DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA No.

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“Extracción de ADN”

Introducción
Todo organismo vivo está formado por la ampliamente estudiada y conocida molécula de
DNA. Entre las cuatro biomoléculas principales que componen a los seres vivos,
encontramos a los ácidos nucleicos. Entre ellos, el ADN o Ácido desoxirribonucleico, es el
material genético que comprende las instrucciones que determinan todas las características
y funciones de un organismo y se puede transmitir a su descendencia
(heredabilidad). Razón por la cual, la extracción de ADN es un paso obligado hacia el
ejercicio y práctica de la biología molecular.

Objetivo
Extraer ADN a partir de células animales y vegetales.

Presentación de resultados
Dibujar la estructura molecular del ADN y explicar brevemente sus características
Cuestionario

1. ¿Para qué sirve extraer ADN?

Se le llama extracción al método por el cual se obtiene el ADN a partir de material

biológico (ej.: cepillado bucal, saliva , sangre o cualquier tejido) utilizando técnicas físicas
y químicas. La extracción consiste en la separación y purificación del ADN con el fin de
poder estudiarlo, analizarlo o manipularlo.
En la investigación biomédica el ADN se utiliza para analizar a pacientes con diferentes
padecimientos como enfermedades genéticas, cáncer, infecciones,
Alberto Checa Rojas. (2017). Extracción de ADN. 2020, Marzo 25

2. ¿Describa brevemente cuál es la importancia del ADN para la vida?

Es el encargado de mantener a través del CÓDIGO GENÉTICO, la información genética

necesaria para crear un ser vivo similar a aquel del que proviene.

3. ¿Para qué se utiliza el detergente y la sal?

La sal evita la unión de las proteínas al ADN. El detergente ... Además de permitirnos ver
el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados
en la solución acuosa.

4. Dibuje o esquematice la acción del detergente sobre las células

 5. ¿Por qué se utiliza el alcohol?

La adición de alcohol frío precipita el ADN dado que es insoluble en altas concentraciones
de sal y alcohol.

6. El ADN de una célula se encuentra enrollado a proteínas formando la

cromatina ¿En qué etapa del experimento se separa el ADN de las proteínas?

En la etapa de aplicación del alcohol.

7. ¿En qué parte exacta del tubo se observan los filamentos de ADN?

Zona media

¿qué se deduce sobre la solubilidad de ADN en el agua salada y el etanol?

Precipita la muestra.
8. ¿Cuáles son las técnicas de biología celular y/o molecular que requieren
la extracción de ADN? (Explique al menos 3 técnicas e incluya
imágenes).

Incubación del lisado para su uso

Una posible forma de aislar el ADN genómico es incubar el lisado crudo a temperaturas
entre 90 – 100 ºC y luego usarlo directamente. Es evidente que mediante este método el
ADN obtenido es de muy baja pureza y con aplicaciones muy reducidas. Otra desventaja de
este método son las pérdidas de ADN por acción de las nucleasas y otros componentes de
los orgánulos que están en contacto con el ADN y pueden destruirlo, por lo que no es útil
para almacenar el ADN pues los contaminantes pueden degradar las moléculas de ADN.

Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos

Si se opta por realizar el lisado de las células mediante un proceso mecánico hay que tener
en cuenta la posibilidad de ruptura de las moléculas de ADN que se intentan separar, por lo
que este debe bastar para lograr la lisis de las células pero no ser muy agresivo para
proteger el ADN. Este método puede ser usado para extraer ADN de material crudo,
liofilizado o congelado, que puede romperse con un mortero, por congelación-
descongelación o usando ultrasonidos. El lisado de células se puede extraer con cloroformo,
alcohol isoamílico o fenol, siendo las proteínas y otros componentes de la célula solubles
en el disolvente orgánico, por lo que de esta forma se logra la separación de los ácidos
nucleicos. Este método se puede usar para moléculas de ADN de alto peso molecular,
obteniendo buenos rendimientos de moléculas relativamente puras, siempre teniendo en
cuenta que hay que controlar el pH de la fase acuosa y la concentración de sales, que son
los factores que aseguran una buena separación. Las desventajas de este método son el uso
de disolventes orgánicos dañinos para la salud humana y que pueden quedar como trazas en
la muestra de ADN y luego actuar como interferentes en técnicas como el PCR, que es
largo, en ocasiones puede dar rendimientos poco reproducibles y requiere de varios
trasvases que aumentan la posibilidad de contaminación de la muestra.
Lisado y purificación con un detergente iónico. Método del CTAB

Este es un procedimiento básico para extraer ADN de vegetales, donde un detergente

aniónico puede romper la pared celular y así se produce la lisis de las células. El uso de
detergentes aniónicos no solo se restringe a la extracción de ADN vegetal, puede ser usado
para ADN genómico de bacterias y otros tipos de organismos. Un ejemplo de este método,
quizás el más conocido, es el uso de CTAB (bromuro de cetil trimetil amonio) como
detergente para lograr la lisis. El CTAB además, en presencia de EDTA como agente
quelatante y TRIS-HCl como tampón, forma complejos insolubles con el ADN. Luego se
extraen los residuos orgánicos con cloroformo, para separar posteriormente el ADN por
precipitación con etanol. Si se quiere evitar el uso de disolventes orgánicos se puede llevar
a cabo el método del CTAB separando directamente los complejos insolubles formados con
el ADN del sobrenadante donde han quedado disueltos el resto de componentes celulares.
Estos complejos se resuspenden en disolución salina y se adiciona posteriormente alcohol y
RNAsa, logrando que precipite el ADN con un grado de pureza aceptable para muchas
aplicaciones.
Anexos
 DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA No. 7
“Genética humana”
INTRODUCCIÓN

En el laboratorio se estudiarán algunas características humanas conocidas, para demostrar

la herencia Mendelina simple. Con esta actividad práctica, los estudiantes investigarán
acerca de la herencia de las de características humanas.

Presentación de resultados y cuestionario

A. Explique el tipo de anormalidades cromosómicas existen y cuáles son los efectos en
el desarrollo del individuo.
Un ejemplo de una afección causada por anomalías numéricas es el síndrome de Down, el
cual se caracteriza por retraso mental y otros problemas. Un individuo con síndrome de
Down tiene tres copias del cromosoma 21 en lugar de dos; por ese motivo, la afección
también se conoce como trisomía 21. Un ejemplo de monosomía, en la que a un individuo
le falta un cromosoma, es el síndrome de Turner. En el síndrome de Turner, una mujer nace
con un sólo cromosoma sexual, una X, y tiene habitualmente una estatura más baja del
promedio y no puede tener hijos, entre otras dificultades.

Anomalías estructurales: La estructura de un cromosoma puede ser cambiada de varias

maneras.

Duplicaciones: Se duplica una parte del cromosoma, lo cual produce material genético de
más.

Translocaciones: Se transfiere una parte de un cromosoma a otro cromosoma. Hay dos tipos
principales de translocación. En una translocación recíproca, se han intercambiado
segmentos de dos cromosomas distintos. En una translocación robertsoniana, un
cromosoma entero se ha unido a otro en el centrómero.

Inversiones: Una parte del cromosoma se ha desprendido, y reinsertado en el cromosoma

pero en la dirección inversa. Como resultado, el material genético del segmento.

Deleciones (eliminaciones): Se pierde o se elimina una parte del cromosoma está invertido
con respecto a la orientación normal.

Anillos: Una parte de un cromosoma se ha desprendido y formado un círculo o anillo. Esto

puede suceder con o sin pérdida de material genético.

La mayoría de las anomalías cromosómicas ocurren como un accidente en el óvulo o el

espermatozoide. En estos casos, la anomalía está presente en cada una de las células del
cuerpo. Sin embargo, algunas anomalías suceden después de la concepción; en este caso,
algunas células tienen la anomalía y otras no.

Las anomalías cromosómicas pueden heredarse de uno de los padres (tal como una
translocación) o ser "de novo" (nueva al individuo). Es por ello que, cuando se descubre
que un niño tiene una anomalía, a menudo se realizan estudios cromosómicos en los padres.

B. ¿Cómo influye el ambiente en la expresión de los genes?

Los genotipos de dos individuos de la misma especie nunca son exactamente iguales,
excepto los mellizos univitelinos que tienen genotipos idénticos. A las diferencias que
pueden presentar en el fenotipo de dos individuos que poseen genotipos semejantes se les
llama variaciones ambientales.

Cuando los individuos con genotipos semejantes viven bajo condiciones ambientales
diferentes, por ejemplo la alimentación, luz, temperatura, etc., manifiestan un fenotipo
diferente. Así tenemos por ejemplo:

Efectos de la temperatura: En el tipo de conejo llamado Himalaya varía el color de su pelo

(fenotipo) de acuerdo con las temperaturas. A altas temperaturas por encima de 35ºC; los
conejos son completamente blancos y se crían a temperatura ambiente estos conejos con
igual genotipo presentan cola, nariz, patas de color negro.
Efecto de la luz: Cuando dos plantas de genotipo similar se desarrollan una en presencia de
luz y otra en ausencia de luz, se observan diferentes características; así tenemos a la que se
desarrolla en presencia de luz es normal, de color verde, erecta; mientras que la que se
desarrolla en la ausencia de luz crece arrastrándose por el suelo, con un tallo alargado, de
color amarillo por falta de clorofila.
Otro ejemplo es el raquitismo en el humano. En la piel existen provitaminas "D", por la
acción de la luz solar se transforma en vitamina "D", ésta favorece la absorción de calcio y
el fósforo en nuestro organismo, y así contribuye a la formación de huesos y dientes. Un
niño que no consume ninguna fuente de vitamina "D" y no se expone a los rayos solares
tiene un alto riesgo de sufrir raquitismo, sus huesos serán muy débiles, y su tamaño mucho
menor que lo normal.

Efecto de los nutrientes: Si una planta se desarrolla en un suelo rico en nutrientes, su

desarrollo será normal y su fruto será abundante y si se desarrolla en un suelo pobre en
nutrientes, su desarrollo será atrofiado, débil y poco fructífera; el color de sus flores, hojas
y la altura pueden variar.

C. Mencione al menos 2 síndromes relacionados con anormalidades cromosómicas

más frecuentes y otras dos menos frecuentes o enfermedades huérfanas.

Las anomalías cromosómicas pueden tener diferentes efectos, según la anomalía en

cuestión. Por ejemplo, una copia adicional del cromosoma 21 causa el síndrome de Down
(trisomía 21). Las anomalías cromosómicas también pueden causar abortos espontáneos,
enfermedades o problemas en el crecimiento o en el desarrollo.

El tipo más común de anomalía cromosómica se conoce como aneuploidía y representa una
anomalía en la cantidad de cromosomas, debido a un cromosoma demás o uno menos de lo
normal. La mayoría de las personas con aneuploidía tienen una trisomía (tres copias de un
cromosoma) en lugar de una monosomía (una copia única de un cromosoma).
 El síndrome de Klinefelter no es hereditario, sino que aparece como resultado de un error
genético aleatorio después de la concepción.
Los hombres que nacen con el síndrome de Klinefelter pueden tener niveles bajos de
testosterona, masa muscular reducida, y poco vello facial y corporal. La mayoría de los
hombres con esta enfermedad no producen esperma o lo hacen en cantidades reducidas.
El tratamiento puede consistir en reemplazo de testosterona y tratamiento de fertilidad.

Síndrome X-frágil
El síndrome X frágil es una enfermedad genética rara, debida a un defecto hereditario en el
cromosoma X. Es la causa conocida más frecuente de retraso mental hereditario y la
segunda cromosopatía después del síndrome de Down. Se estima que la frecuencia en
España es de 1 por cada 4.000 varones en la población general, una portadora por cada 800
y un portador por cada 5.000 nacidos vivos. Clínicamente cursa con retraso mental de grado
variable, aunque suele ser leve con dificultades en el aprendizaje, falta de atención,
hiperactividad, con ansiedad y humor inestable o comportamientos autistas.

2. Síndrome de Moebius
El Síndrome de Moebius es una enfermedad rara del desarrollo. Dos importantes nervios
craneales, el 6º y 7, no están totalmente desarrollados en estos pacientes. Estos nervios
controlan tanto el parpadeo y movimiento lateral de los ojos, como las múltiples
expresiones de la cara, por lo que causa parálisis facial y falta de movimiento en los ojos.
La falta de expresión facial puede acompañarse de babeo, dificultades en el habla y
problemas de pronunciación.
 ESTUDIANTE NO. 1 ESTUDIANTE NO. 2 ESTUDIANTE NO.2
CARACTERISTICA

GENOTIPO ( S) GENOTIPO ( S) GENOTIPO ( S)

FENOTIPO POSIBLES ( S) FENOTIPO POSIBLE ( S) FENOTIPO POSIBLE ( S)

ENRROLLAMIENTO DE
SI Uu-Uu 75 % SI Uu-UU 75% Uu-Uu 75 %
LENGUA SI

SEPARACION DE LOS
SI Ll-Ll 75 % SI Ll-Ll 75 % SI 75 %
LOBULOS DE LAS Ll-Ll

OREJAS

PULGAR EN ESCUADRA

SI Pp-Pp 75 % NO pp 25 % NO pp 25 %

PICO DE VIUDA NO vv 25 % NO vv NO vv 25 %
25 %

VELLO EN LAS
SI DD-Dd 75 % SI DD-Dd 75 % SI DD-Dd 75 %
FALANGES DE LOS

DEDOS DE LAS MANOS

DEDO ANULAR MAS

SI AA-Aa 75 % SI AA-Aa 75 % SI AA-Aa 75 %
CORTO QUE EL DEDO

INDICE

SEXO HOMBRE___ MUJER_ X_ HOMBRE___ MUJER__X_ HOMBRE___ MUJER__X_

ANEXOS: