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El forense Phadebas 1 es un nuevo producto que detecta la saliva manchas por

reacción con amilasa. Cuando el papel está presionado contra una saliva mancha
se produce una mancha azul. Para probar la sensibilidad del papel, un conjunto de
serie de diluciones de saliva hasta 1:500 fue preparado sobre tejido de algodón.
Manchas de color azul puede verse a partir de diluciones de 1:100 cuando se
incuban a temperatura ambiente y 1:200 en 37 8C. Sin embargo, la incubación a
37 8C no proporciona reproducibilidad aceptable. La prueba fue Phadebas1 en
comparación con cuatro diferentes fuentes de iluminación para la capacidad de
detectar la saliva en diferentes materiales

. Tejido de algodón (camisetas), denim, gamuza, cuero, madera pintada y madera


sin tratar. El dril de algodón, no se pueden detectar las manchas con los fuentes
de iluminación, pero Phadebas1 mostraron todas las manchas de pura saliva y
dilución 1:5. Análisis de ADN se ha realizado en las manchas y detecta puntos
correspondientes Phadebas1 en el papel. Completar los perfiles de ADN fue
producido para las manchas de pura saliva y dilución 1:5. # 2008 Elsevier Ireland
Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introducción

La Saliva las manchas con las células epiteliales pueden ser muy útiles en casos
forenses de ADN. En el Laboratorio Nacional de Suecia de Ciencia Forense, no se
utilizan fuentes de iluminación específica para encontrar saliva en diferentes
materiales. Una cantidad significativa de recuperar muestras, que contienen las
células epiteliales, a estar en blanco

Phadebas1 es una química de la saliva detección basada en actividad de la


amilasa y un complejo almidón insoluble en agua con un color molécula. Cuando
la amilasa se rompe el complejo, el color es liberado. El sistema se ha utilizado en
casos forenses durante más de tres décadas, en el que participan bastante
laborioso pasos manuales [1,2]. A principios de 2007, el nuevo
Forense Phadebas1 Pulse prueba disponible. Un filtro de papel ha sido tratado
previamente con el Phadebas1 química. Un lado es de color azul y una blanca.
Cuando se humedece y presionado contra una tinción positiva saliva, con el lado
blanco hacia arriba, una mancha azul sea visible. Los objetivos fueron: determinar
la sensibilidad del Phadebas1 prueba forense la correlación entre un resultado
positivo Phadebas1 y la posibilidad de obtener un perfil de ADN.

2. Material y métodos
Los experimentos se basan en protocolos disponibles del fabricante [3]. Los
niveles de amilasa en la saliva pueden variar entre los individuos, y para una
persona con el tiempo. Por lo tanto la saliva de dos personas se reunieron en el
día de cada experimento, y analizado en paralelo. A fin de evitar la contaminación
cruzada, la muestra las personas no toman parte en el trabajo de laboratorio.
La saliva una serie de diluciones (1:1, 1:5, 1:10 1:25, 1:50, 1:100,
1:200, 1:500) fue preparado para cada muestra, utilizando suero fisiológico-
solución como agente. EL triplicado de 50 ml de cada una de las diluciones se
imparte en tejido de algodón (camisetas), junto con un control negativo (50 ml de
fisiológico salinesolution).
Para cada serie de diluciones, dos piezas idénticas de tejido de algodón se
prepararon para desarrollo paralelo de la temperatura de la sala y 37 8C
(calefacción armario). Las manchas se dejaron secar a temperatura ambiente
durante aproximadamente 2 h antes del análisis.
Las piezas de tejido de algodón fueron puestas en una operación de limpieza
Y paño humedecido con agua des ionizada. Un pedazo de Phadebas1 Prensa
papel de prueba forense se puso en la parte superior de la tela y humedecido para
saturar el papel, en el inicio la reacción.
Una placa de vidrio se puso en la parte superior del papel y el peso del papel
prensa firmemente contra el tejido. El progreso de las reacciones fue monitoreado
cada 5 minutos después de 40 minutos la reacción fue interrumpido, y el papel
para que se sequen.
Seis diferentes materiales fueron estudiados: denim, telas de algodón (camisetas),
cuero, gamuza, madera tratada y madera pintada.
Dos series de diluciones saliva se prepararon (1:1, 1:5 1:25, 1:100). Triplicado de
50 ml de cada una de las diluciones se dispensaron en cada conjunto de
materiales, junto con un control negativo. Las muestras se deja secar durante la
noche, y el estudio con cuatro diferentes fuentes de iluminación: Crimen Scope1
CS-16-10, 430 nm/amarillo gafas (Spex); Quaser 2000/30, 340-413 nm/ gafas
transparentes (Foster & Freeman); UV spotlight, 365 nm/ gafas transparentes
(Labino) y Polilight1 PL6, 425 nm/amarillo gafas (Rofin). Desarrollo Phadebas1 se
realizó aproximadamente a las 24 h después de la aplicación de las manchas, el
protocolo descrito anteriormente (temperatura ambiente).
Tras el secado, las exposiciones y la Phadebas1 papel, toma de muestras para
análisis de ADN. Dos manchas de saliva elegido dos concentraciones (1:1 y la
concentración más baja que da positivo Phadebas1 resultado), de cada una de las
exhibiciones y la correspondiente
Phadebas1 fueron muestreados. Las manchas de madera sin tratar, madera
pintada, cuero y gamuza se hisoparon con hisopos de algodón, corte y colocados
en tubos para microcentrifugadora.
Las manchas de tejido de algodón, pantalones de mezclilla y el Phadebas1
papeles fueron cortados directamente (1,5 cm 1,5 cm) en tubos para
microcentrifugadora.
Chelex 1001 extracción se utilizó para todas las muestras [4]. De cuero y ante un
paso de purificación Centricon1-100 tubo se realizó [5]. El análisis del ADN se
realizó con
Applied Biosystems 7300 PCR en tiempo real Sistema de cuantificación de ADN
humano QuantifilerTM Kit1 GeneAmp PCR System 9700 con AmpFISTR1 SGM
Plus1 amplificación por PCR
Kit, ABI PRISM1 3130xl y analizador genético GeneMapperTM ID v3.1.
3. Resultados y discusión
Con pura saliva, fuertes cambios de color pueden ser vistos en todas las manchas
dentro de los 5 minutos después de 40 minutos, las manchas eran visibles a
dilución 1:25 tanto para temperatura de la habitación y una serie 8C serie 37. Se
observaron resultados débiles para la dilución 1:100 a temperatura ambiente y
para 1:200 a 37 8C (una serie). El segundo 37 8C serie sólo dio resultados a 1:10.
Después del secado de la Phadebas1 papel, sólidos resultados puede verse hacia
abajo a la dilución 1:50 a temperatura ambiente. Para todos los resultados
positivos, color azul del papel fue desplazada hacia el tejido de algodón,
generando un visible en la muestra. No se han visto resultados de los controles
negativos. La incompatibilidad durante el período de incubación de 37 8C es
probablemente causado por una elevada evaporación y el problema para
humedecer el material y papel de forma uniforme y suficiente.
Desde temperatura ambiente mostraron más aún los resultados, y es más
asequible para aplicar tanto en las escenas de los crímenes y en el laboratorio,
este fue elegido para el resto los experimentos. Sin embargo, las indicaciones de
los menores niveles de detección en temperaturas más altas deben ser evaluadas.
El dril de algodón, no las manchas pueden ser detectados utilizando las fuentes de
iluminación, y ni siquiera de pura saliva. Utilizando Phadebas1, tanto el de 1:1 y
1:5 diluciones eran claramente visibles después de 40 min de incubación. El tejido
de algodón, Phadebas1 ha dado resultados hasta 1:100, mientras que las fuentes
de iluminación no de pura saliva. Sin embargo, las fuentes de iluminación salvo
delito Scope1 visualizan las manchas de la solución salina controles negativos, lo
que indica que algo más que la saliva se fluorescentes. De madera sin tratar, la
UV fluorescencia de spotlight dieron todas las manchas incluido el control
negativo, mientras que las otras fuentes de iluminación no visualizar las manchas.
Phadebas1 mostraron manchas claras a dilución 1:100. Sobre la piel, Phadebas1
y UV spotlight dio resultados a 1:25, el Quaser sólo logró concentrar la saliva. Las
otras fuentes de iluminación no visualizar las manchas. De madera pintada, las
fuentes de iluminación hacia abajo para visualizar las manchas 1:25, mientras que
Phadebas1 muestra claramente todas las manchas hasta 1:100. En gamuza,
Phadebas1 no mostraron las manchas, mientras que el delito alcance1 y UV
Spotlight dio resultados a 1:25 y 1:100, respectivamente.
Sin embargo, la delincuencia alcance1 visualiza las manchas de la solución salina
como control negativo.
La prueba Phadebas1 genera mejores resultados que cualquier fuente de todos
los materiales, con la excepción de suede. La ventaja comparativa de la saliva la
amilasa específica frente al método fuentes de iluminación es evidente. Sin
embargo, el mayor tiempo de detección y carácter invasivo del método podría
beneficiarse uso de fuentes de iluminación. Es evidente que las superficies muy
absorbentes, como suede y denim, es difícil para ambos la amilasa y encapsulado
detección, como la saliva aparece atrapada dentro de la textura de estas
exposiciones. Aun así, Phadebas1 parece funcionar mejor en estos tipos de
materiales. Está claro que es muy importante para hidratar el Phadebas1 papel y
la exposición y, sobre todo de materiales absorbentes. Algunos problemas durante
la ejecución de este proyecto surgió de no utilizar agua suficiente y esto tiene que
ser considerada en estudios posteriores.
El análisis de ADN de pura saliva manchas en diferentes materiales generados
perfil completo en todos los casos probados. De cuero y madera pintada, el
análisis de ADN de la correspondiente hoja de papel Phadebas1 también arrojó
perfil completo, y la cantidad de DNAwas aproximadamente el mismo que el de las
exposiciones. Para las demás exposiciones, muestras del papel no analizables
producir cualquier cantidad de ADN. La razón plausible para esto es que menos
absorbente inerte o exposiciones son más propensos a transferir células al
Phadebas1 papel. De las muestras de la menor ha detectado manchas, sólo la 1:5
diluciones (denim y cuero) dio suficiente ADN para posibilitar el análisis. Esto
sugiere que la prueba Phadebas1 es más sensible para detectar manchas de
saliva los métodos estándar de análisis forenses de ADN. La 1:100 diluciones que
se detecta correctamente en algunos materiales corresponden a 0,5 ml pura saliva
en la mancha 50 ml, que es una muy pequeña cantidad cuando se trata de análisis
de ADN.
Los niveles de detección de Phadebas1 también son altamente dependientes de la
naturaleza del material de antecedentes. No inhibición PCR puede verse en el
análisis, lo que sugiere que la química Phadebas1 no se interfiere con el
consiguiente PCR.
En conclusión, el forense Phadebas1 Pulse prueba da una buena indicación de si
o no una escena de crimen mancha contiene la saliva adecuada para análisis de
ADN. Sin embargo, las manchas pueden contener demasiado poco ADN y
tinciones negativas podrían producir completar los perfiles de ADN.