6.

Control génico de la expresión del citocromo

P-450 en el hígado
RAMIRO JOVER ATIENZA
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular.
Facultad de Medicina. Universidad de Valencia. Avda. Blasco Ibañez 13,
E-46010 Valencia. E-mail: Rmiro.Jover @uv.es

1. RESUMEN

La expresión de los genes del citocromo P-450 (CYP) en el hígado

depende en gran medida de factores de transcripción que pertenecen a dos
grupos o categorías principales: 1) factores de transcripción hepáticos (Li-
ver-enriched transcripcion factors) y 2) factores de transcripción activa-
bles por ligandos xenobióticos. Dentro del primer grupo encontramos fac-
tores de diversas familias como los C/EBP (CCAAT/Enhancer-Binding
Protein) o los HNF (Hepatocyte Nuclear Factor), que se expresan abun-
dantemente en el hígado, y que se unen a regiones reguladoras de genes
típicamente hepáticos, incluyendo los CYPs. Estos factores forman homo-
y hetero-dímeros con miembros de su familia; y muestran cooperatividad
y sinergismo con factores de otras familias modulando así su especifici-
dad y potencia trans-activadora. Pero además de los factores de transcrip-
ción hepáticos que juegan un papel clave en la expresión “constitutiva” de
los CYPs en el hígado, existen otros factores de transcripción que tiene
un papel crucial en la inducción de los genes CYP por xenobióticos. Uno
de los primeros factores de transcripción asociado con la respuesta induc-
tiva de los genes CYP que se descubrió fue el receptor de hidrocarburos
aromáticos policíclicos, AhR (Aryl hydrocarbon Receptor), que promueve
el aumento de la transcripción de CYPs, tales como los CYP 1A1, 1A2 y
1B, y de otros genes de enzimas de biotransformación como la glutation-
S-transferasa y la UDP-glucuronosiltransferasa. Más recientemente se

205
 RAMIRO JOVER ATIENZA

identificaron varios receptores nucleares que pueden unir xenobióticos y

que también juegan un papel crucial en el mecanismo de inducción de ge-
nes CYP. Estos son: I) el PXR (Pregnane X Receptor) que activa los ge-
nes de la subfamilia CYP3A en respuesta a diversos compuestos quími-
cos incluyendo ciertos esteroides naturales y sintéticos; II) el CAR
(Constitutive Androstane Receptor) que media en gran medida la induc-
ción de los genes CYP producida por el fenobarbital y otros muchos com-
puestos lipofílicos similares; y III) el PPAR (Peroxisome Proliferator-Ac-
tivated Receptor) que media la inducción de los genes CYP de la
subfamilia CYP4A por compuestos químicos acídicos clasificados como
proliferadores de los peroxisomas y carcinógenos no genotóxicos. Los me-
dicamentos y xenobióticos capaces de unirse a estos receptores ocasionan
su activación o desinhibición, y provocan una cascada de acontecimientos
que culmina con la unión del receptor a la secuencia diana en el promo-
tor de los genes CYP y su consiguiente transactivación por los mecanis-
mos bien conocidos de los receptores nucleares.

2. CONTROL DE LA EXPRESIÓN DE LOS GENES CYP

POR FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN HEPÁTICOS

La actividad de un gen se rige por la interacción de factores de trans-

cripción con sus elementos de respuesta en el DNA y por la estructura de
la cromatina, que regula la accesibilidad al locus génico.
La transcripción se lleva a cabo por las enzimas llamadas RNA poli-
merasas cuya actividad depende de la secuencia del promotor y de las
proteínas o factores reguladores (basales, activadores constitutivos e in-
ducibles) que se unen a ésta, su tipo y actividad. Además, existen otros
factores llamados co-reguladores que no se unen al DNA: los co-activa-
dores, que favorecen la transcripción, y los co-represores, que la inhiben.
Algunos de los factores de transcripción son ubicuos, se expresan en la
mayoría de tejidos, mientras que otros están más restringidos y se ex-
presan solo en determinados tejidos [1].
La remodelación de la estructura de la cromatina es esencial para la
expresión génica. La cromatina inactiva, que no está siendo expresada,
se encuentra en forma muy compacta o condensada. Para su expresión,
esta estructura debe relajarse y hacerse accesible al complejo basal de

206
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

transcripción que contiene la RNA polimerasa. En estos procesos inter-

vienen diversos complejos multiproteicos y enzimas [2].
La regulación transcripcional juega un papel crucial en el control de
la expresión de los genes hepáticos. El conocimiento presente de la re-
gulación transcripcional en el hígado ha derivado principalmente de los
análisis de promotores y elementos intensificadores de genes que se ex-
presan selectivamente en hepatocitos adultos. Estos análisis han llevado
a la identificación de un número importante de factores de transcripción,
denominados Liver-enriched transcription factors (LETF), que se expre-
san abundantemente en el hígado, si bien no son exclusivos de este teji-
do, y que se unen a regiones reguladoras de genes típicamente hepáticos
[3] (Figura 1). Los LETF se agrupan en diversas familias atendiendo a la
homología de sus dominios de unión al DNA, que poseen secuencias de
aminoácidos y estructuras características. Estos factores forman homo- y
hetero-dímeros con otros miembros de su familia; y muestran cooperati-
vidad y sinergismo con factores de otras familias modulando así su es-
pecificidad y potencia trans-activadora [3, 4].
Algunos genes se transcriben siempre a un cierto nivel denominado
constitutivo, otros pueden aumentar su actividad transcripcional (induc-
ción) mediante la interacción con determinados factores de transcripción
dependientes de ligando. Los factores de transcripción LETF no están
bajo el control de ligandos endógenos y por eso su papel es el de regu-
lar la expresión constitutiva y específica de tejido de los genes hepáticos.
A menudo encontramos que son varios los LETF que participan en
la regulación de genes hepáticos, de hecho, las regiones de DNA identi-
ficadas en los promotores de estos genes son capaces de unir dos o más
de estos factores [4, 3]. Un ejemplo sería el gen de la albúmina que se
regula por HNF1a, C/EBPa, C/EBPb y DBP [5] (Figura 1). La activi-
dad coordinada de los LETF también es importante para la regulación de
los genes hepáticos durante el desarrollo. Además los LETF pueden tam-
bién jugar un papel en su auto-regulación. Por ejemplo, hay un sitio de
respuesta a HNF4a en el promotor del gen HNF1a [6]. Esto implica me-
canismos de regulación recíproca.
Numerosos estudios recientes demuestran que muchos de los LETF
conocidos están implicados en el control de la expresión de los genes
CYP en el hígado (Tabla 1) (Figura 1). Diversos estudios también de-

207
 RAMIRO JOVER ATIENZA

TABLA 1
Numerosos estudios recientes demuestran que muchos de los factores
de transcripción hepáticos están implicados en el control
de la expresión de los genes CYP en el hígado
CYP2A4 HNF4 Yokomori-N, et al. (1997) J-Steroid-Biochem-Mol-Biol 62:307-14
CYP2B1 C/EBP Park-Y & Kemper-B (1996) DNA-Cell-Biol 15:693-701
CYP2B1 C/EBP-b & -d Berg-T, et al. (2002) BBRC 293, 907-912
CYP2B1 C/EBP-b & -d Cassel-TN, et al. (2000) Mol-Cell-Biol-Res-Commun 3, 42-47
CYP2B1/2 C/EBP Luc-PV, et al. (1996) Biochem-Pharmacol 51:345-56
CYP2C HNF4 Chen-D, et al. (1994) J-Biol-Chem 269:5420-7
CYP2C HNF4 Chen-D, et al. (1994) DNA-Cell-Biol 13:771-9
CYP2C12 C/EBPa Tollet-P, et al. (1995) Mol-Endocrinol 9:1771-81
CYP2Cs HNF3g Bort-R et al. (2002) Biochem-J (submitted)
CYP2D6 HNF4 & COUP-TFI Cairns-W, et al. (1996) J-Biol-Chem 271:25269-76
CYP2D5 C/EBPb & Sp1 Lee-YH, et al. (1994) Mol-Cell-Biol 14:1383-94
CYP2D6 HNF4 Hara-H & Adachi-T (2002) Mol-Pharmacol 61, 194-200
CYP2E1 HNF1 Liu-SY & Gonzalez-FJ (1995) DNA-Cell-Biol 14:285-93
CYP3A4/7 C/EBPa & DBP Ourlin-JC, et al. (1997) J-Hepatol 26:54-62
CYP3A1 HNF4 & COUP-TF Ogino-M, et al (1999) Arch-Biochem-Biophys 362, 32-7
CYP3A4 C/EBP-b & -a Jover-R et al. (2002) FASEB-J 10.1096/fj.02-0195fje
CYP2H1 HNF1, HNF3 & C/EBP Dogra-SC & May-BK (1997) DNA-Cell-Biol 16:1407-18
CYP7A1 HNF1 Chen-J, et al. (1999) BBRC 260, 829-834

muestran que tanto la expresión de los LETF como la de los genes CYP
está estrechamente asociada al estado diferenciado del hepatocito.
Los mecanismos que gobiernan la regulación de los genes CYP son
diversos y todavía no bien conocidos. A pesar de ello, el estudio indivi-
dual del papel de diversos LETF en la expresión de los CYPs ha permi-
tido dar un primer paso hacia el conocimiento global de la compleja re-
gulación de los CYPs por estos factores de transcripción.

208
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

FIGURA 1. Interacciones de factores de transcripción hepáticos (Liver-enriched

transcription factors) y factores ubicuos (NF-1, NF-Y/ACF, AP-1 y Sp1)
en el promotor de tres genes de expresión hepática

2.1. La familia C/EBP (CCAAT/Enhancer Binding Proteins)

Los C/EBPs constituyen una familia de factores de transcripción que tie-

nen como característica estructural común una región básica de unión al DNA
y un dominio de dimerización de cremallera de leucina [7]. Los miembros
identificados de esta familia son seis (C/EBPa, C/EBPb, C/EBPd, C/EBPg,
C/EBPe, etc.). Todos ellos presentan un nivel de homología elevado en el do-

209
 RAMIRO JOVER ATIENZA

minio de dimerización, que se utiliza tanto para la formación de homodíme-

ros como de heterodímeros con otros miembros de la familia [8]. En su con-
junto las proteínas de esta familia regulan la transcripción de los genes im-
plicados en la diferenciación de células hematopoyéticas, adipocitos y
hepatocitos [7]. Los efectos pleiotrópicos de los C/EBPs se deben en buena
parte a su expresión específica de tejido, a la modulación de su traducción
por escaneado ribosomal variable, a modificaciones post-transcripcionales y
a una unión al DNA de especificidad variable. Estos mecanismos tienen como
consecuencia la generación de un gran número de isoformas de C/EBPs que
pueden dimerizar y unirse a los elementos de respuesta en el DNA para ac-
tivar en grado variable la transcripción de los genes diana.
En los hepatocitos los factores C/EBP más importantes son C/EBPa
y C/EBPb. C/EBPa parece jugar un papel general en la regulación del
metabolismo energético [9] y su expresión está restringida a células di-
ferenciadas y quiescentes, por lo que se postula que juega un papel cla-
ve en la expresión de genes de diferenciación y proliferación [10, 11].
Por ejemplo, C/EBPa se expresa abundantemente en hígado adulto nor-
mal, pero disminuye dramáticamente (más del 80%) en hígado en rege-
neración [12] o en sistemas celulares proliferantes in vitro como los he-
patomas [13]. El C/EBPb se expresa tanto en hepatocitos en cultivo y
hepatomas, así como en hígado adulto normal, mientras que C/EBPd es
virtualmente indetectable. Tras un estímulo inflamatorio o por citoquinas,
sin embargo, C/EBPb y d se inducen dramáticamente, mientras que los
niveles de C/EBPa disminuyen significativamente. Estos cambios en el
patrón de expresión de los distintos factores C/EBP hepáticos conducirán
a la inducción transcripcional de diversos genes hepáticos como los de
las proteínas de fase aguda (hemopexina, haptoglobina, a1-glicoproteína
ácida, amiloide A sérico, proteína C reactiva, etc.) [14].
Los factores C/EBP también participan en la regulación de algunos
genes CYPs. Se han identificado elementos en el promotor proximal del
CYP2B1 y del CYP2B10 que unen factores C/EBP y que son necesa-
rios para la actividad constitutiva de estos genes [15-17]. De modo si-
milar, la actividad del promotor del CYP2D5 de rata se induce por
C/EBPb en células de hepatoma [18]. Los C/EBPs también podrían re-
gular al CYP7A1 pero solo muestran un efecto moderado en ensayos de
transactivación [19].

210
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

Una evidencia experimental directa de la relación causal entre la ex-

presión del factor C/EBPa y la expresión general de genes CYP, pudo
obtenerse recientemente en nuestro laboratorio con la re-expresión de
C/EBPa en el hepatoma humano HepG2. Se trata de una línea celular
aislada de un hepatoma humano, altamente diferenciada, y que muestra
muchas característica fenotípicas del hepatocito adulto pero que no ex-
presa CYPs. En esta línea celular, los niveles de C/EBPa destacan por
ser considerablemente bajos en relación con los hepatocitos humanos. Un
aumento en los niveles de C/EBPa, logrado al transfectar células HepG2
con un vector de expresión regulado a través del promotor de la metalo-
tioneína, se tradujo en la reactivación de la expresión del CYP2B6,
CYP2C9 y CYP2D6 [20].
Tras estas evidencias iniciales investigamos con detalle el papel de
los factores C/EBP en la regulación del CYP3A4, que es de especial re-
levancia ya que participa en el metabolismo de más del 50% de los fár-
macos de uso común. Mediante ensayos con genes reporteros, análisis de
cambio de movilidad electroforética (EMSA) y de mutagénesis dirigida,
demostramos la existencia de un sitio proximal y dos distales para la trans-
activación del CYP3A4 por C/EBPa [21]. También investigamos la re-
levancia de estos hallazgos en el contexto más complejo del gen endó-
geno con su organización nucleosomal. La sobreexpresión de C/EBPa
mediante vectores adenovirales causó un aumento en la expresión del
CYP3A4, 3A5 y 3A7 en células HepG2, confirmando el papel clave de
este LETF en la regulación de los genes de la subfamilia CYP3A [21].
Experimentos similares demostraron que el C/EBPb es también un
transactivador del CYP3A4 [22]. Sin embargo, el C/EBPb puede tener
dos productos de traducción, una proteína completa denominada LAP (Li-
ver Activator Protein) y una proteína truncada denominada LIP (Liver In-
hibitory Protein) que carece de dominio de transactivación y como con-
secuencia ejerce un papel represor al dimerizar con formas activas de la
familia C/EBP. Para investigar el papel de las distintas formas C/EBP en
la regulación del CYP3A4, desarrollamos diversos vectores adenovirales
para la expresion de los factores activadores C/EBPa, C/EBPb-LAP y
para el dominante-negativo C/EBPb-LIP. Los resultados obtenidos con
esta metodología demuestran que C/EBPb-LIP es un represor del
CYP3A4 y que juega un papel crucial en la regulación negativa de este

211
 RAMIRO JOVER ATIENZA

CYP por citoquinas pro-inflamatorias como la IL-6 [22, 23]. Su efecto

represor además es mediado por competición con las formas activadoras
C/EBPa y C/EBPb-LAP, que son factores que confieren una elevada ex-
presión hepática de los CYPs.

2.2. a (hepatocyte nuclear factor 1a

El HNF1a a)

La familia HNF1 comprende dos miembros, HNF1a y HNF1b, pero

solo HNF1a se expresa en hepatocitos adultos. El HNF1a es un factor
de transcripción con homeodominio, que se expresa abundantemente en
hígado pero también en riñón, intestino, estómago y páncreas [24]. El
HNF1a está implicado en la regulación transcripcional de un número de
genes hepáticos, incluyendo albúmina, a- y b-fibrinógeno, a1-antitripsi-
na, a-fetoproteína, piruvato quinasa, transtiretina, aldolasa B, apolipo-
proteínas, etc. [4, 3].
El HNF1a también puede jugar un papel importante en la regulación
de los genes CYP. Estudios con genes reporteros quiméricos (que con-
tienen promotores de genes CYP) y de retardo en la movilidad electro-
forética han identificado secuencias promotoras e intensificadoras de cier-
tos CYP que son dianas potenciales para el factor HNF1a. Según estos
estudios el factor HNF1a sería un regulador positivo del CYP2E1 [25],
CYP7A1 [26], CYP1A2 [27] y CYP27 [28]. Estudios con ratones defi-
cientes en HNF1a demuestran además que este factor regula el CYP4A
[29] y el CYP7A1 [30]. Si tenemos en cuenta que algunas de estos CYPs,
como el 2E1 o el 1A2, median la toxicidad aguda y la susceptibilidad a
ciertos carcinógenos químicos, podemos pensar que el factor HNF1a po-
dría ser también un elemento clave en el desarrollo de estos fenómenos.

2.3. a
El receptor nuclear HNF4a

El factor HNF4a (hepatocyte nuclear factor 4a) es un miembro de

la superfamilia de receptors nucleares que se expresa abundantemente en
el hígado, pero también en riñón, intestino y páncreas [31]. El HNF4a se
clasifica como un receptor huérfano ya que no se ha identificado un cla-
ro ligando endógeno o exógeno, aunque es activado por tioésteres de áci-

212
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

dos grasos y acetil CoA [32]. En cualquier caso, está bien demostrado
que este factor es también capaz de promover la transcripción en ausen-
cia de ligando añadido.
HNF4a tiene una importancia capital en la regulación de genes es-
pecíficos del hígado (metabolismo de glucosa, colesterol, ácidos grasos,
síntesis de factores de coagulación) y en el proceso de diferenciación que
conduce al fenotipo hepático adulto.
La obtención de ratones deficientes en HNF4a ha permitido evaluar
mejor el impacto global de este factor en el control de genes hepáticos
in vivo. En ratones adultos se ha demostrado que el HNF4a es absoluta-
mente imprescindible para la expresión constitutiva de algunos genes con
promotores complejos como el de la Apo-CIII, Apo-AII, L-FABP u OTC
[33, 34]. Aunque existen otros factores que contribuyen a la regulación
de estos genes, el HNF4a tiene una influencia dominante. Este hecho está
en consonancia con su actividad remodeladora de la cromatina que debe
ser un prerrequisito para la posterior unión de otros factores. Otros estu-
dios con embriones de ratón deficientes en HNF4a han demostrado tam-
bién la dependencia de ciertos genes hepáticos respecto al HNF4a. Cabe
destacar ALDO-B, Apo-CIII, Apo-AII y L-FABP [35, 36].
Junto con otros LETF, el HNF4a también tiene un papel importante en
la regulación de los CYPs. El HNF4a se une en forma de homodímero a
secuencias que contienen repeticiones directas del hexámero AGGTCA, se-
paradas por una base (DR-1) [31]. Sin embargo el HNF4a también puede
unirse a una secuencia parecida, denominada motivo HPF-1, que se loca-
liza en la región promotora proximal de los genes CYP2A, CYP2C y
CYP2D. Los estudios in vitro de transfección celular y los ensayos de unión
al DNA han demostrado que este factor juega un papel positivo en la re-
gulación del CYP2C12 y CYP3A de rata, CYP2A4 de ratón, CYP2C1/2
de conejo, y CYP2C9, CYP2D6 y CYP3A4 humanos [37-45].
Para comprender mejor el papel del HNF4a en la regulación general
de los CYPs humanos en el hígado realizamos un estudio en nuestro la-
boratorio utilizando hepatocitos humanos en cultivo transfectados con
RNA antisentido contra el HNF4a. Los análisis de los diversos CYPs en
estos hepatocitos humanos deficientes en HNF4a revelaron que la ex-
presión de la mayoría de genes CYP depende en mayor o menor medida
de este factor de transcripción [46]. Los hepatocitos humano transfecta-

213
 RAMIRO JOVER ATIENZA

dos con el RNA antisentido contra el HNF4a, mostraron una pérdida sig-
nificativa de la expresión del CYP3A4, CYP3A5, CYP2A6, CYP2B6,
CYP2C9 y CYP2D6, pero no se afectó la expresión del CYP2E1. Nues-
tro estudio demostró que el HNF4a es un regulador general que confie-
re expresión hepática a los CYPs humanos más relevantes en el metabo-
lismo de fármacos.

2.4. La familia HNF3

Los factores HNF3 (hepatocyte nuclear factor 3) pertenecen a la fa-

milia de factores de transcripción HNF3/FKH que se caracterizan por un
motivo de hélice alada (winged-helix) y otro de unión al DNA muy con-
servado y homólogo a la proteína homeótica de Drosophila denominada
forkhead [47].
Los factores HNF3 se descubrieron por su habilidad para unirse a se-
cuencias consenso en los promotores de la a1-antitripsina y transtiretina [48].
En la subfamilia de genes HNF3 de mamíferos se conocen tres iso-
formas, a, b y g. Estas proteínas se expresan secuencíalmente durante la
embriogénesis (bÆaÆg) [49] y juegan un papel determinante en la re-
gionalización definitiva dentro del endodermo [50]. En hepatocitos adul-
tos, el factor HNF3g es el más relevante.
Se ha postulado que las proteínas HNF3 también pueden situarse en
la parte superior de una jerarquía de factores de transcripción porque son
capaces de interaccionar con la estructura de la cromatina intensificando
o permitiendo la unión de otros factores de transcripción al DNA [51].
Los estudios con variantes HNF3 dominantes-negativas [49] y con
ratones deficientes en HNF3g [52] demuestran que los factores HNF3 jue-
gan un papel importante en la expresión de genes específicos hepáticos
como la albúmina, transtiretina, transferrina, PEPCK, aldolasa B y tiro-
sina aminotransferasa.
Los factores HNF3 también parecen jugar un papel importante en la
regulación de los genes CYP. Se ha demostrado la importancia de estos
factores en la transactivación y modulación de los CYP2C6, 2C12 y 2C13
de rata [53-56], y de los CYP2H1 y 2H2 de pollo [57, 58].

214
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

La presencia de múltiples sitios HNF3 en la región promotora de

los genes de la subfamilia CYP2C humana, nos llamó la atención y nos
llevó a investigar el papel del factor HNF3g en su regulación. La co-
transfección de genes reporteros conteniendo los promotores de los
CYP2Cs, junto con un vector de expresión para HNF3g demostró que
este factor de transcripción activa CYP2C8, CYP2C9 y CYP2C19. Es-
tudios adicionales de la regulación de los genes CYP2C endógenos uti-
lizando un adenovirus recombinante para la expresión de HNF3g de-
mostró que este factor transactiva CYP2C9 y CYP2C19, pero también
CYP2C18, sugiriendo la existencia de sitios distales de regulación que
pueden escapar a los análisis con genes reporteros. Además, nuestros
estudios demostraron que el HNF3g no transactiva el CYP2C8 endóge-
no en células de hepatoma debido a una compactación excesiva de la
cromatina en la zona reguladora de este gen. Nuestros resultados de-
muestran la importancia del HNF3g en la expresión específica de los
CYP2Cs humanos en el hígado.
En estudios más recientes investigamos el papel de este factor en la re-
gulación del CYP3A4. Estudio previos habían demostrado que el factor he-
pático C/EBPa era un transactivador importante de este CYP. Por el con-
trario, la sobreexpresión de HNF3g mediante vectores adenovirales no afectó
a la expresión endógena del CYP3A4 en células HepG2 de hepatoma hu-
mano. Sin embargo, experimentos de cotransfección con adenovirus re-
combinantes para C/EBPa y HNF3g demostraron que el HNF3g era capaz
de potenciar de un modo muy significativo la activación del CYP3A4 por
C/EBPa. El nivel de expresión del CYP3A4 aumenta más de 50 veces en
presencia de los dos factores de transcripción, mientras que en presencia de
cada uno de ellos por separado los incrementos son muchos mas modestos
(1.5-5 veces) [21]. Esta potenciación también se observó en los CYPs 3A5
y 3A7, lo que sugiere que los genes CYP3A comparten mecanismos de re-
gulación.
Se ha descrito que el HNF3 es capaz de modificar el posicionamien-
to de los nucleosomas en la cromatina [59] facilitando la unión de otros
factores de transcripción [60]. Una posible explicación para el efecto co-
operativo entre C/EBPa y HNF3g sería que el HNF3g actúa modifican-
do la estructura de la cromatina facilitando el acceso de C/EBPa a su si-
tio de unión en el promotor del CYP3A4.

215
 RAMIRO JOVER ATIENZA

Otra característica del efecto cooperativo entre C/EBPa y HNF3g es

que es un efecto específico hepático ya que no se detecta en las células
no hepáticas HeLa. Esto indica que HNF3g para poder ejercer su efecto
cooperativo requiere la presencia de otras proteínas que se encuentran es-
pecíficamente en los hepatocitos [21].
En definitiva, la expresión específica en hígado en los genes CYP3A
parece obedecer a una actuación directa de determinados factores de trans-
cripción hepáticos como el C/EBPa. Pero la máxima expresión de los ge-
nes CYP3A parece en cambio necesitar una actuación coordinada de va-
rios LETFs (tal y como sería el HNF3g) y de otras proteínas que se
expresan de forma exclusiva en el hígado.

2.5. Otros LETF

DBP es un factor de transcripción de la familia bZip (región básica

más cremallera de leucina) que se caracteriza además por poseer un do-
minio PAR rico en aminoácidos ácidos y prolina, que contribuye a la ac-
tivación transcripcional [61]. Este factor se identificó inicialmente como
un factor de transcripción que regulaba la expresión de la albúmina a tra-
vés de la unión al “sitio D” existente en su promotor [62]. La expresión
de DBP aumenta durante el desarrollo y exhibe un ritmo circadiano en
su expresión [63]. Diversos estudios también han demostrado que el DBP
está implicado en la regulación transcripcional de los genes CYP que
muestran patrones de expresión circadiana como el CYP2A4 y 2A5 [64],
o el CYP7A1 (colesterol 7-alfa hidroxilasa) [19]. También parece estar
implicado en la activación de los CYP2C6 y 2C7 de rata durante el co-
mienzo de la pubertad a las 4-6 semanas de vida [65].
Por último, dentro del grupo de los LETFs cabe mencionar al HNF6,
que es un factor de transcripción hepático descubierto recientemente que
pertenece a una nueva clase denominada ONECUT caracterizada por la
presencia de un dominio CUT único (singel-cut) y un homeodominio pe-
culiar [3]. Este factor participa en la regulación de diversos genes hepá-
ticos como a1-globulina urinaria, a1-antitripsina, 6-fosfofructo-2-quina-
sa, triptofano oxigenasa y a-fetoproteína [66]. También podría estar
implicado en la regulación de algunos genes CYP como el CYP2C13 [66].

216
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

3. INDUCCIÓN DE LOS GENES CYP POR FACTORES

DE TRANSCRIPCIÓN ACTIVABLES POR
LIGANDOS XENOBIÓTICOS

Los genes CYP son únicos en el sentido de que son capaces de res-
ponder a señales tanto endógenas como exógenas cambiando su activi-
dad transcripcional y, como consecuencia, su actividad metabolizadora.
Además de la los factores de transcripción hepáticos que juegan un pa-
pel clave en la expresión “constitutiva” de los CYPs en el hígado, es bien
sabido que existen otros factores de transcripción que tiene un papel cru-
cial en la inducción de los genes CYP por xenobióticos [67-69].
Uno de los primeros factores de transcripción asociado con la res-
puesta inductiva de los genes CYP que se descubrió fue el receptor de
hidrocarburos aromáticos policíclicos AhR (Aryl hydrocarbon Receptor).
El receptor AhR, una vez activado, promueve el aumento de la trans-
cripción de un conjunto de genes con elementos de respuesta en sus re-
giones promotoras. Muchos de los genes inducidos son genes de enzimas
que participan en el metabolismo de fármacos, tales como los CYP 1A1,
1A2 y 1B, la glutation-S-transferasa y la UDP-glucuronosiltransferasa
[70-72]. Más recientemente se han identificado varios receptores nuclea-
res específicos que pueden unir xenobióticos o medicamentos inductures
y que también juegan un papel crucial en el mecanismo de inducción de
genes CYP.

3.1. La superfamilia de receptores nucleares

Los receptores de hormonas esteroides (estrógenos, andrógenos, pro-

gestágenos, glucocorticoides, mineralcorticoides), hormona tiroidea, reti-
noides, vitamina D, algunos ácidos grasos, ácidos biliares, protaglandinas,
etc. son reguladores de la transcripción que controlan la expresión de gru-
pos de genes diana más o menos específicos para cada mediador u hor-
mona. Estos receptores hormonales junto con otros receptores denomina-
dos “huérfanos”, porque su ligando es desconocido, constituyen la
superfamilia de receptores nucleares, que, con más de 150 miembros, es el
principal grupo de factores de transcripción inducibles en los vertebrados
[73-75]. Los receptores nucleares juegan un papel crucial en el crecimien-

217
 RAMIRO JOVER ATIENZA

to, diferenciación, metabolismo, reproducción y morfogénesis de organis-

mos superiores. Estos receptores son un ejemplo de simplificación extre-
ma en la transducción de la señal: los ligandos de naturaleza lipofílica atra-
viesan la membrana plasmática se unen a los receptores nucleares y son
transferidas directamente a los genes que regulan [73, 74, 76, 77].
Todos los receptores nucleares tienen características estructurales co-
munes, como son el dominio central de unión al DNA y el dominio de
unión al ligando en la mitad carboxilo-terminal. El Dominio de Unión al
DNA (DBD —DNA Binding Domain) es la región más conservada. Está
organizado formando dos “dedos de zinc”. Su estructura tridimensional
es compacta y contiene dos hélices alfa cruciales para el reconocimiento
del DNA y para la dimerización entre receptores nucleares. El dominio
de unión al ligando (LBD - Ligand Binding Domain) es un dominio mul-
tifuncional. Está formado por doce hélices alfa (H1-H12) que en su par-
te central albergan una cavidad donde reside el centro hidrofóbico de
unión al ligando. Las estructuras con ligando son más compactas debido
a que se produce un cambio conformacional tras la unión [78-80].
Los receptores nucleares regulan la transcripción mediante la unión
a secuencias específicas del DNA en los genes diana, conocidas como
elementos de respuesta hormonal (HRE-Hormone Response Elements). El
análisis de un gran número de HREs ha revelado que el núcleo de estos
elementos está constituido por un hexanucleótido (AGAACA o
AGG/TTCA), pero hay que tener en cuenta que estos son motivos con-
senso idealizados. Los HREs son diméricos, unen receptores dimeriza-
dos, y pueden configurarse como palíndromas (ƨ), palíndromas in-
vertidos (ƨ) o HREs repetidos directos (ÆÆ), con un número variable
de bases espaciadoras entre ambos elementos que también juegan un pa-
pel importante en la especificidad [81].
Los receptores de hormonas esteroides se unen a los HREs palindró-
micos casi exclusivamente como homodímeros. En contraste, los recep-
tores no esteroideos pueden unirse a HREs con diferentes configuracio-
nes, siendo los más potentes los configurados como repeticiones directas
(ÆÆ). Aunque algunos receptores no esteroideos se unen a estos ele-
mentos como homodímeros (p.e. HNF4a), la mayoría lo hacen como he-
terodímeros, y en este caso la pareja o socio promiscuo es el receptor
RXR [81, 82] (Figura 2).

218
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

FIGURA 2. La inducción de muchos genes CYP se realiza a través de mecanismos

que implican a tres receptores nucleares. Los ligandos xenobióticos capaces de unir-
se a diversos receptores nucleares ocasionan su activación o desinhibición, y pro-
vocan una cascada de acontecimientos que conducen a la heterodimerización con
el receptor RXR, a la unión a la secuencia diana o elemento de respuesta (RE) en
el promotor de los genes CYP y a su consiguiente transactivación tras el recluta-
miento de proteínas coreguladoras y de la maquinaria basal de transcripción

A excepción de la inducción de los genes de la familia CYP1, la induc-

ción del resto de genes CYP se realiza a través de mecanismos de inducción
que implican a tres receptores nucleares. Estos son: 1) el PXR (Pregnane X
Receptor) que activa los genes de la subfamilia CYP3A en respuesta a di-
versos compuestos químicos incluyendo ciertos esteroides naturales y sinté-
ticos; 2) el CAR (Constitutive Androstane Receptor) que media en gran me-
dida la inducción de los genes CYP producida por el fenobarbital y otros
muchos compuestos lipofílicos similares; y 3) el PPAR (Peroxisome Prolife-
rator-Activated Receptor) que media la inducción de los genes CYP de la
subfamilia CYP4A por compuestos químicos acídicos clasificados como pro-
liferadores de los peroxisomas y carcinógenos no genotóxicos [67, 83].
Los medicamentos y xenobióticos capaces de unirse a estos recepto-
res ocasionan su activación o desinhibición, y provocan una cascada de
acontecimientos que culmina con la unión del receptor a la secuencia dia-
na en el promotor de los genes CYP y su consiguiente transactivación por
los mecanismo bien conocidos de los receptores nucleares (Figura 2).

219
 RAMIRO JOVER ATIENZA

3.2. El receptor PXR (Pregnane X Receptor)

Mediante la búsqueda en bases de datos de DNA utilizando secuen-
cias bien conservadas de los receptores nucleares se pudieron identificar
nuevos miembros de esta superfamilia. Este tipo de análisis condujo al
clonaje de un nuevo receptor nuclear que recibió el nombre de Pregna-
ne X Receptor (PXR) y que se demostró se activaba por varios pregna-
nos naturales y sintéticos [84-87]. El análisis de la distribución tisular en
ratón reveló que este receptor nuclear se expresa predominantemente en
hígado pero también en estómago, intestino delgado, colon y riñón. Un
perfil de expresión similar se vió en su ortólogo humano con la excep-
ción de la ausencia del receptor en estómago y riñón [84-87].
La activación del PXR por pregnanos es de especial relevancia ya que
se conoce desde hace tiempo que los derivados de la pregnenolona, tal
como la pregnenolona 16a-carbonitrilo (PCN), y ciertos compuestos es-
teroides son capaces de prevenir el efecto tóxico de ciertos fármacos [88].
Una posible explicación para este tipo de fenómeno es que el PXR, acti-
vado por estos esteroides, induce la actividad de los enzimas de metabo-
lización y destoxificación. Apoyando esta idea está el hecho de que exis-
te una correlación entre la distribución tisular del PXR y la de las
proteínas de la subfamilia CYP3A [89-92]. Evidencias experimentales
posteriores demostraron que el PXR de ratón era capaz de heterodimeri-
zar con RXRa y unir eficientemente el motivo de DNA de repetición di-
recta DR3 dentro del promotor proximal del CYP3A23 [87]. En huma-
nos también se encontró que un elemento de repetición ER6 en la región
promotora proximal del CYP3A4 era activado por heterodímeros PXR-
RXRa [84-86], además un elemento modular de respuesta a xenobióti-
cos localizado en una región intensificadora a unas 8 kb del inicio de
transcripción también se demostró necesario para la máxima inducción
de la actividad CYP3A4 por PXR [93].
La regulación del gen CYP3A4 por receptores nucleares es un tema
importante desde el punto de vista farmacológico ya que se ha estimado
que este citocromo está implicado en el metabolismo de casi el 60% de
los medicamentos de uso común y, por lo tanto, no es sorprendente que
su actividad esté implicada en muchas de las interacciones medicamen-
tosas descritas [94, 95]. Además de regular a los miembros de la subfa-
milia CYP3A, el PXR también participa en la regulación de miembros

220
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

de la subfamilia CYP2B. Se han identificado elementos DR4 en los pro-

motores de diversos genes CYP2B [96-98]. En el promotor del CYP2B1
(rata), CYP2B6 (humano) y CYP2B9 (ratón) se identificó una región de-
nominada phenobarbital-responsive enhancer module (PBREM) que de-
mostró una activación dependiente del PXR. Los elementos de respuesta
PBREM contienen dos motivos DR4 que unen tanto PXR-RXRa como
otro heterodímero que consiste en RXRa y CAR, sugieriendo que los ge-
nes de la subfamilia CYP2B estan bajo el control de ambos receptores
nucleares, PXR y CAR [96-98].
Los activadores del PXR poseen una elevada diversidad estructural.
Además de los metabolitos del pregnano ya descritos, encontramos glu-
cocorticoides, antiglucocorticoides (RU486), esteroides naturales como la
progesterona, así como una serie de xenobióticos tal como el clotrima-
zol, la lovastatina y el ester de bisfosfonato SR1283 [99, 87]. Aunque el
PXR de diversas especies comparten activadores comunes, hay también
diferencias marcadas en la activación de los distintos ortólogos de este
receptor nuclear. Por ejemplo, la rifampicina y el SR1283 activan el PXR
de conejo y el humano, pero no el de rata o el de ratón. En consonancia,
la rifampicina induce los genes CYP3A4 (humano) y CYP3A6 (conejo)
pero no induce la isoforma de rata CYP3A23. Contrariamente, PCN, de-
xametasona y 17a-hidroxipregnenolona que son activadores potentes del
PXR de ratón pero no del humano, inducen los genes CYP3A de rata/ra-
tón pero no tienen ningún efecto en el CYP3A4 humano [100-103]. Es-
tas diferencias entre especies son debidas a propiedades intrínsecas de los
distintos ortólogos del PXR, tal como se demuestra en estudios con ra-
tones deficientes en PXR pero transgéncos para el PXR humano (huma-
nized mouse) donde si existe respuesta a la rifampicina [104].
Si tenemos en cuenta el hecho de que el PXR estimula la expresión
del CYP3A, no sorprende el que exista una superposición casi absoluta
entre los activadores del PXR y los inductores del CYP3A. La activación
coordinada de ambas proteínas por una serie de compuestos sugiere que
estas proteínas pueden trabajar conjuntamente en la detección (PXR) y la
eliminación (CYP3A) de xenobióticos a través del metabolismo oxidati-
vo. Además, si tenemos en cuenta la habilidad del CYP3A de metaboli-
zar a la mayoría de fármacos, la inducción del CYP3A por PXR también
sugiere que los medicamentos que estimulan al PXR están predispuestos

221
 RAMIRO JOVER ATIENZA

a causar interacciones medicamentosas en pacientes que toman diversos

medicamentos. Por ello, el screening de compuestos que se unen como
ligando y activan al PXR es un aspecto importante a tener en cuenta du-
rante el desarrollo de nuevos fármacos.
El PXR también regula los genes que codifican enzimas implicados
en la síntesis, transporte y metabolismo de ácidos biliares. Se postula que
el PXR podría actuar como un sensor de sales biliares, como el ácido li-
tocólico, para regular la expresión de varios genes de un modo coordi-
nado y así prevenir la acumulación de ácidos biliares potencialmente tó-
xicos [105, 106]. En este sentido el PXR al mismo tiempo que inhibe al
CYP7A1 (enzima limitante de la síntesis de ácidos biliares a partir de co-
lesterol) [107, 106], induce al CYP3A, que también metaboliza ácidos bi-
liares para facilitar su eliminación, y al OATP2, que transporta ácidos bi-
liares al interior del hepatocito para su metabolismo por CYP3A [106,
105, 104, 98].
En resumen podemos decir que el PXR juega un papel fundamental
en la protección del hígado contra los niveles fisiopatológicos de ácidos
biliares. Así, a pesar del hecho de que la activación del PXR por agentes
farmacológicos puede conducir a interacciones medicamentosas, los ac-
tivadores del PXR pueden resultar útiles en el tratamiento de la enfer-
medad colestática.

3.3. El receptor CAR (Constitutive Androstane Receptor)

Desde hace casi 40 años se sabe que algunos CYPs se inducen en

respuesta al fenobarbital (FB) [96]. El subconjunto de genes que se esti-
mulan por FB incluye CYP2A, CYP2B, CYP2C, CYP2H, CYP3A y
CYP6A [96]. De todos ellos los CYP2B son los que mejor se transacti-
van por el FB [108, 109], un efecto que además ocurre predominante-
mente en el hígado. El estudio de los promotores de diversos CYP2B ha
demostrado que existe una secuencia de DNA de 51-bp denominada
PBREM que media la respuesta al FB [110]. Esta secuencia PBREM se
encuentra en el promotor de diversos CYP2B como el CYP2B9/10 de ra-
tón, el CYP2B1/2 de rata y el CYP2B6 humano [111]. La conservación
de esta secuencia entre especies sugiere que puede tener una función más
generalizada en la respuesta a otros xenobióticos además del FB. De he-

222
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

cho, se ha demostrado que el PBREM puede mediar la inducción de los

CYP2B por diversos xenobióticos que han sido todos denominados “phe-
nobarbital-like inducers” por su habilidad de inducir la expresión de los
genes CYP2B, a pesar de no poseer semejanza estructural [112, 110, 111].
Entre los diversos inductores de este grupo encontramos un pesticida con-
taminante (TCPOBOP) que es uno de los inductores más potentes y más
utilizados en los estudios para descifrar los mecanismos por los que ac-
túan estos compuestos [112, 110, 111].
El hecho de que el FB y otros xenobióticos fueran capaces de esti-
mular la expresión de los CYP2Bs a través del elemento PBREM, que
contiene secuencias de hexanucleótidos DR4, sugirió que este fenómeno
debía estar mediado por un receptor nuclear. Efectivamente, los estudios
con genes reporteros conteniendo el elemento PBREM demostró que un
receptor nuclear conocido como CAR era capaz de aumentar la actividad
reportera, uniéndose a este elemento como un heterodímero con el re-
ceptor RXRa [113]. El receptor CAR esta estrechamente relacionado con
el PXR y se expresa predominantemente en hígado, pero también en in-
testino a niveles más bajos [114, 115]. El CAR fue clasificado como un
receptor “constitutivo” a raíz de su habilidad para transactivar genes dia-
na en ausencia de ligando añadido [114, 115], si bien más tarde se iden-
tificaron diversos ligandos que modulan su actividad. Ciertos androsta-
nos, por ejemplo, son capaces de debilitar la asociación entre el CAR y
sus coactivadores, por lo que reciben el nombre de agonistas inversos
[116]; por el contrario, la unión del TCPOBOP al CAR incrementa nota-
blemente el reclutamiento de sus coactivadores [117]. Diversos estudios
permiten concluir que la actividad constitutiva del CAR es de hecho in-
dependiente de ligando [118], pero eso no impide que este receptor nu-
clear medie también los efectos inductores del FB y de los otros induc-
tores de este grupo (Figura 3).
De modo similar a ciertos receptores esteroides en los que la adición
del ligando promueve la acumulación nuclear del receptor, el tratamien-
to de ratones con TCPOBOP o FB causa la translocación del CAR des-
de el citoplasma al núcleo de los hepatocitos [119]. Aunque el mecanis-
mo de esta traslocación no se ha descifrado completamente todavía, si se
sabe que ciertos inhibidores de fosfatasas como el ácido ocadáico pueden
prevenir dicha translocación en hepatocitos tratados con FB, inhibiendo

223
 RAMIRO JOVER ATIENZA

FIGURA 3. Posibles mecanismos de inducción por fenobarbital (FB). La inducción

de la expresión de los CYP2Bs por FB y otros xenobióticos está mediada por el re-
ceptor nuclear CAR que se une al elemento PBREM como un heterodímero con el re-
ceptor RXRa. El receptor CAR es también capaz de activar otros elementos de res-
puesta existentes en las regiones reguladoras de otros CYPs como los CYP3A y los
2C. El CAR está secuestrado en el citoplasma formando un complejo con proteínas
de choque térmico, inmunofilinas, fosfatasas, etc. Tras el tratamiento con FB se ini-
cia una transducción de la señal en la que la desfosforilación es un paso crítico para
la translocación nuclear del CAR. Una vez en el núcleo el CAR podría necesitar ser ac-
tivado por fosforilación para poder realizar correctamente su función transactivadora

así la indución del CYP2B [119] (Figura 3). La entrada de CAR al nú-
cleo no sigue el esquema de los receptores esteroides que implica unión
del ligando, disociación de proteínas de choque térmico o inmunofilinas
y transporte al núcleo. Más bien, los datos actuales sugieren que existe
un mecanismo específico para mantener al CAR en el citoplasma y que
este estado es dependiente de fosforilación. La translocación nuclear del
CAR es además un fenómeno con características exclusivas para cada es-
pecie. Por ejemplo, TCPOBOP provoca la translocación nuclear del CAR
murino pero no la del ortólogo humano [96].

224
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

Los estudios en ratones deficientes en CAR sugieren que este recep-

tor nuclear juega un papel central en el metabolismo de xenobióticos, ac-
tuando como sensor de un gran número de substancias y regulando al
mismo tiempo la actividad de los citocromos P-450 encargados de su me-
tabolización [120, 121].

3.4. El receptor PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated

Receptor)

Los citocromos P-450 de la subfamilia CYP4A catalizan la oxigena-

ción de ácidos grasos biológicos como el ácido araquidónico y otros ei-
cosanoides. Los genes CYP4A pueden ser activados transcripcionalmen-
te en el hígado y el riñón por una serie de fármacos acídicos y otros
xenobióticos como los fibratos hipolipidémicos, plastificadores industria-
les y varios contaminantes ambientales [122]. Estos compuestos inducto-
res del CYP4A se clasifican como compuestos proliferadores de los pe-
roxisomas ya que inducen marcadamente los enzimas peroxisosomales
hepáticos causando un incremento notable tanto en el tamaño como en el
número de peroxisomas celulares. Los activadores exógenos del CYP4A
no solo estimulan la proliferación de los peroxisomas en los hepatocitos,
sino que también pueden inducir carcinoma hepatocelular por un meca-
nismo no genotóxico, es decir, por un mecanismo que no implica daño
directo al DNA por los compuestos xenobióticos inductores o sus meta-
bolitos [123].
El receptor responsable de la inducción del CYP4A, de los enzimas
peroxisomales y de la proliferación de los peroxisomas hepáticos, se clo-
nó por primera vez en 1990 y se denominó PPARa (Peroxisome Prolife-
rator-Activated Receptor a) [124]. El estudio de su distribución tisular
demuestra que se expresa mas abundantemente en hígado, seguido de ri-
ñón y corazón, y esta distribución refleja la respuesta mayor o menor de
estos tejidos a los agentes prolifereadores de peroxisomas [67].
La inducción del CYP4A y la proliferación de los peroxisomas está
ausente en ratones deficientes en PPARa [125]. Este fenómeno esta en
consonancia con la presencia de elementos de respuesta para receptores
nucleares en la región 5’ de los genes CYP4A que unen heterodímeros
PPARa-RXRa [126, 127]. En el caso del CYP4A6 de conejo, existe por

225
 RAMIRO JOVER ATIENZA

ejemplo un intensificador potente para el PPAR localizado en la región

comprendida entre -667 y -644 bp, que contiene cuatro repeticiones he-
xaméricas imperfectas, dos de ellas organizadas como un motivo DR1,
muy similar al encontrado en otros genes activados por PPAR [128]. Para
que la unión al DNA sea efectiva, el receptor PPARa, que está en el nú-
cleo de un modo constuitutivo, ha de unir en primer lugar compuestos
proliferadores de los peroxisomas o ácidos grasos endógenos [129]. Ade-
más, los heterodímeros PPAR-RXR son permisivos en el sentido que pue-
den ser activados sinergísticamente por la combinación de compuestos
proliferadores de peroxisomas, que se unen al PPAR, y por ácido 9-cis-
retinóico que se une al RXRa [126].

3.5. El receptor AhR (Aryl hydrocarbon Receptor)

Aunque muchos genes CYP implicados en el metabolismo de xeno-

bióticos son activados transcripcionalmente por miembros de la superfa-
milia de receptores nucleares (CAR, PXR, PPAR, etc.), la inducción de
los genes de la subfamilia CYP1A está regulada por el receptor de hi-
drocarburos aromáticos policiclicos (AhR), que es un factor de trans-
cripción de la familia bHLH-PAS (basic helix-loop-helix, Per-Arnt/AhR-
Sim homology) y que es estructuralmente distinto de los receptores
nucleares. El motivo bHLH está localizado en la región amino terminal
y participa en la dimerización y unión al DNA. El motivo PAS consiste
en unos 250 aminoácidos que se encuentran adyacentes al motivo bHLH
en dirección carboxilo-terminal y se cree que su función es la de generar
una superficie interactiva para la homo- o hetero-dimerización [71]. En
ausencia de ligando AhR está presente en el citosol acomplejado con las
proteínas Hsp90, XAP2 (proteína tipo inmunofilina) y p23 (co-chapero-
na) [130] (Figura 4). XAP2 y p23 son requeridos seguramente para man-
tener la estabilidad del complejo de choque térmico Hsp90. Tras la unión
al ligando el AhR se transloca al núcleo y se disocia del complejo Hsp90
para formar un heterodímero con la molécula Arnt [131, 130]. Este hete-
rodímero AhR/Arnt reconoce una secuencia de DNA intensificadora (en-
hancer) que se denomina XRE (xenobiotic response element) localizada
en la región promotora del gen CYP1A1 causando un aumento de la ac-
tividad transactivadora [132] (Figura 4). En el caso del CYP1A1 de ra-

226
 CONTROL GÉNICO DE LA EXPRESIÓN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HÍGADO

FIGURA 4. Mecanismo de activación transcripcional por hidrocarburos aromáticos

policíclicos. En ausencia de ligando el receptor AhR está presente en el citosol
acomplejado con las proteínas Hsp90, XAP2 y p23. Tras la unión al ligando el AhR
se transloca al núcleo y se disocia del complejo Hsp90 para formar un heterodí-
mero con el factor Arnt. El heterodímero AhR/Arnt reconoce una secuencia de DNA
reguladora (XRE) localizada en la región promotora de los genes diana y causa un
aumento de la transactivación. La unión de AhR/Arnt al DNA remodela la estruc-
tura de la cromatina y facilita la asociación de otros factores de transcripción y de
los factores de transcripción generales a través de interacciones con coactivadores

tón se han encontrado seis copias de la secuencia diana XRE. La unión

de AhR/Arnt al DNA remodela la estructura de la cromatina (Figura 4) y
facilita la asociación de otro factor de transcripción, Sp1, con su secuen-
cia de reconocimiento en la región promotora. Además, el heterodímero
AhR/Arnt interacciona directamente con Sp1 y ambos factores de trans-
cripción incrementan sinergísticamente la actividad del gen [133]. Al igual
que otros factores de transcripción, el heterodímero AhR/Arnt se comu-
nica con los factores de transcripción generales (GTFs) a través de inter-
acciones con coactivadores como CBP/p300 y SRC-1 [134].
El CYP1A1 juega un papel destoxificador de compuestos aromáticos
policíclicos, pero su inducción puede tener también un efecto deletéreo
ya que genera metabolitos mutagénicos y especies reactivas del oxígeno.

227
 RAMIRO JOVER ATIENZA

Aunque es cierto que el AhR es un receptor de xenobióticos, los estudios

recientes en ratones deficientes en AhR sugieren que este receptor juega
un papel regulador en la homeostasis y el desarrollo de animales, por lo
que se cree debe de existir un ligando intrínseco para el AhR. De hecho,
la velocidad de crecimiento de los ratones AhR-/- es mucho más lenta
que los normales (wild-type), encontrandose retraso en el desrrollo del
hígado y del sistema inmune [135]. En ratones adultos también se han
encontrado diversos defectos en el fenotipo como la acumulación de áci-
do retinóico en el hígado o una estructura vascular anormal en el hígado
y el riñón [136, 137].

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