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9/3/2020 Buffer de fosfatos (PBS): fundamento, preparación y usos - Lifeder

Buffer de fosfatos (PBS): fundamento,


preparación y usos
Por Marielsa Gil

El buffer de fosfatos, BPS o buffer fosfato salino es una solución amortiguadora e


isotónica, cuya función es mantener el pH y la presión osmótica lo más parecido al
ambiente biológico natural (fisiológico). Las siglas PBS significan phosphate buffered saline.

El pH y la osmolaridad son dos aspectos muy importantes que deben ser controlados en
ciertos protocolos de laboratorio. En el caso del pH es imprescindible que sea controlado,
especialmente en reacciones bioquímicas, ya que estas pueden variar o no ejecutarse si los
reactantes están en un pH inadecuado.

Buffer fosfato salino PBS en dos pH diferentes. Fuente: Pixinio.com

En tanto que, el control de la osmolaridad es esencial sobre todo cuando se trabaja con
células vivas, pues las membranas plasmáticas de las células reaccionan de acuerdo a la
concentración de solutos en la que se encuentren.

Si las células son trasladadas a un medio hipertónico se deshidratarán, ya que el gradiente


de agua se transportará al lado donde hay mayor concentración de solutos. Si por el
contrario se colocan células en un medio hipotónico, las células absorberán líquido hasta
lisarse.

Es por ello que se utiliza el buffer PBS para protocolos de laboratorio que requieren el
mantenimiento de células in vitro, de esta manera las células no se dañarán.

El PBS está compuesto por una combinación de sales, tales como cloruro de sodio, fosfato
de sodio, cloruro de potasio y fosfato de potasio. La composición del PBS puede variar
dependiendo el protocolo.

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1 Fundamento
2 Preparación
2.1 -Solución madre buffer fosfato salino (PBS 10X)
2.2 -Buffer fosfato salino (PBS 1X)
2.3 .Soluciones para el ajuste de pH
3 Usos
4 Limitaciones
5 Referencias

Fundamento
Básicamente la función del buffer fosfato salino es mantener un pH fisiológico constante
junto a una concentración electrolítica similar a la que se encuentra en el interior del
organismo.

En este ambiente las células son capaces de mantenerse estables, pues se simula en lo
posible las condiciones fisiológicas.

A la formulación original del PBS pueden agregarse otros compuestos de ser necesarios, por
ejemplo la adición de EDTA al buffer es útil para el lavado de glóbulos rojos en la prueba de
incompatibilidad cruzada.

El EDTA impide que la fracción del complemento C1 presente en el suero, se escinda y lise a
los glóbulos rojos, es decir, evita resultados falsos de incompatibilidad. Además el EDTA
ayuda a disociar a las células.

Preparación
La cantidad de sales que se deben pesar para la elaboración del buffer fosfato salino PBS
dependerá de la cantidad que se requiera preparar:

-Solución madre buffer fosfato salino (PBS 10X)


Para un litro de solución:

Pesar:

80,6 g de NaCl,

2,2 g de KCl,

11,5 g de Na2HPO4,

2,0 g de KH2HPO4
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Técnica de preparación
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En un vaso de precipitado coloque las sales pesadas, agregue suficiente agua (80%) y
mezcle sobre la plancha agitadora con barra magnética hasta que se disuelvan las sales.

Preparación del PBS utilizando plancha agitadora con barra


magnética . Fuente: User:Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filtre para eliminar las partículas no disueltas. Utilice filtros con poros de 0,45 µm. Esterilice
en autoclave y distribuya asépticamente en campana de flujo laminar en frascos de vidrio
con tapa.

A la solución 10X (concentrada) no se ajusta el pH. El ajuste se realiza una vez diluida a la
concentración buffer PBS 1X, (dilución 1:10).

-Buffer fosfato salino (PBS 1X)


El PBS 1X puede prepararse de forma directa, pesando las cantidades correspondientes de
cada sal o puede preparase diluyendo la solución madre (1:10) con agua destilada estéril.

-Para preparar directamente un litro de buffer fosfato salino PBS 1X pesar:

8,06 g de NaCl,

0,22 g de KCl,

1,15 g de Na2HPO4,

0,20 g de KH2HPO4

Técnica de preparación

Proceder como se explicó en la solución concentrada. Posteriormente se debe ajustar el pH.


Para ello mida el pH y dependiendo del resultado utilice ácido (HCl) o base (NaOH) para
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bajar o subir el pH respectivamente según sea necesario, hasta que quede en 7,4.
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El ácido o la base se agregan gota a gota mientras se va monitoreando el valor del pH de la


solución utilizando un pH-metro. Filtre, esterilice en autoclave y distribuya asépticamente
en tubos cónicos o frascos según sea necesario.

-Para preparar el PBS 1X a partir de la solución madre 10X:

Realice una dilución 1:10. Por ejemplo, para preparar 1 litro de PBS 1X, mida 100 ml de la
solución madre y agregue 700 ml de agua destilada estéril. Ajuste el pH y complete la
cantidad de agua hasta llegar a 1000 ml.

El buffer PBS preparado es incoloro y transparente.

El PBS de uso diario se puede guardar a temperatura ambiente y el resto en nevera.

.Soluciones para el ajuste de pH

HCl

Para 100 ml de HCL (ácido clorhídrico) al 1 molar.

Medir 91 mL de agua destilada y colocarlo en un vaso precipitado de 250 ml de capacidad.

Medir 8,62 mL de HCl concentrado y agregarlo lentamente en el vaso de precipitados que


contiene el agua (nunca lo haga al revés). Tomar las medidas de bioseguridad pertinentes
al manipular ácidos fuertes (sustancia altamente corrosiva).

Mezclar por 5 minutos utilizando preferiblemente una plancha agitadora con una barra
magnética en el interior del vaso. Pasar a un balón de 100 ml y enrasar a 100 ml con H2O
destilada.

NaOH

Para 100 ml de NaOH (hidróxido de sodio) 10 molar.

Medir 40 mL de agua destilada y colóquela en un vaso de precipitados de 250 ml de


capacidad. Medir 40 gr de NaOH y agregar al agua. Mezclar haciendo uso de una plancha
agitadora con una barra magnética en el interior del vaso.

Pasar a un balón aforado de 100 ml y enrasar con agua destilada. Cumplir con las normas
de bioseguridad, debido a que esta reacción es exotérmica (libera energía en forma de
calor).

Si se desea preparar otras cantidades de solución fosfato salino se puede consultar la


siguiente tabla:

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Fuente: «Laboratorio de Genómica Viral y Humana, Facultad de Medicina UASLP»

Usos
Principalmente se usa en laboratorios de biología celular, inmunología, inmunohistoquímica,
bacteriología, virología e investigación.

Es ideal para hacer lavados celulares por centrifugados (glóbulos rojos), lavados de
monocapas celulares, en técnicas de elipsometría espectroscópica, en la cuantificación de
biopelículas bacterianas, en el mantenimiento de cultivos celulares para virus, como
solución de lavado en la técnica de inmunofluorescencia indirecta y en técnicas para la
caracterización de anticuerpos monoclonales.

También sirve para transportar células o tejidos, como diluyente para el contaje de células,
la preparación de enzimas celulares (tripsina), como diluyente del método de desecación de
biomoléculas y para preparar otros reactivos.

Por otra parte, Martin y colaboradores en 2006 demostraron que el PBS es útil en
laboratorios de ciencias forenses, específicamente en la recuperación de espermatozoides
provenientes de frotis vaginales, o en la recuperación de células vaginales de frotis de pene.
De esta manera se puede establecer si ha habido una relación sexual.

Limitaciones
-Algunos buffer PBS traen como preservante una sustancia llamada azida de sodio. Este
compuesto puede generar sustancias explosivas si se pone en contacto con plomo o cobre.
Por este motivo se debe tener especial cuidado al descartar este reactivo por el desagüe. Si
se descarta por esta vía debe agregarse abundante agua para diluir al máximo.

-Al buffer fosfato no se le debe adicionar Zinc, ya que hace precipitar algunas sales.

-Wangen y colaboradores en el 2018 determinaron que el uso de PBS no era adecuado para
el lavado de células primarias de leucemia mieloide aguda (AML) extraídas de sangre
periférica, debido a que se pierden muchas células por lisis, con una gran disminución del
material proteico.

Por tanto, determinaron que las células primarias de AML no deben lavarse con PBS
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después del almacenamiento en nitrógeno líquido.
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Referencias
1. Coll J. (1993). Técnicas de diagnóstico en virología. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Cultivo celular. Cambio de Medio. Departamento de Citología e
Histología Normal y Patológica Universidad de Sevilla. Disponible en personal.us.es
3. Preparación de Phosphate Buffered Saline (PBS). (2008). Standard Operating Procedures
(SOPs) Laboratorio de Genómica Viral y Humana Facultad de Medicina UASLP. Disponible
en: genomica.uaslp.mx
4. «Tampón fosfato salino.» Wikipedia, La enciclopedia libre. 3 abr 2019, 19:36 UTC. 13 abr
2019, 02:57 es.wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, Von-Bilderling C.Tópicos en biofísica molecular. Disponible en:
users.df.uba.ar
6. Rediar. Manual de Instrucciones. PBS+EDTA. Disponible en: felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurk K, Lucy D, Scrimger DG. The use of
phosphate buffered saline for the recovery of cells and spermatozoa from swabs. Sci
Justice. 2006; 46 (3):179-84. Available in: ncbi.nlm.nih.gov
8. Wangen R, Aasebø E, Trentani A, et al. Preservation Method and Phosphate Buffered
Saline Washing Affect the Acute Myeloid Leukemia Proteome. Int J Mol Sci. 2018;
19(1):296. Available in: ncbi.nlm.nih.gov
9. Martínez R, Gragera R. (2008). Fundamentos teóricos y prácticos de la histoquímica.
Consejo superior de investigaciones científicas. Madrid. Disponible en:
books.google.co.ve

Marielsa Gil
Bioanalista/Microbióloga, Especialista en Docencia para la Educación Superior y Magíster en Tecnología
Educativa. Docente en la Escuela de Medicina de la Universidad de Carabobo, Venezuela. Miembro de la
Sociedad Venezolana de Microbiología.

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