmente por los aromaterapéutas.

Recopilado por: Linsay Melisa Rodríguez González. Código: 451002084.

BIBLIOGRAFIA.

BRUNETON, Jean. Elementos de Fitoquímica y Farmacognosia. Editorial ACRIBIA. 1991.


pp.
TRITERPENOS

 Definición.
Los triterpenos son compuestos C30 procedentes de la ciclación del escualeno, los
triterpenos poseen una estructura siempre policíclica, normalmente tetra o pentacíclica,
casi siempre hidroxilados en 3. Presentan al contrario de los demás terpenos, una unidad
estructuralmente bastante fuerte, siendo excepcionales las modificaciones profundas del
esqueleto básico (cuasinoides).
No existe una diferencia fundamental entre los triterpenos y los esteroides,
considerándose estos últimos triterpenos tetracíclicos que han perdido como mínimo, tres
metilos.

 Distribución.
Los triterpenos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. En el reino
vegetal, se encuentran en las flores, en los frutos, en las resinas de loas plantas, y en la
madera de los árboles jóvenes. En los animales, en los órganos y en las secreciones.
El escualeno lo podemos encontrar en el germen de trigo, aceite de hígado de tiburón y
en levaduras. El lanosterol se encuentra presente en las grasas y se encuentra formando
parte de la lanolina presente en la grasa de lana.
Entre las familias donde podemos encontrar a los triterpenos están: Eufphorbiaceae
(euphol), Sapotaceae (parkleol), Loganiaceae (cycloartenol), Rutaceae (limonoides),
Moraceae, Meliaceae, Simaroubeaceae.

 Usos.
Los triterpenos debido a que poseen muchas propiedades farmacológicas, son
ampliamente utilizados en farmacia como: antivirales, antiulcerosos, antioxidantes,
antiinflamatorios, antitumorales, antialérgicas.
También poseen gran importancia por su uso como insecticidas. Las plantas los usan
como fitoalexinas, como protectores de insectos y otras plantas.
 Biosíntesis.

CH2 OPP IPP isomerasa CH2 OPP


Dimetilalillpirofosfato Hemiterpenos
Isopentenilpirofosfato

PP

CH2 OPP

Geranildifosfato Monoterpenos

PP CH2 OPP

CH2 OPP
Farnesildifosfato Sesquiterpenos

PP CH2 OPP

CH2 OPP
2PP Geranilgeranildifosfato Diterpenos

Escualeno Triterpenos
2PP

Fitoeno Tetraterpenos

Recopilado por: Johan Ramírez. Código: 451002091.


BIBLIOGRAFIA
CAROTENOS

 Definición.
Los carotenoides o tetraterpenoides son una clase de pigmentos terpenoides con 40
átomos de carbono derivados biosintéticamente a partir de dos unidades de geranil-
geranil-pirofosfato, en su mayoría son solubles en solventes apolares y de coloraciones
que oscilan entre el amarillo (por ejemplo el ß-caroteno) y el rojo (por ejemplo el licopeno).
Los carotenoides están presentes en muchas de los alimentos que consumimos a diario,
particularmente frutas y ensaladas.

 Clasificación.
Los carotenoides se clasifican en dos grupos: carotenos y xantofilas. Los carotenos solo
contienen carbono e hidrógeno (por ejemplo el ß-caroteno, el licopeno, etc.), mientras que
las xantofilas contienen además oxígeno (por ejemplo la luteína).

 Distribución y estado natural.


Los carotenoides se encuentran ampliamente distribuidos en el reino vegetal, en
bacterias, y muy pocos se han reportado en animales (por ejemplo los colores rojizos de
las plumas del flamingo son debidos a la cantaxantina, un carotenoide), y particularmente
invertebrados marinos como las esponjas, estrellas de mar, pepinos de mar, erizos de
mar, y otros.
A los carotenoides se les encuentra en forma libre, como ésteres de ácidos grasos o
como glicósidos. Sin embargo los glicósidos carotenoides son muy raros, un ejemplo de
estos últimos es la crocina.
Los carotenoides se encuentran principalmente en partes aéreas de las plantas,
especialmente en hojas, tallos y flores, en frutos (por ejemplo tomate, pimentón, etc.), y en
menor proporción en raíces (por ejemplo la zanahoria).
Ejemplos de carotenoides naturales ampliamente distribuidos.

 Extracción y aislamiento.
Los carotenoides debido a la alta conjugación de enlaces dobles presentes en sus
moléculas se descomponen por efecto de la luz, la temperatura y el aire. La luz favorece
reacciones fotoquímicas que cambian la estructura original del carotenoide (por ejemplo
isomerismo cis y trans) es un factor a considerar al momento de realizar su extracción. La
temperatura también favorece reacciones térmicas de degradación. El aire debido al
oxígeno favorece la oxigenación de los enlaces dobles a funciones epóxido, hidroxilos y
peróxidos, entre otros.
Por estas razones la extracción de carotenoides se debe preferiblemente realizar en
condiciones de ausencia de luz, a temperatura ambiente o menor, y en ausencia de
oxígeno (por ejemplo con una atmósfera artificial de nitrógeno). Además se debe realizar
lo más rápido posible, y a partir de tejidos frescos, para evitar la degradación por la acción
conjunta de estos factores adversos.
Debido a que los carotenoides en su mayoría son solubles en solventes apolares como
éter etílico, benceno, cloroformo, acetona, acetato de etilo, entre otros; y a que se deben
extraer de tejidos frescos, los cuales presentan un alto contenido de agua la cual dificulta
una extracción eficiente, es conveniente eliminar dicho agua. Un procedimiento
recomendable es deshidratar los tejidos con etanol o metanol a ebullición seguido de
filtración. El tejido deshidratado se puede entonces extraer con un solvente apolar. Una
alternativa a este proceso de deshidratación es la liofilización, la cual resulta ventajosa
porque se realiza a baja temperatura y al vacío, eliminando la posibilidad de degradación
por altas temperaturas y presencia de aire.
Si en el extracto existen carotenoides esterificados, estos se pueden hidrolizar disolviendo
el extracto en un volumen pequeño de KOH 60% alcohólico. Esta mezcla se deja en la
oscuridad durante la noche, con atmósfera de nitrógeno, a temperatura ambiente y con
agitación magnética, con lo cual los carotenoides son liberados. Si se desea un proceso
más rápido, es aconsejable la ebullición durante 5-10 minutos.

 Cromatografía.
Debido a que los extractos de carotenoides generalmente están impurificados por otras
sustancias como los esteroles, estos se pueden eliminar dejando el extracto concentrado
en solución de éter etílico, tapado y a -10°C durante la noche. De esta manera los
esteroles se precipitan y pueden ser retirados por centrifugación o filtración.
Una vez obtenido el extracto o los extractos de carotenoides, estos se pueden separar y
analizar por cromatografía en capa fina, en papel o en columna. El método más usado es
la cromatografía en capa fina con varias clases de fases estacionarias que incluyen: óxido
de magnesio activado, sílica gel, hidróxido de calcio y fosfato de magnesio entre otros. La
siguiente tabla resume los valores Rf de varios carotenoides naturales. Además de los
valores Rf en CCF de varios carotenoides naturales.

PIGMENTO Rf (x100) en eluente


1 2 3 4 5 6
-Caroteno 66 80 88 - - -
-Caroteno 49 74 84 - - -
-Caroteno 11 41 45 - - -
-Caroteno 70 84 - - - -
Licopeno 01 13 15 - - -
Luteína - - - 10 35 56
Zeaxantina - - - 05 24 55
Violaxantina - - - 05 21 84
Criptoxantina - - - 54 75 07
Capsantina - - - 06 16 -
Neoxantina - - - - - 93

Fases estacionarias y eluentes: 1. MgO activado, éter de petróleo (90-110°)-Benceno


(1:1), 2. MgO activado, éter de petróleo (90-110°)-Benceno (1:9), 3. Sílica gel-Hidróxido
de calcio (1:6), éter de petróleo-benceno (49:1), 4. Fosfato de magnesio, éter de petróleo
(40-60°)-benceno (9:1), 5. Sílica gel, Diclorometano-Acetato de etilo (4:1).
Para la separación y aislamiento cromatográfico con sílica gel algunos autores
recomiendan alcalinizar la sílica con KOH al 3% para prevenir la isomerización durante el
desarrollo cromatográfico. Además, como los carotenoides comienzan a descomponerse
al secarse la placa por la evaporación del eluente, recomiendan trabajar con atmósfera de
un gas inerte. Para proteger los colores contra la oxidación, las placas cromatográficas
pueden rociarse con una solución de aceite de parafina al 5% en éter de petróleo.
Más recientemente y gracias al avance de los métodos cromatográficos instrumentales es
posible el aislamiento rápido de carotenoides puros. En este sentido, la cromatografía
líquida de alta eficiencia (CLAE) es muy utilizada actualmente, debido a que se puede
trabajar a bajas temperaturas, en ausencia de luz y aire, y es muy sensible por los grupos
dienos conjugados abundantes en las estructuras de los pigmentos carotenoides. Aunque
se han utilizado columnas de fase normal, son más utilizadas las de fase reversa,
especialmente las de octadecilsilano (columnas C18).
En la actualidad, el procedimiento de análisis e identificación de los carotenoides en
muestras biológicas se realiza en tres etapas principales. En la primera, se obtiene el
extracto crudo. Posteriormente, el extracto es sometido a extracción en un cartucho con
una fase sólida (de sílica gel para eliminar interferencias polares, o de octadecilsilano u
octilsilano, para eliminar impurezas apolares, ó ambos). El extracto se recupera
nuevamente por elución con un solvente adecuado, y finalmente se somete a análisis y/o
fraccionamiento preparativo por CLAE. La identificación puede hacerse por comparación
con los tiempos de retención de carotenoides estándares, o en el caso preparativo los
carotenoides aislados se someten a análisis espectrales de masas, RMN, etc.
El desarrollo reciente de interfaces CLAE-Espectrometría de masas, y detectores como
los de arreglo de diodos, permiten obtener los correspondientes espectros de masas y
UV-visible, los cuales facilitan el proceso de identificación.
Como muestras de referencia pueden obtenerse ß-caroteno, canthaxantina y crocina (del
azafrán), luteína, violaxantina y neoxantina (de las hojas de cualquier planta superior),
licopeno (del tomate rojo o de pasta de tomate comercial), y capsantina del pimentón rojo.
En el libro de Harborne, se describen métodos para el aislamiento de carotenoides de
hojas, de pétalos (de Compuestas como las crisantemas, caléndula, diente de león, etc.),
y de frutos (pimentón rojo).

Recopilado por: Linsay Rodríguez. Código: 451002084


ESTEROIDES
 Definición.

Son lípidos que derivan del ciclopentano perhidrofenantreno, denominado gonano


(antiguamente esterano). Su estructura la forman cuatro anillos de carbono (A, B, C y D).
Los esteroides se diferencian entre sí por el nº y localización de sustituyentes.

Los esteroides más característicos son:

a) Esteroles. De todos ellos, el colesterol es el de mayor interés biológico. Forma parte


de las membranas biológicas a las que confiere resistencia, por otra parte es el precursor
de casi todos los demás esteroides. Otros esteroles constituyen el grupo de la vitamina D
o calciferol, imprescindible en la absorción intestinal del calcio y su metabolización.

b) Ácidos biliares. Derivan de los ácidos cólico, desoxicólico y quenodesoxicólico, cuyas


sales emulsionan las grasas por lo que favorecen su digestión y absorción intestinal.

c) Hormonas esteroideas. Incluyen las de la corteza suprarrenal, que estimulan la


síntesis del glucógeno y la degradación de grasas y proteínas (cortisol) y las que regulan
la excreción de agua y sales minerales por las nefronas del riñón (aldosterona). También
son de la misma naturaleza las hormonas sexuales masculinas y femeninas (andrógenos
como la testosterona, estrógenos y progesterona) que controla la maduración sexual,
comportamiento y capacidad reproductora.
ESTRUCTURAS.

Estructura del colesterol

Estructura del estradiol

Estructura de la norlutina.

Estructura de la progesterona.
Estructura de la testosterona.

Estructura de la cortisona.

Estructura del ácido cólico.


- Conformaciones de esteroides.
El isómero más estable de un 1,2-dialquil-ciclohexano es aquel que tiene ambos
sustituyentes ecuatoriales. Un anillo de ciclohexano trans-1,2-disustituido puede existir en
una conformación preferida, en la que ambos sustituyentes son ecuatoriales, mientras que
su isómero cis debe tener un sustituyente axial y otro ecuatorial. El isómero trans es, por
consiguiente, el más estable.

H H

CH3 CH3
mäs estable H
CH3
H CH3

trans (e,e) cis (a,e)

El núcleo de los esteroides contiene tres uniones de anillos (A/B, B/C y C/D). Por lo
general, en la naturaleza estas son uniones –trans más estables.
CH
CH 3
3
H

H
H
H

Uniones de anillo trans

Los grupos sustituidos en el sistema de anillos de esteroides pueden estar debajo o arriba
del plano del anillo. Un grupo que esta debajo del plano (trans a los grupos metilos
angulares se llama grupo α y ß con su empleo en la química de los carbohidratos, donde
solo de refiere a los grupos en el carbono anomérico. En ambos grupos de compuestos ß
denota, sin embargo, un grupo proyectado hacia arriba en la formula conformacional
usual, mientras que α denota un grupo proyectado hacia abajo.)

grupos metilos angulares

CH R
CH 3
3
H

HO
H

ß : arriba ( cis a los grupos metilos angulares)

- Nomenclatura iupac de 3-hidroxiesteroides.


Aunque a la mayoría de esteroles conocidos se les conoce por sus nombres vulgares
(P.ej. colesterol, estigmasterol, ß- sitosterol, brassicasterol, coprosterol, etc.) la IUPAC
tiene una forma más sistemática para llamar a todas estas clases de sustancias. Para
ello, considera a la mayoría de esteroles relacionados con la estructura del colestano.

El nombre IUPAC consta de cuatro partes:


-el esqueleto básico
-la posición de las insaturaciones
-la posición del grupo hidroxilo
-la estereoquímica

Por ejemplo veamos el nombre IUPAC del colesterol:


El esqueleto básico es el del colestano entonces: COLEST-
Tiene un enlace doble sobre el carbono 5, entonces: 5-én-
Tiene un grupo hidroxilo sobre el carbono 3, entonces: 3-OL
Y por lo tanto el nombre correcto es:

Colest-5-én-3-ol
Cuando el esterol posee más de un enlace doble se escribe COLESTA en vez de
COLEST.
Cuando posee 2, 3, 4, etc. enlaces dobles se dice: DIEN, TRIEN, TETRAEN, etc.
Cuando posee 2, 3, 4, etc. grupos hidroxilos se dice: DIOL, TRIOL, TETRAOL, etc.
Veamos ahora cuál es el nombre IUPAC para el ergosterol:
24-METILCOLESTA-5,7, 22-TRIEN-3-OL
Los sufijos dependen del grupo más oxidado, p. Ej. El carbonilo es un sufijo preferible
frente a un grupo hidroxilo.
Los esteroles que posean un anillo contraído, por ejemplo algunos esteroles marinos en
los cuales el anillo A es de 5 carbonos, se les denomina nor-esteroles, por ejemplo: A-
Norcolesterol. Los que poseen un anillo expandido se les denomina homo-esteroles. Los
esteroles con un enlace roto o ausente en alguno de los anillos se los denomina seco-
esteroles.
Sin embargo, hasta ahora no se ha incluido en el nombre IUPAC algo tan importante
como es la estereoquímica. Para lograr esto, basta con añadir luego del número
correspondiente las letras R, S, E, Z, α ó ß, según se trate de epímeros R o S, isómeros
E o Z o configuraciones α ó ß, respectivamente.
Generalmente, los esteroles naturales poseen la configuración 3ß-hidroxi, siendo pocas
las excepciones. Cuando no se conoce la estereoquímica del C-24 se utiliza la letra griega
α .

 Biosíntesis.
En la biosíntesis de los esteroides hay siete pasos y ocho enzimas que se listan a
continuación:
1. Enzima que corta la cadena lateral del colesterol
2. Esteroide C17 hidroxilasa
3. Esteroide C17,C20 liasa
4. Esteroide C21 hidroxilasa
5. Esteroide 11 beta-hidroxilasa
6. Esteroide C18 hidroxilasa
7. 18-hidroxiesteroide oxidasa
8. Aromasa

Epoxidación del escualeno. Biogénesis de lanosterol y cicloartenol: Este proceso


comienza con la ciclación del escualeno cuando hay presentes oxígeno molecular,
NADPH y la fracción soluble y microsomal de hígado. La epoxidación del escualeno
comienza con la incorporación de oxígeno molecular y es catalizada por una
monooxigenasa, concretamente, la escualeno epoxidasa. En la segunda reacción, que
ocurre en animales y hongos, interviene la lanosterol sintetasa, una ciclasa que
cataliza la ciclación conduce al triterpeno lanosterol.
 Métodos de análisis.
a. Extracción.
El método más utilizado para la extracción de esteroles libres y esterificados es el de Bligh
y Dyer. El tejido vegetal seco y molido se extrae a temperaturas menores de 40°C, con un
volumen suficiente de una mezcla Cloroformo:Metanol 2:1. Toda esta mezcla se filtra y al
filtrado obtenido se le hace partición con un volumen adecuado de agua. La fase
clorofórmica contiene entonces todos los compuestos liposolubles tales como esteroides,
triglicéridos, otros terpenoides, ácidos grasos, etc.
Cuando se sabe de antemano que la muestra contiene glicósidos esteroides, y se desea
estudiar sus respectivas agliconas, entonces el material vegetal se extrae con alcohol o
con una mezcla alcohol:agua, y el extracto obtenido se hidroliza con HCl 2M.
Existe un procedimiento a escala industrial para la obtención del colesterol de médula de
bovinos. Así mismo se ha descrito un proceso de obtención de los fitosteroles a partir de
la "cachaza" de la caña de azúcar.

b. Métodos de separación y purificación.


Para la separación y purificación de esteroles a partir de extractos lipídicos, se emplean
con buenos resultados la Cromatografía en Columna y la Cromatografía en Capa Fina
(CCF), con sílica gel y eluentes como mezclas de n-hexano-acetato de etilo, y mezclas de
ellos. Una mezcla recomendable es n-Hexano-Acetato de etilo 4:1. Existen varias clases
de reveladores incluido el de Liebermann-Burchard, uno con cloruro de berberina y
carbazol-ácido sulfúrico.
Sin embargo, no siempre estas técnicas en forma aislada permiten la obtención de
esteroles puros, sobretodo en el caso de mezclas de esteroles, por lo cual deben
complementarse con otras técnicas de separación y purificación más eficientes como son:
La CCF Argéntica (placas de sílica gel impregnadas con una solución de nitrato de plata
al 10% en acetonitrilo), la Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (CLAE o HPLC en
inglés) y la Cromatografía de Gases (CG).
En la CCF Argéntica, se impregna la sílica con soluciones concentradas de Nitrato de
Plata en agua:alcohol; y como resultado los esteroles se separan sobre dicha sílica por
retención diferencial de acuerdo al número de enlaces dobles C=C que contengan en su
estructura (P.ej. el ergosterol con 3 enlaces dobles es más retenido que el colesterol, el
cual solo posee un enlace doble). Esta es una técnica no solamente útil para los
esteroles sino también para los productos naturales en general.
La CLAE permite las mejores separaciones de mezclas esterólicas y se obtienen más
rápidamente esteroles puros. Son muy utilizadas columnas de Octadecilsilano (Fase
Reversa) y eluentes tales como: Metanol, mezclas Metanol:Agua, mezclas
acetonitrilo:Agua, etc. Además, la integración de la CLAE con la Espectrometría de masas
es una excelente técnica porque a la vez que separa mezclas de esteroles, permite
obtener información estructural a partir de los espectros de masas, inclusive es posible
hacer diferenciación entre efímeros debido a su retención diferencial. Adicionalmente, la
combinación de la CLAE con espectrómetros UV (de longitud de onda variable o arreglo
de diodos) e infrarrojo con transformada de Fourier, permite la obtención de los
correspondientes espectros UV e IR.

La Cromatografía de Gases con fases estacionarias como OV-17 (1%, 3%, 5%), SE-54,
etc., con temperaturas de 250-280°C, permite una buena separación y análisis de
mezclas esterólicas. Además, si esta se acopla con un espectrómetro de masas de
impacto electrónico, se obtienen los respectivos espectros de masas, los cuales facilitan
la identificación.

c. Métodos de identificación.
- Ensayo de Liebermann-Burchard.
Los esteroles se pueden reconocer fácilmente en los análisis fotoquímicos preliminares de
muestras vegetales y animales mediante el ensayo de Liebermann-Burchard. En este
ensayo, a una solución clorofórmica de la muestra que se analiza, se le agrega un
volumen igual de anhídrido acético y una gota de ácido sulfúrico concentrado (98%). Si
hay esteroles, se producen coloraciones verdes, violetas, rojas o azules.
Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada. Algunos autores
aseguran que la dan positiva solamente los esteroles que tengan en su estructura grupos
dieno conjugados reales o potenciales (por ejemplo en los 5 -3-hidroxiesteroides la
deshidratación genera un 3,5 dieno).
Existen otras pruebas de coloración para el reconocimiento de esteroides, pero son
menos utilizadas debido al gran desarrollo de las técnicas instrumentales.

 Espectroscopia.
- UV.
Debido a que la mayoría de esteroles naturales contienen grupos funcionales tales como
enlaces dobles C=C y el grupo hidroxilo, sus espectros ultravioleta en metanol (200-360
nm) únicamente muestran un máximo de absorción alrededor de 205 nm, debido a
transiciones π -π* del enlace doble aislado. Sin embargo, para esteroles con grupos
dienos conjugados como por ejemplo el ergosterol, estos sí absorben intensamente en la
región citada y la posición de los máximos de absorción se puede predecir con las reglas
de Woodward-Fieser para dienos conjugados. Por ejemplo, los esteroles con núcleo ß 5,7
-3-hidroxiandrostadieno presentan máximos de absorción alrededor de 240, 270, 280 y
290 nm, mientras que los esteroles con núcleo ß5, 7,9(11) -3-hidroxiandrostatrieno
presentan máximos de absorción alrededor de 310, 325 y 340 nm.
Los esteroides con el cromóforo ß4 -3-oxa muestran un máximo característico alrededor
de 240 nm.

- IR.
Los espectros infrarrojos de la mayoría de esteroles naturales son bastante simples y
similares a los de alcoholes alifáticos saturados o insaturados. Generalmente se
observan: Una banda de tensión O-H alrededor de 3600 cm -1 , bandas de tensión de
enlaces C-H saturados alrededor de 2960-2780 cm -1 , bandas de tensión de enlaces
=C-H alrededor de 3125-3030 cm -1 , bandas de flexión de enlaces saturados C-H
alrededor de 1440 y 1380 cm -1 y bandas de tensión de enlaces C=C olefínicos alrededor
de 1670 cm-1 (Generalmente es una banda débil que a veces no se observa). Existe una
colección de espectros infrarrojo de esteroles.
Una aplicación interesante de la espectroscopia infrarrojo es que permite diferenciar por
ejemplo entre los ésteres de esteroles y otros tipos de sustancias como los triglicéridos y
los fosfolípidos.

- RMN Protónico.
Los espectros de resonancia magnética nuclear protónica de los esteroles deben ser
preferiblemente de alta resolución (220, 360 MHz, etc.), debido al número y clases de
protones que contienen. En forma general se observan las señales de protones metílicos
en la región de 0-1 ppm con constantes de acoplamiento de 6-7 Hz cuando tienen
carbonos saturados vecinos. El protón ligado al carbono 3 se observa a 360 MHz como un
"heptete" alrededor de 3.53 ppm cuando el hidroxilo está en posición 3, mientras que se
observa como un "quintete" cuando el hidroxilo está en posición 3 .
En el caso de los esteroles con enlace doble entre los carbonos 5 y 6, el protón del
carbono 6 se observa como un "doblete" ancho alrededor de 5.35 ppm.
En el caso de esteroles con enlaces dobles en C-5 y C-7 (esteroles con núcleo tipo
ergosterol) los protones H-6 y H-7 se observan como multipletes en 5.4 y 5.5 ppm.
En general, los espectros RMN permiten asignaciones estereoquímicas a partir de su
análisis detallado y por comparación con los espectros de esteroles de estructura
completamente conocida.
En el caso de los derivados acetilados de esteroles, la presencia del grupo acetato sobre
el carbono 3, desplaza la señal del protón ligado al mismo carbono hasta valores de 4.5
ppm, además en el espectro aparece la señal del grupo metilo del acetato alrededor de
1.8 ppm.
La región de protones metílicos (0-1.2 ppm) es conocida para varios esteroles naturales, y
permite asignaciones estereoquímicas precisas de la cadena lateral.

- RMN 13C.
El gran desarrollo de la Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear de carbono-13
en los últimos años, ha hecho que esta técnica desplace a otras en la elucidación
estructural de esteroides. Es muy fácil reconocer en estos espectros las señales
características de esteroles como por ejemplo, la señal del carbono 3 aparece alrededor
de 72 ppm en esteroles con núcleos 5 - y 7 -3-hidroxiandrosteno . Además, los esteroles
con núcleo 5 -3-hidroxiandrosteno presentan las señales de los carbonos 5 y 6 en 141 y
122 ppm aproximadamente, la señal del metilo 18 a 12 ppm, y la del metilo 19 a 20 ppm.
Los esteroles con núcleo 7 -3- hidroxiandrosteno muestran las señales de los carbonos 7
y 8 a 130 y 140 ppm, y las señales de los metilos 18 y 19 alrededor de 12 ppm
aproximadamente.
Rangos de desplazamiento químico en RMN-13 C para varios tipos de carbonos
característicos de esteroides naturales Tipo de carbono Desplazamiento químico (ppm)
CH3 sat. 12-24 CH2 sat. 20-41CH sat. 35-57 C sat. 27-43 C-OH sat. 65-91 C=C olefínico
119-172 C=O 177-220 C-F 88-102. Adicionalmente, es posible hacer la diferenciación
entre epímeros gracias a diferencias en sus desplazamientos químicos.
Por otro lado, el desarrollo de la RMN Bidimensional permite hacer una asignación más
fácil de las señales y por ende de la estructura. Para un ejemplo de la utilización de las
técnicas RMN-Bidimensionales en la elucidación estructural de esteroles puede
consultarse el artículo de Prakash y col., en el cual inclusive se hace la asignación
estereoquímica trans de los anillos A/B de un esteroide de un alga roja, utilizando el
espectro COSY H-H Rango Largo (i.e. Acoplamientos a larga distancia: acoplamientos
"W").
Otro ejemplo interesante es la aplicación de la técnica bidimensional NOE (comúnmente
llamada NOESY) en el análisis conformacional de esteroides 4-en-3- ona.

- Espectrometría de masas de impacto electrónico 14.


Los espectros de masas de impacto electrónico (70 eV) de los esteroles libres
proporcionan buena información estructural y existen mecanismos de fragmentación
verificados experimentalmente con esteroles marcados con isótopos tales como deuterio.
Teniendo en cuenta que la mayoría de esteroles naturales poseen 4 clases de núcleos
tetracíclicos: ß 5 -3-Hidroxiandrosteno, ß0 -3-Hidroxiandrostano, ß7 -3-Hidroxiandrosteno,
ß5,7 -3-Hidroxiandrostadieno y ß5,7,9(11) -3-Hidroxiandrostatrieno, y que muchos de
ellos tienen cadenas laterales hidrocarbonadas saturadas o monoinsaturadas en los
carbonos 22, 24 o 25; pueden establecerse las siguientes características estructurales a
partir de su espectro de masas I.E.: a) Los esteroles libres con núcleo ß 5 -3-
Hidroxiandrosteno y la cadena lateral saturada presentan en sus espectros de masas
normalmente los fragmentos: M (Ion molecular), M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, M-85,
M-111, 273, 255, 231,
213 y 145. Además, si contienen un grupo isopropilo terminal se observan también los
fragmentos M-isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados muestran los
fragmentos M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, 255 (M-AcOH-R), 213 y 145. Los derivados
Trimetilsililéteres (TMS) muestran los fragmentos M,
M-TMSOH, M-TMSOH-15, 255 (M-TMSOH-R) y 145.

 Usos.
- ANTIINFLAMATORIO
- ANTIALERGICO
- ANTICOCEPTIVO
EJEMPLO:

HO

COLESTA-5,7-DIEN-3ß-OL (7- DEHIDROCOLESTEROL)

El espectro de RMN-1 H confirma el núcleo ß5,7 -3 -hidroxiandrostadieno por las


señales multiplete en 5.4 y 5.6 ppm integrando cada una para un protón, correspondientes
a los protones olefínicos H-6 y H-7, un multiplete (7 señales) en 3.65 ppm correspondiente
al protón H-3ß y dos singletes en 0.62 y 0.95 ppm, correspondientes a los metilos H-18 y
H-19. Las señales de los CH 3 -26 y CH 3 -27 se observan como dobletes en 0.85 y 0.86
ppm, y los protones del CH 3 -21 se observan como un doblete en 0.9 ppm. Estos datos
corresponden a un esterol con el núcleo ß5,7 -3ß -hidroxiandrostadieno con una cadena
lateral con un grupo isopropilo terminal. La configuración 3ß-hidroxi la confirma la
multiplicidad de la señal del H-3,
la cual corresponde a un multiplete extendido 42 Hz originado por acoplamientos de los
protones axiales de H-3 con H-2 y H-4, y a los acoplamientos entre H-3ß y los
protones ecuatoriales H-2 y H-4, mientras que la configuración 3ß -hidroxi genera un
'quintete' extendido 28 Hz, originado por acoplamientos protónicos axial-ecuatorial y
ecuatorial-ecuatorial de H-3ß con H-2 y H-4. El espectro de RMN-13 C muestra 27
señales entre las cuales cuatro corresponden a los carbonos olefínicos C-5 (139.73 ppm),
C-6 (119.57 ppm), C-7 (116.21 ppm), C-8 (141.47 ppm) y una al carbono hidroxilado C-3
(70.44 ppm), confirmando la existencia de un esterol con núcleo ß5,7 -3ß -
hidroxiandrostadieno, las demás señales corresponden a ß 38.34 (C-1), 31.96 (C-2),
40.74 (C-4), 46.20 (C-9), 36.97 (C-10), 21.08 (C-11), 39.14 (C-12), 42.90 (C-13), 54.47 (C-
14), 23.00 (C-15), 28.08 (C-16), 55.84 (C-17), 11.80 (C-18), 16.27 (C-19), 36.10 (C-20),
18.83
(C-21), 36.11 (C-22), 23.84 (C-23), 39.47 (C-24), 27.99 (C-25), 22.54 (C-26) y 22.85 (C-
27). Con este análisis se llega a la conclusión de que este esterol es el colesta-5,7-dién- 3
ß -ol (comúnmente llamado 7-dehidrocolesterol).

El espectro de RMN-13 C muestra 27 señales entre las cuales cuatro corresponden a los
carbonos olefínicos C-5 (139.73 ppm), C-6 (119.57 ppm), C-7 (116.21 ppm), C-8 (141.47
ppm) y una al carbono hidroxilado C-3 (70.44 ppm), confirmando la existencia de un
esterol con núcleo D5,7 -3b -hidroxiandrostadieno, las demás señales corresponden a d
38.34 (C-1), 31.96 (C-2), 40.74 (C-4), 46.20
(C-9), 36.97 (C-10), 21.08 (C-11), 39.14 (C-12), 42.90 (C-13), 54.47 (C-14), 23.00 (C-15),
28.08 (C-16), 55.84 (C-17), 11.80 (C-18), 16.27 (C-19), 36.10 (C-20), 18.83 (C-21), 36.11
(C-22), 23.84 (C-23), 39.47 (C-24), 27.99 (C-25), 22.54 (C-26) y 22.85 (C-27).

El espectro de masas muestra el ión molecular en m/z 384 consistente con la fórmula
molecular C 27 H 44 O. También pueden observarse los iones m/z 369 (pérdida de un
grupo metilo), 366 (pérdida de una molécula de agua) y 351 (pérdida de un grupo metilo y
una molécula de agua), característicos de esteroles.
Los iones m/z 271 (pérdida de la cadena lateral), 253 (pérdida de la cadena lateral y una
molécula de agua), 253 (pérdida de la cadena lateral y una molécula de agua) y 211
(fisión del anillo D menos agua), indican claramente la presencia de dos insaturaciones en
el núcleo, y los iones m/z 158 (fisión entre anillos B y C), 143 (158 menos un grupo metilo)
y 128 (158 menos dos grupos metilo) hacen evidente que las insaturaciones están en el
C-5 y en el C-7. La diferencia entre el ión molecular y el ión m/z 271 (pérdida de la cadena
lateral) indica que la cadena lateral de este esterol es saturada con la fórmula C 8 H 17.
Todo este análisis lleva a la conclusión de que este compuesto es un esterol con núcleo
ß5,7 -3-hidroxiandrostadieno con una cadena lateral saturada de ocho átomos de
carbono.
R

X=H
M-C H 3 -R
+
xo - HO
m/z 271

-XOH -H 2 O

R +

-R

+
-CH 3
M-XOH m/z 253

+
C
H +
+ C
M-XOH-15

m/z158

-CH 3

+C C +
+C

m/z143 m/z128
m/z 211
0.11
Recopilado por: Henry Segura. Código: 451992019
BIBLIOGRAFIA.

SAPONINAS Y SAPOGENINAS

 Definición.
Son grupos de glucósidos que se encuentran en el reino vegetal, forman espuma con el
agua. Se les da el nombre de saponinas por el latín Sapón = jabón, se disuelven en agua
y disminuyen la tensión superficial de esta, además de ella se pueden obtener
carbohidratos y una glicona llamada genéricamente Sapogenina, la cual pueden tener un
esqueleto esteroidal.
En el enlace glicósido siempre se forma con el oxígeno del Carbono 3. Se conocen más
de 200 saponinas esteroidales, localizadas en las monocotiledóneas (lileaceas,
amarilidaceas y dioscoreaceas), y principalmente con excepción en escrofuleriaceas).
Ambos grupos de saponinas se han aislado en diversos órganos vegetales.

 Aislamiento.
Son sustancias muy polares, y es posible extraerlas en caliente o en frío, con agua o
alcoholes de bajo peso molecular. Los materiales lipoides presentes en los extractos se
separan con benceno. Al calentar la solución alcohólica se separan las saponinas y
después se cristalizan en mezclas de alcohol - agua.
Se pueden obtener a través de hidrólisis con sus encimas naturales o de origen
microbiológico. En ácidos HCl, H2 SO4, y para extraer los insaturados se hace con , H2
SO4 concentrado.
Para extraer saponinas poco polares se utilizan el benceno, eter de petróleo o acetona y
se recristalizan.
Las saponinas son compuestos incoloros, amorfo de gran poder emolítico los cuales se
usan para producir espumas en bebidas, champú, extintores de incendios. Además la
identificación de los carbohidratos se hace con cromatografía en papel, cromatografía
fase vapor.

 Obtención.

3 Kg. De hojas + etanol

Destilación en BoMa

Residuo
Éter etílico

Lípidos Material insoluble

Recristalizar con etanol


al 80%

Cristales kamonina

Recristalizar con
metanol

Kamonina

- Obtención de kamogenina con etanol.

29 gramos de Kamonina en 500 mL

[HCl 100 mL

Reflujo 2 horas
Destilar solvente
a presión reducida

100 ml

Agregar un
litro de agua

Aglicona
Buchner

Lavar con agua


y secar

- Extracción con agua.


Kamogenina

Flores, yemas o frutos macerados con agua

Filtrado Precipitado

Acidular con
H2so4 hasta pH de 1

Reflujo de 4 – 6 horas

Enfriar, decantar, lavar


el ppt con H2so4 3N

Reflujo 5 horas

Enfriar, filtrar,
lavar con agua
el ppt
Neutralizar con Carbonato de Sodio

Secar y pulverizar
y extraer con hexano

Decolorar la solución
con carbón y concentrar
hasta cristalización

Solución

Hecogenina
Filtrado

- Obtención triterpenoide.
Al pulverizar semillas de entada physaloides y desengrasar con eter de petróleo, luego se
extrajo con etanol caliente y se concentra el extracto a presión reducida. Al residuo se
añade eter y se obtiene una goma café, luego se hidroliza la goma con reflujo de 5 horas
en etanol (700 ml.) y el HCl (140 ml) destilar el etanol en el boma manteniendo el volumen
contante con agua. El precipitado se extrajo en soxhlet con eter. El extracto se lava con la
solución de NaHCO3 al 5%. De estos lavados el precipitado es ácido triterpénico.
Las saponinas por su parte tienen una acción hemolítica las cuales destruyen las paredes
de los glóbulos rojos dispersando la hemoglobina.
 Reacciones coloridas.
Las saponinas o sapogeninas insaturadas, o varios grupos de OH dan coloraciones con
diferentes reactivos ácidos como: Liebermann, Burchard, Salkowski, Cloruro de Tionilo y
tricloruro de antimonio, además dan positiva la prueba de Molisch (alfanaptol + etanol +
H2SO4 dando un anillo color violeta). Además de esto se conocen las prueba de Antrona,
de Rosentholer, reacción de Noller y la prueba para pseurosapogenina.

 Cromatografía.

- Cromatografía en papel capa delgada.


Por su carácter polar las saponinas son material adecuado para la cromatografía en
papel, usando como fase estacionaria papel más vaselina, jabones de aluminio o
dimetilformamida. La fase móvil puede ser:

 Butanol-1 -saturado de agua


 Butanol-1 -ácido acético-agua (4:1:15)
 Butanol-1-etanol-agua (1:1:1)
 Butanol-1-acetato de etilo-agua (4:1:5)

- Cromatografía capa delgada.


Fase estacionaria silica gel G en particular con 1-20% de nitrato de plata. Da muy buenos
resultados para las sapogeninas y las microcelulosas para las saponinas.

Sílica gel G fase móvil para las saponinas:

 Butanol1-ácido acético-agua (4:1:1)


 Hexano-acetato etilo (1:1)
 Cloroformo-metanol-agua (65:35:10)

REVELADORES: Ácido tricloroacético que al calentar da manchas verdes.


Solución de ácido fosfomolibdico o peryodato de potasio.

Fase móvil sapogeninas:

 Cloroformo-acetona (9:1)
 Benceno acetona (9:1)
 Benceno metanol (9:1)
 Cloroformo etanol (95:5)
 n-hexano-acetato de etilo (1:1)
 Cloroformo tolueno (9:1)

REVELADORES SAPOGENINAS: Vapor de yodo, H2SO4, p-toluensulfonico.

Solución Clorofórmica de SbCl3 y SbCl5, y posteriormente calor

 Características espectrales.

 Uv: Por carencia de grupos cromóforos conjugados, las saponinas y sus


agliconas, usualmente no absorben en el Uv, aunque los insaturados dan señal
entre 205-210 nm. La intensidad aumenta con el incremento de los grupos alquilos
unidos al doble enlace.

 Infrarrojo:
 Estiramiento de OH 3600-3300 cm-1
 Carbono hidrógeno 2980-2800 cm-1
 Numerosas absorciones en 1250-850 cm-1
 Absorciones máximas de cadenas isoespiroacetal 982, 922, 900, 866 cm-1.
 Los espiroacetal normales estan en el 987, 922, 900, 852 cm-1

- Saponinas y triterpenoides y derivados.


Carecen de máximas características. La posición y detalles de sustitución de un doble
enlace de la glicona puede precisarse la absorción en el infrarrojo, ejemplo:
 R2C = CHR están 1667, 1650, 1435, 828, 804 cm-1
 R2C = CH están 1642, 1640, 833 cm-1
 Ácido triterpencarboxílico en que el grupo CO2H está rodeado de grupos
voluminosos como el ácido oleanóico, se encuentran como monómeros y
absorben a 1690, 1687 cm-1 con señales adicionales entre 3630 cm-1 y los dímeros
absorven a 1745 y 1742 cm-1 .

 RMN Acumulación de señales


o eteres sililo. 3.3-3.8 (CHO-Si)
o Instauraciones de las Aglicona 5.2-5.6
o Protones C19 y C18. Presentan singletes entre 0.8-1.1
o Protones metilo C21 doblete entre 0.89-0.98
o Protones metilo Neosapogenina C21 doblete 1.15-1.21
o Protones C27 doblete 0.78-0.80
o Protones C26 doblete 3.30-3.90
o Protones C16 multiplete 4.38-4.40

Las señales anteriores con deuterocloroformo experimentan un desplazamiento, con el


benceno hay relación espacial entre los protones del C27 y las funciones del eter de los
anillos E y F.

Recopilado por: Fabian Silva. Código: 451982045

BIBLIOGRAFÍA
DOMINGUEZ, Xorge Alejandro. Métodos de investigación Fitoquímica. Editorial Limusa.
México, 1973. pp. 150-156.

FLAVONOIDES

 Definición.
Los Flavonoides los encontramos ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Los
podemos ver las rosas, por medo del color rojo que estas poseen, en las uvas, en la
manzana, etc., favorecen la función de la vitamina C, mejorando u absorción y
protegiéndola de la oxidación.
Tienen una estructura química bien definida. Tienen dos anillos bencénicos, unidos a
través de una cadena de 3 átomos de C. Compuesto C6C3C6.

 Clasificación.
Los flavonoides se clasifican en varios grupos: Chalconas, flavonas, flavonoles
flavanonas, flavononoles, antocianidinas, auronas, catequinas, epicatequinas, isoflavonas,
pterocarpanos, rotenoides.

 Nomenclatura.
La mayoría de los flavonoides, poseen nombres triviales con la terminación INA u OL. La
acacetina, se identifico en el una planta del genero acacia y se clasifica como una flavona;
la quercetina, se identifico en una planta del genero quercus y se clasifica como un
flavonol; la naringenina se identifico en la naranja y se clasifica como una flavanona; el
eriodictiol se identifico en una plantas del genero eriodictyum, y se clasifica como una
flavanona.
Los flavonoides se encuentran ligados a moléculas de carbohidratos. Núcleo flavanoide
básico, mas una o varias moléculas de carbohidratos, produce un Glicósido por ejemplo la
vitexina. Cuando no tienen ligados moléculas de carbohidratos se le denominan Agliconas
flavonoides, por ejemplo la acacetina, quercetina, erodictiol, etc.
Ejemplos de flavonas:
NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 Fuente
Crisina - - OH - OH Populus
Baicaleína - - OH OH OH Scutellaria
Apigenina - OH OH - OH Petroselinum
Acacetina - OMe OH - OH Robinia
Escutelareína - OH OH OH OH Scutellaria
Hispidulina - OMe OH OH OH Ambrosia
Luteolina OH OH OH - OH Reseda
Crisoeriol OMe OH OH - OH Eriodictyon
Diosmetina OH OMe OH - OH Diosma

Ejemplos de flavonoles:
NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 R6 Fuente
Galangina - - OH - OH - Alpinia
Fisetina OH OH - - OH - Rhus
Kaemferol - OH OH - OH - Delphinium
Herbacetina - OH OH - OH OH Gossypium
Quercetina OH OH OH - OH - Quercus
Ramnetina OH OH OH - OMe - Rhamnus
Quercetagetina OH OH OH OH OH - Tagetes
Gossipetina OMe OH OH - OH OH Gossypium
Isorramnetina OH OMe OH - OH - Cheiranthus

Ejemplos de antocianidinas:
NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 R6 Fuente
Apigenidina - OH OH - OH - Rechsteineria
Luteolinidina OH OH OH - OH - Rechsteineria
Pelargonidina - OH OH OH OH - Pelargonium
Cianidina OH OH OH OH OH - Centaurea
Peonidina OMe OH OH OH OH - Paeonia
Delfinidina OH OH OH OH OH OH Delphinium
Petunidina OMe OH OH OH OH OH Petunia
Malvidina OMe OH OMe OH OH OHe Malva

Ejemplos de flavanonas:
NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 Fuente
Pinocembrina - - OH - OH Pinus
Liquiritigenina - OH - - OH Glycyrrhiza
Naringenina - OH OH - OH Prunus
Sakuranetina - OH OH - OMe Prunus
Eriodictiol OH OH OH - OH Eriodictyon
Hesperetina OH OMe OH - OH Prunus

 Biogénesis.

Como se mencionó anteriormente los flavonoides son metabolitos secundarios vegetales


de origen biosintético mixto: el anillo A proviene de la ruta de la malonilcoenzima A y el
anillo B y la cadena C3 provienen de la ruta del ácido shikímico. Un tricétido se cicliza y se
condensa con una molécula de ácido p-cumárico. La enolización del ciclo proveniente de
la ruta de la malonilCoA da origen al anillo aromático A en las chalconas y flavanonas.
Estas a su vez son los precursores de las demás clases de flavonoides. Es importante
recalcar que este proceso de biosíntesis sustenta el hecho de que en la mayoría de
flavonoides el anillo A sea meta-oxigenado, es decir como es característico de los anillos
aromáticos originados por la vía de la malonilCoA; y por otro lado, el anillo B proveniente
de la ruta del ácido shikímico, generalmente es orto-oxigenado. Para el caso de la
biogénesis de los isoflavonoides tales como las isoflavonas, pterocarpanos y rotenoides,
los experimentos realizados por diversos investigadores sugieren que hay un proceso de
migración 2,3. Por ejemplo se ha demostrado que la (2S)-naringenina (una flavanona) es
convertida por una isoflavonasintasa de la soya (Glycine max) en genisteína (una
isoflavona):
 Distribución y estado natural.
Los flavonoides, se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas verdes
(angiospermas) y solo algunos pocos se han detectado en hongos y algas. Se han
encontrado en diferentes partes de la planta especialmente en las partes aéreas; y se le
encuentran en forma libre (agliconas), glicósidos (la mayoría de las veces), como sulfatos
y algunas veces como dímeros y polímeros. Los glicósidos pueden ser de dos clases, o-
glicósidos, cuando los carbohidratos se encuentran unidos por enlace hemiacetal C-O y
unidos por enlace C-C llamados c-glicósidos.
Los o-glicósidos, son los más comúnes de hallar. Las antocianidinas, se encuentran como
sales principalmente en flores, frutos y tejidos con coloraciones que van desde el rojo,
morado, violeta y azul.

 Propiedades Físicas.
Las propiedades físicas dependen del flavonoide considerado y su forma (libre, Glicósido
o sulfato). Por ejemplo las flavonas, flavonoles y aurona debido a tienen un sistema
conjugado van desde el amarillo muy tenue al rojo.
Las antocianidinas son de color rojo intenso, morado violeta y azul. Las flavanonas y los
flavononoles, debido a que poseen un carbono quiral C2 sufren el fenómeno de rotación
óptica.
Los glicósidos en general son sólidos amorfos, mientras que las agliconas y los altamente
metoxilados son cristalinos.

 Solubilidad.
La solubilidad depende de la forma en que se encuentren y el numero y clase de
sustituyentes presentes. Los glicósidos, las antocianidinas y los sulfatos son solubles en
agua y en alcohol. Las agliconas flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en
alcohol, mientras que las poco hidroxiladas lo son en solventes como éter etílico, acetato
de etilo y acetona. Las agliconas metoxiladas son solubles en solventes menos polares
como el éter de petróleo y el cloroformo.

 Reacciones coloridas.
a. Ensayo de shinoda.
Los flavonoides con el núcleo benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles, flavanonas, etc.)
producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o alcohólicas se les
adiciona magnesio seguido de HCl concentrado. Aunque no se conoce el mecanismo de
esta prueba, es muy utilizada para reconocer esta clase de compuestos.

b. Ensayo con Zn/HCl.


Al remplazar el Mg por el Zn en el procedimiento del ensayo de Shinoda, solamente los
dihidroflavonoles (o flavononoles) producen coloraciones rojo-violeta. Las flavanonas y
flavanoles no producen color o producen coloraciones rosadas débiles.

c. Ensayo de pacheco.
El sólido flavonoide se calienta sobre una llama con unos pocos cristales de AcONa y 0.1
ml de anhídrido acético. Luego con 0.1 mL de HCl conc. Los dihidroflavonoles producen
un color rojo característico. Las flavonas, chalconas, auronas, flavonoles y flavanonas dan
una respuesta negativa.

d. Reconocimiento de antocianinas.
Las antocianinas se comportan como indicadores ácido-base debido al proceso:

A pH ácido presentan coloraciones rojas, violetas y moradas; mientras que a pH alcalino


presentan coloraciones verdes y azules.
Con esta prueba se pueden diferenciar entre las antocianinas y las betacianinas
(pigmentos nitrogenados de colores rojos y violeta de plantas del orden Centrosperma,
como p. ej. los pigmentos de la remolacha Beta vulgaris, Fam. Chenopodiaceae y también
presentes en otras plantas como la Phytolacca americana, Fam. Phytolaccaceae)

 Extracción y aislamiento.
Material Vegetal
Éter de petróleo (desengrase)
Extracción Etanol 70%
Extracto

Éter etílico Acetato de etilo n-butanol

Flavonoides Flavonoides F. polaridad media


apolares polares

CCF HPLC fase


reversa
Agliconas Glicósidos Glicósidos Agliconas
flav. flav.

cloformo/acetato acetato de etilo/a. columnas RP-18. Rp18.254nm.


etilo 60:40 formica/a.acetico/agua 254nm. acetonitrilo/
(100:11:11:27) Ac.acetico2%acuo H2O
/acetonitrilo /a. acetico
1%

Las antocianinas se pueden extraer de tejidos frescos (p. ej. pétalos) por maceración con
un solvente ácido como por ejemplo la mezcla metanol-ácido acético-agua (MAW)
(11:1:5) ó la mezcla MFW, es decir metanol/ácido fórmico/agua por ejemplo 10:1:9. El
extracto obtenido se concentra y se somete a cromatografía en papel unidimensional
eluyendo con la mezcla t-BuOH:AcOH:H2O (3:1:1). En estas condiciones las antocianinas
presentan Rf bajo y se pueden separar de otros tipos de flavonoides como los glicósidos
de flavonoles los cuales presentan un Rf alto. Una vez eluído del papel el extracto con las
antocianinas se puede purificar a través de un cartucho RP-8 eluyendo con AcOH al 7%
acuoso y con AcOH al 7% metanólico. También se pueden analizar por cromatografía en
capa fina con placas de celulosa y eluyendo con la mezcla HCl conc./ácido fórmico/agua
19.0/39.6/41.4.
Las antocianinas se pueden separar a escala analítica por HPLC [(columna RP-18, 25 cm
de long., 5 m); eluente: una mezcla 1:1 de A (H3PO4 al 1.5% acuoso) y B
(H2O:MeCN:AcOH:H3PO4 107:50:40:3) a un flujo de 0.8 ml/min; detectando a 352 y 530
nm]. A nivel preparativo puede usarse una columna RP-18 de 25 cm de long., los mismos
solventes citados arriba pero en una proporción 43:57 respectivamente, a un flujo de 2
ml/min y detectando a 440 nm.
A las fracciones obtenidas luego de con centrarlas al vacío, se les puede eliminar el ácido
fosfórico pasándolas a través de un cartucho RP-8 lavando con AcOH al 8% acuoso.
Luego, las antocianinas se eluyen con AcOH al 8% metanólico, se concentran a sequedad
y se liofilizan para obtener los compuestos puros para su caracterización química.
Para la resolución de mezclas enantioméricas de flavanonas se utiliza actualmente la
HPLC con fases estacionarias quirales.

 Propiedades espectroscópicas.
- Espectroscopia ultravioleta-visible.
Los espectros UV de los flavonoides en metanol presentan bandas características
debidas a los sistemas conjugados de los anillos aromáticos.
Las flavonas y flavonoles muestran dos bandas definidas: La banda I, de mayor
longitud de onda en el rango 300-390 nm asociada con la funcionalidad cinamoílo, y la
banda II, entre 250-280 nm debida al anillo aromático A (funcionalidad benzoílo),
aunque a veces se observan otras bandas de absorción. La posición de la banda I
depende del tipo de flavonoide: las flavonas la muestran en 310-350 nm, los
flavonoles 3-O-sustituídos en 330-360 nm, y los flavonoles en 350-385 nm.
La presencia de hidroxilos fenólicos en diferentes posiciones de la molécula puede
establecerse estudiando el comportamiento del espectro UV metanólico al añadirle los
denominados reactivos de desplazamiento: Metóxido de sodio (NaOMe), acetato de
sodio (NaOAc), cloruro de aluminio (AlCl3) con y sin HCl, y ácido bórico (H3BO3).
El NaOMe es una base fuerte que ioniza los hidroxilos fenólicos presentes en la
molécula y particularmente permite reconocer la existencia de grupos hidroxilo en 3 y
4'. Las flavonas 4'-hidroxiladas presentan desplazamiento batocrómico de 45-65 nm
para la banda I al añadir NaOMe, y la intensidad de la banda no decrece. Los
flavonoles (ó 3-hidroxiflavonas) sin hidroxilo en 4', también presentan el mismo
desplazamiento batocrómico de 45-65 nm, pero la intensidad de la banda se ve
disminuida. En los flavonoles 3,4'-dihidroxilados, orto-dihidroxilados y diorto-
trihidroxilados, el espectro se descompone en pocos minutos
luego de añadir el NaOMe. La aparición de una banda alrededor de 330 nm (banda III)
es característica de flavonas 7-hidroxiladas.
El NaOAc es una base más débil que el NaOMe, y ioniza solo los hidroxilos fenólicos
más ácidos: 3, 4' y 7. La ionización del hidroxilo en 7 afecta la banda II y por lo tanto el
NaOAc es un reactivo útil para determinar la presencia de dicho hidroxilo. Si al añadir
el NaOAc se observa un desplazamiento batocrómico de 5-20 nm en la banda II se
trata de una flavona o flavonol 7-hidroxilado. Las flavanonas 5-hidroxiladas presentan
un desplazamiento batocrómico de 35 nm. Los flavononoles (sin 5-OH) presentan un
desplazamiento batocrómico de 60 nm. Sin embargo, Heinz y col. han reportado que
se debe tener precaución en la obtención del espectro con NaOAc.
La formación del quelato produce desplazamiento batocrómico en la banda I. Si el
desplazamiento es de 12-36 nm se trata de un flavonoide (flavona, flavonol, aurona o
chalcona) orto-dihidroxilado en el anillo B, pero si el desplazamiento batocrómico es
menor es un flavonoide orto-dihidroxilado en el anillo A. Las isoflavonas, flavanonas y
flavononoles orto-dihidroxiladas en el anillo A muestran desplazamiento batocrómico
de 10-15 nm pero en la banda II.
El AlCl3 anhidro también forma quelatos con flavonoides orto-dihidroxilados, 3-
hidroxilados y 5-hidroxilados. En el caso de los orto-dihidroxilados el quelato es
inestable a pH ácido, mientras que los quelatos formados con 3- y/o 5-hidroxilados son
estables:

Por lo anterior, si al determinar el espectro con AlCl3 y HCl se mantiene un


desplazamiento batocrómico de 35-55 nm en la banda I (comparando con el espectro
metanólico) se trata de una flavona o un flavonol 5-hidroxilado. Si el desplazamiento
es de 17-20 nm se trata de una flavona o un flavonol 5-hidroxilado y 6-oxigenado. Si el
desplazamiento es de 50-60 nm se trata de una flavona o un flavonol 3-hidroxilado
(con o sin 5-OH).
En el caso de flavonoides (flavonas y flavonoles) orto-dihidroxilados en el anillo B (sin
3-OH ni 5-OH) al añadir el cloruro de aluminio se obtiene un desplazamiento
batocrómico de la banda I de 30-40 nm, el cual se pierde al añadir el HCl. Los orto-
dihidroxilados en A (sin 3-OH ni 5-OH) muestran un desplazamiento de la misma
banda de 20-25 nm, el cual se pierde también al añadir el HCl.
Otros flavonoides como las flavanonas, isoflavonas y flavanonoles presentan
desplazamientos batocrómicos pero en la banda II. Las auronas, chalconas y
antocianidinas también presentan desplazamientos batocrómicos en la banda I.

- Espectrometría de RMN.
El espectro de RMN-1H de los flavonoides permite reconocer características estructurales
importantes. Un resumen de los para los tipos de protones más comúnmente hallados se
presenta en la siguiente tabla.

(ppm) Tipos de protones


0.0 Tetrametilsilano
0.0-0.5 Trimetilsililo
1.0-1.2 Metilo de la ramnosa (doblete ancho)
1.7 Metilos del grupo isopentenilo
1.9-2.0 Metilos de acetatos alifáticos (de azúcares)
2.2-2.4 Metilos de acetatos aromáticos
2.7-3.0 H-3 de flavanonas (multiplete)
3.0-4.8 Protones de azúcares
3.5 Metileno del grupo isopentenilo
3.7-4.1 Metoxilos aromáticos
4.2-6.0 Protón 1 de azúcares, protón 2 de flavanonoles y
flavanonas (doble doblete)
5.9-6.0 Metiléndioxi
6.0-6.8 Protones 3, 6 y 8 de flavonas
6.8-8.0 Protones aromáticos del anillo B
7.5-8.0 Protón 2 de isoflavonas
12.0-14.0 Protón del hidroxilo 5
Las antocianinas se pueden reconocer en sus espectros RMN-1H por la señal en 8.9 (s,
H-4) y las señales características de otros protones aromáticos como en los glicósidos de
la delfinidina:

Las flavanonas se reconocen por las señales dd en 5.4 (H-2, J=13 y 2-3 Hz), 3.1 (H-3
trans, J=13 y 2-3 Hz) y 2.8 (H-3 cis, J=17 y 2-3 Hz).
Las isoflavanonas se pueden reconocer por RMN-1H por las señales: 4.1 (H-2a, dd, J=5 y
8 Hz), 4.5 (H-2b, dd, J=5 y 12 Hz) y 4.6 (H-3, dd, J=8 y 12 Hz).

En el espectro de RMN-13C se pueden reconocer los siguientes tipos de carbonos:

(ppm) Tipos de carbonos


18 C-6 de ramnosa
30 C-4 de flavan-3-oles
42-46 C-3 de flavanonas,
56-61 Metoxilos
60-80 C-OH de carbohidratos
70-75 C-3 de flavanonoles
80 C-2 de flavanonas
85 C-2 de flavanonoles
C-3 de flavonas, C-1 de carbohidratos, C-10 de
100-115
flavonas 5-hidroxiladas
115-128 aromáticos con H
130-140 aromáticos sulfatados
C-3 de flavonoles, C-5 de flavonas 5-hidroxiladas,
145
C-3 y C-4 de antocianinas
C aromáticos hidroxilados y metoxilados, C-1a de
150-165 flavonas, C-2 de antocianinas, C-2 de flavonas, C-4'
oxigenado, C-9 de flavonas
carbonilo C-4 sin OH en C-5 en flavonas, C-4 de
175-178
flavonoles
182 carbonilo C-4 con OH en C-5 de flavonas
190-196 carbonilo C-4 de flavanonas
197-200 carbonilo C-4 de flavanonoles

Es posible también diferenciar entre un C-glicósido flavonoide y un O-glicósido flavonoide.


En los O-glicósidos, el C-1 resuena alrededor de 100 ppm para los carbohidratos más
comunes, mientras que en los C-glicósidos resuena alrededor de 75 ppm. Por otro lado,
en los C-glicósidos el carbono de la aglicona ligado al carbohidrato resuena alrededor de
10 ppm a campo más bajo de su valor normal (sin sustituyente).

- Espectrometría de masas.
Las agliconas flavonoides presentan fragmentos característicos en su espectro de masas
IE. Por ejemplo, las flavonas y flavonoles presentan generalmente los fragmentos M+., [M-
H]+, y [M-CO]+. Uno o varios de los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y B2+ los que se
originan por rompimientos Retro-Diels-Alder:

Las flavonas e isoflavonas generalmente muestran los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y
B2+. Los flavonoles muestran [A1+H]+ y B2+; además el fragmento [M-CHO]+. Las 3-
metoxiflavonas muestran A1+., [A1+H]+ y B1+.. Además se observa el fragmento [M-CO-
Me]+.
Las flavanonas muestran A1+., [A1+H]+, [B1+2H]+. y los fragmentos [M-anillo B]+ y B3+.:

Las chalconas tienden a producir fragmentos originados por ruptura a cada lado del
carbonilo:
Las 2'-hidroxichalconas pueden isomerizarse a flavanonas y generar los fragmentos
característicos de estas.
En general las agliconas flavonoides con uno o varios grupos metoxilo presentan el
fragmento [M-Me]+, el cual es especialmente intenso en flavonoides 6- y 8-metoxilados.
En los flavonoides 2'-hidroxilados también se aprecia a veces el fragmento [M-OH]+,
mientras que los 2'-metoxilados presentan el fragmento [M-OMe]+. El fragmento [M-
agua]+ es común en flavonoles, flavan-3,4-dioles y C-glicósidos. El fragmento [M-55]+ o
[M-56]+. Indica la presencia de un sustituyente isopentenilo.
Es importante anotar que es posible diferenciar 5-hidroxi-, 6,7-dimetoxi-, 7,8-dimetoxi-, 5,
6,7-trimetoxi- o 5, 7,8trimetoxiflavonas con base en las intensidades relativas de los iones
M y M-15.
Para los glicósidos y flavonoides sulfatados aunque anteriormente se obtenían los
espectros de masas a partir de sus derivados permetilados,, y trimetilsililéteres,, más
recientemente se utiliza la Espectrometría de masas FAB. Por ejemplo el espectro de
masas FAB permite reconocer los flavonoides sulfatados ya que presentan además del
ion pseudomolecular (M+H en modo positivo, ó M-H en modo negativo), pérdidas
sucesivas de 80, 160, 240, etc. unidades de masa debidas a la pérdida de 1, 2, 3 ó más
grupos sulfato. Por ejemplo, el espectro FAB del siguiente compuesto, muestra los
fragmentos m/z 505 (M-H), 425 (M-HSO3) y 345 (M-2HSO3):

Ejemplo. La morina es un Flavonoide de formula molecular C15H10O7 y que presenta los


espectros UV mostrados a continuación. Determine la estructura más probable para esta
sustancia.
Recopilado por: Edson Ojeda. Código: 451992026
Alfonso Moreno. Código: 451001045

BIBLIOGRAFIA
Hppt: //www.amart@muiscas.udea.edu.co//. MARTINEZ, Alejandro. Aceites esenciales.
Facultad de Química y Farmacia. Universidad de Antioquia. Medellín, 2003.

LIGNANOS
 Características generales
Dímeros de unidades de fenilpropano.
 Clasificación; según el tipo de núcleo específico que tengan.
Lignanos
Neolignanos
Oligómeros
Norlignanos

 Importancia en Farmacognósia
Presentan actividades farmacológicas de aplicación en terapéutica
(citostáticos y citotóxicos -podofilotoxina-, antiinflamatorios -nuez moscada-,
hepatoprotector -cardo mariano-, etc.)

Métodos de, Investigación en Fitoestrógenos Química, Análisis y Propiedades Biológicas

Introducción a la Síntesis y Metabolismo de los Fitoestrógenos


Entre los fitoestrógenos predominantes en las plantas se encuentran los lignanos y las
isoflavonas. Los lignanos son relativamente simples desde el punto de vista metabólico y
son el resultado de las variaciones de la condensación de dos unidades de fenilpropano.
En las isoflavonas también se encuentra una cadena medular de fenilpropano, pero con
una estructura anillar adicional que se deriva de la condensación de acetato. En contraste
con los lignanos, que se encuentran ampliamente distribuidos, las isoflavonas, desde el
punto de vista de la evolución, llegaron tarde, y se encuentran principalmente en una
subfamilia de las Leguminosae, la Papilionoideae. Entre estas plantas, las isoflavonas
específicas presentes varían ampliamente, y con regularidad se acumulan sólo bajo
condiciones específicas de estrés. Una excepción a esto es el alto nivel constitutivo del
fitoestrógeno isoflavona, la genisteína, que se encuentra presente en la semilla y órganos
de las plántulas del fríjol soya, tanto como glucosil como conjugados de malonilglucosil.
Por otro lado, a diferencia de las isoflavonas, los flavonoles, que están muy relacionados,
también están ampliamente distribuidos en las plantas a niveles altamente constitutivos.
Esto nos da la posibilidad de que la formación de las isoflavonas pueda introducirse en los
cultivos alimentarios con la introducción de unos cuantos genes metabólicos.
Las funciones endógenas de las isoflavonas están mucho mejor fundamentadas que
aquellas llevadas a cabo por los lignanos. Entre los papeles predominantes se encuentran
las interacciones planta-microbio, en donde pueden funcionar como: 1) toxinas
preformadas (fitoanticipinas); 2) precursores de antibióticos inducidos (fitoalexinas); 3)
señales para quimioatracción de patógenos hacia el huésped; 4) señales para la
inducción de genes que regulan la infección de patógenos o simbiontes; y 5) antioxidantes
para proteger las células huésped. Aunque la investigación en nuestro laboratorio se ha
enfocado en muchos de estos acontecimientos, fue sólo recientemente que descubrimos
que la genisteína también actúa como una señal interna para activar la competencia de
defensa en células de soya, que de lo contrario serían quiescentes. Este nuevo papel de
la genisteína es particularmente interesante; ya que ésta sirve como una fitoseñal
parecida a una hormona que programa la respuesta de la célula. De esta manera, las
comparaciones de las respuestas de plantas y animales a la genisteína pueden
proporcionar información complementaria muy interesante con relación a las rutas de
respuesta de estímulos correspondientes.
Después del descubrimiento de los dos lignanos en mamíferos, la enterolactona y el
enterodiol, de la orina humana, se ha incrementado considerablemente la investigación
interdisciplinaria sobre estas estructuras butirolactona tipo di- y polifenólica. Los lignanos
de mamíferos están formados por bacterias intestinales en el tracto intestinal a partir de
lignanos vegetales tales como matairesinol y secoisolariciresinol, que también han sido
detectados en el plasma y heces fecales humanos, junto con lignanos dietéticos tales
como lariciresinol e isolariciresinol de la orina humana. Estudios recientes acerca de la
linaza y el centeno han indicado que probablemente hay más lignanos precursores
presentes en estos tipos de alimentos. La enterolactona sola o junto al enterodiol también
se ha detectado en la leche de vaca, plasma humano, heces, fluido de quistes mamarios,
saliva y fluido prostático.
Se han desarrollado algunos métodos de preparación sintética para identificar estas
estructuras de lignanos en muestras biológicas y para estudiar sus efectos biológicos en
el hombre. Se desarrolló una reacción tipo adición Michael de tres componentes para
sintetizar los dos enterolignanos y los precursores vegetales de matairesinol,
secoisolariciresinol y los precursores potenciales arctigenina y buplerol. El esqueleto del
lignano en el lariciresinol y en el isolariciresinol tiene características estructurales que
requieren un mayor diseño en su síntesis.

Se desarrolló un método de cromatografía de gas de dilución de isótopos-espectrometría


de masa en el modo de monitoreo del Ion selecto para los lignanos. Su ensayo
cuantitativo por medio de IDGC-MS-ISM está basado en el empleo de estándares internos
deuterados. Habiendo estudiado los métodos de deuteración para los enteroliganos y los
lignanos vegetales, ahora podemos introducir hasta ocho átomos estables de deuterio en
el esqueleto de lignano utilizando varias técnicas, por ejemplo para dar D6enterolactona y
el correspondiente diol, D6-matairesinol, D6- y D8-secoisolariresinol en elevada pureza
isotópica.
Las bajas concentraciones de lignanos en ciertos fluidos humanos conllevan la necesidad
de métodos analíticos más sensibles y específicos. Se sintetizaron numerosos
enterolignanos con una cadena lateral carboxílica lateral, para el desarrollo del
radioinmunoensayo. Ahora podemos procurar tanto cadenas laterales de carboxialcoxi
como carboxialquil derivadas de enterolignanos. También ciertos amino-enterolignanos
han sido sintetizados con el mismo propósito.
Para esclarecer el metabolismo de los lignanos dietéticos vegetales, se han sintetizado
numerosos lignanos sustituidos con hidroxilo o metoxilo, muchos de los cuales son
compuestos nuevos. Hasta ahora, el 7-hidroximatairesinol y el 7-hidroxienterolactona han
sido identificados empleando compuestos modelo sintéticos auténticos. También se han
llevado a cabo estudios acerca de la síntesis de sulfatos enterolignanos. Actualmente,
estamos sintetizando los precursores potenciales de lignanos que pueden encontrarse en el
centeno y la linaza.
Los lignanos son una clase de fenilpropanoides ampliamente distribuidos en la naturaleza
cuyas estructuras sustentan la visión de que se forma por dimerización oxidativa de
unidades C6C3. Los lignanos propiamente dichos son dimeros oxigenados de fenil
propanos sencillos con puente β-β! De la cadena lateral.
β β!

α α!

Cuando esta unión es diferente a β-β! Se denominan neolignanos.


Los lignanos se pueden separar por extracción con metanol seguidas por particiones con
solventes de diferentes polaridades.
Los lignanos que poseen grupos fenólicos, se pueden separar por precipitación, a las
soluciones alcohólicas se les adiciona KOH acuoso concentrado, estos se precipitan
como sales de potasio o con acetato de plomo, precipitan como sales de plomo, en este
caso, los fenoles se liberan por la adición de H2S a la suspensión alcohólica.
Una vez obtenido el extracto, se monitorea por cromatografía en capa fina (ccf) y las
manchas se observan en UV a 254 nm o con vapores de yodo.

 Ejemplo de aislamientos.
- Glucósidos de lignanos:
3 Kg. de rizomas y raíces de Podophyllum peltatum, secos y molidos se extrajeron con
varias porciones de metanol caliente (en total 6 litros), en periodos de 90 minutos. Los
extractos se evaporaron a presión reducida. Al residuo se le añadió 4 litros de agua y se
extrajo con 700 mL de cloroformo. A la fase acuosa se le añadieron 4.5 L de metanol.
Enseguida se añadieron 130 mL de sln al 30% de acetato de plomo para precipitar
flavonoides y taninos. A la mezcla se le ajustó el pH a 6, y se filtró. El filtrado se concentró
a presión reducida hasta 4 L. Esta sln se extrajo, sucesivamente, con 800 Ml de
cloroformo, cloroformo n-butanol (9:2) 800 mL de cloroformo n-butanol en partes de (7:3)
y n-butanol al destilar los disolventes a presión reducida dejaron, respectivamente los
siguientes residuos, 2.20 g, 12.14 g, 5.78 g y 15.30 g de los que por cromatografía en
columna de gel de sílice se obtuvo podofilotoxina, podofilotoxina -S-D-glucosido de
pallatina-S-D-glucosido.

- Lignanos (liriodendrina)
20Kg de tronco descorteza de tulipán (Liriodendron tulipifera) se convirtieron en astillas
diminutas y se cubrieron con etanol. La suspensión se dejó reposar 6 semanas de
seguido. El extracto etanólico (30 L). Se separó y evaporó a presión reducida el residuo
se mezcló con una ayuda para fioltración. El filtrado se esxtrjo con cloroformo. La capa de
filtrado se mezcló con un exceso de acetato básico de plomo. El precipitado de sales de
plomo se separó por filtración y en la solución filtrada se eliminó el exceso de plomo con
H2S el sulfato de plomo se recogió y la sln se concentró a presión reducida. El
concentrado se dejó reposar varios días, separándose cristales incoloros de liriodendrina
(10 g), que recristalizada el etanol fundió a 170º.

Lignanos con grupos fenólicos

Solución alcoholica
+
[KOH] o PbAc2

Sales de Pb++
Sales de k+
H2S

Liberación de fenoles

Se monitorea por CCF

Se lee en U.V a 240 nm aproximadamente o con vapor de yodo (revelador)

 Reacciones coloridas.
Son las genéricas por hidroxilo fenólico, coloración por el cloruro ferrico en etanol para el
grupo metilendioxi (CH2O), cuando forman colores rojos con el H2SO4 y el acido
cromotropico, o para anillos aromáticos cuando se colorean al calentar [H2SO4].

 Cromatografía.
- Cromatografía en papel y en capa delgada.
Se han separado algunos lignanos en papel Whatman números 1 y 3, previamente
tratados con 20% de formamida en acetona usando como disolvente cloroformo-
tetrahidrofurano-formamida (50:50:6.5) v/v, pentacloruro de antimonio en cloroformo como
agente cromogenico. Para cromatografía en capa delgada se han usado capas con gel de
sílice G, y solventes como cloroformo metanol (75:20). Para glicosilignanos cloroformo-
metanol-agua (70:25:5), acetato de etilo-acetato de isopropilo-etanol-agua (40:40:15:5),
benceno o éter de petróleo-benceno (1:3), usando con hidroxiotobaina y análogo. Para el
otobafenol se ha usado acetato de etilo y ciclohexano (1:9) y acido perclórico al 2% para
colorear.

 Características espectrales.
- U.V. Los espectros ultravioleta carecen de detalles particulares, amenos que haya
instauraciones conjugadas con los anillos aromáticos, los espectros son muy parecidos a
los anillos aromáticos sustituidos. Generalmente tienen dos máximas de casi igual
intensidad, 230-240 nm (ε = 8.000) y 280-290 nm (ε = 6.000-8000) (en etanol). Las
ilustraciones conjugadas con el anillo aromático originan desplazamientos batocrómicos e
hipercrómicos.
- IR. Se exhiben señales de hidroxilos (3.600-3400 cm-1) si los hay, de C-H (2.950-2800
cm-1), de lactona (1.775 cm-1) si la hay, o de ester (1.738 cm-1), de anillo aromático a
1600-1590; 1505-1503; 1.490 cm-1. Además pueden observarse las señales de grupos
metilendioxi y metoxi.
- RMN. Es muy útil para determinar las estructuras y configuraciones de estos
compuestos. Los protones aromáticos aparecen a 6.20-6.80 δ, los HO-fenólicos a 6.50 δ,
(singlete) los metilendioxi-5.90-5.94 δ (cuarteto). Los grupos metilos unidos a un carbón
secundario dan dobletes a 0.85-1.05 δ (J = 6 cps). Los compuestos análogos a la
sesamina, K exhiben dobletes a 3.11-3.15 δ.
Los espectros de masa son difíciles de interpretar, se ha examinado la tendencia de
fragmentación exhibida por lignanos con un solo anillo de tetrahidrofurano y también dos.
El espectro de masa se muestra en la asarinina un bifuránico y un tetrahidrofurano.
O
Ar-CH CHCH2OH
O H2 C m/e = 179
O
Ar-CH CH CH2
Ar
O O m/e = 161
O
m/e = 203
O
m/e = 354

H3CO OCH3

H3CO OCH3

H
OCH3 O OCH3

H3CO H3CO
Folleto informativo.
Semilla de linaza: una rica fuente de lignanos.
La semilla de linaza es una de las fuentes más ricas de lignanos, un tipo de fitoestrógeno.
Los fitoestrógenos son un grupo diverso de compuestos derivados de plantas que pueden
interferir con el metabolismo de estrógenos en animales y humanos. De hecho, los
fitoestrógenos pueden tener efectos biológicos contrarios, exhibiendo ambas actividades
estrogénicas y antiestrogénicas.
Los lignanos tienen numerosas propiedades biológicas, las que incluyen antimitosis
(división celular), fungicidas, antioxidantes. Los lignanos de los conos de pinos y del
arbusto creosote4 han mostrado in Vitro inhibir la reproducción del virus del síndrome de
inmunodeficiencia adquirida. El cinamofilin, un nuevo lignano identificado, inhibe la
síntesis de tromboxana, lo cual disminuye la producción de tromboxana A2 y en
consecuencia reduce la agregación de plaquetas y la vasoconstricción.

¿Cuáles son las principales fuentes de lignanos?


Los lignanos están ampliamente distribuidos en el reino vegetal encontrándose en la
mayoría de los granos sin refinar tales como cebada, mijo, trigo sarraceno, avena;
leguminosas como la soya; en vegetales como brócoli, zanahoria, coliflor y espinaca. La
fuente más importante de lignanos es la semilla de linaza. La linaza contiene altos niveles
del precursor vegetal de lignanos llamado secoisolariciresinol diglicósido (SDG), y provee
de 75-800 más lignanos vegetales que otras fuentes encontradas en dietas vegetales. La
mayoría de los lignanos vegetales son removidos durante los procesos, por tanto estos no
se encuentran en cantidades apreciables en el aceite de linaza.

¿Son lo mismo los lignanos que las ligninas?


Los lignanos y las ligninas están relacionados estructuralmente (ambos tienen en común
un ácido residual cinámico y pueden ser sintetizados por procesos similares) pero difieren
en sus efectos biológicos. Los lignanos son estructuras difenólicas formadas por la unión
de dos derivados de ácidos cinámicos. Cientos de compuestos de diversas estructuras
son clasificados como lignanos, algunos de los cuales han sido investigados por sus
efectos antiestrogénicos.
Las ligninas son un tipo de fibra comestible insoluble. Como la celulosa, las ligninas son
una estructura polimérica encontrada en las paredes de células vegetales que son
resistentes a hidrólisis de enzimas digestivas humanas. El ácido cinámico es un precursor
de las ligninas.

¿Cuál es la relación entre los lignanos vegetales y mamá licos?


Los lignanos vegetales son precursores de los lignanos mamá licos. Por ejemplo, el
principal precursor en la semilla de linaza (secoisolariciresinol diglicósido o SDG) es
convertido por las bacterias en el colon a los principales lignanos encontrados en
humanos y otros animales: enterodiol y enterolactona. El enterodiol y la enterolactona son
también llamados lignanos animales o mamá licos para distinguirlos del SDG y otros
precursores de lignanos vegetales.

¿Cuál es el destino metabólico de los lignanos ingeridos?


Los lignanos vegetales ingeridos se convierten a lignanos mamá licos por las bacterias
intestinales. Los lignanos mamá licos, enterodiol y enterolactona, tienen dos destinos
metabólicos: 1) pueden ser excretados directamente en las heces; o 2) pueden
absorberse del intestino y entrar a la circulación entero hepática donde son conjugados
principalmente con gluconatos y luego son excretados por la orina y la bilis. La
concentración de enterodiol y enterolactona en la orina esta relacionado a la
concentración de lignanos vegetales en la dieta; a una mayor cantidad de lignanos
vegetales resulta en mayor cantidad de enterodiol y enterolactona excretada en la orina
de ratas y animales.

¿Protegen los lignanos contra el cáncer?


Los lignanos pueden proteger contra cierto tipo de cánceres, particularmente los cánceres
de sensibilidad hormonal tales como el de mama, endometrio y próstata, al interferir con el
metabolismo de las hormonas sexuales. Se ha demostrado que los lignanos han
mostrado estimular la síntesis hepática de globulina adherente de hormonas sexuales
(SHBG), así mejorando la liberación y circulación de estrógeno, y la unión de receptores
de estrógeno en el SHBC en una forma dosificada, de esta manera se inhibe la
agregación de estrógeno y testosterona. Como la SHBG se encuentra en las células de
cáncer de mama, la unión de lignanos mamá licos a la SHBG puede interferir con los
procesos de generación tumoral mediados por estrógeno.

¿Los lignanos de la semilla de linaza pueden tener propiedades anticancerígenos?


Basados en estudios animales, la respuesta es Sí. En un estudio con ratas femeninas
alimentadas con una dieta basal alta en grasa, con suplemento ya sea con semilla de
linaza molida o semilla de linaza desgrasada por un período de cuatro semanas mostró
disminuir la proliferación de células epiteliales y aberraciones nucleares en el tejido de las
glándulas mamarias, comparado con ratas alimentadas con la dieta basal únicamente. En
otro estudio, con tumor de mama existente las ratas fueron alimentadas ya sea con una
dieta basal o dieta basal mas SDG, aceite de linaza o semilla de linaza (2.5 o 5%). El
volumen tumoral disminuyó en las alimentadas con dieta basal más SDG o semilla de
linaza. Más aún, el volumen de los tumores establecidos disminuyó significativamente
cuando las ratas fueron alimentadas con aceite de linaza, el cual contiene ácido alfa
linolénico ALA. La semilla de linaza ha mostrado también tener un efecto protector contra
el cáncer de colon en ratas.

¿Tiene la semilla de linaza y otros lignanos propiedades anticancerígenos en


humanos?
Estudios poblacionales de dieta y riesgos de enfermedad también sugieren qué papel
anticancerígeno de los lignanos y otros fitoestrógenos. Poblaciones con alto consumo de
fitoestrógenos (tales como japoneses y chinos, que típicamente consumen una dieta baja
en grasa, alta en fibra y rica en isoflavonoides de soya y lignanos de vegetales y granos)
ha mostrado tener índices de menor incidencia y mortalidad por cáncer de mama,
endometrio y próstata. Las poblaciones occidentales tienden a consumir dietas bajas en
fibra, altas en grasas y tienen mayor riesgo de estos cánceres. Las diferencias
poblacionales pueden observarse en las diferencias de isoflavonoides en el plasma
sanguíneo, el cual es mayor entre hombres japoneses que hombres europeos, y en
niveles de lignanos mamá licos e isoflavonoides en orina, que son mayores entre
vegetarianos y lacto-vegetarianos que en omnívoros.

Semilla de Linaza. Efectos benéficos de la semilla de linaza en el sistema


inmunológico.
La semilla de linaza contiene dos componentes que afectan favorablemente el sistema
inmunológico: el ácido alfa linoléico (ALA), un ácido graso esencial omega-3, y lignanos,
un tipo de fitoestrógenos. Estos componentes afectan la respuesta inmunológica de
células y mediadores inmunológicos tales como eicosanoides y citocines. El ALA, por
ejemplo, suprime la proliferación de linfocitos monucleares sanguíneos periféricos y el
retraso de respuesta hipersensible de ciertos antígenos. Las investigaciones recientes
sugieren que el ALA y los lignanos en la semilla de linaza modulan la respuesta
inmunológica y pueden jugar un papel benéfico en el manejo clínico de enfermedades
auto-inmunes. El ALA de la semilla de linaza tiene influencia inmunológica (la habilidad
del cuerpo para defenderse exitosamente contra substancias extrañas) a través de sus
efectos en los fosfolípidos de las membranas celulares y la producción de eicosanoides y
citocines. Los lignanos tienen influencia en ciertos mediadores de la respuesta
inmunológica.
Recopilado por: Roger Rivera. Código: 451002089

BIBLIOGRAFIA
Hppt: //www.amart@muiscas.udea.edu.co//. MARTINEZ, Alejandro. Aceites esenciales.
Facultad de Química y Farmacia. Universidad de Antioquia. Medellín, 2003. pp. 123 -136.

ANTRONAS Y XANTONAS

Recopilado por: Jean Charris. Código: 451002052

BIBLIOGRAFIA
Hppt: //www.amart@muiscas.udea.edu.co//. MARTINEZ, Alejandro. Aceites esenciales.
Facultad de Química y Farmacia. Universidad de Antioquia. Medellín, 2003. pp. 161-174.
ALCALOIDES
 Generalidades.
La diversidad estructural y la variedad en la actividad biológica, hacen de los alcaloides
como también de los antibióticos, los grupos mas importantes entre las sustancias
naturales de interés terapéutico.
Se han aislado principalmente en plantas superiores y se han encontrado en mas de 100
familias de Fanerógamas (aquellas plantas que se reproducen por semillas producidas en
sus inflorescencias), en menor proporción en Criptógamas (Plantas que tienen sus
órganos reproductores ocultos) del tipo licopodios, microorganismos (ergot) y animales:
peces y sapos (bufotenina). Su actividad biológica a nivel del sistema nervioso, dio pie a
las primeras investigaciones, siendo los alcaloides las primeras sustancias naturales
estudiadas.
El término alcaloide (de álcali), fue propuesto por el farmacéutico W. Meissner en 1819, se
aplicó a los compuestos de origen vegetal con propiedades alcalinas, este carácter básico
es debido a la presencia de nitrógeno amínico en su estructura.
No existe una definición exacta para los alcaloides, pero se puede considerar como: “Un
compuesto orgánico de origen natural (generalmente vegetal), nitrogenado, derivados
generalmente de aminoácidos, mas o menos básico, de distribución restringida, con
propiedades farmacológicas importantes a dosis bajas y que responden a reacciones
comunes de precipitación.
Por comodidad, algunos autores dividen los alcaloides en cuatro clases (ver figura 1)
· Alcaloides verdaderos
· Protoalcaloides
· Pseudoalcaloides
· Alcaloides imperfectos
Alcaloides Verdaderos. Cumplen estrictamente con las características de la definición de
alcaloide: tienen siempre un nitrógeno heterocíclico, son de carácter básico y existen en la
naturaleza normalmente en estado de sal, biológicamente son formados a partir de
aminoácidos.
Protoalcaloides. Son aminas simples con nitrógeno extracíclico, de carácter básico y son
productos del metabolismo de los aminoácidos.
Pseudoalcaloides. Presentan todas las características de la definición de alcaloide pero
no son derivados de aminoácidos.
Alcaloides imperfectos. Son derivados de bases púricas, no precipitan con los reactivos
específicos para alcaloides.

Aspectos biogenéticos para la clasificación de los alcaloides


En cuanto a su estado natural, los alcaloides son esencialmente sustancias presentes en
las angioespermas (plantas que tienen sus semillas recubertas por un epicarpio), sobre
todo en ciertas familias como Lauraceae, Magnoliaceae, Renunculacease Annonaceae,
Menispermaceae, Papaveraceae, Fumariaceae, Rutaceae, Apocynaceae, Loganiaceae,
Rubiaceae, y Solanaceae, se encuentran excepcionalmente en bacterias (Piocianina de
Pseudomonas aeriginosa); y en hongos (psilocina de los hongos alucinógenos mexicanos
yergopéptidos del ergot del centeno).

 Función de los alcaloides en las plantas.


La función de los alcaloides en las plantas no es aun clara, existen algunas sugerencias
sobre el “rol” que juegan estas sustancias en los vegetales como:
· Sirven como productos de desecho o almacenamiento del nitrógeno sobrante, esta
función es equivalente a la del ácido úrico o de la urea en los animales.
· En algunos casos los alcaloides pueden servir como productos de almacenamiento del
nitrógeno no metabolizado o para transporte del mismo; en el caso de las Solanaceas
midriáticas, los ésteres del tropano se forman en las raíces y son transportados a las
partes aéreas donde pueden ser hidrolizados.
· La microquímica ha permitido mostrar en forma general, que los alcaloides son
localizados en los tejidos periféricos de los diferentes órganos de la planta, es decir en el
recubrimiento de las semillas, corteza del tallo, raíz o fruto y en la epidermis de la hoja;
esto nos permite pensar que los alcaloides cumplen una importante función como es la de
proteger a la planta, por su sabor amargo de estos, del ataque de insectos.
· Los alcaloides pueden servir de reguladores del crecimiento, se ha demostrado que los
alcaloides derivados de la putrescina se incrementan notablemente en algunas plantas
cuando se encuentran en suelos deficientes de potasio[2,3].
· Mediante técnicas biotecnológicas, las plantas que normalmente acumulan alcaloides en
las partes aéreas, como es el caso de la Nicotiana y Daturas, se han producido sin
alcaloides, la pérdida de alcaloides en el vástago, no impide el desarrollo de la planta, lo
cual sugiere que los alcaloides no son esenciales para los vegetales
Si bien, la presencia de alcaloides no es vital para la planta, estos deben de participar en
secuencias metabólicas y no son solamente productos de desecho del metabolismo.

 Propiedades fisicoquímicas
Los alcaloides tienen masas moleculares que varían entre 100 y 900 (coniína
C8H17N=127, vincristina C46H56N4O10=824); son casi siempre incoloros a excepción de
aquellos altamente conjugados como berberina (amarillo), sanguinarina (rojo), urabaina
(verde) y oxoaporfinas que van de amarillo a rojo; son normalmente sólidos a temperatura
ambiente, algunas bases no oxigenadas como la coniína, la nicotina y la esparteina que
son líquidas; 6 con algunas excepciones como la arecolina que es oxigenada y líquida; los
alcaloides base son poco solubles en agua.

 Reconocimiento de los alcaloides.


Las técnicas de reconocimiento son basadas en la capacidad que tienen los alcaloides en
estado de sal (extractos ácidos), de combinarse con el yodo y metales pesados como
bismuto, mercurio, tugsteno formando precipitados; estos ensayos preliminares se pueden
realizar en el laboratorio o en el campo.
En la práctica, se utilizan reactivos generales para detectar alcaloides como: la solución
de yodo-yoduro de potasio (Reactivo de Wagner), mercurio tetrayoduro de potasio
(reactivo de Mayer), tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de Dragendorff), solución de
ácido pícrico (reactivo de Hager), ácido sílico túngtico (reactivo de Bertrand), p-
dimetilamino benzaldehido (reactivo de Ehrlich); nitración de alcaloides (reacción de
Vitali-Morin se usa para alcaloides en estado base).
Existen reactivos específicos que colorean ciertos grupos de alcaloides[6].
· El p-dimetilamino benzaldehido para los alcaloides del ergot del centeno
· El sulfato de cerio (IV) y amonio, diferencia los indóles (amarillo), los dihidroindóles(rojo)
los b-anilino acrilatos (azul). 1% de solución de sulfato de cerio y amonio en una solución
al 85% de ácido fosfórico.
· El sulfato cérico ácido sulfúrico para los alcaloides esteroidales, esteroles y saponinas.
Se satura una solución al 65% de ácido sulfúrico con sulfato cérico, se calienta x 15 min a
120º (J. Chomatog. 12, 63 (1963)
· El nitroprusiato de sodio y amoniaco para los alcaloides de la cicuta
· El sulfato de hierro y amónio para los alcaloides de la vinca
· Los reactivos de percloruro férrico en medio clorhídrico para tropolonas y en medio
perclórico para alcaloides de las Rauwolfias.
· El reactivo de yodoplatinato para los alcaloides del opio (morfina y codeína da coloración
gris azuloso y los otros color castaño).
· Ciertos alcaloides de la quina (principalmente quinina y quinidina) tienen la propiedad de
ser fluorescentes (l366 nm) en presencia de un ácido oxigenado.

 Extracción y aislamiento
Puesto que los alcaloides son compuestos de carácter básico, su solubilidad en los
diferentes solventes varia en función del pH, es decir según se encuentre en estado de
base o de sal:
En forma de base, son solubles en solventes orgánicos no polares como benceno, éter
etílico, cloroformo, diclorometano, acetato de etilo.
En forma de sales, son solubles en solventes polares agua, soluciones ácidas e
hidroalcohólicas.
El fundamento de la extracción se basa en el carácter básico de los alcaloides y en el
hecho de su existencia en las plantas como sales de ácidos orgánicos o como
combinaciones solubles de otras sustancias[1,2], entre los principales se encuentran: los
ácidos tíglico, 3 metil butírico, benzoico, cinámico, hidroxifenil propiónico, trópico y
tricarboxílicos, y además con otro tipo de sustancias como taninos y fenoles.

 Extracción de Alcaloides.
Para la extracción existen dos métodos generales: La extracción en medio alcalino (por un
solvente orgánico) y la extracción en medio ácido (con agua, con alcohol o solución
hidroalcohólica).
a) La droga pulverizada y desengrasada se mezcla con una solución alcalina que
desplazalos alcaloides de sus combinaciones salinas; las bases liberadas son en seguida
solubilizadas en un solvente orgánico medianamente polar.

Extracción de alcaloides con solvente orgánico apolar en medio alcalino.

b) El solvente orgánico conteniendo los alcaloides bases es separado y concentrado a


presión reducida, luego se agita con una solución acuosa ácida, donde los alcaloides se
solubilizan en su forma de sales, mientras que otras sustancias que se encuentren en el
extracto como pigmentos, esteroles y otras impurezas restan en la fase orgánica.
c) Las soluciones acuosas de las sales de alcaloide son alcalinizadas y extraídas con un
solvente orgánico no miscible; el solvente orgánico es deshidratado sobre una sal anhidra,
filtrado y concentrado a presión reducida, el residuo que queda son los alcaloides totales
(AT).
La basicidad de los alcaloides es muy variable y en algunos casos es estrechamente
relacionada con el par de electrones libres del nitrógeno: los grupos electro atrayentes
adyacentes o vecinos al nitrógeno disminuyen la basicidad, es el caso de del carbonilo de
las amidas como la colchicina, la piperina, y de las oxoaporfinas, esto hace que sean
compuestos prácticamente neutros[5]; esto ocurre también cuando en la molécula, el
tamaño de la parte hidrocarbonada es muy grande con relación a la nitrogenada (algunos
alcaloides esteroidales y bisaporfinas, se puede extraer en medio neutro con solventes
apolares (en el desengrase).
Clasificación de los alcaloides.
Habitualmente los alcaloides se han clasificado en función de su estructura,
distinguiéndose principalmente los compuestos heterocíclicos de los no heterocíclicos.

- Alcaloides alifáticos
· derivados de la ornitina (pirrolidinas, tropánicos, pirrolizidínicos)
· derivados de la lisina (piperidinas, quinolizidínicos)
-Alcaloides aromáticos
· derivados del ácido nicotínico (piridinas)
· derivados de la fenil alanina y tirosina (isoquinoleinas)
· derivados del triptofano (indolicos, quinoleinas)
· derivados de la histidina (imidazoles)
- Alcaloides de origen diverso
· alcaloides terpénicos y esteroidales
· alcaloides diversos (purinas, macrociclos, etc.)

 Biosíntesis de alcaloides.
La biosíntesis de los alcaloides será abordada en forma general por la diversidad
estructural de estos metabolitos secundarios, en forma detallada, se mostrará la
biosíntesis de algunos grupos de alcaloides.
Según la clasificación de los alcaloides de acuerdo a su origen biosintético, Los
aminoácidos precursores son (ver figura 5): la ornitina, la lisina, el ácido nicotínico, la
fenilalanina, la tirosina, el triptofano, el ácido antranílico y la histidina, además de estos
aminoácidos, intervienen también bases púricas y unidades terpénicas y derivadas del
acetato.
 Alcaloides derivados de aminoácidos alifáticos.
Los alcaloides pirrolidínico y piperidínicos provienen salvo raras excepciones del
metabolismo de los aminoácidos ornitina y lisina, la utilización de aminoácidos con el
nitrógeno marcado (15N), permitió que Herbert y col. demostraron por marcación isotópica
en plantas del género Belladona, que la d-N-metilornitina es un componente natural de
estas plantas y que el amino terminal de la ornitina y lisina es el que finalmente se
incorpora para formar las iminas cíclicas.

 Alcaloides derivados de la ornitina.


Los alcaloides derivados de la ornitina llamados alcaloides pirrolidínicos, son menos
frecuentes que sus análogos piperidínicos, varios tipos de alcaloides se derivan del
aminoácido ornitina, estos son biogenéticamente derivados del D1 pirrolidina, algunos
adicionan cadenas laterales formadas por unidades de acetato y comprenden:
. Las pirrolidinas simples como las higrinas y los alcaloides tropánicos de ciertas
Solanaceae y Erythroxylaceae (coca), los alcaloides del tabaco y la stachidrina de
Stachys officinalis.
· Las pirrolicidinas de Borraginaceas y de algunas Compuestas.
· Las indolicidinas aunque tienen la estructura D1 pirrolidina y D1 piperidina solo los
encontrados en los géneros Eleaocarpus y Tylofora, son derivadas del metabolismo de la
ornitina, en los otros casos como los alcaloides del género Securinega, son del
metabolismo de la lisina.
De este grupo y por su acción farmacológica, los alcaloides derivados del núcleo
tropánico son los de mayor interés.
Alcaloides derivados de la Ornitina

 Alcaloides derivados del núcleo tropánico.


El núcleo tropánico comprende un heterocíclico nitrogenado bicíclico:

El tropanol o sus derivados, son esterificados con ácidos orgánicos. El principal de estos
ácidos es el ácido trópico el cual posee un carbón asimétrico y se forma por
unreagrupamiento tipo Many de la fenil alamina luego de una transaminación y posterior
reducción.

 Biogénesis del núcleo tropánico.


La mayoría de los trabajos sobre la biosíntesis de los alcaloides del núcleo tropánico se
han realizado sobre diversas especies del género Datura, los datos disponibles,
evidencian la similitud de las rutas de formación del núcleo tropánico en este género con
otras plantas productoras de este tipo de alcaloides.
El primer trabajo con isótopos radiactivos mostró que al aminoácido ornitina se le
incorporaban unidades de acetato para formar el núcleo, luego se demostró que esta
incorporación era esteroespecífica dependiendo de la especie.
Para el caso del tropanol de Solanaceas y de la ecgonina de Erythroxylaceas, el
mecanismo de formación del núcleo, se divide luego de la condensación de la cadena de
acetato.

 Actividad Biológica.
Actividad del grupo Atropina - hiosciamina.
Estos dos alcaloides poseen las mismas propiedades farmocológicas, en general la
hiosciamina es entre 10 y 50 veces mas activa que la atropina, pero esta es mas estable.
· Sobre el Sistema Nervioso Central (SNC).
A dosis bajas tienen poca acción pero a dosis altas, provocan una excitación que se
traduce en delirio llamado “delirio atropínico”.
· Sobre el Sistema Nervioso Autónomo (SNA).
A dosis terapéuticas estos alcaloides son antagonistas de la acetil colina produciendo:
A nivel de los ojos, midriasis
A nivel del corazón, una aceleración
A nivel de los vasos capilares una vaso constricción
A nivel del tubo digestivo un relajamiento del peristaltismo y un agotamiento de las
secreciones.
Tienen además, una acción espasmolítica neurotópica .
 Alcaloides derivados del ácido nicotínico.
En los vegetales el ácido nicotínico se forma por la condensación del gliceraldehido 3
fostato con el ácido aspártico.
Biogénesis de la nicotina y la anabasina.

 Alcaloides derivados de la fenil alanina y tirosina.


Los derivados de los aminoácidos fenil alanina, tirosina y sus productos de
descarboxilación, comprenden una variada y gran cantidad de estructuras alcaloídicas
como:
· aminas simples o fenil etil aminas
· isoquinoleinas simples
· derivados bencilisoquinoleinas: alcaloides del opio y aporfinoides
· participación de ácido mevalónico (emetina y cefalina)
Estos alcaloides tienen una variada actividad farmacológica, muchos de ellos usados en
terapéutica como es el caso de la emetina, morfina, codeína, tubocurarina etc.

 Alcaloides morfinanos.
Este tipo de alcaloides son exclusivos del género Papaver, género que cuenta con mas de
cien especies, solo una decena biosintetiza la tebaina y la morfina es solamente
elaborada por P. somniferum y P. setigerum[6].
Las adormideras (amapolas)
Pertenecen a la familia Papaveraceae, género Papaver la especie principal es Papaver
somniferum y P. rhoeas.
Papaver somniferum: adormidera, es una planta anual de 0.5 a 1.5 m de altura, con flores
solitarias insertadas sobre pedúnculo velloso, la planta contiene entre 5 a 8 cápsulas.
Además de numerosos híbridos de jardín se conocen las siguientes variedades:
P. somniferum var. Grabrum. Cultivada en Turquía, sus flores son generalmente púrpuras
pero a veces se presentan blancas; cápsula subglobular; 10-12 estigmas, semillas de
color blanco a violeta oscuro.
P. somniferum var. Album. Cultivada en la India,: flores y semillas blancas; cápsulas mas
o menos aovadas de 4-8 cm de diámetro, sin poros bajo el estigma.
P. somniferum var.nigrum, cultivada en Europa, el nombre de la variedad se da por el
colorde la semilla, las hojas y el calis son glabros, las flores de color violáceo y las
cápsulas algo menores que las de la variedad album lo que la hace poco usada como
opiode. Esta es la variedad que se ha introducido en las montañas latinoamericanas para
fines ilícitos.
P. somniferum var.setigerum. Esta es una forma silvestre del sur de Europa. Los
pedúnculos y las hojas están cubiertos de pelos cerdosos; los lóbulos de las hojas son
muy puntiagudos y cada uno termina en una cerda.
Papaver rhoeas.comunmente llamada amapola es una planta similar a la anterior,
contiene alcaloides de tipo BTHIQ, como la rhoeadina, no tiene actividad tipo morfínica.

- OPIO. Es el látex desecado obtenido de las cápsulas inmaduras de P. somniferum.


Obtenido por la incisión de las cápsulas de las diferentes variedades, que luego de
secado y oxidado, forma una pasta de color café oscuro y de sabor acre y amargo.
- Composición química
El opio contiene cerca de 25 alcaloides combinados con en gran parte con ácido
mecónico el cual se puede detectar por la prueba del cloruro férrico: Se extrae el ácido
mecónico con éter en medio clorhídrico y luego se caracteriza por una coloración roja
granate en presencia de una solución diluida de percloruro de hierro.

La mayoría de los alcaloides se pueden clasificar en cuatro grupos:


Grupo de la morfina (Morfina, tebaina, codeina)

Grupo de la papaverina o Bencil Iso Quinoleina (BIQ)


Grupo de la narcotina o noscapina: Bencil Tetra Hidro Iso Quinoleina (BTHIQ)
Grupo de la narceina

Su biogénesis es a partir de la reticulina, girando la molécula por una línea imaginaria


entreel metoxilo en 2 y el carbono en 6aª vecino al nitrógeno, luego un acoplamiento
oxidativo de fenoles con el fin de formar el núcleo fenantrénico como se muestra en la
siguiente figura.
Biosíntesis de alcaloides derivados de la Morfina.

Acción fisiológica.
La morfina
· Sobre el sistema nervioso central (S.N.C.): acción analgésica que se manifiesta a dosis
bajas produciendo depresión de la percepción dolorosa; paralelamente, desarrolla una
sedación seguida de euforia que pasa progresivamente a sueño, el despertar es
particularmente desagradable; por lo tanto es un buen analgésico pero mal hipnótico.
· Sobre la respiración es un depresor respiratorio; la morfina y sus derivados a bajas dosis
tiene acción antitusiva.
La etilación del OH fenólico de la morfina produce un producto mas potente que la
codeína de aplicación oftalmológica. Mientras que la diacetil morfina , La heroína, tiene via
intravenosa una acción euforiante; mientras que si se sustituye el N-metilo de la morfina
por un grupo N-alilo produce la nalorfina, aunque tiene un efecto analgésico, se usa como
antagonista del efecto narcótico de la morfina.

La codeina
Es el mas usado en terapéutica la metilación del hidroxilo fenólico de la morfina produce
modificaciones de la actividad farmocológica:
· Disminución de la acción analgésica
· Disminución del efecto depresor respiratorio
· Disminución de la toxicomanía
Excelente antitusivo
Produce acción sedativa a dosis fuertes y prolongadas.

La tebaína
Este es un alcaloide sin acción terapéutica propia.
· Tóxico (convulsivante a dosis altas)

La papaverina
· Espasmolítico sobre la musculatura lisa

La noscapina
· No tóxico, sedativo de la tos.

 Aporfinoides.
El término aporfinoide comprende las aporfinas las mas ampliamente distribuidas y los
derivados de estas como oxoaporfinas, dioxo 4,5 aporfinas, dehidroaporfinas,
azaantraquinonas, azafluorenonas y los dímeros bisaporfinas entre otros.
Las aporfinas (N-metiladas) y las noraporfinas se encuentran casi siempre con
sustituciones oxigenadas en las posiciones 1 y 2 (hidroxilos, metoxilos o metilemdioxilo).
Además, debido a su origen biogenético, suelen estar sustituidas en las posiciones (10) o
(10, 9) o (10, 11) o (9, 10, 11) y en 7 en el caso de las 7 hidroxi aporfinas; raramente en 3
y en 8. En las posiciones 4, 5 y en la posición 7 puede haber corbonilos, en el primer caso
como las dioxoaporfinas[1] y en el segundo caso las oxoaporfinas; se conocen también
las 7 alkilaporfinas y diferentes productos de degradación como el caso de los derivados
fenantrénicos y las azafluorenonas.
El término aporfinoide esta estrechamente ligado a la morfina debido al rearreglo
estructural de esta en medio ácido, produciendo la apomorfina, una aporfina
hemisintética.
La apomorfina es utilizada en humanos vía parenteral para producir vómito cuando se ha
ingerido tóxicos, este alcaloide también es disponible en comprimidos sublinguales en
caso de intoxicaciones alcohólicas.
Esta sustancia le dio el nombre a los aporfinoides (proaporfinas, aporfinas y derivados),
actualmente hay mas de 600 estructuras conocidas y frecuentemente encontradas en
familias consideradas arcaicas, del orden de las Magnoliales como Annonaceae,
Lauraceae, Magnoliaceae, Monimiaceae, Menispermaceae y en otras familias como
Renunculiaceae, Papaveraceae, Hernandiaceae.
Ensayos in vitro e in vivo han mostrado en ciertos aporfinoides un potencial farmacológico
importante, como por ejemplo: antagonistas dopaminérgicos (anonaína, bulbocapnina),
depresor del SNC (coridina), antitusivo (glaucina), antibacteriana y antifuúngica
(liriodenina, macondina), efecto vasodilatador en aorta de rata (liriodenina y
norushinsunina), antiplaquetaria (boldina, glaucina), actividad citotóxica (lisicamina,
liriodenina y algunas bisaporfinas).
Solamente dos aporfinas son actualmente incluidas como especialidades farmacéuticas:
el extracto de hojas y de corteza del boldo donde se extrae la boldina y la apomorfina,
aunque producto hemisintético, tiene como se dijo anteriormente, gran importancia
farmacológica.
 Alcaloides derivados de bases púricas.
Los alcaloides derivados de bases púricas son importantes debido a su gran consumo en
el mundo entero, utilizadas como excitantes del Sistema Nervioso Central donde el
principal es la cafeína. Son considerados alcaloides imperfectos pues aunque se derivan
de aminoácidos modificados (ver figura 1) como es la purina + pirimidina, mas
precisamente la xantina o dioxo-2,6 purina; poseen un carácter básico pero no precipitan
con los reactivos específicos para alcaloides.

Estos alcaloides son básicamente 3:


· Cafeína o trimetil 1,3,7 xantina
· Teofilina o dimetil 1,3 xantina
· Teobomina o dimetil 3,7 xantina

Generalmente se encuentran en los vegetales en presencia con taninos y su


determinación consiste en desplazar el alcaloide de sus combinaciones tánicas por medio
de alcalinización, luego se extrae en forma selectiva por medio de tetracloruro de carbono
y se lee espectrofotométricamente en el ultra violeta a 273 nm.

 Determinación estructural.
Desde el aislamiento de los primeros alcaloides, en la mitad del siglo pasado, los métodos
usados para la identificación y determinación estructural de estas sustancias ha cambiado
considerablemente. Originalmente se usaron las técnicas de química húmeda o sea las
transformaciones químicas para la preparación de derivados o las reacciones de
degradación; luego, con la llegada de los métodos instrumentales de análisis, aumentó
considerablemente las investigaciones en productos naturales.

 Espectroscopia.
- UV.
El espectro UV de los alcaloides depende de su estructura, naturaleza, número, tipo y
posición de los sustituyentes. Hay grupos de alcaloides que careciendo de cromóforos, no
absorben en esta región, como es el caso de la mayoría de los alcaloides derivados de
aminoácidos alifáticos y algunos derivados del metabolismo terpénico.
En forma general, los alcaloides que tienen átomos con electrones solitarios, dobles o
triples enlaces aislados (grupos cromóforos) absorben con cierta intensidad en la región
de 150 a 200 nm (ultravioleta lejano) ; si hay conjugación de estos grupos, los máximos
de absorción se desplazan hacia la región visible (efecto batocrómico) e incrementan la
intensidad de la absorción (efecto hipercrómico).
Los alcaloides de tipo isoquinoliecos (figura 1), como bencilisoquinoleinas y las
bisbencilisoquinoleinas tienen espectros ultravioleta relativamente complejos, presentan
máximos de absorción hacia 225 y 280 nm y un mínimo entre 250 y 260 nm según la
figura
Para los alcaloides del tipo aporfinoides, los espectros los espectros de UV característicos
se muestran en la figura 1 (b y c), las oxoaporfinas que son moléculas altamente
conjugadas, muestran espectros complejos, las dehidroaporfinas muestran un espectro
característico donde se observa un máximo de absorción con una alta densidad óptica
cerca de 280 nm.1

Alcaloides isoquinoleicos
Infrarrojo IR
Aunque el Ir de los alcaloides carece de absorciones que permitan identificarlos,
proporciona importante información sobre la presencia o no de ciertos sustituyentes. Las
absorciones mas útiles son entre 3200 y 3700 cm-1 en la que absorben los grupos
hidroxílos (los fenólicos entre 3650 y 3500 cm-1, los alcohólicos entre 3200 y 3500 cm-1)
y grupos amino entre 3200 y 3400 cm-1 y en la región entre 1620 y 1780 cm-1 absorben
los grupos carbonilo. Ejemplo el alcaloide oxindólico rinchofilina , muestra señales a 3415
cm-1 de grupo amino, 1732 y 1706 cm-1 de grupo carbonilo, 1643 y 1623 cm-1 del
sistema aromático; mientras que el alcaloide de tipo carbazol glicozolidol muestra señales
a 3500 cm-1 de grupo hidroxilo, 3440 cm-1 del grupo amino, 1625 y 1600 cm-1 del
sistema aromático, 1208 cm-1 de éter aromático, 815 cm1 del benceno sustituido entre
otros.

- Espectrometría de masas EM.


La gran variedad estructural de los alcaloides dificulta la generalización para
lainterpretación de los espectros de masas. En general las masas moleculares de los
alcaloides son impares si el número de nitrógenos es impar y pares si este es par, así
como la señal del pico molecular es generalmente intensa, a menos que no tengan
insaturaciones como en el caso de los alcaloides alifáticos.
Los alcaloides del tipo bencil tetrahidro isoquinoleinas presentan una fragmentación
principal a nivel del enlace bencílico. El pico molecular es generalmente muy débil por lo
que hay que utilizar ionización química; los fragmentos principales son mostrados en la
siguiente figura.
Los picos dados por los fragmentos a y b permiten determinar la naturaleza de los
sustituyentes en los ciclos A y C respectivamente.

Fragmentación típica de bencil tetrahidro isoquinoleinas

Para la determinación estructural de alcaloides de tipo tetrahidroprotoberberina, la


espectrometría de masas proporciona una amplia información: La apertura del ciclo C a
nivel de los enlaces bencílicos de produce debido a un mecanismo de tipo retro Diels-
Alder formando tres iones a, b y c como se muestra en la figura:
Fragmentaciones típicas de tetrahidrprotoberberinas

- Espectroscopia de Resonancia Magnética Protónica +H RMN


La identificación de los alcaloides se hace básicamente gracias a la espectroscopía de
RMN protónica. Dos regiones del espectro son de una importancia particular, la de los
protones aromáticos y la de los grupos metilos ligados a heteroátomos. Los protones
aromáticos resuenan entre 6.70 y 7.40 ppm, para el caso de las aporfinas, el protón en
posición 3 es el más blindado hacia 6.60 ppm y el protón en 11 es el mas desblindado
entre 7.60 y 8.30 ppm, debido al efecto anisotrópico del anillo A7.

En espectroscopía de RMN, los efectos de los solventes pueden aportar una ayuda
suplementaria para determinar la posición de los grupos funcionales (OH, OCH3
principalmente), midiendo las diferencias en el desplazamiento químico entre los
espectros registrados en cloroformo deuterado y en otro solvente como la piridina
deuterada, se observa desplazamientos de los protones vecinos sobre todo en orto de los
grupos funcionales OH y OCH3

- Espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear de Carbono-13 13C RMN.


Los espectros de RMN en Carbono 13 de cierto número de alcaloides, han sido descritos.
En general, es fácil atribuir las señales de los átomos alifáticos (sp3), pues las señales se
encuentran a campo fuerte, en el caso de aporfinas, serían los carbonos de los ciclos B y
C así: el C4 resonará entre 28 y 30 ppm (aproximadamente 23 si el C3 es sustituido), el
C5 entre 42 y 53 ppm, el C6a cerca de 62 ppm y el C7 hacia 35 ppm.
Los carbonos aromáticos no sustituidos resuenan en la región entre 105 y 112 ppm; los
carbonos aromáticos ipso (conteniendo) a un grupo oxigenado OH, OCH3 o OCH2O son
los mas desblindados entre 140 y 151 ppm; los carbonos aromáticos sp2 cuaternarios
resuenan entre 119 y 130 ppm. Los carbonos unidos a N hacia 43 ppm, los carbonos de
metoxilos entre 56 y 62 ppm, aquellos que son orto sustituidos resonarán a campo mas
bajo que 60ppm. Los metilendioxilo resonarán entre 100 y 102 ppm.

Recopilado por: Luis Urquijo. Código: 451002082


Jaime Pastor. Código: 451011034
Jairo Alvis. Código: 451002057

BIBLIOGRAFIA
Hppt: //www.amart@muiscas.udea.edu.co//. MARTINEZ, Alejandro. Aceites esenciales.
Facultad de Química y Farmacia. Universidad de Antioquia. Medellín, 2001.

WHITANOLIDOS
 Definición.
Son lactonas esteroides incoloras que tiene 28 átomos de carbono y son derivadas
biogenéticamente del ergostano.

O O

 Clasificación.
Los withanolidos pueden clasificarse según la forma en que se presente el anillo D; de
esta manera se tienen 3 tipos:
a) Normales: son los más abundantes; el anillo D es de 5 miembros y tiene un CH3 en el
C-13 y opcionalmente –Ohen C-14 o en C-17

O O

OH

OH O

b) Aromáticos: El anillo D es de 6 miembros y de naturaleza aromática; son pocos los


compuestos de este tipo que se conocen.
O
O
O

OH
OH O

Physalinas: el enlace C-13, C-14 se roto oxidativamente y en su estructura general


tienen una delta y una gama lactona.

H
O O
O

O
HO O

 Características estructurales.
Estas se dan según las sustituyentes:
a) Carbonilo: con una o 2 excepciones, siempre están situados en C-1 y en un caso en
C-12. El anillo unido en C-20 es lactónico y en pocas ocasiones lactol. Usualmente
el carbonilo es de ,  insaturado
b) Metilos: se encuentran situados en C-10, 13,21, 24, y 25 aunque en el caso de las
physalinas y aromáticas varía esta situación ya que alguno de los metilos originales
se encuentran oxidados o hacen parte de un anillo. El metilo de C-25 en la lactona
puede hallarse como CH2OH.

c) OH muy frecuentemente se encuentran localizadas en C-14, C-17 y C-20. En el
anillo se localiza en C-5 o C-3.
d) Epóxidos: se localizan preferiblemente en el anillo  (c-5,C-6, o C-6, C-7) su apertura
origina –OH en tales posiciones.
e) Halógenos: se han reportado 6 withanolidos que tienen en el anillo  halohidrinas,
siendo el cloro el halógeno que siempre esta presente. Se ha demostrado que estos
compuestos no son “artefactos” producidos durante el proceso de extracción y el átomo
de cloro parece originarse NaCl que se encuentra en altas concentraciones de estas
plantas.

OH
O O H
OH O O
O
OH
C D

CH3O A B OH
O
OH

HO O
O O

O
O

Estructura de algunos Withanólidos

 Biogénesis.

Los esteroles se derivan biogenéticamente de la AcetilCoA (Ruta del Acetato) vía


mevalonato y escualeno. Los esteroles vegetales tienen como precursor inmediato al
cicloartenol, mientras que los animales tienen al lanosterol (Figura 3). De una forma
análoga se originan los triterpenoides. En la biogénesis de los esteroles también están
implicados procesos tales como hidrogenaciones y deshidrogenaciones C-C, metilaciones
(vía S-adenosilmetionina), hidroxilaciones, etc.
Un hecho estructural notable es que la gran mayoría de esteroles naturales tienen
sustituyentes alquílicos sobre los carbonos 4 y 24 fundamentalmente, y este hecho es
justificado por la misma biogénesis. El conocimiento de la biosíntesis de esteroides ha
contribuido al desarrollo de la Quimotaxonomía vegetal, particularmente en el caso de las
algas, y ha servido para correlacionar la estructura de estas sustancias con aspectos
evolutivos.

Para una revisión sobre el origen y la biosíntesis de esteroles de esponjas marinas puede
consultarse el artículo de Djerassi y Silva. Para procedimientos de síntesis química
análogos a la ciclización del escualeno consultar el trabajo de Zoretic y col.
Esquema biogenético para los esteroles vegetales.
 Separación y purificación.

Para la separación y purificación de esteroles a partir de extractos lipídicos, se emplean


con buenos resultados la Cromatografía en Columna y la Cromatografía en Capa Fina
(CCF), con sílica gel y eluentes como mezclas de n-hexano-acetato de etilo, y mezclas de
ellos. Una mezcla recomendable es n-Hexano-Acetato de etilo 4:1.
Existen varias clases de reveladores incluido el de Liebermann-Burchard, uno con cloruro
de berberina y carbazol-ácido sulfúrico. Sin embargo, no siempre estas técnicas en forma
aislada permiten la obtención de esteroles puros, sobretodo en el caso de mezclas de
esteroles, por lo cual deben complementarse con otras técnicas de separación y
purificación más eficientes como son: La CCF Argéntica (placas de sílica gel impregnadas
con una solución de nitrato de plata al 10% en acetonitrilo), la Cromatografía Líquida de
Alta Eficiencia (CLAE o HPLC en inglés) y la Cromatografía de Gases (CG).
En la CCF Argéntica, se impregna la sílica con soluciones concentradas de Nitrato de
Plata en agua:alcohol; y como resultado los esteroles se separan sobre dicha sílica por
retención diferencial de acuerdo al número de enlaces dobles C=C que contengan en su
estructura (Ej. el ergosterol con 3 enlaces dobles es más retenido que el colesterol, el cual
solo posee un enlace doble).
La CLAE permite las mejores separaciones de mezclas esterólicas y se obtienen más
rápidamente esteroles puros. Son muy utilizadas columnas de Octadecilsilano (Fase
Reversa) y eluentes tales como: Metanol, mezclas Metanol:Agua, mezclas
Acetonitrilo:Agua, etc.
Además, la integración de la CLAE con la Espectrometría de masas es una excelente
técnica porque a la vez que separa mezclas de esteroles, permite obtener información
estructural a partir de los espectros de masas, inclusive es posible hacer diferenciación
entre epímeros debido a su retención diferencial. Adicionalmente, la combinación de la
CLAE con espectrómetros UV (de longitud de onda variable o arreglo de diodos) e
infrarrojo con transformada de Fourier, permite la obtención de los correspondientes
espectros UV e IR. La siguiente figura muestra el cromatograma CLAE de la fracción de
esteroles libres de la esponja marina Ircinia campana.
Cromatograma CLAE de la fracción esterólica de una esponja marina.

La Cromatografía de Gases con fases estacionarias como OV-17 (1%, 3%, 5%), SE-54,
etc., con temperaturas de 250-280°C, permite una buena separación y análisis de
mezclas esterólicas. Además, si esta se acopla con un espectrómetro de masas de
impacto electrónico, se obtienen los respectivos espectros de masas, los cuales facilitan
la identificación. Una revisión completa sobre los métodos generales de obtención,
purificación e identificación de esteroles la hicieron Popov y colaboradores.

 Características espectroscópicas.

Para degradar o transformar los withanólidos se usan primera la química orgánica y


que a pesar de la disponibilidad de estos equipos aun se utilizan las transformaciones
de withanólidos con el fin de comparar estructuras con otras ya conocidas.

- UV. Absorben frecuentemente a 210 –225 nm, con una absortividad molar de 7000
aproximadamente. Esta absorción corresponde a los cromóforos carbonilo , 
insaturado y a la delta lactona insaturado. Los insaturados del tipo 2, 4, 6 –trien –1-
ona absorben a 352 (E=3.500) y 228 (E=10000)
- IR. Cuando la molécula tiene varios carbonilos ,  insaturados aparece una banda
ancha en la región 1690; de otra manera, las absorciones son 1690, lactona
insaturada; 1730 lactona saturada y 1700 lactona saturada de 6 miembros (anillo A);
1680 para el carbonilo ,  insaturado.

- RMN +H. En los equipos de baja resolución, estos se detectan, gracias a la formación
de acetatos, pero los OH- terciarios presentan dificultades para ser acetilados; por ello
se usa el bistricloroacetil carbamato HOCO  NH  CO  (CCl)3  apareciendo en el

RMN de este derivado tan a 8.0 –9.0 ppm como grupos OH tiene la molécula
original y corresponden a los H unidos al nitrógeno.
El análisis de MRN se dividirá en 3 partes; en las primera los desplazamientos
químicos de protones diferentes a metilos, la segunda los metilos de C-13, C-20 el
protón C-22 y la influencia de los OH en desplazamiento de los metilos y por último el
metilo C-10.
a) desplazamiento químico a diferentes métodos
Los protones de C-4 se acoplan alílicamente con el protón del C-2 con un l=1,1 Hz;
este mismo protón H-2 resuena a compas más bajos que el protón H-3, con 1=11:0Hz,
la constante de acoplamiento de H-3 con H-4 es de 3.5 Hz.
Las physalinas se diferencian fácilmente del resto de las withanolidos por la presencia
de una señal a 4.56 correspondiente al protón alcoxi de la delta lactona.
b) Metilos 13, 20 y protón H-22.
Los desplazamientos químicos de estos protones son un excelente parámetro para
conocer la presencia de grupos –OH en la molécula, tanto a nivel de la cadena lateral
como en los anillos A y D. De especial interés es la diferencia de los desplazamisnto
usando cloroformo y piridina deuterados (=CDCl3 - Piridina d5) fundamentado en
los mismos principios que se mencionaron en el capítulo de las santonas. A
continuación se presentan los promedios para este tipo.
c) Metilo unido al carbono 10.
Los efectos de grupos funcionales unidos al anillo A del núcleo del withanolido sobre
el metilo unido al carbono 10 a los valores obtenidos previamente para esteroides y en
general siguen las tres reglas siguientes:
- Desprotección 1,3 –diaxial: los protones o metilos que ocupan una posición 1,3 –
diaxial al grupo –OH experimentan una desprotección de 0.20 a 0.40 ppm cuando
el espectro se toma en cloroformo y luego en piridina.
- Protones y metilos vecinales al –OH son desprotegidos, y la extensión de esta
-
depende del ángulo diedro subtendido entre o el metilo y la función OH. Para
ángulos de 180º -160º , el  observado es de –0.03 a –0.05, a medida que este
ángulo se hace menor de 85º,  es –0.013 y cuando es de 60º varía entre –0.27
a-0.20.
- Los protones y metilos germinales a un carbono que tenga un –OH se desprotege
en un valor de 0.15 –0.20 ppm con relación al CDCl3.

- 13CRMN.
Este tipo de análisis es muy valioso debido a la posibilidad de diferenciar fácilmente
las señales asignadas, cosa que difícilmente se obtiene con 1HRMN (a menos que se
usen equipos de alta resolución).
En withanolidos halogenados, el metilo de C-10 sufre un desplzamiento a campos más
altos de 7 ppm, debido a un efecto gamma. El carbono que porta el halógeno resuena
entre 45 a 60 ppm y se desplaza a campos más bajos (66 ppm), debido a un efecto
del 5-OH y además no está influenciado por el 4-OH.

- Espectrometría de Masas.
El ión molécular ocasionalmente no aparece, pero este puede deducirse a través de
los picos a M+-CH3, M+-H2O o M+–CH3CO2H. La fragmentación ocurre principalmente
a nivel de la cadena lateral y del anillo B y en este proceso se puede perder agua
conjuntamente con otro fragmento. El ión m/e es un excelente diagnóstico para
detectar este tipo de sustancias.

Fragmentación del anillo A


A pesar de la complejidad estructural de las physalinas, estas generan iones
fácilmente reconocibles

Recopilado por: Mario Castillejo. Código: 451992034.

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