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Naturales
Farmacognosia
Guía de Trabajos
Prácticos
Autoras:
Dra. Silvia Debenedetti
Dra. Erica Wilson
Lunes a viernes de 9 a 21 h.
Torre Universitaria, Zabala 1837, primer nivel inferior.
C1426DQG - CABA
Teléfono: 4788-5400, internos 5002 y 2122.
Email: fasciculos@ub.edu.ar
www.ub.edu.ar
Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales
Guía de Trabajos Prácticos-FARMACOGNOSIA
FARMACOGNOSIA
Guía de trabajos prácticos
Carrera de Farmacia
3º Año Plan 2012 y plan 2008 transición 2012.
OBJETIVO:
- Que el alumno se familiarice con el manejo de las drogas vegetales y sus preparados:
polvos, extractos secos y líquidos,etc.
- Que pueda diseñar procedimientos de extracción, métodos cromatográficos, realizarlas
y detectar los puntos a mejorar a partir de los resultados obtenidos.
UNIDADES:
1. EXTRACCIÓN
2. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN (TLC/HPLC)
3. CONTROL DE CALIDAD
BIBIOGRAFÍA:
Libros que se detallan a continuación se pueden consultar en la biblioteca o en la Cátedra
virtual:
-Sharapin, N. (2000).Fundamentos de Tecnología de Productos Fitoterapéuticos. Ed. R. Pinzón
CAB-CYTED. Bogotá, Colombia (Site de Farmacognosia)
-Dewick P.M. (2004). Medicinal Natural products, a biosynthetic approach.2ª Ed. John Wiley &
Sons, Ltd. (Site de Farmacognosia)
-World Health Organization "Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials" cap. 13.
(1998) (Site de Farmacognosia)
-Elementos de fitoquímica y de farmacognosia. Bruneton, Jean. 1991. xvii, 594 p.
Solicitar por: 041349.
-Farmacognosia. Evans, William Charles. 1991. 901 p. Solicitar por: 041361.
-Farmacognosia : fitoquímica, plantas medicinales. Bruneton, Jean. 2001.1099 p.
Solicitar por: 056588
http://www.rain-tree.com/plants.htm
Sitio con muy buenas monografías gratis (inglés)
http://www.herbphoto.com/education/index.html
Sitio con algunas monografías gratis (del listado hay algunas que están, otras se pagan)
http://barcelonacomenius.googlepages.com/whomedicinalplantsbooks
Hay tres volúmenes con monografías de plantas medicinales- Publicación de la OMS (inglés)
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/
La Universidad de Antioquia, Colombia
http://www.profitocoop.com.ar
Si se registran tienen acceso a algunas monografías oficiales. Es gratis.
http://www.salutia.com.ar/Sitio/Sp/Servicios/Vademecum/Farmacopea_Argentina/sp_Vademe
cum_Farmacopea_Index.htm Farmacopea Argentina
Recordar que la mayoría de los accidentes en los laboratorios químicos son el resultado del
descuido o distracción, falta de criterio o fatiga del accidentado o de alguna de las personas
cercanas.
El estudiante debe adquirir los hábitos de trabajo de manera de realizar las actividades en el
laboratorio con la máxima seguridad para él y sus compañeros.
1-Su localización.
2-Accesos a fuentes de agua, gas y desagües
3-Dónde están los matafuegos
4-Donde está la ducha de emergencia y lavaojos
5-Dónde están las distintas puertas de salida.
1-Guardapolvo para no llevar ni traer contaminantes del medio ambiente, como barrera de
contención de las proyecciones o salpicaduras de elementos corrosivos. No debe colocarse
nada encima de él.
2-Guantes para proteger las manos en caso que se usen elementos cáusticos.
3-Anteojos para proteger los ojos de las proyecciones, salpicaduras o radiaciones.
4-Propipetas para evitar respirar los vapores y la posible ingestión de distintas sustancias.
JAMÁS PIPETEE NADA CON LA BOCA.
5-Barbijo para evitar la penetración de polvos a las vías respiratorias.
1-Usar todos los elementos de seguridad en todo momento en que esté realizando una
experiencia.
14-Cuando caliente NO dirija la boca del tubo u otro elemento hacia su rostro o el de sus
compañeros.
16-Sea precavido al trasvasar líquidos, evite que se derrame sobre el exterior del envase. En
este caso, límpielo con una servilleta de papel o un trapo rejilla.
17-Cuando finalice su trabajo deje todo el material limpio y ordenado, las mesadas limpias y
controle que las llaves de gas estén cerradas y los equipos eléctricos apagados.
7-¿Qué aspectos se deben tener en cuenta en una industria fitofarmacéutica para la elección
del solvente de extracción?
8-¿Que solventes emplearía para extraer la mayor cantidad de metabolitos presentes en una
droga vegetal?
9-¿En que se basaría para la elección del solvente de extracción de los grupos fitoquímicos
mencionados en la pregunta 2)? Indique para cada uno de ellos el solvente más apropiado.
11-Mencione las diferentes técnicas de extracción. Clasifique las técnicas mencionadas según
extracciones solido-líquido o líquido-líquido y según sean procesos en frio o en caliente.
12-¿Que tipo de extracto es una tintura? Que proceso de extracción se utiliza para la obtención
de tinturas?
Que es un alcoholaturo?
Que significa la relación que se encuentra entre paréntesis en los extractos?
Conocimientos previos:
1. Objetivo
- Familiarizarse con la metodología de trabajo que se utiliza para la extracción y aislamiento
de compuestos a partir de material vegetal
- Utilizando un ejemplo concreto usarán los siguientes métodos de extracción: sonicación,
reflujo, Soxhlet, extracción con agitación mecánica.
- También se familiarizarán con el uso del evaporador rotatorio y demás equipamiento de
laboratorio que utilizarán durante el cuatrimestre.
- Elegirán un solvente de extracción de acuerdo a las características de la muestra.
- Se compararán los resultados obtenidos con los diferentes métodos de extracción por un
lado y con los distintos solventes elegidos por cada alumno.
2.Material vegetal:
Frutos de Capsicum annum desecados y molidos a polvo fino.
3.Métodos:
- Reflujo.
-Ultrasonido a temperatura ambiente
-Soxhlet
Agitación mecánica a temperatura ambiente
4.Procedimiento:
Se pesan 2 g de la droga vegetal y se coloca en el recipiente adecuado de acuerdo al
método a utilizar. Se agregan 150 ml de solvente y se extrae durante 60 minutos (Soxhlet,
reflujo), 10 minutos (ultrasonido) y 30 minutos (agitación mecánica).
Luego de transcurrido el tiempo preestablecido, se filtra el contenido del recipiente por
Buchner , se lleva a sequedad y se pesa.
1-OBJETIVO
2.MATERIAL VEGETAL
Polvo de Cáscara sagrada.
Aloe
3.MÉTODO
Cada equipo (2 alumnos) elaborará un esquema de extracción que utilizará con una de las
drogas. El esquema será discutido con el profesor/ayudante previo a la realización de la
actividad.
Se trabajará con 1 g de droga y aproximadamente 50 ml de solvente en el caso de la
Cáscara sagrada y con 0,5 g en el caso del Aloe.
La presencia de los grupos fitoquímicos extraídos se verificará mediante las reacciones de
caracterización que se describen en el punto 4.
Se reservarán 2 ml de cada fracción en viales de color caramelo identificados con el
nombre de los alumnos y su contenido para su análisis por TLC en otro práctico.
4.REACCIONES DE CARACTERIZACIÓN
Esta reacción consta de una extracción con solvente poco polar, seguida del siguiente
procedimiento. En este caso utilizar 3 ml del extracto etéreo obtenido anteriormente que
se colocan en un tubo de ensayo.
Agregar 2 ml de una solución de hidróxido de amonio concentrado, agitar suavemente y
observar la coloración de la fase acuosa.
Extracto acuoso:
Colocar la muestra en un tubo de ensayo. *Agregar 2 ml de NaOH 10% y calentar a baño
de maría durante 15 minutos. Enfriar y acidificar con HCl 1M, verificando con papel
tornasol. Agregar 2 ml de éter de petróleo y agitar cuidadosamente. Transferir la fase
orgánica con una pipeta pasteur a un tubo de hemólisis y agregar 1 ml de NaOH. Observar
el color de la fase acuosa.
Extracto orgánico:
Colocar aprox. 2 ml de la muestra en un tubo de ensayo. Eliminar el solvente por
evaporación calentando a baño de maría. Seguir con el procedimiento indicado en el
párrafo anterior a partir del asterisco (*)
Droga vegetal:
Colocar aprox. 1 g de la droga pulverizada en un tubo de ensayo, agregar 2 ml de NaOH
10% y calentar a baño de maría durante 15 minutos. Filtrar y trasvasar el filtrado a otro
tubo de ensayo, acidificar con HCl 1M, verificando con papel tornasol. Agregar 2 ml de
éter de petróleo y agitar cuidadosamente. Transferir la fase orgánica con una pipeta
pasteur a un tubo de hemólisis y agregar 1 ml de NaOH. Observar el color de la fase
acuosa.
Informe
Elaborar el esquema de extracción utilizado indicando solventes y resultados de las
reacciones de caracterización. Indique que otros grupos fitoquímicos pueden estar
presentes en cada una de las fracciones obtenidas.
CUESTIONARIO
1) Además de Cáscara sagrada, ¿Qué otras drogas conoce cuyos principios activos son
derivados de antraquinonas? Nombre científico (NC), nombre vulgar (NV) y parte usada de
cada una de ellas.
2) Escriba la fórmula de los principales componentes de las drogas mencionadas en (1) e
indique sus principales usos medicinales
3) Durante el TP ud. efectuó la separación de los distintos compuestos hidroxiantracénicos de
cáscara sagrada (Rhamnus purshiana DC)
a) Fundamente en que fracción obtiene las antraquinonas libres de las aloínas y de los
cascarósidos presentes en la droga vegetal.
b) ¿Que reacciones de caracterización utilizó en cada una de las fracciones? Justifique su
respuesta.
c) Fundamente el método de separación de O y C heterósidos realizado en el TP
1-OBJETIVO
Extraer los alcaloides de una droga vegetal empleando alguno de los métodos convencionales
de extracción de alcaloides: medio ácido, medio básico o con solventes.
2-MATERIAL
Quina (Cinchona calisaya- Rubiaceae)
3-MÉTODO
4-REACCIONES DE CARACTERIZACIÓN
Colocar unas gotas del extracto de cloruro de metileno en una placa de toque o
portaobjetos. Evaporar el solvente. Agregar una gota del reactivo de Draggendorf y observar
la reacción. Utilizar como control, una solución de sulfato de quinina al 0.1%.
Esta reacción se puede realizar también sobre papel, sembrando unas gotas sobre un trozo
de papel de filtro y agregando el reactivo. Una vez seco, se debe lavar con agua,
considerándose positiva la reacción si se observa una persistencia del color en el papel.
Informe
Elaborar el esquema de extracción utilizado indicando solventes y resultados de las
reacciones de caracterización. Indique que otros grupos fitoquímicos pueden estar presentes
en cada una de las fracciones obtenidas.
PROBLEMAS DE EXTRACCIÓN
1) ¿Qué tipo de compuestos podría encontrar en una infusión de una droga vegetal?
2) ¿Y en un extracto hexánico?
3-Ud. necesita extraer los glicósidos flavonoides presentes en los botones florales de Sofora.
a) Describa la metodología a utilizar.
Cómo haría para comprobar que agotó el material vegetal
Acido linoleico
Mentol
Rutina
Soforosa
¿En qué fracciones tendría una reacción de Draggendroff (+)? Justifique su respuesta.
8. Se realiza una extracción S/L semi-contínua de una droga vegetal, pasando sucesivamente
hexano, cloruro de metileno, acetato de etilo, metanol y agua.
Se realizan los siguientes ensayos de caracterización sobre las fracciones obtenidas:
Rojo de metilo, Liebermann-Bouchard, Shinoda, FeCl3, Dragendorff, Fehling, Rosenheim.
Explique en qué fracciones podría esperar reacciones positivas para dichas reacciones y qué
núcleo podría estar caracterizando.
Tolueno
Justifique su respuesta.
12. Diseñe un método de extracción que permita obtener los asiaticósidos de la Centella
(saponinas triterpénicas) , en un estado lo más purificado posible .
13. Esquematice un método de extracción que le permita obtener los siguientes compuestos en
3 fracciones distintas. Indique qué ensayos realizaría para caracterizarlos.
14. Diseñe un método para obtener arbutina pura de las hojas de Ilex brasiliensis que contiene
aproximadamente 10% (P/P) sobre droga seca.
Arbutina
Ácido isoclorogénico
16- Se realiza un proceso de extracción semicontinuo sólido –líquido a una droga vegetal en
polvo, siguiendo el siguiente esquema de fraccionamiento:
a) Hexano
b) Cloroformo
c) Acetato de etilo
d) Agua
Discuta qué tipo de compuestos podría encontrar en los distintos extractos.
20-Las semillas de Nuez vómica (Strychnos nux-vomica, Loganiaceae) contiene alcaloides, lípidos
y aminoácidos.
a) Proponga un método de extracción que permita separar en tres fracciones los alcaloides, los
lípidos y los aminoácidos presentes en esta droga.
b) ¿Cómo caracterizaría cada grupo fitoquímico en la fracción correspondiente?
18) ¿En que caso es imprescindible la utilización de un extracto patrón y en que caso una
sustancia de referencia?
19) ¿En que casos utiliza fases móviles que contienen con ácidos y en que casos se agrega a la
fase móvil una base? Justifique.
21) ¿Qué criterios se emplean para seleccionar el sistema de revelado de los cromatogramas?.
1-OBJETIVO
Desarrollar sistemas cromatográficos para el análisis cualitativo de extractos vegetales.
2-MATERIAL VEGETAL
Extracto de Capsicum
Extractos de Cáscara sagrada y Aloe obtenidos en el TP Nº 2
Extracto de quina obtenido en el TP Nª 4
3-MÉTODO
Se utilizarán Cromatofolios de silicagel como fase estacionaria. La fase móvil será
seleccionada por cada equipo.
Se realizarán las corridas cromatográficas y se evaluará la resolución del sistema
registrando los Rf correspondientes a los compuestos de interés, optimizando el sistema
en base a los resultados obtenidos.
En todos los casos se deberá informar las condiciones cromatográficas utilizadas para
cada prueba realizada, los parámetros cromatográficos obtenidos (k´, α´y Rs) y la
justificación de los cambios planteados.
Informe
Realizar un esquema del cromatograma obtenido indicando: Sistema cromatográfico
utilizado (FM, FE, y revelado)
Tabla de Rfs de las bandas obtenidas en los extractos y sustancias de referencia (color al
UV y con reactivo revelados)
1. OBJETIVO
2. MATERIAL VEGETAL
- Extracto de Cáscara sagrada
- Extracto de Frángula.
3. MÉTODO
4. RESULTADOS:
Registrar los Rf de las manchas observadas en los distintos cromatogramas, en tablas
similares a las siguientes:
a) Observación a la luz visible (Rf)
Extracto de R.
Extracto de Solución testigo
purshiana. R.frangula aloína
1-OBJETIVO
Identificar un extracto vegetal en un producto terminado.
2-MATERIALES
Extracto de Cáscara sagrada
Extracto de Frángula
Comprimidos de Cáscara sagrada/Frángula
3.MÉTODO
Procedimiento
Analizar la muestra siguiendo el método descripto en el TP Nª 7
4-CONCLUSIONES
Elabore un informe sobre los resultados obtenidos y la identidad del extracto presente
en los comprimidos de acuerdo al ensayo realizado.
1.- Se dispone de un extracto clorofórmico de centella asiática que contiene ácido asiático
(triterpeno libre) entre otros compuestos.
a) Describa una técnica que permita identificar ácido asiático (triterpeno libre) en dicho
extracto.
b) Probando distintos sistemas cromatográficos para identificar ácido asiático obtuvo los
siguientes cromatogramas:
Qué sistema le parece más adecuado? Justifique su respuesta analizando los parámetros de
resolución que se encuentran afectados en cada uno de los sistemas.
c.- Cómo procedería para obtener 5 mg de ácido asiático a partir de un extracto clorofórmico de
centella asiática. Describa la metodología a emplear detallando los siguientes puntos:
T= testigo
M= muestra
T M
¿Podría utilizar este sistema cromatográfico para identificar barbaloina en el extracto de áloe?
En caso necesario, ¿que modificaciones haría para lograrlo? Justifique su respuesta, indicando
los factores de resolución (capacidad, eficiencia, selectividad).
c)Que sistema utiliza par su revelado?
3.- Usted debe analizar los alcaloides presentes en un extracto cloruro de metileno
semipurificado de opio.
a) Describa una técnica que permita identificar morfina (alcaloide) en dicho extracto.
M= Muestra
T=Testigo (morfina)
¿Podría utilizar este sistema para identificar morfina en el extracto. Justifique su respuesta. En
caso necesario ¿cómo optimizaría este sistema?
4.- Usted debe analizar por cromatografía sobre planos un extracto acetato de etilo
semipurificado de hipérico.
a) Describa una técnica que le permita comprobar la presencia de hiperósido (heterósido
flavonoide) en dicho extracto.
b) Ensayando diversos sistemas cromatográficos para comprobar la presencia de hiperósido en
el extracto, obtuvo los siguientes cromatogramas:
T M
Qué sistema le parece más adecuado? Justifique su respuesta analizando los parámetros de
resolución que se encuentran afectados en cada uno.
6.- Usted debe analizar por cromatografía sobre planos un extracto acetato de etilo
semipurificado de hojas de Gingko biloba.
a) Describa una sistema cromatográfico (FM, FE y Revelado) que le permita detectar la rutina
(heterósido flavonoide) presente en dicho extracto.
b) Buscando un sistema adecuado para cuantificar la rutina, obtuvo los siguientes
cromatogramas:
(1) (2) (3)
T M T M T M
c.- Usted necesita obtener rutina a partir de un extracto acetato de etilo semipurificado de
hojas de Gingko biloba. Describa la metodología que emplearía para obtener 10 mg de rutina
detallando los siguientes puntos:
I) Sistema cromatográfico.
II) Soluciones a preparar.
III) Siembra de las mismas, revelado.
IV) Interpretación del cromatograma resultante y obtención de la rutina.
V) Verificación de la pureza de la rutina aislada..
1.- Se dispone de un extracto clorofórmico de centella asiática que contiene ácido asiático y
ácido madecásico (triterpenos libres) entre otros compuestos.
a) Describa una técnica que le permita detectar la presencia de ácido asiático en dicho extracto.
b) Probando distintos sistemas cromatográficos para identificar ácido asiático obtuvo los
siguientes cromatogramas:
Qué sistema le parece más adecuado? Justifique su respuesta analizando los parámetros de
resolución que se encuentran afectados en cada uno de los sistemas.
TRABAJO PRÁCTICO Nº 9
ANÁLISIS CUANTITATIVO DE UN EXTRACTO VEGETAL POR HPLC
1-OBJETIVO
Que el alumno realice un ensayo de cuantificación siguiendo un procedimiento descripto en
una farmacopea (Farmacopea Española 2005).
2-MATERIALES
Comprimidos con extracto de Gingko biloba
Quercetina (sustancia de referencia).
3.MÉTODO
4-INFORME
2. MATERIALES
1) ¿Qué ensayos realizaría sobre una droga vegetal para evaluar si:
a) Está contaminada con tierra y/o arena.
b) Tiene un contenido de humedad > 12%.
c) Ha sido adulterada con otra especie semejante.
d) Está agotada en sus principios activos.
e) (Droga aromática) ha sido desecada a alta temperatura.
2) Enumere los ensayos que realizaría sobre los siguientes productos botánicos para
determinar su calidad:
a) Aceite de ricino para cápsulas
b) Cáscara sagrada según Farmacopea Argentina.
c) Cáscara sagrada en polvo según Farmacopea Argentina.
d) Comprimidos de Cáscara sagrada según USP.
e) Extracto seco de Ginkgo con 24 % de glicósidos flavonoides expresados como rutina.
f) Comprimidos de extracto seco de Sen (conteniendo 8% de sennósidos expresados
como sennósido B) y 200 mg de polvo de Regalíz.
g) Tisana con 20% de hojas de boldo, 30% de semillas de anís y 50% de tallos de Cola de
caballo.
h) Polvo de belladona con 0.08% de alcaloides totales expresados como hiosciamina.
b) Una muestra de polvo de semillas de Psillium que se utiliza para un laxante de acción
mecánica.
5) Diseñe un método de control de calidad para unas gotas coleréticas que contienen extracto
hidroalcóholico de alcachofa y extracto de boldo.
6)Desarrollo un método de control de calidad para comprimidos que contienen extracto seco de
manzanilla y polvo de corteza de frángula.
7) Se desea evaluar el reemplazo de una esencia de lavanda de Egipto (de calidad óptima) por
una de otro origen. Desciba un procedimiento que le permita saber si dicho reemplazo es
factible
9) Explique qué ensayos realizaría sobre unas gotas antiespasmódicas que contienen tintura de
belladona y clorhidrato de papaverina para comprobar si las mismas cumplen cuali y
cuantitativamente con la fórmula declarada.
-APÉNDICE-
MONOGRAFÍAS
cont…..
Continúa……..
Forma y
Comunicación 1A
Ficha Nº 2
Cátedra:
Arq. Eduardo García Lettieri