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Los aspectos cuantitativos son ignorados: síntesis y degradación de protes.

Hubo un gran progresos cuando se enetendiócomo las protes eran degradads por las cel
eucariotas . obvio la sintesis y la degradacion deben estar equilibrados para mantener la
viabilidad de las celula.

El crecimiento cel y la activacion aumentan las tasa de eliminación de protes debido a


mayores tasas de síntesis y además la redistribución de compuestos celulares a nuevas
tareas.
Hay evidencia reciente de que de que mas del 30% de las protes son degradados por las
proteasas justo después de ser sintetizados debido a su gran incapacidad para lacanzar sus
estado functional( se denomino a estas como protes protes ribosomal defectuosas DRiPs)
Una explicación para esta aparente eficiente de la sintesis de prptes es q es menos costoso
parlas cel degrades un alta de fraccion de protes defectuosas q sientizarlas mas
efiucientemente. Para evaluar los costos , es necesario conocer la tasa de sint de protes y
aus coste energy. Tmb conocer el numero de proteosomas y las tasas requeridas para la
degradacion de una gran fracción de protes nascientes. Las impostancia de la cuantifiaccion
se v aumentada por su contribución de la vigilancia inmune. El sist inmune utiliza los
productos peptidicos de la degradación proteosomal para monitorear la presencia de virus y
otros parasitos intracelulares .Un poco de los peptifos proteosomales encuentran su camino
de moluculas de la clase1 of the major incompatibility complex MHC q los exhibe en la
superficie ceular de la celula para la captacion por los receptors de las celulas T on CD8 T
celulas.

RESULTADOS
La economia proteica de LK
Se usaron cel L929 de ratas. Para emplear la 25D1 para cuantificar complejos de peptidos de
clase 1 , se uso celukass transfectadas con un codon de adn que codifica la molecula de
clase 1 de rataS H2 KB o cel lkb
El primer paso y el mas simple en la caracterizacion de la economia de las protes fue
determinsar el contenido proteico. Equivale a 200pg cell o prote 466 aa ( la longtd media
de EBML human proteome).
Se usa la wea de western en conjunto con los estandares de de ribomoas y proteosomas
purificados para determinar el numero de copias.
Las células lk poseen 6x 106 ribosomas y 106 proteosomas. Figura 1 immunotrnsf para
ribosomas y proteosomas. Tenemos que corregir estas cifras para considerar a alas
subunidades q no están presentes en conjuntos funcionales
- Para ribosomas debe ser , estom debe ser al menos de la vidamedia de los ribosomas
ensamblados (10d) es mucho mas q su tiempo de ensamblaje.
- No hay datos comparables para los proteosoma de cells l929 , pero se hay nformado
q el 75-80% de subunidad de proteosomas estan presentas en ensamblajes
funcionales en ujna linea cellular de ratas se divide rapidamente.
- Extrapolando estos resultados a las lkb el resultado es de un num de copias de 8 x
105 proteosomas funcionales.

Después se mide la tasa se sintesis de protes midiendo la incorporación de H leu en TCA


material insoluble marcadas in normal growth media
La tasa aparente de la sint de prtes fue 3.3x106 protes por min
Esto no da cuenta de lasDRiPS, algunas de estas se degradan en el etiquetado de oulso .
Para wstimar la fraccion de protes degrades recién sintetizadas bajo estas condiciones , se
reetiqueta celulas en presencia o ausencia de inhibidores de proteosomas.
-esta info indica q la real tasa dr sint dde prote es de 25% mas q la tasa medida sin
inhibidores, o 4x106 proteínas por min.este valos es comsistente con el conte de ribosomas,
dada una tasa de trasduccion tipica de de 5 aa, cada ribosomas un tipica prteina en 93 s, lo
que equivale a 3.9x106 protes por min si todos los ribosomas estan traduciendo protes eb
ese ritmo. Los datos indican que hay pocos ribosmas inavtivos in lkb cells.
Podemos asumir q se se producen 4x106 protes por min?. Basados en las recuperación de
TCA material insoluble en los experimentos de pulzo- caza , encontranos que 1.3x106
proteínas por min son degradados por proteosomas dentro de las 2 primeras horas de su
sintesis( 1x106 min en los primero 10 min), 4.7 x 105proteins por min son segregados o
liberados de las celulas dentro de una hora de sus sintesis , y un 5x105 protes por min se
degradan durates las prox 22 horas basado es una tasa de conversion de 1.1% de lo largo
vivido de potes po hora(ee experimtl procedimi). Esto dejaria a 1,7x106 protes por min para
crear una lkb celuklas hija, q es notablemente cercacno al numero de protes (1.8x106 min)
necesitados para duplicar contenido de prote cellular para soportar un tiempo de div cel de
24 horas.
A continuacion d]s edetermino el costo energetico de la sint de protes de lkb cells. Cuando
la sintesis de protes es bloqueada por la adicion de ciclohexamida a la celullas, el conusmo
de oxigeno se reduce en un 34%. Se midio la produccion de ATP a partir de O2 bajo estas
condiciones debe es de 75% (usanndo oligomicina la ATPasa mitochondrial), lo q significa q ,
lonq significa q la sint de protes consume 45% de lo suministros de atp cellular.
Esta en ua estimacion minma de la energia cellular q se dedica a la sint de protes , ya que
usando el m,edio requerido para el consume de atp, la sintesis de protes se redujo a celulas
incubdas de crecimiento medio. Estos underscores el altpo pecio q pagan las celulas par la
sint de protes ( 5 ATP por enlace petifico o 2300 por una prte tipica . El costo de DRiPS es
correspondeintenente alto: una tasa de Drips del 25% corresponde al usos total del 11% del
uso total de la energia cellular.
Ademas se encontro que el tratiemnto de cells lk con lactasicina el inhibidor de
proteosomas no dio lugar a ninguna reducci’on detectable del consume de oxigeno.
Cuantificando el procesamientos de antigenos en lk cells
Paso 1: la cuantificación de la síntesis por sustrato
Para obtener una comprensi’on m’as cuantitativa de de la generaci’on de peptidos, se us’o
un rvv q expresan las protes quiméricas q contienen nucleoproteínas de influenza NP, una
prote con 498 residuos con un muy alta estabilidad metab’olica

Cuantificacion de peptidos clase 1

Al relacionar la intensidad de fluorescencia con una curva estándar, se podría