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Pontificia Universidad Católica de Valparaíso

Facultad de Ciencias Básicas


Instituto de Biología

CITOESQUELETO

El citoesqueleto es una estructura tridimensional dinámica que permite el


movimiento y estabilidad de la célula eucariota.
Las fibras largas del citoesqueleto están formadas por:

 Microtubulos
 Microfilamentos
 Filamentos intermedios.

Microtubulos:

- Tubos cilíndricos de 20-25 nm en diámetro.


- Compuestos de subunidades tubulina.
- Funciones:
 Determinar la forma celular.
 Permitir el movimiento de organelos celulares.
 Formar las fibras del huso para separar los cromosomas durante la
mitosis
 Cuando se disponen en forma geométrica dentro de flagelos y cilios,
son usados para la locomoción. 

Microfilamentos:

- Fibras de proteínas de 3-6 nm de diámetro.


- Compuestos principalmente de actina.
- Función:
 Llevar a cabo movimientos celulares, incluyendo desplazamiento,
contracción y citocinesis. 

Filamentos intermedios:

- Tienen un diámetro de alrededor de 10 nm.


- Formados por un conjunto de proteínas específicas para cada tipo celular.
- Proveen fuerza de tensión a la célula. 

OBJETIVOS

Comprender la importancia del citoesqueleto en diversas actividades celulares como


movimiento de organelos, movimientos ciliar y flagelar y mitosis.
MITOSIS

En las células eucariontes (hongos, protistas animales y vegetales), la fase M del


ciclo celular representa la culminación del mismo y corresponde a la etapa de división
celular. Dicha fase incluye la mitosis, es decir los distintos estados de la división nuclear y
la citocinesis o división del citoplasma.
La mitosis puede ser entendida como un proceso en virtud del cual una célula
eucarionte divide su material genético previamente duplicado de manera equitativa entre
dos células hijas que tendrán por lo tanto la misma cantidad de material genético entre
ellas. Se dice además que este proceso constituye un mecanismo de división equitativa o
ecuacional ya que permite que las células hijas conserven el complejo cromosómico
(número de cromosomas) de la célula progenitora.
La mitosis, se presenta 4 etapas secuenciales; profase, metafase, anafase y telofase.
La citocinesis o división del citoplasma se produce habitualmente de manera sincrónica
con los sucesos de la telofase.

OBJETIVOS

Conocer la técnica de preparación de muestras vegetales.


Identificar las etapas mitóticas en Allium cepa.
Profundizar sus conocimientos sobre ciclo celular y división celular.

CONOCIMIENTOS PREVIOS

Etapas del ciclo celular y mitosis.


ADN, Cromatina, Cromosomas.
Palabras claves: Orceína, tinción, Mitosis. Centrómero, citoesqueleto.

ACTIVIDAD PRÁCTICA

I- Observación de Cromosomas de Allium cepa

El alumno comenzará el práctico de obtención de preparados de cromosomas para el


microscopio de luz a partir del paso 7.

Técnica para la obtención de preparados de cromosomas para el microscopio de luz

1. Poner a germinar semillas o bulbos de cebolla y cortar las raíces enteras cuando tienen
0.3 y 1 cm de longitud (mientras las células del ápice estén en crecimiento activo).

2. Poner las raíces en fijador (3/4 etanol, ¼ ácido acético) por lo menos 2 horas ó por toda
la noche.

3. Sacar las raíces y sumergirlas por 10 min. en una solución de 1:1 de ácido clorhídrico y
etanol.

4. Lavar 2 ó 3 veces con etanol 100% por 10 min.


5. Sumergir las muestras en orceína acética por toda la noche.

7. Tomar un ápice con una pinza y colocar en el portaobjetos. Aplastar las células
ejerciendo presión sobre el cubreobjetos. Golpear suavemente de manera de obtener una
muestra de color rosado pálido.

8. Examinar al microscopio con poco aumento. Recorrer la muestra hasta encontrar una
zona en que se muestre una sola capa de células, observar los cromosomas teñidos de
color rojo intenso.

Enfoque la muestra con el objetivo de 100x y luego pase a 400x con el objeto de identificar
distintas etapas de la mitosis.

FAGOCITOSIS

La fagocitosis se define como el proceso a través del cual la célula incorpora


grandes partículas a su interior. Protozoos y algunos otros protistas realizan
rutinariamente fagocitosis de grandes partículas como un método de alimentación.
En los organismos multicelulares, la fagocitosis es realizada por células
especializadas como los glóbulos blancos del tipo macrófagos y leucocitos
polimorfonucleados, los cuales ingieren bacterias, restos celulares o células viejas que
deben ser eliminadas. Este proceso constituye uno de los mecanismos efectivos de defensa
contra la invasión por microorganismos patógenos.
Las partículas fagocitadas son tomadas desde la superficie celular en vacuolas
fagocíticas o fagosomas, los que posteriormente se fusionarán con los lisosomas para que
ocurra la digestión celular. Los lisosomas así formados (fagolisosomas) pueden ser
bastantes grandes y heterogéneos, dado que su tamaño y forma estará determinado por el
contenido del material fagocitado.
El molusco bivalvo Mytilus edulis chilensis (chorito), es un buen modelo
experimental para observar el proceso de fagocitosis. Estos organismos poseen como
fluido corporal hemolinfa, presente en todos los invertebrados (análogo a la sangre de los
vertebrados). Ésta presenta un componente sérico y otro celular y es incoloro ya que carece
de pigmentos respiratorios del grupo de la hemoglobina. Al componente celular se le ha
atribuido funciones relacionadas con la respuesta inmune y se han descrito dos tipos de
células:
Hialinocitos: Con un núcleo grande y central, su citoplasma hialino se debe a que los
gránulos que posee tienen el mismo índice de refracción.
Granulocitos: Núcleo desplazado, gránulos notorios en el citoplasma, dándole un aspecto
rugoso. A este grupo principalmente se le ha designado propiedades fagocíticas.

OBJETIVOS

Evidenciar el mecanismo de fagocitosis evidenciado en hemocitos de un molusco bivalvo.


Comprender los procesos involucrados en la fagocitosis de agentes extraños.

CONOCIMIENTOS PREVIOS
Fisiología básica de M. edulis chilensis .
Mecanismos de defensa en invertebrados.
Componentes celulares de la hemolinfa.
Palabras claves: hemolinfa, inmunidad innata, moluscos bivalvos.

MATERIALES QUE DEBEN TRAER LOS ALUMNOS

- 1 sobre de levadura (por curso)


- Choritos (uno por cada 3 alumnos)
- 1 jeringa de 3 o 5 ml (una por cada 3 alumnos)
- Guantes (1 par por alumno)

ACTIVIDAD PRÁCTICA

 Con una lima metálica hacer un pequeño orificio en la cara convexa del molusco
hacia ¾ del borde inferior.
 Identificar los músculos aductores. Extraer desde uno de ellos alrededor de 1 ml de
hemolinfa utilizando una jeringa de 5 o 10 ml (la jeringa debe tener previamente 1
ml de PBS a pH 7.4, con el objeto de evitar la agregación de los hemocitos) y
transferirla a un tubo Falcon ® de 15 ml que debe estar en un baño de hielo.
 Para separar las células del suero, centrifugar a 1800 rpm por 5 minutos.
 Eliminar el sobrenadante y resuspender el pellet (componentes celulares) en 500 ul
de buffer PBS a pH 7.4.
 Preparar una muestra de levadura disolviendo 0.01 gr. de levadura fresca
(comercial) en 1 ml de buffer PBS a pH 7.4. Someter a 70°C por 10 minutos. Teñir
con 200 ul de safranina.
 Esparcir 100 ul de pellet resuspendido sobre un portaobjetos y dejar reposar por 10
minutos en una cámara húmeda. Pasado este tiempo esparcir sobre la muestra 50 ul
de la muestra de levaduras (teñidas con safranina). Incubar por 20 minutos.
 Mantener los hemocitos en una cámara húmeda para evitar que estos mueran al
deshidratarse. La cámara húmeda se fabrica con un recipiente tapado
herméticamente que contenga papel filtro mojado en su interior.
 Después del tiempo señalado, lavar con buffer PBS utilizando una pipeta para
eliminar las levaduras que no fueron fagocitadas. Este procedimiento debe
realizarse cuidadosamente para evitar la pérdida de los hemocitos.
 Cubrir la muestra con un cubreobjetos. Observar al microscopio la preparación para
comprobar la fagocitosis.

BIBLIOGRAFÍA

1 H. Lodish, A. Berk, L. Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore , J. Darnerll, 2002.


2 “Biología Celular y Molecular”. Editorial Médica Panamericana. Madrid-España.

1 B. Albert, D. Bray, J. Lewis, 2000. “Biología Molecular de la Célula. Ediciones


2 Omega S.A., Barcelona.

Farmacología Molecular: Receptores, transducción de señales y activación de


genes, 2000. Marcelo Kazanietz. Ed. Universidad Nacional de Quilmes – Argentina.

1 De Robertis y De Robertis, 1991. “Biología Celular y Molecular”. 11º Edición, El


2 Ateneo, Buenos Aires.

1 J. Kurjan y B. Taylor, 1993. “Signal Transduction”. Academic Press Inc. N.Y.

Abbas Abul K., A. H. Lichtman & Pober J. Inmunología Celular y Molecular. 4º


Edición, 2002. Ed. McGraw-Hill-Interamericana, Madrid, España

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