UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CIUDAD JUÁREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMEDICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS

ACADEMIA DE BIOQUÍMICA

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE

BIOQUÍMICA MÉDICA (PLAN 2014)

Documento modificado, actualizado y revisado por:

M. en I. Edith Enríquez Gallosa

M. en C. Leny Judith Álvarez Araujo

Docentes y Técnicos Académicos de la Academia de Bioquímica

Vo.Bo.:

Dra. Laura Alejandra de la Rosa Carrillo

Coordinador de la Academia de Bioquímica

Autorizado por:

Ph.D. Alejandro Martínez Martínez

Jefe del Departamento de Ciencias Químico Biológicas

Cd. Juárez Chihuahua

Revisión Enero 2015

Manual de Practicas de Laboratorio de Bioquímica Médica 1997

Instituto de Ciencias Biomédicas

Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

Semestre regular Enero – Mayo 20XX

Semestre regular Agosto – Noviembre 20XX

Curso de Verano Junio – Julio 20XX

NOMBRE DEL ALUMNO____________________________________

MATRICULA ____________________

HORARIO DE TEORIA ____________________

HORARIO DE LABORATORIO_______________

GRUPO DE LABORATORIO _________________

NUMERO Y/O NOMBRE DEL EQUIPO ______________________

PROLOGO..................................................................................................................................... I

P R E S E N T A C I Ó N............................................................................................................. II

REGLAS PARA LOS ALUMNOS QUE ASISTEN A LOS LABORATORIOS DE

BIOQUIMICA............................................................................................................................ III

INSTRUCCIONES PARA EL USO DE ESTE MANUAL........................................................V

PRÁCTICA NO. 1........................................................................................................................ 1

BIOSEGURIDAD........................................................................................................................ 1

PRÁCTICA NO. 2........................................................................................................................ 4

CUANTIFICACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA SERICAS........................4

PRÁCTICA NO. 3........................................................................................................................ 8

DIGESTION DE CARBOHIDRATOS....................................................................................... 8

PRÁCTICA NO. 4..................................................................................................................... 11

PERFIL LIPIDICO................................................................................................................... 11

PRÁCTICA NO. 5..................................................................................................................... 15

CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO SÉRICO.................................................................15

PRACTICA NO.6...................................................................................................................... 19

DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE BILIRRUBINAS SERICAS......................19

PRACTICA NO. 7..................................................................................................................... 23

DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE TRANSAMINASAS SERICAS.................23

 PROLOGO

El siguiente manual ha sido modificado de acuerdo a las necesidades de la nueva Curricula 2014
de la carrera de Medicina, por lo que se espera que el alumno aproveche en su totalidad la
información aquí presentada.

El curso de Bioquímica Médica se imparte en el Instituto de Ciencias Biomédicas como parte del
programa integral del Departamento de Ciencias Químico Biológicas y se requiere del curso de
Bióquímica General como materia antecedente.

En este curso se presenta una completa orientación hacia el área Médica en donde se
correlacionan aspectos del metabolismo integral con las funciones específicas de los órganos y
sistemas con un carácter muy fundamental teniendo en cuenta que dichas funciones se tratarán
con mayor detalle en las nosologías y las clínicas respectivas.

2014

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 PRESENTACIÓN

Uno de los aspectos fundamentales de la enseñanza de materias correspondientes al

área de las Ciencias Básicas, es que el estudiante debe de comprender los elementos teóricos
revisados. Con el fin de reafirmar dichos conocimientos es necesario que los practique en el
Laboratorio y como consecuencia reciba los refuerzos apropiados y al final de dicho curso este
compenetrado con la materia analizada.
En la Academia de Bioquímica siempre ha existido el interés de que los alumnos que
cursen dichas materias tengan la capacidad de comprender los fenómenos moleculares tanto a
nivel celular como del organismo.
El individuo que se dedique a la investigación y/o a la enseñanza de la Bioquímica, debe
de estar convencido de que el ensayo de formas más eficientes de involucrar al alumno en el
estudio de ésta interesante área, es la única manera de evolucionar positivamente en la
investigación y en la excelencia académica.
Este manual de prácticas es el resultado del esfuerzo común de la Academia de
Bioquímica, con el único fin de fomentar la interrelación de los conocimientos teóricos con la
actividad práctica, de una manera más organizada, en aras de un mayor aprovechamiento de la
enseñanza Bioquímica. En base a este pensamiento, nos comprometimos a elaborar el "Manual
de Prácticas de Laboratorio de Bioquímica medica" el cual esperamos sea útil durante los cursos
de Bioquímica.
En este Manual se pretende dar al alumno una información básica, que lo motive a
desarrollar un diseño experimental predeterminado y a deducir por medio del análisis objetivo de
los resultados, las posibles implicaciones que se tengan para demostrar un hecho que fue
discutido previamente en la clase teórica.
Agradecemos la cooperación y el apoyo recibido por parte de las autoridades
Universitarias para lograr la publicación de este Manual.

Atentamente Comisión Elaboradora

Academia de Bioquímica

M.C. Héctor Reyes Leal Biol. Héctor Esparza Valencia

Q.F.B. Gilberto Reyes Leal Biol. Daniel Chávez Licón
Q.F.B. Graciela Manjarrez G. Q.B.P Jorge Baylón Monárrez
Q.B.P. J. Angel Araujo Dr. David Reyes Ruvalcaba.
Q.B.P. Oscar Barrozo

1997

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 REGLAS PARA LOS ALUMNOS QUE ASISTEN A LOS LABORATORIOS DE
BIOQUIMICA.

1. - Al inscribirse en la materia queda automáticamente inscrito en un grupo de Laboratorio. El

maestro no está facultado para realizar cambios de grupo y/o permutas.
1. - La asistencia a los laboratorios es obligatoria y deberán presentarse con un retardo no
mayor de 10 min. de la hora de entrada.
1. - Para tener derecho a calificación final del laboratorio se requiere un 80 % de asistencias.
1. - Toda falta a la práctica equivale a cero en su reporte.
1. - Es obligatorio presentarse con bata blanca de manga larga a las sesiones de laboratorio.
1. - Durante las sesiones de laboratorio queda estrictamente prohibido fumar e ingerir
alimentos.
7.- En caso de reprobar el laboratorio, automáticamente queda reprobado en la clase de teoría.
8.- La calificación final de laboratorio corresponde al promedio obtenido en las prácticas,
exámenes y trabajo en el laboratorio.
9.- Los reportes de la semana se entregarán obligatoriamente en el horario establecido por el
maestro. La aceptación extemporánea de reportes queda a consideración del docente. El
Reporte es individual.
10.- Los reportes ya calificados, se devolverán a la semana siguiente.
11.- El material que sea dañado por el alumno, deberá reponerse antes de finalizar el curso
acompañado con la factura de compra. De no ser así no se condicionará la calificación del
alumno.
12.- Si parte del material es dañado o se pierde y se desconoce al responsable, el material será
repuesto por el grupo asistente a la práctica.
13.- Se realizarán los exámenes de laboratorio pertinentes en las fechas indicadas en la
calendarización de la academia.
14.- Es obligación del alumno entregar el material limpio cada vez que termine su práctica.
15.- Se recomienda mantener limpia su mesa de trabajo y guardar el mayor orden posible.
16.- El alumno se deberá comprometer a regresar el material en las mismas
condiciones en que lo recibieron.
17.- Los reportes se calificarán en base a los acuerdos de la academia, teniendo mayor peso los
siguientes apartados:
A) Resultados
B) Discusión
C) Conclusiones
D) Cuestionario

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E) Bibliografía
El maestro detallará la forma de reportar dentro del encuadre, el día de la recepción del
grupo. Incluyendo el trabajo experimental y la discusión y participación en la práctica.
18.- Es obligación del alumno investigar sobre el tema de la práctica previa realización de ésta,
en caso de presentarse sin haber estudiado se considerará como falta de interés, afectando la
calificación de la participación de la misma.
19.- De igual manera, para aquél alumno que no se prepare para la discusión de las prácticas,
se verá afectado en la parte de su calificación de correspondiente a la misma.

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 INSTRUCCIONES PARA EL USO DE ESTE MANUAL

Con la idea de que el alumno pueda manejar de manera más eficiente este Manual se
hacen las siguientes recomendaciones:
1.- Al principio del Manual se incluye un índice de las prácticas a realizar, que permite su rápida
localización.
2.- La secuencia de prácticas, está en función de los programas de teoría y cabe aclarar que en
la primera sesión se les indicará cuales prácticas se van a realizar durante el semestre.
3.- Todas las prácticas están subdivididas en dos partes:
a) Incluye la descripción metodológica de la práctica, que a su vez se subdivide
en:
- Título de la práctica
- Objetivo de la práctica
- Prerrequisitos
- Introducción
- Material y Métodos
b) Contiene los elementos correspondientes al reporte de la práctica y se
subdivide en:
- Resultados
- Discusión
- Conclusiones
- Cuestionario
- Bibliografía consultada
4.- A continuación se mencionan algunos aspectos significativos de cada uno de estos
elementos:
a) Título de la práctica.- Indica el nombre de la práctica y la de manera
específica de lo que se va a realizar durante la sesión.
b) Objetivo de la práctica.- Señala lo que se espera que el alumno logre al
término de esta.
c) Prerrequisitos.- Comprende una serie de puntos, que el alumno debe de
conocer su significado con anterioridad a la explicación de la práctica, para lo
cual se recomienda consultar la bibliografía recomendada al final de este
Manual.
d) Introducción.- Información básica y muy breve, referente a la práctica a
realizar.
e) Métodos y Materiales.- Es la descripción del desarrollo de la práctica,
señalando el equipo, cristalería y soluciones a utilizar en la práctica.

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 Es importante que el alumno entienda la secuencia del desarrollo antes de
iniciar el experimento, por lo cual es necesario que se lea antes de la sesión de
explicación de la práctica, para que pueda consultar sus dudas con el Docente.
f) Resultados.- En esta sección se anotan los datos obtenidos durante la sesión
de la práctica, de acuerdo a las indicaciones tanto del Manual como del
Profesor.
h) Discusión.- Es una de las partes principales de todo experimento, ya que
consiste en realizar un análisis comparativo de los resultados esperados con
respecto a los obtenidos, llevando a cabo la argumentación necesaria de dichos
resultados.
i) Conclusiones.- En base a los resultados obtenidos y a la discusión
desarrollada, concluir cuales son los puntos principales y que consecuencias a
futuro plantean esta práctica.
j) Bibliografía consultada.- En este punto se deben incluir las referencias
bibliográficas de los libros o artículos consultados, de acuerdo a los siguientes
lineamientos:

En el caso de revistas:
Nombre(s) del autor(es), (año), Título del artículo Nombre de la
Revista, Volumen, Páginas consultadas

En el caso de libros:
Nombre(s) del autores), (año), Nombre del capítulo. Nombre del
libro. Editorial. Edición. País. Páginas consultadas.

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 PRÁCTICA No. 1

BIOSEGURIDAD

OBJETIVO:
El alumno determinará la importancia de la aplicación de la normatividad sobre la
seguridad, en niveles de riesgo en cualquier laboratorio para evitar accidentes.

PRERREQUISITOS:
1. Diferencias entre regla, reglamento, norma y ley.
2. Diferencia entre ley y costumbre.
3. Organismos que rigen las normatividades.
4. Normas involucradas en la seguridad en los laboratorios.

INTRODUCCIÓN:
Bioseguridad es una palabra compuesta por bio (del latín que significa vida) y seguridad
(del latín securitas que significa ausencia de riesgo).
El riesgo es la vulnerabilidad ante un daño para personas, cosas y/o el medio ambiente. Existe
una variedad de riesgos en los que se encuentran los riesgos físicos, químicos, biológicos,
ambientales, laborales, financieros, políticos, etc.
Sin embargo en el laboratorio el nivel de bioseguridad depende del grupo de riesgo:

Tabla I.- Clasificación de laboratorios

Grupo de Nivel de Tipo de laboratorio Prácticas de laboratorio Equipo de seguridad
riesgo bioseguridad
1 Básico Enseñanaza básica, TMA Ninguno; trabajo en
Nivel 1 investigación mesa de laboratorio al
descubierto
2 Básico Servicios de atención TMA y ropa protectora; Trabajo en mesa al
Nivel 2 primaria; diagnóstico, señal de riesgo biológico descubierto y CSB
investigación para posibles
aerosoles
3 Contención Diagnóstico especial, Prácticas de nivel 2 más CSB además de otros
Nivel 3 investigación ropa especial, acceso medios de contención
controlado y flujo primaria para todas
direccional del aire las actividades
4 Contención máxima Unidades patógenos Prácticas de nivel 3 más CSB de clase iii o
Nivel 4 peligrosos cámara de entrada con trajes presurizados
cierre hermético, salida con junto con CSB de
ducha y eliminación clase ii, autoclave de
especial de residuos doble puerta (a través
de la pared), aire
filtrado

TMA: técnicas microbiológicas apropiadas. CSB: cámara de seguridad biológica. OMS(2005)

En los laboratorios aparte del equipo, existen soluciones reactivas las cuales también se
manejan y deben llevar un requerimiento para su uso. Cada sustancia que se maneje en los
laboratorios debe estar etiquetada y siempre deberá haber a la mano la Hoja de Datos de Uso
Seguro (MSDS por sus siglas en ingles), misma que refiere los cuidados que se debe tener para
el manejo de las sustancias.
El Sistema de Comunicación de Riesgos (Right To Know) muy utilizado en los E.U.A. nos refiere
de manera explícita de los riesgos y daños a los cuales estamos expuestos por el manejo de una
sustancia y que equipo de protección personal se debe de utilizar. Aquí en México la Secretaria

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de Trabajo y Previsión Social también se preocupa por los riesgos ocupacionales de los
diferentes centros de trabajo junto con la Secretaria de Salud, por lo que también existen
señalizaciones para determinar las áreas de trabajo, puertas de acceso, y salidas, áreas
despejadas, código de tuberías para sustancias que corran en ellas, etc. Es por eso que es muy
importante tomar en cuenta las barreras y el tipo de ellas.
También es importante hacer hincapié en el desecho adecuado de las sustancias que se
manejan en los laboratorios los cuales son vigilados por la SEMARNAT ya que estos son
dispuestos al medio ambiente, llámese agua (a los drenajes que a pesar de llegar a una planta
de tratamiento de agua residuales en algunas ocasiones, estas siguen su curso a canales de
irrigación y/o acequias para riego de cultivos y por ende al subsuelo), cielo abierto (por la emisión
de los gases y que contaminan el aire que respiramos) o tierra (con la disposición de los residuos
sólidos que impactan a el medio alterando los ciclos naturales biológicos).

MATERIAL: Ocupado para la elaboración de esta práctica

METODO:
Investigación del marco teórico, en las diferentes referencias impresas o computarizadas
sobre el cual se sustenta la minimización de los riesgos para la realización del trabajo seguro
en cualquier laboratorio.

RESULTADOS:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

DISCUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

CONCLUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
________________________________________________________________________

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BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:

Manual de Seguridad e Higiene y Reglamento General de Laboratorios de la UACJ 2006

Reglamento Interno de la Academia de Bioquímica

Normas Oficiales Mexicanas del Diario Oficial de la Federación

Ley General de Salud

Manual de Bioseguridad en el Laboratorio

Organización Mundial de la Salud
Tercera Edición

CUESTIONARIO:

1._ Importancia del manejo de residuos peligrosos

2._ Importancia de la NOM-087-ECOL-1997
3._ Función del rombo de seguridad en el laboratorio
4._ Importancia de la Ley General de Salud en la clínica medica
5._ Explique a que se refiere el acto y la condición insegura
6._ Que es un riesgo
7._ Por que debemos vivir con lineamientos

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 PRÁCTICA No. 2

CUANTIFICACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA SERICAS

OBJETIVO:
Conocer y practicar dos técnicas de cuantificación de proteínas del suero y analizar los
resultados en relación a posibles anormalidades desde un punto de vista metabólico

PRERREQUISITOS:
1. Analizar el fundamento químico de la reacción de Biuret
2. Conocer el perfil proteínico del suero
3. Analizar clínicamente el termino Proteínas Totales y albumina sérica

INTRODUCION:
Una de las fracciones orgánicas más importantes de la sangre es la de las proteínas,
tanto por su contenido total de proteínas del plasma es normalmente del orden de 5.7 a 8.0 g/dl.
Las proteínas séricas constituyen la mayor parte de los sólidos del plasma y son una mezcla
compleja de proteínas simples y conjugadas como glucoproteínas y lipoproteínas.

Las proteínas del plasma están constituidas en tres principales: Albumina, Globulinas y
Fibrinógeno. El Fibrinógeno normalmente constituye del 4 al 6% de las proteínas plasmáticas, es
producido por el hígado y tiene importancia fundamental para la coagulación de la sangre.

La albumina es la principal proteína del suero; se halla también en los espacios extravasculares,
linfa y otros líquidos biológicos como el amniótico, bilis, jugo gástrico, etc. Se encuentra en la
orina de pacientes con enfermedades renales y es uno de los componentes principales del
líquido del edema. Las dos funciones principales de la albumina plasmática son: El
mantenimiento de la presión coloidosmótica y el transporte de algunos metabolitos tales como
bilirrubinas, aminoácidos, ácidos grasos, enzimas, medicamentos, etc. La albumina es
sintetizada por las células hepáticas en una cantidad de 12 a 14 g/día.

Las globulinas se dividen en tres grupos principales: globulinas alfa, beta y gamma. Las
globulinas alfa y beta ejercen diversas funciones principales en la circulación tales como el
transporte de metabolitos y de iones metálicos. Las globulinas gamma actúan en la actividad
inmunológica y que constituyen las inmunoglobulinas que resisten a la infección. La mayor parte
de las globulinas alfa y beta son de origen hepático pero las gamma se pueden sintetizar en
tejidos hepático y linfático.

El tejido hepático es el centro principal de proteínas plasmáticas. La formación de albumina y

fibrinógeno parece estar limitada al tejido hepático; aproximadamente el 80% de las globulinas
se fabrican en tejido hepático, incluyendo las lipoproteínas. El principal papel del tejido hepático
en la síntesis proteínica del plasma se refleja en la disminución notable de albumina y
fibrinógeno que tiene lugar en tejido hepático dañado, como se observa en pacientes con
Cirrosis o a consecuencia de una hepatectomía experimental.

Existe una gran cantidad de compuestos químicos entre los cuales se incluyen a las drogas y los
fármacos que afectan la integridad metabólica de los hepatocitos. Algunos de ellos afectan la
capacidad de síntesis de metabolitos como la albumina y en la mayoría de los casos el efecto es
tan drástico que puede llegar a ser letal. Dentro de los compuestos que han sido catalogados
como hepato-tóxicos están el cloroformo, el dinitrofenol, la clorpromazida, el fluoruracilo y la
tetraciclina.

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MATERIAL:
Gradilla
Tubos de ensaye 10 x 100 mm
Pipetas serológicas de 5 ml
Propipetas
Micropipetas para 50 y 100 microlitros
Celdas para espectrofotómetro

EQUIPO:
Centrífuga clínica
Espectrofotómetro

SUSTANCIAS REACTIVAS:
Solución preparada de reactivo de Biuret
Solución patrón de proteínas totales y albumina
Solución de trabajo de reactivo de Albumina o Verde de Bromocresol
Solución salina
Suero no hemolizado

MÉTODO:
Espectrofotocolorimétrico

PROCEDIMIENTO:

a) Cuantificación de Proteínas Totales

Fundamento: El sulfato de cobre en solución alcalina reacciona con los enlaces
peptidicos de la proteína, dando una coloración de azul a purpura dependiendo del
tamaño de la proteína por la cantidad de enlaces peptidicos (Clarck, 1964), que es
cuantificable espectrofotométricamente.

Preparar una serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla II. Distribución de los reactivos para la cuantificación de Proteínas por medio del reactivo de Biuret

Tubo Blanco Estándar o control Problema

Reactivo de Biuret 5.0 ml 5.0 ml 5.0 ml

Solución Salina 0.1 ml ----------------------- ------------------------

Solución estándar o control ------------------------ 0.1 ml ------------------------

-

Suero no hemolizado ------------------------ ----------------------- 0.1 ml

-

Homogenizar el contenido y dejar reposar por 15 minutos a temperatura ambiente. Se puede

colocar en incubadora a 37 grados centígrados.
Medir la absorbancia del estándar y del problema ajustando a cero con el blanco a 550 nm. de
longitud de onda.

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 b) Cuantificación de Albumina Sérica
Fundamento: El verde de bromocresol o también conocido como reactivo de albumina,
en medio acido reacciona con la albumina sérica presente dando una coloración verde
cuantificable espectrofotométricamente. (Doumas et al., 1971)

Preparar una serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla III. Distribución de los reactivos para la cuantificación de la Albumina Sérica por medio del reactivo de Albumina o
Verde de Bromocresol

Tubo Blanco Estándar o control Problema

Reactivo de Albumina
o Verde de 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml
Bromocresol

Solución Salina 0.05 ml ----------------------- ------------------------

Solución estándar o
------------------------- 0.05 ml ------------------------
control

Suero no hemolizado ------------------------- ----------------------- 0.05 ml

Homogenizar el contenido y dejar reposar por 10 minutos a temperatura ambiente. Se puede

colocar en incubadora a 37 grados centígrados.
Medir la absorbancia del estándar y del problema ajustando a cero con el blanco a 640 nm. de
longitud de onda.

RESULTADOS:

Para calcular las concentraciones aplique la siguiente fórmula para cada uno de los
analitos trabajados:

Absorbancia del problema Concentración

Proteínas Totales =--------------------------------------------- X del estándar o control
Absorbancia del estándar o control que se esté usando

=[ ] g/dl

Valores de referencia:
Proteínas Totales 6.6 a 8.7 g/dl
Albumina Sérica 3.20 – 5.00 g/dl

DISCUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________

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CONCLUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:

John M. Clack, Jr., Experimental Biochemistry, USA. W.H. Freeman and Company 1964

Doumas BT, Watson WA and Biggs HG. Albumin standards and the measurement of serum
albumin with bromocresol green. Clin Chim Acta 1971: 31: 87-96.

CUESTIONARIO:

1._ Importancia clínica de la disminución de las proteínas séricas

2._ Importancia clínica del aumento de las proteínas séricas
3._ Importancia de la proteinuria
4._ Patologías relacionadas con proteínas totales y sus fracciones
5._ Importancia de las diferentes enfermedades relacionadas con las globulinas

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 PRÁCTICA No. 3

DIGESTION DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVO:
Determinar el proceso de digestión de los carbohidratos mediante la absorción de los
mismos con el Test de O´Sullivan (determinación de Diabetes Gestacional) y la prueba
Postprandrial (determinación de Diabetes por alimentación), por el método enzimático
espectrofotocolorimétrico para determinar el buen funcionamiento de los Islotes de Langerhans
en el Páncreas, descartando la patología de la Diabetes Mellitus

PRERREQUISITOS:
1._ Clasificación o tipos de Diabetes
2._ Que es el ayuno y cómo influye en el metabolismo
3._ Clasificación de ayuno
4._ Importancia médica de la prueba postprandrial
5._ Importancia médica del Test de O¨Sullivan
6._ Que es la curva de tolerancia a la glucosa
7._ Que es la hemoglobina glucosilada
8._ Normativa relacionada con paciente diabético
9._ Normativa relacionada con diabetes gestacional

INTRODUCCIÓN:
La Diabetes Mellitus es un conjunto de trastornos metabólicos que se caracteriza por un
aumento de niveles de glucosa en sangre: hiperglucemia. La diabetes es causada por varios
transtornos, siendo la más relevante la baja producción de la hormona insulina, la cual es
secretada por las células β de los islotes de Langerhan en el páncreas, y que regula la entrada
de glucosa a las células. Otra es el inadecuado uso de esta hormona debido al exceso y/o
deficiencia de ingesta alimentaria; y la resistencia a la insulina, que en realidad es la
problemática que hay de la cantidad insuficiente o daño de los receptores que se encargan de
dar entrada a la glucosa a las células y que sucede comúnmente en las personas obesas. Sin
embargo se habla de factores genéticos como otro punto importante en el desarrollo de la
patología Diabetes
La diabetes se puede clasificar en diabetes tipo I o insulino dependiente, diabetes tipo II o
resistente a la insulina y diabetes gestacional, que se desarrolla solo mientras existe embarazo
afectando así al metabolismo de la madre
Esta patología puede determinarse por la cuantificación de glucosa sérica mediante análisis
diferentes dependiendo del paciente: Test de O´Sullivan, prueba posprandrial o curva de
tolerancia a la glucosa.

MATERIAL:
Tubos de ensaye de 10 x 100 mm
Gradilla
Pipetas de 5 ml
Propipetas
Micropipetas de 25 microlitros
Celdas para espectrofotómetro

EQUIPO:
Espectrofotómetro de luz visible

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SUSTANCIAS REACTIVAS:
Solución reactiva de glucosa (enzimático)
Estándar de glucosa
Suero no hemolizado

METODO:
Enzimático espectrotofocolorimétrico

PROCEDIMIENTO:
Fundamento: La enzima glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la glucosa sérica, formando
ácido glucónico y peróxido de hidrogeno, el reactivo enzimático de glucosa contiene también la
enzima peroxidasa oxidasa transfiriendo el oxígeno del peróxido de hidrogeno a un aceptor
(Lynch, 1977) cromogénico de oxígeno, el cual puede ser cuantificable
espectrofotométricamente.

Tabla IV. Distribución de los reactivos para la cuantificación de Glucosa Sérica por medio enzimático

Tubo Blanco Estándar o control Problema

Reactivo de Glucosa 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml

Agua destilada 0.025 ml ------------------------ -----------------

Solución patrón o control

----------------- 0.025 ml -----------------

Suero no hemolizado ----------------- ------------------------ 0.025 ml

Se homogenizan todos los tubos y se dejan reposar por 10 minutos mínimo a temperatura
ambiente. Se pueden colocar en incubadora a 37 grados centígrados.

Se calibra el espectrofotómetro a cero de absorbancia a 500 nm con el tubo blanco

Nota: Si el alumno analiza Glucosa Basal y Prueba Postprandrial, Glucosa basal y Test de
O’Sullivan, en realidad serán 4 problemas y si llega a realizar una curva de tolerancia se deberán
incluir la glucosa basal y la cantidad de muestras después de la carga de glucosa.

RESULTADOS:
Para calcular las concentraciones aplique la siguiente fórmula para cada uno de los
analitos trabajados:

Absorbancia del problema Concentración

Proteínas Totales =--------------------------------------------- X del patrón o control
Absorbancia del patrón o control que se esté usando

=[ ] mg/dl

Valores de referencia:
60-100 mg/dl o 70-110 mg/dl de glucosa

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DISCUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

CONCLUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:
M.J.Lynch et. al., Métodos de Laboratorio. México. Nueva Editorial Interamericana, 1977

CUESTIONARIO:

1._ Mencione los diferentes tipo de Diabetes

2._ Cuales son las características de los pacientes diabéticos
3._ Importancia de la detección oportuna de la Diabetes gestacional y sus consecuencias
4._ Importancia de la supervisión de tratamientos en el diabético

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 PRÁCTICA No. 4

PERFIL LIPIDICO

OBJETIVO:
Determinar el nivel de riesgo coronario y aterogénesis mediante la evaluación clínica de
los metabolismos de los lípidos a partir de reacciones séricos enzimáticos de un paciente.

PRERREQUISITOS:
1._ Estructura y función de los triacilglicéridos
2._ Relación metabólica entre el colesterol y las lipoproteínas
3._ Importancia de las fracciones del colesterol en los riesgos coronarios y circulatorios
4._ Análisis de los efectos de las diferentes dislipidemias
5._ Importancia de la relación triacilglicéridos - VLDL

INTRODUCCIÓN:
El perfil lipídico lo constituye una serie de análisis en las cuantificaciones séricas de
diferentes lípidos como lo son las lipoproteínas localizadas en la sangre, tales como el colesterol
total, el HDL colesterol, los triacilglicéridos, las LDL, y las VLDL, mismas que sirven para el
diagnóstico y seguimiento en las enfermedades metabólicas. El colesterol es el lípido más
asociado a enfermedades cardiovasculares y factor de riesgo coronario, sobre todo el unido a las
LDL. (Túnez & Galván, 2006)
Sin embargo existe una relación entre la elevada concentración de los triacilglicéridos asociada a
la acumulación de LDL y una menor cantidad de HDL colesterol situación que evidentemente
predispone a un individuo a presentar las enfermedades cardiovasculares. (Pinto, 2008)

MATERIAL:
Tubos de ensaye
Gradilla
Pipetas de 5 ml
Micropipetas de 25 microlitros
Celdas para espectrofotómetro

EQUIPO:
Espectrofotómetro

SUSTANCIAS REACTIVAS:
Solución reactiva de colesterol (enzimático)
Estándar de colesterol
Solución reactiva de triacilglicéridos (enzimático)
Estándar de triacilglicéridos
Reactivo precipitante para HDL
Suero no hemolizado
Agua destilada

METODO:
Enzimático espectrotofocolorimétrico

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PROCEDIMIENTO:

a) Obtención de la fracción HDL colesterol para cuantificación

Fundamento: Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL)
presentes en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones magnesio. El
sobrenadante contiene las lipoproteínas de elevada densidad (HDL), cuyo colesterol puede ser
cuantificable espectrofotométricamente

Se coloca 0.5 ml de suero problema no hemolizado en un tubo Eppendorff que contenga 1ml de
reactivo precipitante.
Se homogeniza en un vortex por 2 minutos.
Se centrifuga en una microcentrífuga a 10000 rpm
Se trabaja con el sobrenadante etiquetándolo como HDL colesterol

b) Cuantificación del Colesterol Total y HDL Colesterol

Fundamento: Los métodos enzimáticos se basan en el empleo de la enzima colesterol esterasa
que hidroliza los esteres de colesterol, y el colesterol libre es el substrato de la enzima colesterol
oxidasa, que oxida específicamente al colesterol liberando agua oxigenada y con la reacción
secundaria de la peroxidasa oxidasa transfiriendo el oxígeno del peróxido de hidrogeno a un
aceptor cromogénico de oxígeno, el cual puede ser cuantificable espectrofotométricamente.

Tabla V. Distribución de los reactivos para la cuantificación de Colesterol Total y HDL Colesterol
Problema Problema
Tubo Blanco Estándar o control
Colesterol HDL Colesterol
Reactivo
Enzimático de
2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
Colesterol

Agua destilada 0.025 ml ---------------------- ------------------- ----------------------

Patrón o control
de Colesterol ------------- 0.025 ml --------------------- ----------------------
Suero Problema
no hemolizado ------------- ---------------------- 0.025 ml ----------------------

Problema HDL
---------------------
Colesterol -------------- ---------------------- 0.025 ml

Se homogenizan todos los tubos y se dejan reposar por 10 minutos mínimo a temperatura
ambiente. Se pueden colocar en incubadora a 37 grados centígrados.

Se calibra el espectrofotómetro a cero de absorbancia a 500 nm con el tubo blanco.

c) Cuantificación de Triacilglicéridos
Fundamento: Al hidrolizar los triglicéridos por medio de enzimas como lipoproteinlipasa,
glicerol quinasa y peroxidasa oxidasa el cual transfiere oxígeno del peróxido de
hidrogeno a un aceptor cromogénico de oxígeno, dando una coloración roja que puede
ser cuantificable espectrofotométricamente. (Bucolo and David, 1973)

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 Tabla VI. Distribución de los reactivos para la Cuantificación de los Triacilgliceridos

Tubo Blanco Estándar o control Problema

Reactivo enzimático de
2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
Triacilglicéridos

Agua destilada 0.025 ml ------------------------ -----------------

Solución patrón o control

----------------- 0.025 ml -----------------

Suero no hemolizado ----------------- ------------------------ 0.025 ml

Se homogenizan todos los tubos y se dejan reposar por 10 minutos mínimo a temperatura
ambiente. Se pueden colocar en incubadora a 37 grados centígrados.

Se calibra el espectrofotómetro a cero de absorbancia a 500 NM con el tubo blanco

RESULTADOS:

Para calcular las concentraciones aplique la siguiente fórmula para cada uno de los
analitos trabajados:

Absorbancia del problema Concentración

Proteínas Totales =--------------------------------------------- X del patrón o control
Absorbancia del patrón o control que se esté usando

=[ ] mg/dl

Valores de referencia:

Colesterol total
Hasta 30 años: 120-215 mg/dl
30- 39 años: 135-240 mg/dl
40-49 años: 140-280 mg/dl
50- 59 años: 145-295 mg/dl

Colesterol-HDL
Hombre > 55 mg/dl
Mujer > 65 mg/dl

Triglicéridos
36-165 mg/d

DISCUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

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_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

CONCLUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:
I. Túnez Fiñana & A. Galván Cejudo. Practicas Generales de Bioquímica y Biología Molecular.
2006. www..uco.es. Córdoba, España

Xavier Pinto Sala. Protocolos Hipertrigliceridemias. 2008 Sociedad Española de Medicina Interna
y Elsevier España, S.L.

Giovani Bucolo and Harold David. Quantiative Determination of Serum Triglycerides

by the Use of Enzymes. CLIN. CHEM. 19/5, 476-482 (1973). 476 CLINICAL CHEMISTRY, Vol.
19, No.5, 1973

CUESTIONARIO:

1._ Factores predisponentes para un infarto

2._ Importancia clínica de la Hipercolesterolemia
3._ Importancia clínica de la Hipertrigliceridemia
4._ ¿Que otros órganos afectan las dislipidemias?

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 PRÁCTICA No. 5

CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO SÉRICO

OBJETIVO GENERAL:
Determinar la concentración de ácido úrico sérico por medio de la reacción del ácido
fosfotúngstico.

OBJETIVO ESPECÍFICO:
Comparar los resultados para descartar hiperuricemia y gota.

PRERREQUISITOS:
1. Describir el metabolismo de los nucleótidos purícos
2. Describir el catabolismo de las bases purínicas
3. Enumerar las características metabólicas de la Gota.
4. Qué es el monourato de sodio y como se forma

INTRODUCCIÓN:
La síntesis de nucleótidos es un proceso celular dinámico y continuo. Se requiere de
estos para llevar a cabo diversas actividades metabólicas en el organismo, esto último sin tomar
en cuenta su función primaria que es la de ser monómeros estructurales de los ácidos nucleicos.

La regulación de esta vía es compleja debido a que utiliza mecanismos de retroalimentación

negativa, regulación alostérica, así como procesos de recuperación de metabolitos. Con
frecuencia se presentan desajustes en esta regulación, siendo un ejemplo clásico la
sobreproducción de ácido úrico como parte de una descompensación del catabolismo de los
nucleótidos purínicos. En la mayoría de los organismos este defecto no es perceptible, ya que al
ser el ácido úrico un producto de excreción, es eliminado en la orina. Sin embargo, en pacientes
con insuficiencia renal, la excreción del ácido úrico tiende a ser más lenta y por lo tanto su
concentración en sangre aumenta en forma considerable, generando un defecto conocido
hiperuricemia. En algunos pacientes la hiperuricemia es tal, que genera depósitos de monourato
sódico en los tejidos de las articulaciones de las extremidades inferiores. Estos depósitos tienden
a formar cristales que a menudo lesionan los tejidos provocando dolores muy intensos que son
característicos de la enfermedad llamada gota.

Para determinar la concentración de ácido úrico en sangre se utiliza el método del ácido
fosfotúngstico (constituido por ácido fosfórico y tungstato de sodio “que es el que precipita las
proteínas” con un conservador de sulfato de litio), que hace reaccionar al ácido úrico con el ácido
fosfotúngstico en un medio alcalino para formar alantoína y azul de tungsteno, éste último genera
un color muy estable que se mide en espectrofotómetro a una longitud de onda de 640 nm.

MATERIAL:
Gradilla
Tubos de ensaye de 10 x 100 mm
Pipetas serológicas de 1 y 5 ml
Propipetas
Celdas para espectrofotómetro
Micropipetas de 300 y 500 microlitros

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EQUIPO:
Centrífuga clínica
Espectrofotómetro

SUSTANCIAS REACTIVAS:
Solución preparada de ácido fosfotúngstico
Solución patrón de ácido úrico
Agua destilada
Solución de carbonato de sodio al 3.5%

MÉTODO:
Espectrofotocolorimétrico

PROCEDIMIENTO:
Preparar una serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla VII. Primera serie de tubos para la Cuantificación de Ácido Úrico Sérico
Tubo estándar o
Reactivo Tubo blanco Tubo problema
control

Suero --- --- 0.3 ml

Sol patrón --- 0.3 ml ---

Agua destilada 0.3 ml --- ---

Ác. fosfotúngstico 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

Mezclar bien cada tubo y centrifugar el tubo problema a 2,500 rpm durante 10 min. y recuperar el
sobrenadante. El tubo blanco no es necesario que se centrifugue, atendiendo a las propiedades
específicas de la reacción.
Prepare otra serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla.

Tabla VIII. Segunda serie de tubos para la Cuantificación de Ácido Úrico Sérico
Tubo estándar o
Reactivo Tubo blanco Tubo problema
control
Sobrenadante del
--- --- 0.5 ml
tubo problema
Sol. preparada del
--- 0.5 ml ---
tubo patrón
Sol. preparada del
0.5 ml --- ---
tubo blanco
Carbonato de sodio al
2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
3.5%

Mezclar bien cada tubo y dejar reposar durante 20 min..

Se calibra el espectrofotómetro a cero de absorbancia a 640 NM con el tubo blanco y se
obtienen la absorbancias.

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RESULTADOS:
Para calcular las concentraciones aplique la siguiente fórmula:

Absorbancia del problema Concentración

Ácido Úrico Sérico =--------------------------------------------- X del patrón o control
Absorbancia del patrón o control que se esté usando

=[ ] mg/dl

Valores normales:
Hombres: 3.5 – 7.5 mg/dl
Mujeres: 2.5 – 6.5 mg/dl

DISCUSIÓN:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________

CONCLUSIÓN:

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________

CUESTIONARIO:

1.-Esquematice las bases púricas y pirimídicas:

2.-Describa cuatro (4) alteraciones del metabolismo de las purinas.
3.-Mencione cuatro (4) alteraciones del metabolismo de las pirimidinas.
4.- Esquematice la degradación de las bases púricas hasta 2CO 2 + 4NH4+

Rev. Enero 2015 Page 17

5.- Defina:
a) Uremia:_______________________________________________________
b) Uricemia:______________________________________________________
c) Uricaciduria:____________________________________________________

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 PRACTICA No.6

DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE BILIRRUBINAS SERICAS

OBJETIVO:

Determinar la concentración de bilirrubina total y directa por la técnica de Van der Berg y
las analizar como una prueba de función hepática.

PREREQUISITOS:

1.- Conocer y describir el metabolismo de las bilirrubinas.

INTRODUCCION:

La bilirrubina es un compuesto cromógeno de color amarillo o naranja formado en la

excresión del catabolismo de la Hemoglobina. El grupo porfirínico HEM es la fuente directa de
bilirrubina y se detecta en dos formas: bilirrubina libre y conjugada con ácido glucurónico, siendo
esta conjugación a nivel hepático.
El hígado tiene la capacidad para concentrar y eliminar la bilirrubina por mecanismos específicos
y es transportada por el torrente sanguíneo unida electrostáticamente a la albúmina. Se liberan
por día 6 gr. de hemoglobina los cuales son catabolizadas en células del sistema retículo
endotelial donde es liberada la bilirrubina, esto se hace por medio de dos reacciones
enzimáticas: primero el complejo de oxigenasas microsómicas y la acción de la biliverdina
reductasa.
La determinación clínica de bilirrubina sérica es utilizada como prueba de funcionamiento
hepático, las enfermedades ligadas con altas concentraciones de bilirrubinas se conocen como
hiperbilirrubinemias y son responsables de un síndrome llamado Ictericia que determina múltiples
etiologías.

MATERIAL:
Tubos de ensaye de 10 x 100 mm
Gradilla
Pipetas serológicas de 1 y 2 ml
Propipetas
Celdillas para espectrofotómetro

EQUIPO:
Espectrofotómetro de luz visible

SUSTANCIAS REACTIVAS:
Ácido sulfanílico 29 mM.
Acelerador. (cafeína + Benzoato de sodio + Acetato de sodio)
Fehling II (Tartrato de sodio y potasio con Hidróxido de sodio)
Solución Salina 0.89%
Suero no hemolizado.

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METODO:
Espectrofotocolorimetrico

FUNDAMENTO:
Utilizando la técnica de Van der Berg basado en las siguientes reacciones: El ácido
sulfanílico diazoico en un medio alcalino reacciona con la bilirrubina formando un complejo
azobilirrubina el cual tiene una coloración café parda, la sensibilidad es mayor para la bilirrubina
conjugada que la libre. Si se detecta ésta última se aplica un acelerador del color (cafeína,
benzoato de sodio y acetato de sodio).

PROCEDIMIENTO:

a) Técnica para Cuantificación de Bilirrubina Total

Tabla IX. Distribución de los reactivos para la Cuantificación de la Bilirrubina Total

Tubo Blanco Problema

Ácido sulfanílico 0.2 ml 0.2 ml

Nitrito de sodio ----- 0.1 ml

Acelerador 1.0 ml 1.0 ml

Suero problema 0.2 ml 0.2 ml

Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente por 30 minutos

Fehling II 1.0 ml 1.0 ml

Mezclar y leer la absorbancia del problema a 580 nm, ajustando el espectrofotómetro a cero con
el blanco.

b) Técnica: para Bilirrubina Directa (Conjugada).

Tabla X. Distribución de los reactivos para la Cuantificación de la Bilirrubina Directa (Conjugada)

TUBO BLANCO PROBLEMA

Acido sulfanílico 0.2 ml 0.2 ml

Nitrito de sodio ----- 0.1 ml

Solución salina 2.0 ml 2.0 ml

Suero problema 0.2 ml 0.2 ml

Mezclar y reposar 5 min. y leer a 510 nm ajustando el espectrofotómetro a cero con el blanco.

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RESULTADOS:
Para calcular las concentraciones aplique las siguientes fórmulas para cada analito
trabajado:

Absorbancia del problema X 10.5 = [Bilirrubina total] mg/dl.

Absorbancia del problema X 14 = [Bilirrubina Directa] mg/dl.

[Bilirrubina indirecta] mg/dl = Total - Directa.

Valores de referencias:

Hasta 1.0 mg/dl. Para bilirrubinas totales

Hasta 0.3 mg/dl. Para bilirrubinas directas

Bilirrubina Total en mg/dl. =

Bilirrubina Directa en mg/dl. =

Bilirrubina Indirecta en mg/dl.=

DISCUSION:

En base a los resultados obtenidos y el objetivo planteado analice la importancia de esta

determinación, como parte de un Perfil Hepático. Discuta la Técnica utilizada.

CONCLUSION:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

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CUESTIONARIO:

1.- Describa como se degrada la porción porfirínica libre de hierro del grupo Hem
2.- Que cantidad de Bilirrubina se forma en un adulto diariamente
3.- ¿Cuál es la función del Hígado en la formación de la Bilirrubina?
4.- Que rasgos clínicos presenta la Ictericia obstructiva y como se encuentran los valores de
Bilirrubina?
5.- ¿Porque en la Ictericia neonatal no especificada, está indicada la fototerapia?

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 PRACTICA No. 7

DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE TRANSAMINASAS SERICAS

OBJETIVO:
El alumno determinará la transaminasa glutámico pirúvica (STGP) y la transaminasa
glutámico oxaloacetica (STGO) en el suero para interpretar fenómenos fisiológicos, metabólicos y
patológicos relacionados con estas enzimas.

PRERREQUISITOS:
a) Función de las transferasas.
b) fundamentos metabólicos de las transaminaciones.
c) Importancia Clínica de STGO y STGP.

INTRODUCCION:
Las transaminasas son enzimas que realizan la interconversión de aminoácidos alfa-
cetoácidos por transferencia de grupos amino. Existe una gran variedad de transaminasas con
diferente significado fisiológico, de ellas la STGO y la STGP son las más importantes desde un
punto de vista clínico.

La STGO promueve la siguiente reacción:

STGO
L-aspartato + cetoglutarato <--------> oxaloacetato + L-glutamato

la STGP a su vez promueve la siguiente reacción:

STGP
L-alanina + cetoglutarato <--------> piruvato + L-glutamato

Estas reacciones son reversibles y utilizan la fosfato de piridoxal como coenzima. Estas
transaminasas están distribuidas ampliamente en tejidos animales en forma principal de tejido
hepático y tejido cardíaco y en forma secundaria en plasma, bilis y fluido cerebroespinal sus niveles
extracelulares deben ser bajos en condiciones normales y solo cuando hay lesión celular se podrán
encontrar altos títulos de estas enzimas.
En pacientes con infarto al miocardio o con lesión hepática aguda se encontrarán altos títulos de
dichas transaminasas los cuales se mantendrán elevados por un periodo de 24 a 36 hrs. en caso
de infarto y por mucho más tiempo en caso de lesión hepática.

MATERIALES:
Tubos de ensaye de 10 x 150 mm
Gradilla
Pipetas serológicas de 5 y 10 ml
Propipetas
Celdillas para espectrofotómetro

EQUIPO:
Espectrofotómetro de luz visible
Incubadora a 37 grados centígrados

SUSTANCIAS REACTIVAS:
Solución sustrato de TGO

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Solución sustrato de TGP
Solución estándar de Piruvato
Agua destilada
Solucion de Dinitrofenilhidracina o reactivo de color
Solución de NaOH al 0.4 N
Suero no hemolizado

FUNDAMENTO:
Se utilizará la reacción de dinitrofenilhidracina para cuantificar a ambas transaminasas.
Esta reacción tiene el siguiente fundamento químico:
El substrato de alanina en solución amortiguadora de pH 7.4 reacciona con la TGP produciendo
piruvato el cual en un medio alcalino reacciona con la 2,4-dinitrofenilhidracina formando una
fenilcarbazona (dinitrofenilhidrazona) que se puede cuantificar fotometricamente a 505 nm.
El substrato de aspartato en solución amortiguadora de pH 7.4 reacciona con la TGO produciendo
oxaloacetato que reacciona con la dinitrofenilhidracina a Ph alcalino dando también una
fenilcarbazona que se puede medir fotometricamente a 490 nm.

PROCEDIMIENTO:
Primero se deberá elaborar una curva de calibración como se muestra en el siguiente cuadro:

a) Curva de calibración

Tabla XI. Distribución de los reactivos iniciales para la Curva de Calibración

Tubo Ml de piruvato Sustrato de GPT H2O destilada Absorbancia

1 0 1.0 0.2

2 0.10 0.90 0.2

3 0.20 0.80 0.2

4 0.30 0.70 0.2

5 0.40 0.60 0.2

Posteriormente se le van a adicionar los siguientes reactivos, dando tiempos de reposo para que
reaccione el contenido.

Agregar 1.0 ml de dinitrofenilhidracina. Reposar 20 minutos a temperatura ambiente

Agregar 10 ml de NaOH 0.4 N. Reposar 10 minutos a temperatura ambiente

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm ajustando el equipo con un blanco con agua destilada

Una vez obtenidas todas las absorbancias, genere una gráfica donde el eje de las X serán las
Unidades Internacionales (UI) y el eje de las y las absorbancias. Recuerde que la gráfica deberá
tener escala para poder interpretar los resultados obtenidos mediante una interpolación.

Rev. Enero 2015 Page 24

 Tabla XII. Equivalencias de las absorbancias obtenidas con las Unidades de TGO y TGP

Absorbancias Unidades de TGO Unidades de TGP

obtenidas equivalentes equivalentes

0 0

24 28

61 57

114 97

190 150

Eje y

Ab
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2 Eje x
0.1 U.I.
1234567891 1 1 1 1 1 1 1 1 1
0000000000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Figura 1. Representación grafica de las absorbancias
obtenidas por el alumno

Para la cuantificación de las transaminasas, solo se prepara un tubo problema por cada
determinación y se utiliza un blanco de agua destilada para ajustar el fotocolorímetro.

Rev. Enero 2015 Page 25

 b) Tratamiento de los problemas

Tabla XIII. Distribución de los reactivos para la Cuantificación de las transaminasas TGO Y TGP Séricas
Tubo problema Tubo problema
Reactivos y tiempos de incubación
de TGO de TGP

Solución amortiguadora de substrato 0.2 ml 0.2 ml

Preincubación a 37° C 5 mins 5 mins

Suero ( no hemolizado ) 0.2 ml 0.2 ml

Mezclar e incubar a 37° C 30 mins 30 mins

Reactivo de Dinitrofenilhidracina 0.5 ml. 0.5 ml.

Mezclar y dejar reposar a temp. ambiente 20 mins 20 mins

Hidróxido de sodio 0.4 N 5.0 ml. 5.0 ml.

Mezclar y reposar 5 mins a temperatura ambiente.

Medir la absorbancia del tubo de TGP a 490 nm. y de TGO a 505 nm ajustando el
espectrofotómetro a cero de absorbancia con agua destilada.

RESULTADOS:

En base a la gráfica Interpolar los valores de absorbancia obtenidos en la curva de calibración para
determinar las concentraciones de cada transaminasa (TGO y TGP).

Valores obtenidos:

TGO UI/ml
TGP UI/ml

VALORES DE REFERENCIA:

STGO: 4 a 36 Unidades Internacionales / ml.

STGP: 4 a 32 Unidades Internacionales / ml.

DISCUSION:
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
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CONCLUSION:
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BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:
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_______________________________________________________________________________
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CUESTIONARIO:

1._ Mencione cinco enfermedades en donde estén altos los títulos de STGO y de STGP.
2._ ¿Cuáles serán las pruebas específicas primarias para la elaboración de un perfil hepático?
3._ ¿Que es el coeficiente de Rittis? y que datos clínicos nos refiere.
4._ En que otro tipo de tejidos además del hepático y cardíaco es posible encontrar este tipo de
transaminasas.

Rev. Enero 2015 Page 27