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La opinión científica

APROBADA: 21 Octubre el año 2015 PUBLICADA: 20 Noviembre 2.015

doi: 10.2903 / j.efsa.2015.4272

Seguridad y eficacia de etoxiquina


(6-etoxi-1,2dihydro-2,2,4-trimetilquinolina) para todas las especies animales

Comisión Técnica de aditivos y productos o sustancias utilizados en


Animal Feed (FEEDAP)
Esta producción científica, publicada el 20 de noviembre de 2015, sustituye a la versión anterior publicada el 18 de noviembre el año 2015 1

Resumen

La etoxiquina aditivo contiene ≥ 91% etoxiquina, ≤ polímeros etoxiquina 8% y ≤ 3% pag-


fenetidina. Está destinado para uso en todas las especies animales como un antioxidante a un contenido máximo de 50 mg / kg de pienso.
Etoxiquina se absorbe rápidamente tras la administración oral. oxidación etoxiquina en materiales de alimentación y en los animales conduce a
cuatro compuestos principales: 2,4-dimetil-6-etoxiquinolina, etoxiquina N-óxido, imina etoxiquina quinona, y el dímero etoxiquina (detectado
sólo en la harina de pescado y en el salmón). Etoxiquina en sí no es genotóxico o carcinogénico, y no causa toxicidad para el desarrollo. El
NOAEL más bajo (basado en estudios en ratas y perros) es 2 mg / kg de peso corporal por día. El perfil genotóxico del dímero refleja la de
etoxiquina. imina etoxiquina quinona muestra alertas estructurales de mutagenicidad, carcinogenicidad y de unión a ADN; ninguna conclusión
sobre la ausencia de genotoxicidad de imina etoxiquina quinona es posible. pag- Fenetidina es un mutágeno posible reconocido. Las
concentraciones de 50 mg etoxiquina / kg y 11 mg etoxiquina / kg de pienso pueden ser considerados como potencialmente seguro para los
pollos y los criadores y para los perros, respectivamente. Ninguna conclusión sobre los niveles de seguridad potenciales para otras aves de
corral, cerdos, rumiantes, peces y gatos es posible. En general, cuando se considera la presencia de pag- fenetidina en el aditivo, no hay
ninguna conclusión en ningún nivel seguro del aditivo para los animales destinatarios se pueden extraer. Una evaluación de la seguridad para
el consumidor se vea impedida por la falta de datos sobre la exposición, la ausencia de un nivel seguro de exposición y la presencia de pag- fenetidina
en etoxiquina. La niebla respirable de etoxiquina es de baja toxicidad. Etoxiquina no es un irritante cutáneo, pero se considera un potencial
irritante para los ojos y otras membranas mucosas y sensibiliza la piel. Ninguna conclusión sobre la seguridad para el medio ambiente se
puede hacer. Etoxiquina es un potente antioxidante; Sin embargo, no hay datos confirman su eficacia al nivel de uso propuesto.

© Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria, 2015

palabras clave: etoxiquina, pag- fenetidina, etoxiquina quinona imina, antioxidante, genotoxicidad, toxicidad, seguridad

solicitante: Comisión Europea

Número de pregunta: EFSA-Q-2010-01224

Correspondencia: feedap@efsa.europa.eu

1 Una enmienda de redacción se llevó a cabo que no afecte materialmente el contenido o el resultado de este dictamen científico. los

ammednment está en la página 5, la nota 3 de completar la lista de empresas que apoyan la solicitud. Para evitar confusiones, la versión original se ha eliminado de la
EFSA Journal, pero está disponible bajo petición, es una versión que muestra todos los cambios realizados.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Los miembros del panel: Gabriele Aquilina, Vasileios Bampidis, María de Lourdes Bastos, Georges Bories, Andrew Chesson, Pier Sandro
Cocconcelli, Gerhard Flachowsky, Jürgen Gropp, Boris Kolar, Maryline Kouba, Secundino López Puente, Marta López-Alonso, Alberto
Mantovani, Baltasar Mayo, Fernando Ramos , Guido Rychen, María Saarela, Roberto Edoardo Villa, Robert John Wallace y Pieter Wester.

Expresiones de gratitud: El Grupo Especial desea agradecer a los miembros del Grupo de Trabajo sobre aditivos tecnológicos, incluyendo
Mikolaj Gralak, Anne-Katrine Lundebye, Carlo Nebbia y Derek Renshaw por el apoyo prestado a esta producción científica.

Cita sugerida: Comisión FEEDAP EFSA (Comisión Técnica de aditivos y productos o sustancias utilizados en los piensos para animales),
2015. Dictamen científico sobre la seguridad y eficacia de etoxiquina (6-etoxi-2,2,4-1,2dihydro-trimetilquinolina) para todas las especies
animales . EFSA Journal 2015; 13 (11): 4272, 58 pp doi: 10.2903 / j.efsa.2015.4272.

ISSN: 1831-4732

© Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria, 2015

Se autoriza la reproducción siempre que la fuente sea reconocida.

La EFSA Journal es una publicación de la European Food


Autoridad de Seguridad, una agencia de la Unión Europea.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Resumen
A petición de la Comisión Europea, la Comisión técnica de aditivos y productos o sustancias utilizados en los piensos (FEEDAP) se le pidió
que entregar un dictamen científico sobre la etoxiquina para todas las especies animales.

La etoxiquina aditivo contiene al menos 91% etoxiquina, polímeros etoxiquina ≤ 8%, ≤ 3% pag-
fenetidina y ≤ 0,02% de acetona. Está destinado a ser utilizado en la alimentación de todas las especies animales con un contenido máximo de
50 mg / kg de pienso.

Etoxiquina se absorbe rápidamente tras la administración oral. oxidación etoxiquina en materiales de alimentación y en los animales conduce a
cuatro compuestos principales: 2,4-dimetil-6-etoxiquinolina, etoxiquina N-óxido, imina etoxiquina quinona, y el dímero etoxiquina (detectado
sólo en la harina de pescado y en el salmón).

Etoxiquina en sí no es cancerígeno, y que no causa toxicidad para el desarrollo de las crías. El más bajo nivel sin efecto adverso observado
(NOAEL) observada en los estudios disponibles en ratas y perros es 2 mg / kg de peso corporal (BW) por día. Etoxiquina mostró resultados
positivos en algunos in vitro estudios sobre células de mamífero cultivadas; sin embargo, estos resultados no fueron confirmados en viv o. La
Comisión FEEDAP concluye que la etoxiquina en sí no es genotóxico. El perfil toxicológico de los dímeros etoxiquina, presentes en tejidos de
alimentación y de los animales, se considera que refleja la de los monómeros precursores. Ninguna conclusión sobre la ausencia de
genotoxicidad de imina etoxiquina quinona es posible.

imina etoxiquina quinona muestra alertas estructurales de mutagenicidad, carcinogenicidad y de unión a ADN. imina etoxiquina quinona es
negativo en un ensayo de mutación inversa bacteriana, pero los resultados de una
in vitro ensayo de micronúcleos no permiten la exclusión de clastogenicidad. En consecuencia, ninguna conclusión sobre la ausencia de
genotoxicidad de imina etoxiquina quinona es posible.

pag- Fenetidina, una impureza de la etoxiquina aditivo, es un posible mutágeno. Los pocos estudios toxicológicos disponibles no permiten la
identificación de un NOEL general para pag- fenetidina.

Teniendo en cuenta los niveles dietéticos de etoxiquina al parecer tolerados por los pollos y los criadores reportados en la literatura (500-750 mg / kg de
pienso) creciente, la concentración de máximo propuesto de 50 mg etoxiquina / kg podría considerarse como potencialmente seguro para los pollos y
los criadores. Desde no se dispone de estudios comparables a un estudio de tolerancia, una extrapolación a otras aves de corral (incluyendo gallinas
ponedoras) no es posible. La seguridad de la utilización de etoxiquina en la alimentación de lechones no se demuestra por un estudio de tolerancia.
Ninguna conclusión sobre la seguridad de EQ para otros cerdos es posible. Debido a la ausencia de datos, no es posible extraer conclusiones sobre la
seguridad de etoxiquina para los terneros, ganado de engorde, vacas lecheras, ovejas y cabras. Teniendo en cuenta las deficiencias de datos en los
estudios disponibles, ningún nivel dietético seguro para los peces, incluyendo los salmónidos, se puede derivar. El uso de valores por defecto para el
peso corporal y consumo de alimento y la aplicación de un factor de incertidumbre de 10 (para la variabilidad individual y raza) a la NOAEL de 2 mg
etoxiquina / kg de peso corporal por día de un estudio crónico perro, 11 mg etoxiquina / alimentación completa se deriva como el máximo
potencialmente concentración etoxiquina seguro en alimento completo para perros. estaban disponibles para los gatos pero no los datos.

Teniendo en cuenta que el aditivo contiene etoxiquina pag- fenetidina, una posible mutágeno, el Grupo FEEDAP no puede concluir en cualquier
nivel seguro de etoxiquina en el pienso para los animales diana.

Una estimación de la exposición del consumidor a los residuos relacionados etoxiquina-en tejidos y productos procedentes de animales tratados
con etoxiquina no es posible debido a vacíos de datos considerables. Una evaluación de la seguridad para el consumidor se vea impedida por la
falta de un nivel seguro de exposición y la presencia de
pag- fenetidina en las cantidades de medición en curso en el aditivo.

El usuario puede estar expuesto por inhalación a una niebla del aditivo. Sin embargo, la niebla respirable de etoxiquina es de baja toxicidad.
Etoxiquina no es un irritante cutáneo, pero se debe considerar como un potencial irritante para los ojos y otras membranas mucosas y como un
sensibilizante de la piel.

Desde la ecotoxicidad de etoxiquina al suelo y los compartimentos de sedimentos no se puede evaluar debido a la falta de datos, no hay ninguna
conclusión sobre la seguridad para el medio ambiente resultante del uso de etoxiquina como aditivo en piensos para todas las especies animales
se pueden extraer.

Etoxiquina es un potente antioxidante; Sin embargo, los estudios presentados no confirmar su eficacia en el nivel de uso propuesto de 50 mg /
kg de pienso.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Tabla de contenido

Resumen ................................................. .................................................. ...................................... 1


Resumen ................................................. .................................................. .................................... 3
1. Introducción ................................................. .................................................. ..................... 5
1.1. Antecedentes y Mandato ............................................. ....................................... 5
1.2. Información Adicional ................................................ .................................................. ....... 5
2. Datos y metodologías ............................................... .................................................. 6 .....
2.1. Datos ................................................. .................................................. ................................ 6
2.2. Metodologías ................................................. .................................................. ................. 6
3. Evaluación ................................................. .................................................. ..................... 6
3.1. Caracterización ................................................. .................................................. ............... 7
3.1.1. Caracterización del aditivo .............................................. .............................................. 7
3.1.2. Estabilidad y homogeneidad ............................................... .................................................. 8 ..
3.1.3. Condiciones de Uso ............................................... .................................................. ............... 9
3.2. Modo de acción ............................................... .................................................. ................... 9
3.2.1. In vitro .................................................. .................................................. ........................... 9
3.2.2. En vivo................................................ .................................................. ............................ 10
3.3. La absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME) ........................................ ......... 11
3.3.1. Etoxiquina ................................................. .................................................. .................... 11
3.3.2. dímero etoxiquina (EQDM) ............................................. .................................................. 12 ..
3.3.3. Etoxiquina quinona imina (EQI) ............................................ ............................................ 12
3.3.4. pag- Fenetidina ................................................. .................................................. ................ 12
3.4. perfil toxicológico ................................................ .................................................. ......... 13
3.4.1. Etoxiquina y sustancias relacionadas .............................................. ...................................... 13
3.4.2. pag- Fenetidina ................................................. .................................................. ................ 15
3.4.3. Conclusiones sobre la toxicidad oral de la etoxiquina aditivo ......................................... ......... dieciséis
3.5. La seguridad ................................................. .................................................. ........................... dieciséis
3.5.1. Seguridad para las especies objetivo .............................................. .................................................. .... dieciséis
3.5.2. Seguridad para el consumidor .............................................. .................................................. .... 21
3.6. Seguridad para el usuario .............................................. .................................................. ............ 24
3.6.1. Efectos sobre el sistema respiratorio ............................................. .......................................... 24
3.6.2. Efectos sobre la piel y los ojos ............................................. .................................................. ..... 25
3.6.3. Conclusiones sobre la seguridad del usuario .............................................. .................................................. 25
3.7. Seguridad para el medio ambiente .............................................. .................................................. 26
3.7.1. evaluación de la Fase I ............................................... .................................................. .......... 26
3.7.2. II fase de evaluación ............................................... .................................................. ........ 26
3.8. Eficacia ................................................. .................................................. ......................... 27
4. Conclusiones ................................................. .................................................. ................... 27
Observación ................................................. .................................................. ..................................... 28
Documentación proporcionada a la EFSA .............................................. .................................................. 28 ..
Referencias ................................................. .................................................. ................................ 28
Abreviaturas ................................................. .................................................. ............................ 35
Apéndice A - Resumen de los estudios sobre el destino metabólico y perfil toxicológico de etoxiquina ........ 37
Apéndice B - Resumen de los estudios sobre el destino metabólico y perfil toxicológico de pag- fenetidina .... 54
Apéndice C - Resumen de los estudios toxicológicos con imina etoxiquina quinona .......................... 57
Anexo A - Resumen Ejecutivo del Informe de Evaluación del Laboratorio de Referencia de la Unión Europea
los aditivos para piensos en el Método (s) de análisis para etoxiquina ..................................... ...... 58

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Etoxiquina para todas las especies animales

1. Introducción

1.1. Antecedentes y Mandato


Reglamento (CE) no 1831/2003 2 establece las normas que regulan la autorización comunitaria de aditivos para su uso en la alimentación
animal. En particular, el artículo 10 (2) de dicho Reglamento también especifica que para los productos existentes en el sentido del artículo 10
(1), una solicitud será presentada de conformidad con el artículo 7, a más tardar un año antes de la fecha de expiración de la autorización dada
de conformidad con la Directiva 70/524 / CEE para los aditivos con una duración limitada, y en un plazo máximo de siete años después de la
entrada en vigor del presente Reglamento para los aditivos autorizados sin límite de tiempo o en virtud de la Directiva 82/471 / CEE.

La Comisión Europea recibió una solicitud de ANTOXIAC AEIE (antioxidantes Autorización Consorcio Europeo grupo de interés económico) 3 para
la re-evaluación de la etoxiquina producto (6Ethoxy-1,2-dihidro-2,2,4-trimetilquinolina), cuando se usa como aditivo en piensos para todas las
especies animales (Categoría: Tecnológico aditivos; Grupo funcional: antioxidantes).

De acuerdo con el artículo 7 (1) del Reglamento (CE) no 1831/2003, la Comisión remitió la solicitud a la Autoridad Europea de Seguridad
Alimentaria (AESA) como una aplicación en virtud del artículo 10 (2) (re-evaluación de un aditivo para piensos autorizados) . AESA recibió
directamente del solicitante la documentación técnica en apoyo de esta solicitud. De acuerdo con el artículo 8 de dicho Reglamento, la EFSA,
después de verificar los datos y documentos presentados por el solicitante, deberá efectuar una evaluación con el fin de determinar si el aditivo
para piensos cumple las condiciones establecidas en el artículo 5. Los datos y documentos en apoyo de la solicitud se considerará válida por la
EFSA partir del 1 de diciembre de 2010.

De acuerdo con el artículo 8 del Reglamento (CE) no 1831/2003, la EFSA deberá determinar si el aditivo para piensos cumple las condiciones
establecidas en el artículo 5. AESA emitirá un dictamen sobre la seguridad para los animales destinatarios, los consumidores y usuarios y el
medio ambiente y la eficacia de la etoxiquina producto (6-etoxi-1,2-dihidro-2,2,4-trimetilquinolina), cuando se utiliza en las condiciones de uso
propuestas (véase la Sección 3.1.3).

1.2. Información Adicional


La etoxiquina aditivo (6-etoxi-1,2-dihidro-2,2,4-trimetilquinolina) está actualmente autorizado en la Unión Europea para el uso en todas las
especies animales y categorías. Etoxiquina también fue autorizado en la Unión Europea como plaguicida hasta 2009, cuando se retiró la
autorización para su uso. 4

Es un requisito legal de la Organización Marítima Internacional de las Naciones Unidas (OMI) que 'Estabilización de harina de pescado se
consigue para evitar la combustión espontánea mediante la aplicación eficaz: de entre 400 y 1.000 mg / kg (ppm) etoxiquina, o BHT líquido
(butilado hidroxi tolueno); o entre 1000 y 4000 mg / kg (ppm) de BHT en forma de polvo en el momento de la producción '(OMI, 2014) y que:'
chatarra de pescado de la harina de pescado deberá contener al menos 100 ppm de antioxidante (etoxiquina) en el momento de la expedición
(ONU, 2014).

El Comité Científico de la Alimentación Animal (SCAN) emitió un dictamen sobre la seguridad de etoxiquina para perros (CE, 1993). El Comité
Científico de la Alimentación (SCF) emitió un dictamen sobre la seguridad de etoxiquina utilizado para el tratamiento de escaldado en manzanas
y peras (CE, 1975). La reunión conjunta del Grupo de Expertos de la FAO sobre Residuos de Plaguicidas en los Alimentos y el Medio Ambiente
(JMPR) ha emitido una serie de dictámenes sobre la seguridad de etoxiquina (FAO, 1969; 1998; 2005). EFSA emitió una conclusión sobre el
peer

2 Reglamento (CE) nº 1831/2003 del Parlamento Europeo y del Consejo, de 22 de septiembre de 2003, sobre los aditivos en la

nutrición animal. DO L 268 de 18.10.2003, p. 29.


3 En 13/3/2013, AESA fue informado por el solicitante que ANTOXIAC AEIE fue liquidado el 19/12/2012 y sus derechos como

solicitante se transfirieron a FEFANA asbl (Asociación de otros UE ingredientes de piensos y sus mezclas). Avenue Louise, 130A, Box 1, 1050 Bruselas,
Bélgica. Empresas: Industrial Técnica Pecuaria, SA, Barcelona, ​España; Raschig GmbH, Alemania; Novus Europa NV / SA, Bruselas, Bélgica; Noruega
mariscos Federación, Oslo, Noruega; LUCTA SA, Barcelona, ​España; Jiangsu Zhongdan Group Co., Ltd, Qiwei ciudad, la ciudad de Taixing, provincia de
Jiangsu, China. Durante el transcurso de la evaluación, el solicitante notifica que las empresas de Jiangsu Zhongdan Group Co. y LUCTA SA ya no están
defendiendo este aditivo dentro de la aplicación actual.

4 Decisión de la Comisión 2008/941 / CE, de 8 de diciembre de 2008, relativa a la no inclusión de determinadas sustancias activas en el anexo I

la Directiva 91/414 / CEE y la retirada de las autorizaciones de los productos fitosanitarios que contengan estas sustancias. DO L 335 de 13.12.2008, p. 91

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Etoxiquina para todas las especies animales

revisión de la evaluación del riesgo de etoxiquina (EFSA, 2010) y un dictamen motivado sobre la revisión de los límites máximos de residuos
existentes (LMR) para etoxiquina (EFSA, 2013).

2. Datos y metodologías

2.1. Datos

La presente evaluación se basa en los datos presentados por el solicitante en la forma de un expediente técnico 5 en apoyo de la solicitud de
autorización para el uso de etoxiquina como aditivo para piensos. El expediente técnico se preparó siguiendo las disposiciones del artículo 7
del Reglamento (CE) no 1831/2003 y los documentos de orientación EFSA aplicables.

La Comisión FEEDAP utiliza los datos proporcionados por el solicitante junto con datos de otras fuentes, tales como las evaluaciones previas de
riesgo por la EFSA u otros órganos de expertos, artículos científicos revisados ​por pares, otros informes científicos y el conocimiento elicitación
expertos, para entregar la salida actual.

EFSA ha verificado el informe EURL lo que se refiere a los métodos utilizados para el control de la etoxiquina en animales de residuo de alimentación
/ marcador en los tejidos. El resumen ejecutivo del informe EURL se puede encontrar en el Anexo A. 6

2.2. metodologías
El enfoque seguido por la Comisión FEEDAP para evaluar la seguridad y la eficacia de etoxiquina está en línea con los principios establecidos
en el Reglamento (CE) nº 429/2008 7 y los documentos de orientación pertinentes: Orientación sobre aditivos tecnológicos (panel FEEDAP
EFSA, 2012a), la orientación técnica: estudios de tolerancia y eficacia en animales destinatarios (AESA Panel FEEDAP, 2011), la orientación
técnica para evaluar la seguridad de los aditivos para piensos para el medio ambiente (AESA , 2008a, revisada en 2009), de orientación para la
preparación de los expedientes para la re-evaluación de determinados aditivos ya autorizados en la Directiva 70/524 / CEE (AESA, 2008b,
revisada en 2009), de orientación para la preparación de los expedientes para aditivos ya autorizados para su uso en los alimentos (Comisión
FEEDAP EFSA, 2012b), una guía para establecer la seguridad de los aditivos para el consumidor (Comisión FEEDAP AESA, 2012c),
orientación sobre los estudios sobre la seguridad de utilización del aditivo para los usuarios / trabajadores (Comisión FEEDAP AESA , 2012D).

3. Evaluación
Etoxiquina (EQ) fue desarrollado originalmente por la industria del caucho para evitar la aparición de grietas de caucho como resultado de la
oxidación de isopreno. Debido a su alta eficacia antioxidante y la estabilidad, que se desarrolló aún más para su uso como conservante en
alimentos para animales, ya que protege los lípidos contra la peroxidación y estabiliza vitaminas liposolubles (A y E). Actúa de un modo similar a
otros antioxidantes sintéticos (por ejemplo hidroxitolueno butilado (BHT) e hidroxianisol butilado (BHA)) por enfriamiento rápido formación de
radicales libres. Actualmente, etoxiquina se utiliza principalmente como un antioxidante en alimentos para mascotas en conserva y en los piensos
para peces de criadero o aves de corral. También se utiliza para preservar la harina de pescado recién producido contra la oxidación (automático) y
la auto-ignición.

Etoxiquina (6-etoxi-1,2-dihidro-2,2,4-trimetilquinolina) está actualmente autorizado 8 en la UE como un antioxidante en la alimentación de todas


las especies animales (excepto perros) con un contenido máximo de 150 mg / kg de pienso (solo o en combinación con BHA y / o BHT). En la
alimentación de los perros, el contenido máximo autorizado es 100 mg / kg de pienso (la combinación con BHA y / o BHT no debe exceder de
150 mg / kg piensos completos). Etoxiquina no está autorizado para su uso en alimentos.

Etoxiquina ha sido objeto de varias evaluaciones nacionales e internacionales, en particular desde 1990, cuando los informes sobre efectos adversos
en diferentes animales destinatarios, principalmente perros, llegaron al público (US NTP,

5 FEED referencia expediente: FAD-2010 a 0.141.


6 El lleno
informe está disponible en el sitio web EURL: https://ec.europa.eu/jrc/sites/default/files/finrep-fad-2010-0141-
etoxiquina% 20.pdf
7 Reglamento (CE) nº 429/2008 de 25 de abril de 2008, sobre las modalidades de aplicación del Reglamento (CE) n

1831/2003 del Parlamento Europeo y del Consejo, relativas a la preparación y la presentación de solicitudes ya la evaluación y la autorización de aditivos
para piensos. DO L 133, 22.5.2008, p. 1.
8 Lista de los aditivos autorizados en los piensos publicada en aplicación del artículo 9 t (b) de la Directiva 70/524 / CEE del Consejo

sobre los aditivos en la alimentación animal (2004 / C 50/01).

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Etoxiquina para todas las especies animales

1990). La autorización para su uso como plaguicida en la prevención de quemaduras de peras después de la cosecha fue retirado en la UE en enero
de 2009. 9 AESA entonces llevó a cabo una revisión por pares de etoxiquina. Sobre la base de un proyecto de informe de evaluación previsto (DAR)
(Alemania, 2007), la EFSA identificó una brecha de datos y un área de especial preocupación en la toxicología y las secciones de residuo, que se
menciona 'impureza 7' pero para los cuales no hay datos sobre la genotoxicidad y ecotoxicidad fueron proporcionados (EFSA, 2010). Una evaluación
de riesgos para el consumidor y para el operador y la exposición de los trabajadores no podía llevarse a cabo. En 2013, la EFSA evaluó el límite
máximo de residuos (LMR) establecidos por la Comisión del Codex Alimentarius (EFSA, 2013). Se encontró que el límite de residuos máximos del
Codex para Plaguicidas (CXL) no fue apoyada por los datos adecuadamente y se identificó un posible riesgo para los consumidores.

La aplicación actual es para etoxiquina como aditivo tecnológico, los antioxidantes de grupos funcionales, para su uso en la alimentación de
todas las especies animales. Los contenidos de alimentación máximos previstos en la solicitud inicial aplicada estaban de acuerdo a la
autorización actual; Sin embargo, durante el transcurso de la evaluación, el solicitante reduce estos contenidos máximos. Ahora se propone
etoxiquina que deben aplicarse a todas las especies animales con un contenido máximo de 50 mg / kg de pienso (la combinación con BHA y /
o BHT no debe exceder de 150 mg / kg piensos completos).

3.1. Caracterización

3.1.1. Caracterización del aditivo

El aditivo se produce por la reacción obtenida de calentamiento de una mezcla de pag- fenetidina y acetona. Después se añade agua y el
sistema se ajusta a las condiciones alcalinas. La fase del producto se destila en vacío. La fracción de punto de ebullición inferior, que contiene
principalmente pag- fenetidina, se separa, mientras que la fracción principal se recoge en un depósito, mezclado y envasado.

El aditivo es un líquido de color amarillo-marrón, casi inodoro, con una tensión superficial de 58,5 mN / m (90% de solución saturada) a 20 ºC y
una viscosidad de 150 centistokes a 25 ° C. Su solubilidad en agua a 20 ºC es <1 g / L.

Contiene por especificación de al menos 91% etoxiquina (6-etoxi-1,2-dihidro-2,2,4-trimetilquinolina; Chemical Abstracts Service (CAS) número
91-53-2; Catálogo Europeo de estructuras químicas comerciales (EINECS ) número 202-075-7; fórmula química C 14 H 19 NO y el peso molecular

217.30), y no más del 8% de polímeros etoxiquina. también se especifica El aditivo para contener ≤ 3% pag-
fenetidina (CAS no 156-43-4, EINECS no 205-855-5, peso molecular 137,18) y ≤ 0,02% de acetona. La fórmula estructural de etoxiquina se
muestra en la Figura 1.

Figura 1: Fórmula estructural de la etoxiquina (6-etoxi-1,2-dihidro-2,2,4-trimetilquinolina)

Se han proporcionado datos sobre la consistencia de lote a lote para un total de 27 lotes de tres productores. 10
La concentración de etoxiquina varió desde 91,2 hasta 99,7%, la de pag- fenetidina 0,4-1,4%, la de los polímeros etoxiquina 0-7,7% y la
concentración de acetona 0,02-0,08%, la última que exceda el límite especificado propuesto en ocho lotes. Se analizaron tres lotes (uno de
cada fabricante) para caracterizar adicionalmente la fracción etoxiquina, 11 que consistía en

polímeros 95,4, 99,5 y 100% etoxiquina y 4,6, 0,5 y 0% etoxiquina. Una comparación directa de estos datos con la especificación no es
posible, ya que ambos conjuntos de datos utilizan diferentes dimensiones.

9 Decisión de la Comisión 2008/941 / CE.


10 Información de febrero de 2014 especificaciones / anexos complementarios Qi; Información complementario de octubre de 2014 / anexos Qi

lote a lote.
11 Información Suplementaria de febrero de 2014 polímeros / anexos QII.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Un conjunto de datos reducida (15 lotes fuera de las anteriores 27, cinco para cada productor) También se incluyen ethoxyquinrelated
sustancias (tales como dímeros etoxiquina y monómeros etoxiquina), la concentración de la cual varió de 0 a 7,7%, como se determina por la
diferencia de 100 de la suma de etoxiquina +
pag- fenetidina + acetona. 12 La fracción de etoxiquina en estos lotes consistía en 88,3 a 100% etoxiquina y el polímero etoxiquina 0-11,7%, con
marcadas diferencias entre los productores (promedio de cinco lotes por productor: 88,8, 95,8 y 99,9% etoxiquina).

Un productor proporcionó datos sobre el contenido de cuatro compuestos (monómeros) -DH-etoxiquina, isoethoxyquin, 2-4-diclorofenoxiacético
ácido (2,4-D) y la impureza X1-en 30 lotes e informó de concentraciones en el intervalo de 0,61-0,82 , 1,26-1,64, 0,45 a 0,89 y 1,18 a 1,52% de
área, respectivamente. 13

Los metales pesados ​y arsénico se midieron en 11 lotes (de tres productores). 14 concentración de arsénico fue <0,1 mg / kg, y las
concentraciones de plomo, mercurio y cadmio fueron <0,05 mg / kg. Las concentraciones de dioxina y la suma de dioxinas y bifenilos
policlorados similares a las dioxinas (PCB) en nueve lotes (de tres productores) fueron <0,26 ng PCDD / F-TEQ / kg y <0,44 ng PCDD / F-PCB
EQT / kg, respectivamente. 15

El solicitante ha desarrollado métodos para reducir la pag- fenetidina contenido de etoxiquina. dieciséis Los resultados, obtenidos mediante
métodos a escala de laboratorio, indican que es posible producir etoxiquina con una pag- concentración fenetidina tan baja como 40 mg / kg
(0,004%).

3.1.2. Estabilidad y homogeneidad

Duracion

Un total de nueve lotes de aditivo (tres lotes cada uno de tres productores diferentes) se almacena en recipientes cerrados a temperatura
ambiente durante períodos variables de almacenamiento. 17 Un lote se almacenó durante 1 año, un total de cuatro lotes (dos productores) se
almacenaron durante 2 años, y los cuatro lotes restantes (dos productores) se almacenaron durante 3 años. Al final de los períodos de
almacenamiento las muestras se analizaron para la concentración de etoxiquina. Los resultados mostraron en todos los casos sin pérdida de
etoxiquina.

La estabilidad en la premezcla y piensos

La estabilidad de los antioxidantes en las premezclas y los piensos no puede demostrarse mediante el análisis de la concentración de estas
sustancias después de un cierto período de almacenamiento, ya que se degradan por su acción. Esto ha sido ampliamente documentado para
etoxiquina, dímero etoxiquina (EQDM) e imina etoxiquina quinona (EQI), que son los principales productos de degradación en la harina de
pescado y alimentación de los peces, y que también presenta actividad antioxidante (véase la sección 3, el modo de acción).

La persistencia del efecto etoxiquina se estudió midiendo su actividad antioxidante en el tiempo (Parrish y Patterson, 1987). La concentración
de vitamina A (de una formulación de gelatina estabilizada) en una premezcla de vitaminas y minerales aves comerciales se usó como un
punto final y se midió después de 1, 3 y 5 meses de almacenamiento. Etoxiquina se añadió en concentraciones de 0, 0,1 y 2,5%. Las
premezclas se almacenaron bajo diferentes condiciones (ambiente: 25-27 ° C, 50-70% de humedad relativa (RH); acelerado: 44 ° C, 70-75%
de humedad relativa).

Las muestras de control y las que contienen 0,1% de etoxiquina mostraron pérdida casi completa de la vitamina A después de 5 meses de
almacenamiento (tasa de recuperación <4% en condiciones ambientales y 0% en condiciones aceleradas). En contraste, en las premezclas
que contienen 2,5% de etoxiquina, la recuperación de la vitamina A después de 3 y 5 meses fue del 56 y 41%, respectivamente, en
condiciones ambientales y 24 y 14%, respectivamente, en condiciones aceleradas.

La persistencia del efecto etoxiquina en un material de alimentación se midió por Kirkland y Fuller (1969), utilizando el índice de yodo como un
punto final para dobles enlaces insaturados. Los autores añaden 0 y 750 mg / kg etoxiquina a una comida de aves de corral subproducto (dos
lotes de producción). El subproducto de aves de corral

12 Información complementario de octubre de 2014 / anexos Qi polímeros 2AII.


13 Información Suplementaria de febrero de 2014 especificaciones / Anexo Qi ETX.
14 Información Suplementaria de octubre de 2014 / anexos Qi ETX metales pesados; Anexos especificaciones Qi ETX.
15 Información de febrero de 2014 especificaciones / anexos Qi ETX complementarios; Anexo QIII ETX dioxinas y los PCB.
dieciséis Información Suplementaria de junio de 2015 / Anexo 01 Modificado conf fabricación; Anexo 02 Informe pag- fenetidina; anexo 03

Método pag- Proyecto de fenetidina.


17 expediente técnico / Sección II / Anexo Annex_II_4_1; Información Complementario de febrero 2015 / anexos Qv ETX Periodo de validez.

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comida producto se almacenó entonces en bolsas de papel multi-pared con revestimiento de polietileno de hasta 12 (un lote) o 24 semanas a
temperatura ambiente. A partir de 4 semanas de tratamiento, las muestras de etoxiquina tratados mostraron índices de yodo consistentemente más
alta que las muestras de control; sin embargo, la diferencia alcanzó significación sólo para un lote a las 12 semanas después del tratamiento (64 vs.
57). Un estudio comparable se llevó a cabo con una alimentación de aves de corral completo que contiene 5% del material de alimentación por
encima, ya sea tratado con etoxiquina (correspondiente a 37,5 mg etoxiquina / kg de pienso) o sin tratar. El uso de las aves de corral tratada
subproducto en la dieta completa (con aceite de maíz añadido 5%) dio como resultado un índice de yodo mayor después de 6 (74 vs. 66) y 10
semanas de almacenamiento (71 vs. 62).

La estabilidad durante la granulación

Etoxiquina se añadió a una alimentación de perro (dos lotes) a concentraciones de 0, 150 y 300 mg etoxiquina / kg (valores analizados: 124 y
250 mg / kg (lote 1) y 125 y 255 mg / kg (lote 2)). 18

recuperación etoxiquina después de la granulación (a 70-75 ° C) fue de aproximadamente 89% y 95% en las dietas suplementadas con 150 y
300 mg / kg, respectivamente.

Homogeneidad

La distribución homogénea de etoxiquina se estudió en el alimento seco para perros. Etoxiquina fue añadido a tres diferentes lotes cada uno a
una concentración de 0, 150 o 300 mg / kg. 19 Los tres lotes se analizaron para la etoxiquina. Los lotes con la misma concentración de
etoxiquina previsto mostraron niveles similares (108, 111 y 108 mg / kg para los lotes con 150 mg etoxiquina añadieron alimentación / kg, y

227, 223 y 230 mg / kg para los lotes con 300 mg etoxiquina añadido / kg de alimentación).

3.1.3. Condiciones de Uso

Etoxiquina está destinado a ser utilizado en la alimentación de todas las especies animales con un contenido máximo de 50 mg / kg de pienso
(la combinación con BHA y / o BHT no debe superar los 150 mg / kg piensos completos). No se propone ningún plazo de espera.

3.2. Modo de acción

3.2.1. In vitro

Se han reportado mecanismos químicos de oxidación etoxiquina (Battjes et al, 1991;. Brannegan,
2000), dando lugar a cuatro compuestos principales, sucesivamente 2,4-dimetil-6-etoxiquinolina, EQI N-óxido, EQI y EQDM. Estos compuestos
fueron identificados (no cuantificada) cuando etoxiquina se puso en presencia de compuestos oxidantes, tales como ter-butilo, metil-linoleato,
harina de pescado y alimentación de los peces (Thorisson, 1992). EQDM y EQI exhiben una actividad antioxidante significativa, representando
el 63% y 44% de la actividad etoxiquina, respectivamente (de Koning y van der Merwe, 1992).

De Koning y van der Merwe (1992) desarrollaron un método analítico basado en cromatografía de gases (GC) para separar e identificar EQ
deriva productos oxidados utilizando compuestos de referencia purificados. Etoxiquina se añadió a cinco harinas de pescado comerciales
preparados a partir de diferentes tipos de pescado en concentraciones de 400 mg / kg en etoxiquina cuatro comidas y 1.000 mg etoxiquina / kg
en una comida; las comidas se almacenaron a 25 ° C durante 1 a 2 años. Después de un almacenamiento de 1 día (dos comidas), la
concentración EQI fue sólo 2 mg / kg, y no se identificó ningún EQDM. se formaron muy pequeñas y variables cantidades de EQI (2-39 mg / kg
de comida), la concentración de los cuales llegó a su máximo después de 59-244 días y luego disminuye progresivamente. Cantidades
mayores de EQDM (hasta 120 mg / kg de comida) se formaron progresivamente y finalmente se estabilizaron después de un almacenamiento
de 1 año;

En un estudio realizado por de Koning (1996), sin tratar comida sardina fresca y comida anchoa fueron cada uno dividido en tres porciones.
Una porción se trató con 400 mg etoxiquina / kg, uno con 400 mg EQI / kg y una con 400 mg EQDM / kg. Todas las porciones se almacenaron
durante 1 año a 25 ° C; El análisis de GC bimestral de la harina de sardina mostró que ni etoxiquina ni EQI era detectable a partir del día 238
en adelante,

18 expediente técnico / Sección II / Annex_III_2_2_5_1_4b


19 expediente técnico / Sección II / Annex_III_2_2_5_1_4b

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mientras que EQDM todavía estaba presente a una dosis de 84 mg / kg (55 mg / kg después de 1 año); análisis de la harina de anchoa después de 1 año
encontraron concentraciones de 253 mg EQDM / kg, 48 mg etoxiquina / kg y 10 mg EQI / kg.

En un estudio por Él y Ackman (2000a), etoxiquina que contiene una cantidad muy pequeña de EQI (0,5%) como se añadió una impureza a la harina de pescado de arenque a una

concentración de 400 mg / kg produjo recién, después se almacenó a temperatura ambiente o 50 ° C durante 4 meses. Determinación de la etoxiquina, EQI y EQDM se llevó a cabo

mensualmente utilizando un método analítico (cromatografía líquida de alto rendimiento, HPLC) limitar la oxidación etoxiquina; No se formó EQI (adicional) o EQDM (límite de detección (LOD)

= 5 mg EQDM / kg) después de un almacenamiento de 2 meses bajo cualquiera de las condiciones; durante el almacenamiento de los 4 meses en la sala de EQI temperatura se mantuvo en

niveles variables bajas (1,5 a 3,7 mg / kg) y la concentración EQDM aumentado a 9 mg / kg, mientras que a 50 ° C EQI se redujo a 1,5 mg / kg y EQDM permaneció indetectable;

concentración etoxiquina disminuyó en aproximadamente un 9% y 48% a temperatura ambiente y 50 ° C, respectivamente. En el mismo estudio, una harina de pescado comercial tratado con

etoxiquina (400 mg / kg) y dos alimentaciones de peces comerciales (FF1 y FF2) que contiene etoxiquina (150 mg / kg) fueron almacenados a temperatura ambiente o a 50 ° C durante 4

meses; durante el almacenamiento de los 4 meses a temperatura ambiente, el contenido de EQI de harina de pescado se redujo de 2,7 a 1,5 mg / kg y la concentración EQDM aumentado de

6 a 12 mg / kg, mientras que en FF1 y FF2 el contenido EQI se redujo de 1/9 hasta 2/4 a desde 0,8 hasta 0,7 mg / kg y las concentraciones EQDM sólo ligeramente aumentó de 14-8 a 17-10

mg / kg; a 50 ° C, EQI disminuyó más rápidamente y EQDM aumentó en menor medida; concentración etoxiquina disminuyó en harina de pescado en alrededor de 10% y 72% a temperatura

ambiente y a 50 ° C, respectivamente, y en FF1 y FF2 en un 4% y 41%, a temperatura ambiente y a 50 ° C, respectivamente. una harina de pescado comercial tratado con etoxiquina (400 mg

/ kg) y dos alimentaciones de peces comerciales (FF1 y FF2) que contiene etoxiquina (150 mg / kg) se almacenaron a temperatura ambiente o a 50 ° C durante 4 meses; durante el

almacenamiento de los 4 meses a temperatura ambiente, el contenido de EQI de harina de pescado se redujo de 2,7 a 1,5 mg / kg y la concentración EQDM aumentado de 6 a 12 mg / kg,

mientras que en FF1 y FF2 el contenido EQI se redujo de 1/9 hasta 2/4 a desde 0,8 hasta 0,7 mg / kg y las concentraciones EQDM sólo ligeramente aumentó de 14-8 a 17-10 mg / kg; a 50 °

C, EQI disminuyó más rápidamente y EQDM aumentó en menor medida; concentración etoxiquina disminuyó en harina de pescado en alrededor de 10% y 72% a temperatura ambiente y a 50

° C, respectivamente, y en FF1 y FF2 en un 4% y 41%, a temperatura ambiente y a 50 ° C, respectivamente. una harina de pescado comercial tratado con etoxiquina (400 mg / kg) y dos

alimentaciones de peces comerciales (FF1 y FF2) que contiene etoxiquina (150 mg / kg) se almacenaron a temperatura ambiente o a 50 ° C durante 4 meses; durante el almacenamiento de

los 4 meses a temperatura ambiente, el contenido de EQI de harina de pescado se redujo de 2,7 a 1,5 mg / kg y la concentración EQDM aumentado de 6 a 12 mg / kg, mientras que en FF1 y FF2 el contenido EQI se red

Estos estudios indican que: (i) EQI puede ser generado durante el almacenamiento de la harina de pescado, (ii) las concentraciones EQDM aumentan
lentamente independientemente de las condiciones de almacenamiento, (iii) etoxiquina se pierde más rápidamente a partir de harinas de pescado que de
alimentos para peces y esta pérdida se incrementa drásticamente en mayor temperatura; y (iv) la suma de EQI más EQDM no explica la disminución
etoxiquina durante el almacenamiento, lo que indica que otros compuestos etoxiquina derivados se pueden formar o que la interacción etoxiquina con los
constituyentes de alimentación pueden tener lugar.

3.2.2. En vivo

Etoxiquina ha demostrado ser muy eficaz en la prevención de la oxidación de lípidos, siendo capaz de recoger un número de especies de
radicales oxidante fuerte (por ejemplo, hidroxilo y radicales peroxilo) que se forman de manera espontánea en los piensos durante ese
proceso. Al hacerlo, puede limitar el consumo de antioxidantes naturales tales como caroteno, xantofilas y vitaminas liposolubles tales como
retinol y tocoferoles. Cabe señalar que también los productos de oxidación / metabolitos de etoxiquina, incluyendo EQI, etoxiquina-nitróxido y
EQDM, también tienen actividad antioxidante (de Koning, 2002).

La actividad antioxidante de etoxiquina se ha demostrado en en vivo condiciones (Tavárez et al.,


2011). La adición de etoxiquina a la dieta ha sido reportado para disminuir los parámetros relacionados con el estrés oxidativo y para aumentar
los niveles séricos de antioxidantes naturales de los peces (Hung et al., 1981) y aves de corral (Wang et al., 1997). A nivel molecular,
etoxiquina es capaz de activar la vía de señalización Nrf2, dando como resultado, principalmente, en un aumento de la transcripción de
enzimas desintoxicantes como cierta glutatión-S-transferasa (GST) isoenzimas o NAD (P) H: quinona oxidorreductasa 1 ( NQO1), sino también
resulta en muchos otros cambios beneficiosos (por ejemplo, un incremento en el glutatión (GSH) síntesis y regeneración) (Kensler y
Wakabayashi, 2010). En general, los efectos anteriores se han asociado en especies experimentales con efectos quimioprotectores etoxiquina
hacia carcinógenos conocidos, lo más notablemente la aflatoxina B1 y dimetil benzantraceno (DMBA) (Ito et un., 1986; Manson et al., 1997;
Bammler et al., 2000). Si bien actuar como agentes quimioprotectores contra carcinógenos modelo en ciertos órganos, etoxiquina puede
aumentar la potencia carcinogénica de algunos carcinógenos (véase la Sección 5.1.1 y el Apéndice A).

La actividad antioxidante de etoxiquina es dependiente de la concentración. En general se acepta que, en común con otros antioxidantes,
puede actuar como un pro-oxidante cuando está presente en altas concentraciones en los piensos. , Debido a su naturaleza reactiva, se cree
que algunos de sus productos de oxidación (por ejemplo, fenoxilo radicales, etoxiquina nitróxido) que es responsable de una serie de efectos
adversos en animales de laboratorio y de destino, y es probable que también participan en la causa de daño genético y celular (Błaszczyk et
al.,
2013). Hepática y el daño renal se informa en los animales expuestos experimentalmente; Se ha informado de daño renal estar relacionado
con varios efectos bioquímicos, incluyendo interferencias con el mitocondrial

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de transporte de electrones y la inhibición de ATPasas y de transporte de aniones y de cationes orgánico renal (Reyes et al., 1995).

3.3. La absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME)

3.3.1. etoxiquina

Mamíferos

Los estudios para determinar el destino metabólico de EQ, realizado en los mamíferos (ratas, ratones, perros) con 14 etoxiquina Clabelled, se
han evaluado previamente (FAO, 1998; EEUU NTP, 1990) y revisado recientemente (Błaszczyk et al, 2013).. Las principales conclusiones son
las siguientes: (i) etoxiquina es rápida y extensamente absorbido tras la administración oral; (Ii) etoxiquina tiene una corta vida media en el
plasma (por ejemplo 23 minutos en ratas); (Iii) cuenta la excreción urinaria y fecal para dos tercios y un tercio de la excreción total,
respectivamente; una excreción biliar extendido se produce; (Iv) después de la administración oral o intravenosa de etoxiquina, cantidades
traza de etoxiquina sin cambios se encuentran en la orina y las heces, mientras que aproximadamente el 30% de la radiactividad administrada
se encuentra en la bilis; y (v) se encuentran residuos totales, con el fin de concentración decreciente ,, en el hígado, el riñón y el tejido adiposo,
con sólo pequeñas cantidades de etoxiquina se encuentran en el músculo. Las vías metabólicas, derivados de los estudios de Burka et al.
(1996), se dan en el Apéndice A y se pueden resumir como sigue: (i) tanto en ratas y ratones O-de-etilación en C-6 parece ser la ruta
metabólica principal, resultando en 6-hidroxi-

2,2,4-trimetil-1,2-dihidroquinolina (6-hidroxi-etoxiquina) como el principal metabolito urinario; cinco metabolitos menores (cuatro ethoxyquins
hidroxilados y un etoxiquina dihidroxilado; hidroxilación en C-8 ha sido inequívocamente demostrado) han sido identificados; aproximadamente
20-40% de los metabolitos urinarios son glucuronizado (la ruta preferida en ratones) o sulfatado (la ruta preferida, en la rata); (Ii) en la bilis,
etoxiquina es un componente menor (˂ 5%) y tres conjugados etoxiquina-GSH han sido aislados, de los cuales dos han sido identificados como
diastereoisómeros en C-4 derivada de la epoxidación en C-3 / C- 4 y uno es el resultado de cualquiera de epoxidación en C-7 / C-8 o la adición
directa de GSH a EQI.

Se realizó un estudio para comparar el destino metabólico de etoxiquina administrado por vía oral a ovejas y ratas (Kim et al., 1992). Etoxiquina
y un metabolito hidroxilado con el mismo espectro de masas se encontraron en la orina de las dos especies. Por otra parte, un metabolito
etoxiquina dihidroxilado estaba presente en la orina de ratas. No se proporcionó la identificación de los metabolitos.

Pez

Tejidos (hígado y músculo) de salmón alimentados durante 12 semanas con las dietas que contienen harina de pescado-suplementadas con
etoxiquina (0, 18, 107 o 1 800 mg / kg) y de salmón salvaje (11-1 800 mg etoxiquina / kg de alimentación) (Bohne et al., 2006, 2007a) se
analizaron para la presencia de los principales productos de degradación de etoxiquina (EQDM, EQI y etoxiquina de-etilado (DEQ)). Un método
de HPLC con detección de fluorescencia se utilizó para separar y cuantificar etoxiquina y compuestos derivados extenderse a aquellos que
presentan características espectrales similares. Etoxiquina, EQDM, DEQ y EQI se identificaron en el hígado y el músculo, EQI está por debajo
del límite de cuantificación (LOQ) en la mayoría de las muestras. En general, 14 compuestos se separaron, que incluye un compuesto no
identificado importante en el músculo. Los autores observaron una correlación entre las concentraciones de etoxiquina, EQDM, DEQ y el
compuesto no identificado en el músculo y la cantidad de Fed etoxiquina. Llegaron a la conclusión de su 'posible origen metabólico'. Es de
destacar que en estos estudios salmón recibió un alimento de control que contiene pequeñas cantidades de etoxiquina (11 mg / kg) y un pienso
suplementado que contiene también EQDM (hasta 8%). EQDM es más lipófilo que la etoxiquina (log P = 7,39 vs. 3,93) y propensos a la
acumulación en los tejidos de ratas (Ørnsrud et al.,

2011), así como pescado. Desde que se usa no isotópicamente etoxiquina marcado en estos estudios, la presencia de EQDM (y EQI a un grado
mucho menor) en los tejidos de las dietas de pescado administrado suplementadas con etoxiquina durante un largo periodo de tiempo no se
puede atribuir exclusivamente a la biotransformación de etoxiquina por los peces .

plantas

Cuando se aplica a la protección de las peras contra hongos después de la cosecha, etoxiquina se metaboliza a un conjunto de metabolitos
diferentes de los encontrados en mamíferos, esencialmente metil-etoxiquina, dihidro-

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etoxiquina y dehidro-desmetil-etoxiquina. cuentas etoxiquina dímero de la más alta cantidad de residuos de etoxiquina en peras
aproximadamente 8 semanas después del tratamiento.

3.3.2. dímero etoxiquina (EQDM)

EQDM se forma durante el almacenamiento de la harina de pescado tratado con etoxiquina (ver sección 3.1) Se ha identificado como un metabolito
de etoxiquina en el pescado, pero no en mamíferos (ver sección 4.1.2).

En el estudio de Ørnsrud et al. (2011) las ratas fueron expuestas por vía oral durante 90 días a EQDM a una dosis de 12,5 mg / kg de peso
corporal por día. La deposición de etoxiquina y EQDM se midió en los tejidos y órganos en el control y los grupos experimentales al final del
estudio. EQDM acumula en el tejido adiposo (53 319 ± 2 824 mg / kg de tejido húmedo) y en menor medida en el hígado (1 096 ± 135 mg / kg)
y riñón (1 483 ± 219 mg / kg). EQDM no se detectó en los tejidos de las ratas en el grupo control. Etoxiquina no se detectó en los tejidos de
ratas en ninguno de los grupos.

En el mismo estudio, se investigó la influencia de EQDM sobre las enzimas P450. Hepática CYP1A1 ARNm se redujo significativamente en las
ratas alimentadas EQDM, y mRNA CYP2B1 hepática se incrementó. EQDM aumento de la expresión Gstpi1 ARNm, pero el nivel de actividad
de esta enzima de fase II se redujo. Los biomarcadores de la función hepática y renal indicaron efectos adversos de EQDM cuando se
alimentaron ratas F344
12,5 mg / kg de peso corporal por día. EQDM produjo respuestas similares a los observados con el compuesto original (etoxiquina).

3.3.3. Etoxiquina quinona imina (EQI)

EQI se forma cuando etoxiquina entra en contacto con los ácidos grasos altamente insaturados de harina de pescado y en mucho menor
medida, alimentos completos (ver sección 3.1). Se ha identificado como un metabolito de etoxiquina en el pescado (Bohne et al, 2007b y 2008)
y es probable que ocurra en ratas y ratones (Burka et al.,
1996). No se dispone de datos sobre el destino metabólico de EQI administrado por vía oral a los animales.

3.3.4. pag- fenetidina

Poco se sabe sobre el destino de pag- fenetidina en animales de laboratorio y en las especies objetivo. Además, la mayor parte de la
información no se deriva de estudios relacionados con el compuesto per se sino como un metabolito principal de su N-acetilada derivado,
fenacetina. Fenacetina es un analgésico bien conocido que ha sido retirado del mercado porque da lugar a la formación de metahemoglobina
(MetHb), insuficiencia renal y actividad carcinogénica renal que ocurre en pacientes que ingieren grandes cantidades de la droga (Grupo 1
carcinógeno, IARC, 2012). Se describen los estudios disponibles en detalle en el Apéndice B, los principales resultados se resumen a
continuación.

reacciones metabólicas implican tanto el grupo ethoxylic (= O · C 2 H 5) y el grupo amino. El primero se somete a un CYP mediada por
O-de-etilación produciendo pag- aminofenol, que normalmente se somete a uridil difosfato (UDP) glucuronidación--glucuronosyltransferase
mediada, los metabolitos resultantes se excretan principalmente por la orina (Büch et al., 1967).

Diferentes vías metabólicas pueden implicar el grupo amino. Una vía es N-glucuronidación; Por lo tanto, la formación de pag- fenetidina
N-glucurónidos se ha documentado en las orinas de conejos dosificados (Smith y Williams, 1949a). Una posibilidad adicional es
acetyltransferases N-terminales dependientes Nacetylation, lo que lleva a la formación de fenacetina (ver arriba), que ha sido detectado en la
orina de los conejos tratados (Smith y Williams, 1949b). El paso crucial en pag- bioactivación fenetidina se considera la oxidación del grupo
amino, dando lugar a N-hydroxyphenetidine (también referido como

pag- hydroxyaminophenetol), un metabolito reactivo que es responsable de el comienzo de


metahemoglobinemia y hemólisis no sólo en ratas administradas este metabolito (Kiese, 1974, citado por Jensen y Jollow, 1991), pero también
en pacientes humanos como consecuencia del abuso crónico de fenacetina (Jensen y Jollow, 1991). Una etapa de oxidación adicional para pag-
nitroso-derivados (por ejemplo, pag-
nitrosophenetol) ha sido reportado en perros (Baader et al., 1960)

In vitro estudios indican que en los tejidos extrahepáticos, incluyendo médula renal y la vejiga urinaria, pag-
bioactivación fenetidina puede estar mediada por la prostaglandina H sintetasa (PGS), con la generación de metabolitos reactivos que se
pueden unir covalentemente las proteínas microsomales riñón (Larsson et al., 1985) y que también muestran propiedades genotóxicas
(Andersson et al., 1982). La ausencia en perros de ambos genes NAT (Trepanier et al., 1998), que representa su incapacidad conocida a
N-acetilada aromático

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aminas (Poirier et al., 1963), podría esperarse para favorecer el oxidativa (bioactivar) vías sobre los conjugativo (desintoxicantes), lo que
aumenta la susceptibilidad de los perros. Un razonamiento similar se aplica también a los gatos, cuyos pobres acetilante capacidad, causada
por la expresión en los gatos del gen NAT-1 solamente, se acopla con su incapacidad para glucuronidar sustratos aromáticos más
estructuralmente relacionadas (por ejemplo, fenacetina o acetaminofeno), debido a la falta del gen UGT-1A6 (Corte, 2013).

3.4. perfil toxicológico

3.4.1. sustancias etoxiquina y afines

etoxiquina

Etoxiquina ha sido probado en muchos estudios toxicológicos, que se describen en detalles en el Apéndice
A. Los informes completos no estaban disponibles para todos los estudios y en tales casos la Comisión FEEDAP utilizan los resúmenes
preparados por otros comités (FAO, 1969; FAO 1998; FAO, 2005; US EPA, 2004; Alemania, 2007) que tenían acceso a los informes. Varios de
los estudios investigaron los efectos de una sola dosis de etoxiquina en la modificación de la toxicidad de otras sustancias y como tal eran de
uso limitado para la identificación de un nivel seguro de exposición a la etoxiquina. De los que investigan la toxicidad de etoxiquina

per se, algunos no se llevaron a cabo con los protocolos adecuados para los estándares de hoy en día. Sin embargo suficientes estudios aceptables estaban
disponibles para permitir que el panel FEEDAP para identificar de forma fiable los niveles de dosis que pueden causar toxicidad en animales de laboratorio y los
niveles de dosis que produzcan efectos adversos. Los estudios toxicológicos más relevantes se resumen a continuación.

Etoxiquina fue ligeramente tóxico para las ratas en estudios orales agudos con LD-dosis única 50 valores de 1.657 a 2.040 mg / kg de peso corporal siendo
reportados, y autopsias revelando efectos adversos en varios órganos incluyendo el hígado, los pulmones y el tracto gastrointestinal. Una dosis de 500 mg / kg de
peso corporal causada degeneración de los hepatocitos en ratas. En perros que recibieron 50 mg / kg de peso corporal o más había estasis biliar en todos los
niveles de dosis en los hombres y en 100 mg / kg de peso corporal o más en las mujeres.

En estudios de toxicidad oral subcrónica en ratas y perros, los órganos más comúnmente afectados fueron el hígado y los riñones en los que se
observaron cambios patológicos que conducen a necrosis. Sobre la base de la dosis más baja asociada con necrosis hepatocelular (4 mg / kg de peso
corporal por día) en un estudio de 90 días en perros beagle, el nivel sin efecto adverso observado (NOAEL) fue establecido a 2 mg / kg de peso corporal
/ día. En ratas, los cambios en los riñones (nefropatía tubular y necrosis papilar) se observaron en ambos sexos a dosis de 200 mg / kg de peso corporal
por día o superior; y lesiones histopatológicas en el hígado, los pulmones, el estómago y el bazo también fueron vistos con dosis más altas. En un
estudio de ratas de 90 días, tiroides enrojecidas o ampliada (a 200 mg / kg de peso corporal por día o mayor) y de manera incompatible alterados los
niveles sanguíneos de hormonas asociadas se encontraron a una dosis de 40 mg / kg de peso corporal por día (elevados de hormona estimulante de la
tiroides (TSH) fue el único efecto a esta dosis). El NOAEL más bajo identificado para las ratas fue de 20 mg / día kg de peso corporal por basado en
disminución en el peso corporal.

Cuando se administró a ratas etoxiquina en los estudios de toxicidad oral crónica de duración de 20 a 102 semanas, se registraron lesiones en el
hígado riñones y la tiroides. Las lesiones renales (principalmente hiperplasia del epitelio de transición de la pelvis, y la degeneración intersticial o
necrosis de la papila) se observaron en los hombres, pero no estaban asociados con ningún efecto sobre las concentraciones α2u-globulina
urinario. En las mujeres, los efectos en los riñones fueron menos severas, con el aumento de los pesos y la deposición de lipofuscina en los
túbulos renales, pero limitan otras pruebas de toxicidad renal a dosis que causaron toxicidad renal en los hombres. Etoxiquina apareció a
exacerbar espontánea nefropatía crónica progresiva (CPN) en ratas macho y en menor medida en las mujeres. hiperplasia túbulo
preneoplásicas se observó en algunas ratas con etapas pielonefritis o avanzadas de la CPN, pero no parecen ser causados ​directamente por la
etoxiquina. El NOAEL más bajo informado en ninguno de los estudios de ratas fue de 6,25 mg / kg de peso corporal por día basado en el
aumento de peso de hígado y riñones a 12,5 mg / kg de peso corporal por día.

La toxicidad crónica de etoxiquina se ha investigado en tres estudios con perros de duración aproximadamente 1 año y en un estudio de perro
de 5 años. El estudio de 5 años no se realizó e informó a los estándares modernos, usando solamente un nivel de dosis, pero sin embargo
investigó hematológica, bioquímica clínica y la histopatología. Los resultados no mostraron efectos adversos a una concentración en la dieta de
300 ppm (equivalente a 15 mg / kg de peso corporal por día). Uno de los estudios de 1 año no se llevó a cabo a las normas modernas y sus
resultados eran imposibles de interpretar en relación con los efectos de etoxiquina porque los perros sufrían una infección por Histoplasma
capsulatum, lo que causó lesiones en el hígado y los riñones.

www.efsa.europa.eu/efsajournal 13 EFSA Journal 2015; 13 (11): 4272


Etoxiquina para todas las especies animales

Uno de los otros estudios en perros de un año no mostraron efectos en cualquier dosis ensayada (0,9 a 3,6 mg / kg de peso corporal por día),
distintos de una presencia rastro de un pigmento anisotrópico en las células de Kupffer del hígado en una de cuatro machos dado 3,6 mg / kg de
peso corporal por día. Este efecto no fue considerado como adversa y no se observó en las mujeres (nivel de efecto no observado (NOEL) = 1,8 mg
/ kg de peso corporal por día; NOAEL = 3,6 y 2,7 ​mg / kg de peso corporal por día para mujeres y hombres, respectivamente). El estudio restante
1-año utiliza niveles de dosis más altas (3 a 100 mg / kg de dieta), pero los tamaños de los grupos eran pequeños (tres perros, ambos sexos).
hígados de color oscuro y la función hepática reducida, medido por bromsulpthalein tiempo de retención, se observaron a concentraciones dietéticas
de 10 mg / kg de dieta o mayor, y estos resultados se asociaron con degeneración y graso cambio en los hepatocitos. Los mismos grupos de
animales también mostraron hinchazón y cambios histológicos a los riñones, que se caracteriza por la granulación de las células de los túbulos
colectores y la acumulación de grasa. A NOAEL de 28 mg / kg de peso corporal por día se informó para este estudio.

No se han realizado estudios de carcinogenicidad dedicados en ratas o perros. Varios estudios de los efectos de la etoxiquina sobre la
toxicidad de otras sustancias (en su mayoría inductores de cáncer potentes) en sistemas de órganos específicos utilizados un grupo control de
ratas que recibieron etoxiquina (típicamente 0,8% en la dieta, lo que equivale a 720 mg / kg de peso corporal por día) para aproximadamente
30 semanas. Estos grupos de control no mostraron evidencia de carcinogenicidad en el hígado, los riñones, el esófago, partes delanteras
estómago, conducto del oído, de las glándulas mamarias o de la vejiga urinaria. Cuando se coadministra con promotores del cáncer, etoxiquina
reducido la prevalencia de los tumores inducidos en algunos sitios (delantera-estómago, glándulas mamarias, hígado), el aumento de la
prevalencia en otros sitios (esófago, estómago glandular, colon descendente, riñones) y no tuvo efecto sobre la prevalencia en otros sitios (el
ciego, regiones no descendente del colon, pulmones). NORTE-

butilo- NORTE-( 4-hidroxibutil) nitrosamina (BBN), pero 0,8% (720 mg / kg por día de peso corporal) aumentaron el número de tumores benignos
y la hiperplasia sin aumentar el número de tumores malignos. Así, mientras que parece que la etoxiquina no es cancerígeno en sí mismo,
puede aumentar o reducir la potencia carcinogénica de algunos agentes carcinógenos.

Toxicidad para la reproducción se ha investigado en una serie de estudios, incluyendo multi-generación y estudios de desarrollo que se realizaron
en ratas, conejos y perros. El tratamiento oral de ratas con etoxiquina no causó ninguna toxicidad para el desarrollo, pero no hubo efectos sobre
otros aspectos de la toxicología reproducción, incluyendo la fertilidad, el tamaño de camada, número de mortinatos y supervivencia de las crías al
destete. El NOAEL más bajo a partir de los estudios de reproducción en ratas fue de 11 mg kg de peso corporal por día /. Un estudio de
reproducción de dos generaciones en perros usan sólo dos niveles de dosis orales: 2,5 y 6 mg kg de peso corporal por día /. parámetros de
reproducción no se vieron afectados por los tratamientos, pero no había una deposición de pigmento (protoporfirina

IX) en hepatocitos periportal y células de Kupffer en el hígado de las hembras parentales en ambos niveles de dosis. La deposición de pigmento
no se consideraba como un efecto adverso en sí mismo. alanina aminotransferasa sérica se elevó en ambos sexos de los perros de los padres a
6 mg / kg de peso corporal por día, y la fosfatasa alcalina en el suero también se planteó en puntos de tiempo ocasionales en los padres y F 1- perros
generación en el mismo grupo de dosis. El NOAEL de los padres y descendencia para este estudio fue de 2,5 mg / kg de peso corporal por día,
en base a estos efectos.

Etoxiquina fue probado en varios in vitro y en vivo estudios de genotoxicidad (descritos en detalle en el Apéndice A). Los resultados negativos
fueron reportados en un ensayo de mutación inversa en bacterias, mientras que la sustancia era positivo en un ensayo de mutación de genes
en L5178Y prueba de células de linfoma de ratón y en un ensayo de aberraciones cromosómicas en células de ovario de hámster chino (CHO).
se informó dependientes de la dosis pero estadísticamente no significativas aumentos en las aberraciones cromosómicas también en cultivos
de linfocitos humanos. Por otra parte, la sustancia y su dímero (ver abajo) fueron positivos en una in vitro ensayo cometa en linfocitos humanos
cultivados

Por otro lado, etoxiquina fue negativo en dos por vía oral en vivo estudios. Sin embargo, los resultados negativos reportados en un estudio de
micronúcleos en médula ósea de ratón no serían concluyentes debido a que, en ausencia de toxicidad local en la médula ósea, no se
proporcionó ninguna evidencia de la exposición de destino. Sin embargo, etoxiquina también fue negativo en un ensayo de síntesis de ADN no
programada (UDS) en hepatocitos de ratas tratadas en vivo, en el que la presencia de toxicidad sistémica claro garantiza la exposición de las
células diana.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Etoxiquina de quinona

El análisis de la estructura-actividad realizada en EQI por el cuantitativo relación estructura-actividad de la OCDE (QSAR) caja de herramientas
reveló alertas estructurales para la formación de especies reactivas de oxígeno y para mutagenicidad, carcinogenicidad y de ADN fijaciones.

El solicitante presentó dos in vitro estudios de mutagenicidad con EQI (Apéndice C). El ensayo de mutación inversa en bacterias se dio
resultados negativos. 20 En el in vitro ensayo de micronúcleos con EQI bloque citocinesis inducida por un dependiente de la dosis,
estadísticamente significativo, aumento en el número de células mono- y binucleadas con micronúcleos, tanto en ausencia y en presencia de
activación metabólica. 21

Los autores del estudio observaron que la presencia de micronúcleos en células mononucleadas sugiere que el elemento de prueba podría ser
considerado aneugénico. Sin embargo, mientras que una contribución de aneuploidía a la evidente aumento de micronúcleos es plausible, en la
ausencia del análisis de los micronúcleos por fluorescencia en el lugar hibridación (FISH), no es posible excluir la posibilidad de que, además de
un potencial aneugénico probable es que el elemento de prueba puede también ser clastogénico.

dímeros etoxiquina

El dímero formado por la combinación de dos moléculas de etoxiquina (EQDM) y el dímero formado por la combinación de etoxiquina y su
derivado 2,2,4-trimetylquinolin-6- (2H) -ona quinolona (EQQI) se investigó en una in vitro ensayo cometa en linfocitos humanos (Augustyniak et
al. 2012). Las células se trataron durante 1 hora con EQDM o EQQI a dosis que van desde 0,125 M a 100? M, sólo en ausencia de activación
metabólica, y se usaron directamente en un análisis Comet. Sólo se usó un tiempo de muestreo. EQDM indujo un aumento significativo en el
porcentaje de ADN en colas de los cometas en dosis de 0,5 M o más, mientras que se observó citotoxicidad (como se evaluó mediante el
ensayo de exclusión de azul de tripano) sólo a 100? M. EQQI mostró un efecto genotóxico significativo a dosis de 0,5? M y por encima y era
citotóxico a dosis de 1,0 M o superior. El peróxido de hidrógeno utilizado como control positivo realizado como se esperaba.

La aplicación de la OCDE QSAR caja de herramientas para EQDM mostró ninguna alerta estructural para la genotoxicidad, mientras que el perfil de QSAR
EQQI refleja las alertas estructurales del monómero EQI.

3.4.2. pag- fenetidina

De acuerdo con la OCDE (1994) Screening conjunto de información (SIDS) Datos de informe, la LD oral, 50 de pag-
fenetidina en ratas y ratones es de 580 mg / kg de peso corporal y 530 mg / kg de peso corporal, respectivamente, mientras que para los
conejos / kg de peso corporal se pudo establecer un valor de 7 000 mg. Un estudio de toxicidad de dosis repetidas de 28 días se llevó a cabo
en ratas F344 de cualquier sexo (n = 5) e informó sólo como resumen (Sato et al., 1991). los animales se les administró pag- fenetidina (disuelto
en aceite de oliva) por sonda oral a dosis de 0 (control), 10, 40, o 160 mg kg de peso corporal por día / durante 28 días. Dos grupos
adicionales, o bien no tratados o tratados con la dosis más alta, se sacrificaron 14 días después de la retirada del tratamiento. No se
observaron diferencias de género en la respuesta tóxica. MetHb se detectó solamente en la dosis más alta (160 mg / kg de peso corporal por
día). se observó una reducción en el número de eritrocitos, y aumento del número de reticulocitos, un aumento en los niveles urinarios de
urobilinógeno, aumento en el peso del bazo, hematopoyesis extramedular y hemosiderosis, así como la hiperplasia mieloide en ambos sexos
en el grupo tratado con 40 y 160 mg / kg de peso corporal por día. Tales lesiones ya no se detectaron en los animales se dejaron recuperar
durante 14 días. Basado en los hallazgos anteriores un NOAEL de 10 mg pag- fenetidina / kg de peso corporal por día se pudo establecer.

Efectos en la reproducción se evaluaron en un estudio no publicado Buenas Prácticas de Laboratorio (GLP) se describe en un informe SIDS de
la OCDE (1994). dosis fenetidina de 0 (aceite vehículo maíz), 3, 12, 50 y 200 mg / kg de peso corporal por día se administraron por sonda oral
a las ratas macho durante 42 días y desde el 14 º

días antes del apareamiento hasta el día 3 de lactancia para las ratas hembra. índice Cópula y el índice de fertilidad no se vieron afectados en ningún nivel de
dosis. Todas las presas en el grupo de día 200 mg / kg de peso corporal por murieron en los días 23 a 25 del embarazo. Una disminución en el índice de
gestación se observó en los grupos administrados 50 y 200 mg pag- fenetidina / kg de peso corporal por día. Una disminución en el índice de supervivencia se
observó en el F 1 descendencia con un NOAEL calculado para este efecto de 50 mg pag- fenetidina / kg de peso corporal por día. El NOAEL para este estudio fue
12 mg / día kg de peso corporal por, basado en la disminución de índice de gestación en 50 mg / kg de peso corporal por día o más (OCDE,

1994).

20 Información Suplementaria de julio de 2015 / Anexo 05


21 Información Suplementaria de julio de 2015 / Anexo 06

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Etoxiquina para todas las especies animales

formación MetHb fue investigado en perros de diferentes edades después de una sola exposición a pag- fenetidina (12 mg / kg de peso
corporal). Animales de más edad de 1 año eran mucho más sensibles (aproximadamente diez veces mayor aumento en MetHb) que los
mayores de 3-4 meses; el pico MetHb se alcanzó 2 horas después de la dosificación y no se observaron diferencias entre oral (sonda) y (iv) la
administración intravenosa (Baader et al.,
1960). En gatos tratados una vez iv con 8,57 mg fenetidina / kg de peso corporal, el pico de la formación de MetHb (47%) también se produjo 2 horas después
de la dosificación (McLean et al., 1969).

En dos estudios de toxicidad inhalación repetida, grupos de 10 ratas por sexo fueron expuestos sólo para la nariz en vapor y / o atmósferas de
aerosol de pag- fenetidina en concentraciones analíticas medias de 38,2, 133,0 o 1247,6 mg / m 3 durante 6 horas / día durante 5 días, y de 11,1,
86,2 o 882,6 mg pag- fenetidina / m 3 durante 6 horas / día, 5 días / semana, durante 4 semanas. Basado en la erythrocytotoxicity que ocurre en
86,2 mg / m3 y por encima, incluyendo los cambios reactivos aparentes en la médula ósea (aumento de la eritropoyesis) y el bazo (aumento
erythroclasia), el NOAEL en el estudio de 1 semana fue 38,2 mg / m 3 de aire y el NOAEL en el estudio 4 semanas fue de 11,1 mg / m 3.

pag- Fenetidina es una amina aromática primaria. En la actualidad se clasifica por el Reglamento (CE) nº 1272/2008 como una 'sustancia que causa
al ser humano debido a la posibilidad de que pueda inducir mutaciones hereditarias en las células germinales humanas' (mutagenicidad en células
germinales:. Muta 2). El análisis de la OCDE QSAR Caja de herramientas mostró alertas estructurales para la unión de ADN, in vitro mutagenicidad
(prueba de Ames), en vivo
mutagenicidad (micronúcleos) y carcinogenicidad, como se esperaba para una amina aromática primaria.

Varios estudios de genotoxicidad, tanto in vitro y en vivo, están disponibles (descrito en detalles en el Apéndice B). En resumen, la sustancia fue
positiva para el efecto de mutagenicidad cepa de Salmonella
culturas TA100 con la mezcla S9, mientras que los resultados equívocos se informaron sin S9 y en la cepa TA98 solamente con S9. Por el
contrario, en otro estudio bacteriana (Nohmi, 1985), pag- fenetidina fue positiva sólo en ausencia de activación metabólica. Los resultados
positivos de mutagenicidad obtenido en células de hámster chino CHL se mencionan en el informe de la OCDE (1994) SMSL. Un en vivo ensayo
de micronúcleos en médula ósea de ratón mostró resultados positivos en las mujeres después de la administración oral de la dosis más alta.

3.4.3. Conclusiones sobre la toxicidad oral de la etoxiquina aditivo

Tomados en su conjunto, los resultados toxicológicos indican que la etoxiquina en sí no es cancerígeno y genotóxico, y no causa toxicidad para
el desarrollo de las crías. El NOAEL más bajo observado en los estudios disponibles en ratas y perros es 2 mg / kg de peso corporal por día.

Etoxiquina mostró resultados positivos en algunos in vitro estudios sobre células de mamífero cultivadas; Sin embargo, estos resultados no fueron
confirmados en vivo, en particular, en un estudio UDS en hepatocitos de rata en el que la presencia de una toxicidad sistémica claro refleja la
exposición de las células diana. Los resultados positivos reportados solamente in vitro son probablemente debido a la actividad pro-oxidante del
antioxidante que se produce en virtud de
in vitro condiciones experimentales. La Comisión FEEDAP concluye que la etoxiquina en sí no es genotóxico. El perfil toxicológico de los
dímeros etoxiquina se considera que refleja la del monómero precursor.

EQI mostró alertas estructurales para la formación de especies reactivas de oxígeno y para la mutagenicidad, carcinogenicidad y de unión a
ADN. EQI fue negativo en un ensayo de mutación inversa bacteriana, pero en una in vitro ensayo de micronúcleos que aumentos
estadísticamente significativos en el número de células mono- y binucleadas con micronúcleos dependiente de la dosis inducida. A pesar de
una contribución de aneuploidía a la inducción de micronúcleos es plausible, la posibilidad de que EQI también podría ser clastogénico no se
puede excluir. En consecuencia, el Panel FEEDAP no está en una posición para concluir en la ausencia de genotoxicidad de EQI.

En vista de los datos limitados, un NOAEL global para pag- fenetidina no puede ser identificado. pag- Fenetidina es una posible mutágeno.

3.5. La seguridad

3.5.1. Seguridad para las especies objetivo

Teniendo en cuenta que el aditivo contiene etoxiquina pag- fenetidina, una posible mutágeno, ninguna conclusión en cualquier nivel seguro en la
alimentación se puede hacer para animales objetivo, en particular para los alimentados con el aditivo durante toda su vida, tales como perros y gatos y
animales de reproducción.

www.efsa.europa.eu/efsajournal dieciséis EFSA Journal 2015; 13 (11): 4272


Etoxiquina para todas las especies animales

Las siguientes consideraciones sobre los niveles potencialmente seguras de etoxiquina para animales objetivo se basan en un estudio de tolerancia en los
lechones, un estudio cerca de tolerancia en el salmón del Atlántico, otros dos estudios de pescado, una revisión de la literatura en aves de corral, y los estudios de
toxicidad en los perros.

Ninguno de estos estudios con etoxiquina fue calificado por el diseño y el propósito de examinar el efecto de
pag- fenetidina en la salud y el bienestar de los animales diana. En consecuencia, las conclusiones sobre los niveles potencialmente seguras de
etoxiquina están sujetos a la reserva de que los efectos de la posible mutágeno pag-
fenetidina no se tuviera en cuenta.

Seguridad para los pollos de engorde y los criadores

No se proporcionaron los estudios de tolerancia específicos. El solicitante presentó lugar una revisión de expertos en experimentos seleccionados de
la literatura en la que los pollos y los criadores fueron alimentados con diferentes niveles de etoxiquina en la dieta (ninguno de los estudios incluyó el
nivel de uso propuesto).

Gassner et al. (1960) estudiaron la toxicidad de etoxiquina en pollos jóvenes en crecimiento (White Leghorn) de cuatro días de edad hasta las 12 semanas de edad (dosis etoxiquina: 0,

7.5,15, 30, 75 (1,5 × el contenido máximo propuesto), 750 ( 12,5 ×) mg / kg), así como en las gallinas reproductoras de 1 día a 70 semanas de edad (dosis etoxiquina: 0, 75, 750 mg / kg de

pienso). Estos estudios utilizaron dietas nutricionalmente adecuados, e investigaron la salud animal en un número adecuado de aves individuales (por ejemplo, 70 aves por grupo de

tratamiento en el estudio de pollo de 12 semanas). En el estudio de pollo, no se observaron diferencias en la mortalidad. El peso más alto de 6 semanas se observó en el grupo control, pero

no hubo diferencias significativas entre los grupos; ni hubo ninguna diferencia en el peso corporal a las 12 semanas. Sin embargo, se logró la mejor alimentación para ganar proporción en el

grupo de control (3,32), la ración en los grupos de etoxiquina que van desde 3,56 hasta 3,70 (P> 0,05). Otros estudios de toxicidad crónica en gallinas reproductoras no mostraron ningún

efecto significativo de etoxiquina al 7,5, 75 o 750 mg / kg de alimento en cualquier factores estudiados incluyendo el crecimiento, consumo de alimento, la habitabilidad, la producción de

huevos, la fertilidad de los huevos, la capacidad de eclosión de los huevos y el crecimiento y habitabilidad de progenie. El examen histológico de hígado, bazo, riñón, ovario, oviducto, y la

tiroides de las gallinas reproductoras no mostró cambios que se correlacionaban con el tratamiento. Los estudios sobre la fertilidad masculina no fueron concluyentes, probablemente debido

al número relativamente pequeño de los machos utilizados. el consumo de alimento, la habitabilidad, la producción de huevos, la fertilidad de los huevos, la capacidad de eclosión de los

huevos y el crecimiento y la habitabilidad de la progenie. El examen histológico de hígado, bazo, riñón, ovario, oviducto, y la tiroides de las gallinas reproductoras no mostró cambios que se

correlacionaban con el tratamiento. Los estudios sobre la fertilidad masculina no fueron concluyentes, probablemente debido al número relativamente pequeño de los machos utilizados. el

consumo de alimento, la habitabilidad, la producción de huevos, la fertilidad de los huevos, la capacidad de eclosión de los huevos y el crecimiento y la habitabilidad de la progenie. El examen

histológico de hígado, bazo, riñón, ovario, oviducto, y la tiroides de las gallinas reproductoras no mostró cambios que se correlacionaban con el tratamiento. Los estudios sobre la fertilidad

masculina no fueron concluyentes, probablemente debido al número relativamente pequeño de los machos utilizados.

Un estudio de 50 semanas determinado si etoxiquina (750 mg / kg de pienso hasta la semana 38, 3000 mg / kg de pienso para semana 38 a 50) fue tan
eficaz como la vitamina E en la restauración o el mantenimiento de la fertilidad en aves de corral macho alimentados con una dieta baja basal en vitamina
e y altas en ácido linoleico (Kuhns y Arscott, 1.969). Adulto de un solo peine White Leghorn machos (n = 42) se les administró varios tratamientos
experimentales para un período de 50 semanas. La dieta basal se basa en el maíz, harina de soja y aceite de cártamo. En ausencia de la vitamina E y la
concentración de la fertilidad y el esperma etoxiquina se redujeron; tanto las dosis de etoxiquina o vitamina E alimentados después de 38 semanas de
vitamina E agotamiento restaurado concentración fertilidad y semen a valores comparables a los machos alimentadas con vitamina E o etoxiquina
continuamente; las dosis más bajas de vitamina E (32 mg / kg de alimentación) o etoxiquina mantienen la fertilidad y la concentración de
espermatozoides durante el experimento de 50 semanas; y no se observaron diferencias estadísticamente significativas en el volumen de semen, la
capacidad de eclosión de los huevos fértiles, consumo de alimento, peso corporal o espermatozoides muertos.

Los estudios realizados por Bailey et al. (1996) en los pollos jóvenes de un día de edad a 6 u 8 semanas de edad utilizados hasta 1000 mg / etoxiquina kg
en dietas nutricionalmente adecuados, y se han encontrado signos de toxicidad en cualquier salud o parámetro de rendimiento excepto peso relativo del
hígado significativamente mayor en el grupos que recibieron / kg de alimentación de 1,000 mg etoxiquina en el segundo estudio (8 semanas). Los pesos
del hígado relativos fueron 2,8%,
2,7%, 2,6% y 3,1%, en los grupos que recibieron 0, 125, 500 y 1 000 mg etoxiquina / kg de alimento.

Los estudios de Cabel et al. (1988) y Dibner et al. (1996) demostraron los beneficios de etoxiquina (de hasta 125 mg / kg de alimentación) en la
mejora de los rendimientos zootécnicos en pollos alimentados con dietas que contienen grasa oxidada.

La influencia de la dieta sobre la toxicidad de etoxiquina en los pollos se estudió en marzo et al. (1968). La toxicidad de etoxiquina fue significativamente mayor
en pollos alimentados con una dieta que era baja en proteínas. Etoxiquina a 2500 mg / kg de alimento alimentado desde 4 a 9 semanas de edad no deprimir el
crecimiento en pollos alimentados con una dieta basal que contiene 20% de proteína, pero hizo crecimiento reprimir en pollos alimentados con una dieta que
contiene 18% de proteínas y aceite de cártamo 8%. Etoxiquina a 250 mg / kg de alimento no afectó el crecimiento polluelo adversamente cuando se añade a
cualquiera de los piensos. En experimentos adicionales, la densidad de energía de las dietas basales se varió por adición de diferentes niveles y fuentes de
grasa de la dieta. Etoxiquina a 2 500 mg / kg de crecimiento deprimido alimentación en pollos en 3,5 semanas de edad cuando alimentados con dietas que
contienen proteína 19,3% y ácido oleico 8% o aceite de cártamo. Esta

www.efsa.europa.eu/efsajournal 17 EFSA Journal 2015; 13 (11): 4272


Etoxiquina para todas las especies animales

efecto no se observó en los pollos dietas que contienen proteína de 21% y 5% de sebo alimentados, o en pollos alimentados con estas tres dietas que contienen piensos sólo 500 mg

etoxiquina / kg. En otro experimento, etoxiquina a 2 500 mg / kg de pienso crecimiento deprimido por 4,5 semanas de edad en pollos alimentados con dietas basales que contienen 21% de

proteína y la dieta basal que contiene 10% de aceite de cártamo, aceite de soja 10% o 10% de manteca de cerdo. Este efecto no se observó en los pollos alimentados con estas dietas que

contienen sólo 250 mg etoxiquina / kg de alimento. En un experimento adicional, etoxiquina a 2 500 o 1 250 mg / kg de crecimiento deprimido alimentación en pollos por 4 semanas de edad.

Los polluelos habían sido alimentados con dietas containing17 o 23% de proteína, con o sin 10% de manteca de cerdo. En el último experimento, etoxiquina a 2 500 mg / crecimiento

deprimido kg de pienso y alimentar a la ganancia de relación en pollos de 3 semanas de edad. Los polluelos habían sido alimentados con dietas que contienen 17, 21 o 23% de proteínas y

10% de dextrosa o un 10% de manteca de cerdo. En estos estudios etoxiquina no afectó negativamente al rendimiento de los pollos jóvenes cuando se añade a alimentar a dosis de hasta

500 mg / kg. Cuando la administración de suplementos de grasa de la dieta mejorada toxicidad etoxiquina, el efecto pareció ser el resultado de un aumento en la proporción de energía a la

proteína de la dieta en lugar de desde la propia grasa. La concentración de etoxiquina en el hígado de pollos alimentados 2 500 mg etoxiquina / kg de alimentación durante 6 semanas fue

significativamente mayor cuando el nivel dietético de proteína fue del 17% que cuando el nivel era 23%. el efecto parece ser el resultado de un aumento en la proporción de energía a la

proteína de la dieta en lugar de la propia grasa. La concentración de etoxiquina en el hígado de pollos alimentados 2 500 mg etoxiquina / kg de alimentación durante 6 semanas fue

significativamente mayor cuando el nivel dietético de proteína fue del 17% que cuando el nivel era 23%. el efecto parece ser el resultado de un aumento en la proporción de energía a la

proteína de la dieta en lugar de la propia grasa. La concentración de etoxiquina en el hígado de pollos alimentados 2 500 mg etoxiquina / kg de alimentación durante 6 semanas fue

significativamente mayor cuando el nivel dietético de proteína fue del 17% que cuando el nivel era 23%.

Ohshima et al. (1996) evaluaron el uso de extracto de hojas de alfalfa tratada con diferentes concentraciones de etoxiquina, y se añadió a las dietas basales para dar concentraciones diana

de 0, 50, 125, 350, 600 o 1 400 mg etoxiquina / kg de pienso. Las dietas basales eran isoenergética, y contenían 12% de proteína cruda (PC), suplementado con aminoácidos y otros

nutrientes para satisfacer los requisitos de jóvenes de un solo peine polluelos White Leghorn. Ocho pollitos de 1 semana de edad fueron asignados a cada uno de los seis tratamientos

durante un período de 2 semanas. En el día 21, se midieron la ganancia de peso y el consumo de alimento de los pollitos, y la ganancia para alimentar relación calculada. Al final del estudio,

los pollos fueron sacrificados para recoger muestras de sangre, el hígado, la piel del pecho, y las piernas. Durante el período experimental corto, no hay diferencias significativas en el

crecimiento, el peso corporal final, ganan para alimentar relación, peso del hígado, se detectaron en relación peso del hígado, el hematocrito o la web toe pigmentación entre las aves con

referencia negativa y las aves tratadas con etoxiquina. En comparación con el grupo de control negativo, el rendimiento chick aumentarse hasta 125 mg etoxiquina / kg de alimento, y después

disminuyó. las concentraciones en plasma sanguíneo de colesterol total, lipoproteína de alta densidad (HDL) colesterol (LDL) colesterol y lipoproteínas de baja densidad fueron más bajas en

los animales alimentados 50 y 125 mg etoxiquina / kg de dieta. El LDL a la proporción de colesterol total tiende a ser mayor con el aumento de etoxiquina dietética. las concentraciones en

plasma sanguíneo de colesterol total, lipoproteína de alta densidad (HDL) colesterol (LDL) colesterol y lipoproteínas de baja densidad fueron más bajas en los animales alimentados 50 y 125

mg etoxiquina / kg de dieta. El LDL a la proporción de colesterol total tiende a ser mayor con el aumento de etoxiquina dietética. las concentraciones en plasma sanguíneo de colesterol total,

lipoproteína de alta densidad (HDL) colesterol (LDL) colesterol y lipoproteínas de baja densidad fueron más bajas en los animales alimentados 50 y 125 mg etoxiquina / kg de dieta. El LDL a

la proporción de colesterol total tiende a ser mayor con el aumento de etoxiquina dietética.

Una empresa de engorde comercial experimentó un aumento repentino de la mortalidad en los cuatro rebaños en dos lugares separados
(Leong y Brown, 1992). viviendas afectadas tenían polvo rojo en las paredes interiores y en el equipo. pollos afectados fueron de 10 a 18 días
de edad. examen patológico bruto reveló, riñones inflamados pálidos, hígados y uratos ampliadas de color marrón oscuro en los espacios
articulares. El examen histológico mostró necrosis tubular proximal multifocal en los riñones, sinusoides dilatados en los hígados, hiperplasia
biliar y la acumulación de pigmento marrón en los hepatocitos y conductos biliares. Una ración de arranque se analizó y se encontró que
contenía 6 500 mg etoxiquina / kg. Los signos clínicos y lesiones histológicas fueron reproducidos experimentalmente con 12 500 mg
etoxiquina / kg de alimento.

Seguridad para los cerdos

Un total de 96 lechones (Piétrain x (Landrace × Duroc)) fueron asignados a dos por la pluma a un total de 48 corrales. El tamaño del grupo fue
de 12 (repeticiones) × 2 (por corral) lechones. 22 Se alimentaron cerdos, después de un período de adaptación de 8 días (inicial de peso
corporal: 9,3 kg), una dieta basal suplementada con 0, 150 (3 ×), 750 (12,5 ×) o 1500 (30 ×) mg etoxiquina / kg, para 6 semanas. El artículo de
prueba (Capsoquin N) contenía 66,6% de etoxiquina. Se alimentó, probablemente por día 1-14, seguido por una dieta de iniciación (cebada,
soja; Una dieta prestarter (20,6% CP y 14,0 MJ de energía metabolizable (ME) / kg de cebada, soja, harina de pescado, polvo de suero de
leche); 18,7% CP y 13,8 MJ de energía metabolizable (ME) / kg) hasta la finalización del estudio. Las concentraciones de etoxiquina analizados
en las dietas suplementadas eran 107, 640 y 1137 mg / kg y prestarter

118, 565 y 1129 mg / kg de arranque, respectivamente. El peso corporal y el consumo de alimento se midieron en intervalos bisemanales y se
alimentan a ganar relación se calculó.

Las muestras de sangre de ocho lechones por grupo se recogieron al final de la prueba. Las muestras de sangre fueron analizadas para
hematología 23 y la bioquímica clínica. 24

22 Información Complementario de febrero 2014 / Anexo Qvii ETX lechones de seguridad ensayo de tolerancia.
23 Hematocrito, eritrocitos, hemoglobina, volumen corpuscular medio (MCV), hemoglobina corpuscular media (MCH), significa

la concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) y el recuento de leucocitos.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Después de terminar el ensayo, se sacrificaron 24 lechones (seis / grupo) (por una sobredosis intravenosa de pentobarbital de sodio) para la
necropsia.

Todos los parámetros se analizaron utilizando el modelo lineal generalizado (GLM); el modelo utilizado incluyó el tratamiento experimental y el
bloque como efectos principales. Las medias se compararon mediante la prueba de StudentNewman-Keuls. Para los parámetros productivos
una réplica correspondía a los datos de la pluma y para se utilizaron hematología y bioquímica de la sangre de datos individuales.

Uno de los lechones en el grupo de dosis intermedia murió el día 22 de una causa desconocida. Los resultados zootécnicos en cada grupo se
describen en la Tabla 2.

Tabla 1: Los datos de un estudio de tolerancia de 6 semanas con lechones (12 × 2 por tratamiento)

Etoxiquina (mg / la ingesta media diaria


El peso corporal Promedio diario Alimentar a ganar
kg dieta) de alimento
final (kg) ganancia (g) proporción
Destinado a Analizado* (sol)

0 0 36.0 una 958 una 637 una 1.51


150 113 34.0 segundo 873 segundo 589 segundo 1.48
750 653 35.3 ab 916 ab 620 ab 1.48
1500 1133 33.8 segundo 868 segundo 584 segundo 1.49
* Medias de los valores analíticos de las dietas de iniciación y prestarter
ab
Figuras con diferentes superíndices en letra en una columna son significativamente diferentes (P <0,05)

En general, los lechones de los grupos de baja y alta etoxiquina mostraron un peso significativamente inferior del cuerpo, ganancia diaria y el
consumo de alimento que los animales control. Una tendencia a la disminución del peso corporal se observó tan pronto como 2 semanas (P
<0,09) y se hizo significativo después de 4 semanas (p <0,02). Los cerdos en los grupos tratados con dosis bajas y altas de etoxiquina crecieron
menos que los animales en los grupos control y de dosis etoxiquina intermedios. Esto podría ser una resultante de la menor ingesta media diaria
de alimentación que se observó durante las primeras 2 semanas y en general (P <0,05). Durante el segundo y tercer períodos, también se
observó una tendencia a un consumo de alimento reducida (P <0,15). Los animales en los grupos de baja y alta etoxiquina consumen menos
alimento que aquellos en el control y los grupos etoxiquina intermedios. Por consiguiente, no se observaron diferencias estadísticas en relación el
pienso hasta ganancia durante cada período del estudio o general. Una influencia de etoxiquina sobre la palatabilidad del alimento en los
lechones no se puede descartar.

No hay diferencias estadísticamente significativas en el volumen celular empaquetado, se observaron de glóbulos rojos (RBC) recuento, la
hemoglobina o recuento de glóbulos blancos (WBC) entre los tratamientos experimentales, y todos los valores estaban en el rango fisiológico
para estos parámetros en cerdos en crecimiento. Se observaron resultados similares para los parámetros bioquímicos sanguíneos. Las
concentraciones totales de proteína, albúmina, urea, bilirrubina y creatinina fueron similares entre tratamientos (P> 0,05) y sus valores
absolutos cayeron en el rango normal para cerdos. No se observaron diferencias significativas entre los tratamientos experimentales (P> 0,10)
en las enzimas alanina aminotransferasa (ALT), aspartato aminotransferasa (AST) y gamma-glutamiltransferasa ( • GT), y se clasifican en el
rango normal para los cerdos de la misma edad, el genotipo, el sexo o el peso vivo. Las necropsias no revelaron ninguna anormalidad bruto de
órganos externos o internos, incluyendo las de los cerdos en el grupo de alta etoxiquina.

Los resultados indican que la etoxiquina, incluso a 113 el rendimiento mg / kg de alimento, consumo de alimento afectado y el crecimiento, ya que la
dosis de 10 veces también lo hizo. Sin embargo, este efecto significativo no se observó a la dosis de cinco veces. No se observó ningún efecto de la
dieta sobre la etoxiquina resultados de la necropsia o en hematología y bioquímica clínica sanguínea.

Seguridad para los rumiantes

estaban disponibles para evaluar la seguridad de etoxiquina para terneros, ganado de engorde, vacas lecheras, ovejas y cabras no los datos.

24 Alanina aminotransferasa (ALT), aspartato aminotransferasa (AST), gamma-glutamil transpeptidasa (gamma-GT), proteína,

albúmina, urea, creatinina y bilirrubina.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Seguridad para los peces

El solicitante no presentó estudios específicos de tolerancia en los salmónidos, pero sí presentar estudios sobre el salmón y otros peces
publicados en la literatura.

Bohne et al. (2008) llevaron a cabo un ensayo de 12 semanas de alimentación (seguido por la privación de alimentos 2 semanas) en 900 salmones
del Atlántico ( Salmo salar). Los peces se mantiene en 15 de flujo a través tanques interiores cada abastecido con 60 peces con un peso inicial de 460
± 80 g (media ± SD). la salinidad y la temperatura del agua se controlaron durante el ensayo y fueron 27 ± 2 ‰ y 9.5 ± 0.8 ° C, respectivamente. Los
tratamientos dietéticos consistían en cinco alimentados con dietas para pescar en tanques por triplicado, un grupo control (alimentación contenía 11
mg etoxiquina / kg), y grupos alimentados con 18, 107 (2 x) y 1 800 (36 ×) mg alimentación etoxiquina / kg. También se incluyó un grupo que
contiene 15 000 mg etoxiquina / kg (300 ×), pero, ya que los peces se negó a comer la dieta, este grupo se omitió del estudio. Las dietas contenían
por análisis 43,3% CP y 30,1% de lípidos totales. Supervivencia, peso corporal, ganancia de peso y velocidad de alimentación se midieron en los
peces de cada repetición tanque. Al final del período de alimentación, no hubo muertes y no hubo diferencias significativas en la tasa de crecimiento
de los peces o la relación de alimentación a la ganancia. No se tomaron muestras para hematología, química de la sangre clínica o histopatología.

Wang et al. (2010) investigaron los efectos de etoxiquina en la supervivencia, el crecimiento, la utilización de la alimentación y la composición
corporal de gran corvina amarilla, crocea Pseudosciaena. Cinco dietas experimentales se formularon para contener niveles graduales de etoxiquina (0,
50, 150 (3 ×), 450 (9 ×) y 1 350 (27 ×) mg / kg, no confirmado analíticamente). Cada dieta se alimentó al azar para pescar en tres jaulas en el mar,
cada una equipada con 60 peces (con un peso corporal inicial de 7,8 ± 0,7 g) durante 10 semanas. La supervivencia fue más del 93%,
independientemente de los niveles de etoxiquina dietéticos. El peso corporal final y tasa de crecimiento específico fueron significativamente inferiores
(P <0,05) en fed pescado 1 350 mg / kg etoxiquina que en los otros grupos de tratamiento. No hubo diferencia significativa en el consumo de alimento
o la relación de alimentación a la ganancia entre los tratamientos dietéticos y no se encontraron diferencias significativas en la humedad, proteína, o
contenido de cenizas de pescado entre los tratamientos dietéticos. El contenido de lípidos de peces varió significativamente dependiendo de
tratamiento; Sin embargo, no hubo una relación dosis-respuesta. El factor de condición de los peces alimentados con la dieta que contiene 1 350 mg
etoxiquina / kg fue significativamente menor que la de los peces en los otros grupos. El índice hepato-somáticas disminuyó significativamente de una
manera dependiente de la dosis de 1,3% a 1% en el control y el grupo de tratamiento más alta respectivamente. Sin embargo, el índice
víscero-somática de los peces no varió entre tratamientos.

Yamashita et al. (2009) examinaron el efecto de etoxiquina sobre la inmunidad en tilapia ( Oreochromis niloticus). tanques duplicadas de 17 peces fueron alimentados con una dieta de

control (que contiene harina de pescado libre de etoxiquina; etoxiquina en el pienso no analizada) o una dieta de pinchos (aproximadamente 400 mg etoxiquina / kg, no analíticamente

confirmaron) durante 1 mes. Cinco peces se tomaron muestras de cada tanque después de 2 semanas y 1 mes. Se tomaron muestras de sangre para el análisis de fagocítica y

actividad antibacteriana y cuatro peces de cada tratamiento experimental (n = 8 por tratamiento) fueron disecados y tejidos (timo, cabeza, riñón, bazo e hígado) tomadas para las

observaciones histopatológicas. La actividad fagocítica en los peces alimentados con la dieta de control era significativamente más alta después de 1 mes, mientras que la actividad en

peces expuestos a etoxiquina sigue siendo el mismo. La actividad antibacteriana de sangre total fue significativamente menor en los peces experimental que en los peces de control

después de la exposición de 2 semanas y 1 mes de a etoxiquina. El examen histopatológico mostró picnosis en el hígado de pescado etoxiquina alimentado (no cuantificado), que

apareció visualmente para progresar con la duración de la exposición dietética. Se observaron pocas lesiones en los órganos relacionados con el sistema inmune tales como el timo,

riñón cabeza y el bazo (datos no presentados). No hay diferencia significativa en la mortalidad se observó después de la exposición dietética de 30 días para alimentar contiene 400 mg

etoxiquina / kg; crecimiento no se midió. riñón cabeza y el bazo (datos no presentados). No hay diferencia significativa en la mortalidad se observó después de la exposición dietética de

30 días para alimentar contiene 400 mg etoxiquina / kg; crecimiento no se midió. riñón cabeza y el bazo (datos no presentados). No hay diferencia significativa en la mortalidad se

observó después de la exposición dietética de 30 días para alimentar contiene 400 mg etoxiquina / kg; crecimiento no se midió.

De seguridad para perros

No se proporcionó estudio de tolerancia en perros. Sin embargo, desde los estudios de toxicidad, un NOAEL de 2 mg / kg de peso corporal fue
derivado (véase la sección 5.1.1). El uso de los valores por defecto para el peso corporal y el consumo de alimento (EFSA Panel FEEDAP,
2012b) y aplicando un factor de incertidumbre de 10 (para la variabilidad individual y raza), 11 mg etoxiquina / kg de pienso podría ser derivada
como la concentración máxima etoxiquina seguro en completa alimentar a los perros.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Seguridad para los gatos

No hay estudios de tolerancia o datos de toxicidad están disponibles para los gatos, que se espera para excretar el aditivo y posiblemente algunos de
sus metabolitos a un ritmo más bajo que otras especies de mamíferos teniendo en cuenta la poca capacidad para glucuronidar sustratos aromáticos.

Conclusiones sobre la seguridad de etoxiquina en busca de especies

A partir de una revisión de la literatura se podría concluir que al menos 750 mg etoxiquina / kg de alimento es tolerada por los pollos en
crecimiento (tipo Leghorn, no raza moderna de pollo de engorde) y criadores. Sin embargo, la reducción en la tolerancia etoxiquina visto con
dietas reducido en proteínas (absoluta o por aumento de la densidad de energía) establecido niveles inferior tolerada (hasta 500 mg etoxiquina /
kg). Parece ser que el máximo propuesto concentración en la dieta de 50 mg etoxiquina / kg es potencialmente seguro para los pollos y los
criadores. Desde no se dispone de estudios comparables a un estudio de tolerancia con los niveles de etoxiquina dietéticos estrechamente
graduadas, una extrapolación a otras aves de corral (incluyendo gallinas ponedoras) no es posible.

La seguridad de la utilización de etoxiquina en la alimentación de lechones no se demostró mediante un estudio de tolerancia. No hay razón clara para la
reducción en el consumo de alimento y el crecimiento a 113 mg etoxiquina / kg de dieta podría derivarse a partir del experimento; Sin embargo, una
influencia de etoxiquina sobre la palatabilidad del alimento en los lechones se debe tomar en consideración. Por lo tanto, no hay ninguna conclusión sobre
la seguridad de etoxiquina para cerdos es posible.

Debido a la ausencia de datos, no se pueden extraer conclusiones sobre la seguridad de etoxiquina para los terneros, ganado de engorde, vacas
lecheras, ovejas y cabras.

salmón del Atlántico apareció a tolerar 1 800 mg etoxiquina alimentación / kg durante 3 meses sobre la base de parámetros zootécnicos como lo hizo
gran corvina amarilla alimentó 450 mg etoxiquina / kg durante 10 semanas. Teniendo en cuenta las deficiencias de datos en los estudios disponibles,
ningún nivel dietético seguro para los peces, incluyendo los salmónidos, podría derivarse.

El Panel concluye que etoxiquina a 11 mg etoxiquina / kg de pienso es potencialmente seguro para perros. Hay un nivel seguro se deriva para
los gatos y otros animales.

Teniendo en cuenta que el aditivo contiene etoxiquina pag- fenetidina, una posible mutágeno, el Grupo FEEDAP no puede concluir en cualquier
nivel seguro de etoxiquina en el pienso para los animales diana.

3.5.2. Seguridad para el consumidor

estado de residuos de etoxiquina en los tejidos y productos de origen animal

están disponibles en el destino metabólico y los residuos de etoxiquina en las especies animales de destino de datos limitados, con la
excepción de los peces. En consecuencia, en el marco de esta evaluación, el Panel FEEDAP considera etoxiquina como el residuo marcador
por defecto en mamíferos. Desde EQDM es el principal residuo en el pescado y se considera toxicológicamente equivalente a etoxiquina, se
usó la suma de etoxiquina más EQDM para calcular la contribución del pescado a la exposición del consumidor. Debido a las incertidumbres
en relación con (i) la presencia de cantidades significativas de EQI en la alimentación animal, (ii) la falta de estudios metabólicos en las
especies objetivo y animales de laboratorio y (iii) la falta de datos sobre residuos en tejidos y productos, este metabolito no se tuvo en cuenta
en esta evaluación.

Aves de corral

Un estudio de la prórroga de etoxiquina de la dieta a los tejidos y los huevos de pollos y gallinas ponedoras se realizó en las aves alimentadas con
alimento completo que contiene 125 mg de etoxiquina / kg (Hobson Frohock, 1982). Veinte 1 día de edad, los pollos recibieron el pienso
suplementado hasta el sacrificio (8 semanas). Doce 18 semanas de edad, las gallinas ponedoras se alimentaron el pienso suplementado, y 30
semanas más tarde se recogieron diariamente los huevos durante 4 semanas. Las gallinas fueron entonces sacrificados y se recogieron muestras
de músculo y tejidos. concentración etoxiquina en los huevos estaba en el intervalo 0,016-0,054 mg / kg de huevo entero (promedio

0,031 mg / kg), que se encuentra esencialmente en la yema. concentración etoxiquina en el músculo (pierna y de mama) de los pollos y las
gallinas ponedoras fue <0,005 mg / kg (LOQ). concentración etoxiquina en el hígado fue
0,063 y 0,048 mg / kg en los pollos y las gallinas ponedoras, respectivamente; era más alto en la grasa, en 0.215 y 0.238 mg / kg en los pollos
y las gallinas ponedoras, respectivamente. La presencia de productos metabolitos / oxidación etoxiquina no se investigó.

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Etoxiquina para todas las especies animales

El contenido de etoxiquina de los tejidos de pollo se determinó en los animales alimentados desde días 10-15 hasta el día 40 una dieta que contiene
150 mg de etoxiquina / kg (Dvinskaya et al., 1979). Después se determinó 25-30 días etoxiquina en los tejidos y ascendió a 0.282 mg / kg de
hígado, 0,034 mg / kg músculo de la pierna, 0,29 mg / kg de grasa visceral y 0.226 mg / kg de la piel; no se detectó en el pecho. No hay residuos de
etoxiquina se encontraron después de la retirada de 2 semanas.

Leche de vaca

Una vaca lactante se administró una comida que contenga 155 mg 14 C-etoxiquina (etiquetado biológicamente estable). Se recogió leche
durante 84 horas y la radioactividad total medida. La radiactividad alcanzó un valor máximo de 36 horas después del tratamiento que
corresponde a 0,036 mg etoxiquina / L (Wilson et al., 1959). En otro estudio en el que etoxiquina se alimentó a tres vacas lecheras durante 7
días a dosis de 150 mg o 1500 mg / kg de dieta (materia seca), las concentraciones de etoxiquina en la leche medido con un método
fluorimétrico fueron de aproximadamente 0,050 mg / L y 0,125 mg / L en los grupos de baja y alta dosis, respectivamente (Dunkley et al.,
1967). Tres vacas fueron alimentadas con una dieta que contenía 150 mg etoxiquina / kg durante 13 días, la leche se recogió tres veces
durante la semana antes del experimento, todos los días durante los 13 días del tratamiento y durante un tiempo de espera de 5 días.

Salmón

En un estudio de Bohne et al. (2008) (descrito en detalle en la sección 5.1.4), etoxiquina y EQDM residuos en la carne del salmón del Atlántico
( Salmo salar) se determinaron después de un periodo de alimentación de 3 meses y un período de depuración 2 semanas. Análisis de
etoxiquina en los piensos se llevó a cabo al principio (11, 18, 107 y 1761 mg / kg) y el extremo (9, 18, 96 y 932 mg / kg) del período
experimental. Análisis de EQDM en los alimentos al final del período experimental encontraron concentraciones de 0,15, 0,18, 9,5 y

7,0 mg EQDM / kg, respectivamente. Cinco peces de cada tanque se sacrificaron al azar en los días 0, 3, 7, 14, 28 y 84 durante el periodo de
alimentación y en los días 3, 7 y 14 durante el período de depuración (días 0, 84 y al final del período de depuración para la grupo de control).
Las muestras congeladas de músculo homogeneizado se protegieron de la luz luego descongelados y protegidos de la oxidación mediante la
inmersión en una mezcla de reacción que consiste en etanol, hidróxido de sodio, EDTA saturado, ácido ascórbico y pirogalol. Se extrajeron
etoxiquina y EQDM (utilizando hexano) y su concentración determinada mediante separación por HPLC y medida fluorimétrica. Los resultados
se dan en la Tabla 3. Aunque las medidas preventivas fueron tomadas por los autores (del uso previsto de la harina de pescado libre de
etoxiquina, fuente etoxiquina comercial con 97%, el almacenamiento a baja temperatura pureza ˃ de los alimentos), la alimentación de control
contenía pequeñas cantidades de etoxiquina al comienzo del experimento (EQDM no medido). Las dietas etoxiquina suplementada contenían
cantidades considerables de EQDM al final del período experimental.

Tabla 2: La concentración de etoxiquina y dímero etoxiquina (EQDM) (g / kg de peso fresco ± SD;


n = 15) en filetes de salmón del Atlántico después de la exposición de 84 días a niveles graduales de EQ en piensos y siguientes un
período de depuración de 14 días (adaptado de Bohne et al. 2008).

etoxiquina inicial en mg / kg de alimento 11 18 107 1761


Final (día 84) etoxiquina (EQDM) en mg / kg de 9 (0,15) 18 (0.18) 96 (7.5) 932 (7,0)
alimento
Al final del período de alimentación
Etoxiquina (g / kg filete) 18 ± 0,4 43 ± 5 410 ± 13 2.249 ± 275
EQDM (g / kg filete) 683 ± 59 512 ± 61 560 ± 214 2.503 ± 361
Suma de etoxiquina + EQDM (g filete / kg) 701 ± 59 555 ± 66 967 ± 82 4752 ± 587
después de la depuración

Etoxiquina (g / kg filete) 3,0 ± 0,4 4,5 ± 0,4 10 ± 1,4 25 ± 9


EQDM (g / kg filete) 545 ± 49 996 ± 223 951 ± 116 4432 ± 219
Suma de etoxiquina + EQDM (g filete / kg) 548 ± 49 1000 ± 273 961 ± 118 4667 ± 858

Incluso en el primer día del estudio, el tejido muscular contenía niveles sustanciales de etoxiquina y EQDM (14 g etoxiquina / kg y 2326 mg
EQDM / kg). Después de 3 meses, no hay diferencias en el contenido EQDM eran

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Etoxiquina para todas las especies animales

observada entre el grupo control y los grupos que recibieron baja y las dosis intermedias (media de aproximadamente 600 mg / kg de filete). La
concentración de etoxiquina en filete refleja la exposición alimentaria. Después de la depuración, el contenido de etoxiquina disminuyó en todos
los grupos en un factor de 6, 10, 40 y 90 en los grupos que recibieron 11, 18, 107 y 1.761 mg etoxiquina / kg de alimentación inicial,
respectivamente. Al mismo tiempo, EQDM aumentó en los dos grupos alimentados con la las altas concentraciones etoxiquina de tal manera
que no hay diferencia en la suma de etoxiquina y EQDM debido al período de depuración podría ser visto intermedio y. El aumento en un factor
de 2 en la suma de etoxiquina y EQDM en el grupo de dosis baja durante la depuración no puede explicarse.

Los datos de encuestas

Concentraciones que oscilan entre 0,05 y 0,30 mg EQDM / hígado kg y entre 0,25 y 1,27 mg / kg se informó de músculo de la trucha arco iris ( Oncorhynchus
mykiss) y entre 0,43 y 0,92 mg / kg de músculo para el salmón del Atlántico ( Salmo salar). Estos datos proceden de un estudio (Él y Ackman,
2000a) llevado a cabo para mejorar el método analítico para EQDM en el músculo y el hígado de los peces de cultivo en agua de mar (tres
muestras de cada uno).

Etoxiquina, EQDM y DEQ se analizaron, utilizando separación por HPLC y detección fluorimétrica, en filetes de salmón del Atlántico ( Salmo salar), trucha
arcoiris ( Oncorhynchus mykiss), fletán ( Hippoglossus hippoglossus) y el bacalao del Atlántico ( Gadus morhua) muestreada a las granjas de peces y
plantas procesadoras de pescado en Noruega (Lundebye et al., 2010). EQDM estaba lejos (de uno a dos órdenes de magnitud) más abundante que
etoxiquina en todas las especies de pescado, con la excepción de bacalao, en el que estaba por debajo del límite de cuantificación; la concentración
DEQ era muy baja y similar en todas las especies de peces analizados. La variabilidad de los resultados fue muy alta, debido en parte a la reducción
del número de animales muestreados (Tabla 4).

Tabla 3: Concentraciones (mg / kg de peso húmedo) de etoxiquina y sus metabolitos etoxiquina dímero
(EQDM) y de-etilado etoxiquina (DEQ) de filetes de pescado de piscifactoría noruego: el salmón del Atlántico ( Salmo salar), trucha
arcoiris ( Oncorhynchus mykiss), fletán ( Hippoglossus hippoglossus) y el bacalao del Atlántico ( Gadus morhua) ( adaptado de
Lundebye et al., 2010).

etoxiquina EQDM DEQ La suma de

etoxiquina + metabolitos
Salmon (n = 24)
Media (mg / kg filete) 55 730 1.4 786
SD (g / kg) 46 290 0.4
Rango (mg / kg) 13-167 332-1 450 <0,04-2,0
Trucha (n = 16)
Media (mg / kg) 39 760 1.5 800
SD (g / kg) 19 430 0.2
Rango (mg / kg) 9-65 180-1 700 <0.04-1.8
Halibut (n = 15)
Media (mg / kg) dieciséis 720 1.3 737
SD (g / kg) 7.2 725 0.5
Rango (mg / kg) 4,6-25 110-2 593 0.4- 0.4
Cod (n = 4)
Media (mg / kg) 9.5 <0,2 1.2 11
SD (g / kg) 2.8 0.3
Rango (mg / kg) 05.09 a 11.09 0,9-1,6

Una encuesta de contenidos etoxiquina y EQDM de diversos tipos de pescado entero (fresco y ahumado) y productos de pescado (filetes) del
mercado suizo se llevó a cabo (Ortelli et al., 2011). Las muestras de peces salvajes (n = 9), pescado de la agricultura ecológica (n = 7) y el
pescado de cultivo aqua (n = 66) se analizaron mediante cromatografía UltraPerformance-líquido con guión a espectrometría de masas de
tiempo de vuelo como método analítico. Los resultados sólo están disponibles en forma de gráficos. Alrededor del 96% de los peces de cultivo
aqua (orgánicos o no) contenía bajas cantidades de etoxiquina (valor medio: 40 g / kg, valor máximo: 300 g / kg) y mucho mayores cantidades
de EQDM (valor medio: 160 g / kg, valor máximo: 700 g / kg).

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Etoxiquina para todas las especies animales

La exposición del consumidor a etoxiquina

Cualquier estimación de la exposición del consumidor siguiente Reglamento (CE) no 429/2008 tiene que incluir datos de residuos totales de
músculo, hígado, riñón, piel (con proporción natural de grasa), leche de vaca y los huevos. Los datos deben ser obtenidos de los estudios que
utilizan la dosis propuesta más alta en la alimentación completa. El Panel EFSA FEEDAP de orientación sobre la seguridad del consumidor (Panel
FEEDAP AESA, 2012c) define un número mínimo de muestras desde el que debe obtenerse datos.

En particular, se requieren datos que permiten la determinación de la proporción de residuo marcador a residuo total.

Al comparar los datos que se requiere con los datos disponibles, el Grupo FEEDAP observa que:

(yo) Todos los estudios disponibles carecen de cifras para los residuos totales. En todos los estudios, excepto los estudios de peces, solamente
etoxiquina, el compuesto original, se midió.

(Ii) En el estudio de salmón, no se identificó la mayor residuo en la carne.

(Iii) No se intenta determinar los metabolitos se realizó en los estudios sobre las aves de corral, huevos y leche.

(Iv) No se proporcionaron datos relativos a un residuo marcador potencial y la proporción de marcador para
residuo total.

(V) Como la aplicación es para todas las especies animales, se necesitarían datos sobre una especie de mamífero, aves de corral y en los
peces. No hay datos de tejidos de mamíferos estaban disponibles.

(Vi) El número de vacas de leche necesarios para los análisis es de ocho; los datos disponibles proceden de
sólo tres vacas.

(Vii) Los estudios se realizaron con concentraciones de etoxiquina en la alimentación de> 100 mg / kg,
mientras que la máxima concentración propuesta es de 50 mg / kg.

(Viii) No existe información disponible sobre la presencia de residuos de pag- fenetidina en los tejidos y
productos de origen animal.

El Panel FEEDAP concluye que la base de datos disponibles no permiten la estimación de la exposición del consumidor a los residuos totales
etoxiquina.

La evaluación de la seguridad del consumidor

AESA (AESA, 2010) no pudo establecer los valores de referencia (es decir, la ingesta diaria aceptable (ADI)) para etoxiquina, debido al paquete
toxicológico limitado. Sin sustancialmente estaban disponibles nuevos datos a la Comisión FEEDAP ya que la evaluación. Por lo tanto, el Grupo
Especial FEEDAP no está en condiciones de proponer un valor de referencia.

Una estimación de la exposición de los consumidores a los residuos relacionados etoxiquina-y pag- fenetidina en tejidos y productos procedentes
de animales tratados con etoxiquina no es posible debido a vacíos de datos considerables. La presencia de pag- fenetidina en las cantidades de
medición en curso en el aditivo y la formación de EQI en los piensos y los animales evitan, además, la identificación de un nivel seguro de
exposición de los consumidores.

3.6. Seguridad para el usuario

Los informes completos de la mayoría de los estudios a que no estaban disponibles. La siguiente descripción se basa principalmente en los resúmenes
que figuran en el DAR (Alemania, 2007).

3.6.1. Efectos sobre el sistema respiratorio

La toxicidad aguda por inhalación de etoxiquina ha sido probado en dos estudios. En un estudio, el material de ensayo fue el plaguicida
Xedaquine 52% Drench, que contiene 500 g etoxiquina / L. Cinco ratas Sprague-Dawley fueron expuestos sólo para la nariz durante 4 horas a
un polvo respirable de Xedaquine. No hubo mortalidad durante la exposición o durante el período de observación de 14 días que siguieron y
las ratas no mostraron signos clínicos. El peso corporal no se vio afectada y las autopsias no revelaron anormalidades graves. En el otro
estudio, una solución de etoxiquina se ensayó como un aerosol. Cinco ratas Sprague-Dawley de cada sexo fueron expuestos (cuerpo entero) a
una atmósfera que contiene 1,97 mg etoxiquina / L para una

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tiempo no especificado seguido de un período de observación de 14 días. Seis de las 10 ratas tratadas tenían temblores después de la exposición.
Una mujer murió como resultado del tratamiento. Los animales restantes mostraron disminuciones transitorias sólo muy leves en la ganancia de peso
corporal y autopsias revelaron ninguna patología macroscópica. Se concluyó que la LC 50 de etoxiquina es mayor que 1,97 mg / L (equivalente a 1,527
mg / kg, suponiendo que 1 L de aire tiene una masa de 1,29 g), que se clasifica como de Categoría 4 en Sistema globalmente armonizado de la
OCDE de clasificación y el etiquetado de productos químicos ( GHS).

3.6.2. Efectos sobre la piel y los ojos

Irritación dérmica se probó en tres estudios en conejos y uno en ratas. Los protocolos de los estudios parecían estar en línea con OECD
Guideline 404. Todas las pruebas encontraron irritación transitoria única leve después de la exposición de la piel a la etoxiquina o, en un
estudio con conejos, un pesticida a base de etoxiquina (Xedaquine 52% Drench) no provocó una clasificación como un irritante.

Irritación de los ojos se probó en tres estudios con conejos. Uno de los estudios utilizaron un pesticida a base de etoxiquina (Xedaquine 52%
Drench) como el material de ensayo y se encontró que el tratamiento causó enrojecimiento conjuntival (pero ningún otro efecto) que se había
resuelto a las 72 horas post-tratamiento. Los otros dos estudios probaron etoxiquina sin diluir: uno de estos estudios encontraron que el
tratamiento causó inicialmente eritema moderado, ligero edema y copiosa descarga, pero todos los síntomas habían desaparecido a las 72 horas
después del tratamiento en todos los animales; el otro estudio encontró que el tratamiento provocó enrojecimiento y quemosis de la conjuntiva y
que el enrojecimiento conjuntival persistió hasta 72 horas posterior al tratamiento en uno de cada seis animales. Los resultados del último estudio
requieren que el material de ensayo para ser clasificado como un irritante para los ojos.

El potencial de sensibilización de la piel de etoxiquina ha sido probado en cobayas usando un ensayo de Buehler y la del 52% Drench a base
de etoxiquina pesticida Xedaquine ha sido probado en una prueba MagnussonKligman en cobayas. Los protocolos de los estudios parecían
estar en línea con la directriz de la OCDE
429. ensayo El Buehler de Xedaquine 52% Drench dio resultados positivos en desafío en 16 de 20 animales sometidos a ensayo, pero también
dio resultados positivos en 3 de los 20 animales de control. Reexposición con 1% y 3% mezclas de Xedaquine 52% Drench en aceite mineral
resultó en 2/20 y 15/20 positivos, respectivamente, en comparación con 0/10 en los controles. Esto fue interpretado como un resultado positivo
para Xedaquine 52% Drench, pero no estaba claro si este resultado fue debido a la etoxiquina u otro ingrediente del plaguicida. La prueba de
maximización de una solución al 50% de etoxiquina dio una respuesta positiva en 1 de 12 animales tratados (y no hay positivos en los
controles), que se interpretó como que indica que etoxiquina tiene un potencial sensibilizante débil. Teniendo en cuenta los resultados de los
dos estudios juntos,

Un número de casos de campo se ha informado en relación con la aparición de la dermatitis de contacto alérgica grave en los procesadores y
manipuladores de alimentos para animales (Burrows, 1975; Van Ecke, 1977; Alanko et al, 1998;. Rubel y Freeman, 1998). Los resultados positivos en
las pruebas de parche han sido registrados en los trabajadores afectados dadas concentraciones reto de tan poco como 0,01% de etoxiquina en
vaselina (Zachariae, 1978).

3.6.3. Conclusiones sobre la seguridad del usuario

En ausencia de datos, se supone que los trabajadores pueden estar expuestos por inhalación a una niebla del aditivo. Sin embargo, los
resultados de los estudios de toxicidad aguda por inhalación indicaron que la niebla respirable de etoxiquina en sí es de baja toxicidad.

Los resultados de ensayos de irritación de la piel de etoxiquina y un pesticida a base de etoxiquina en conejos y ratas indicaron que la etoxiquina no
es un irritante de la piel.

Los resultados de uno de cada dos pruebas de irritación de los ojos de etoxiquina en conejos indicaron que etoxiquina era irritante para los ojos.
Una prueba adicional sugirió que un pesticida a base de etoxiquina no es irritante para los ojos. Sería prudente para tratar etoxiquina como un
potencial irritante para los ojos y otras membranas mucosas.

Los resultados de un ensayo de Buehler de un pesticida a base de etoxiquina mostraron el pesticida a ser un sensibilizante de la piel. Los resultados de un
ensayo de maximización (normalmente más sensible que la prueba de Buehler) mostraron que la etoxiquina era un sensibilizante de la piel débil. A la luz de
los informes de dermatitis de contacto en los seres humanos, etoxiquina debe ser considerado como un sensibilizante de la piel.

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Etoxiquina para todas las especies animales

3.7. Seguridad para el medio ambiente

Como consecuencia de la utilización de aditivos para piensos que contiene etoxiquina-, etoxiquina se libera inevitablemente en el medio ambiente.
Cuando se utiliza en la alimentación del ganado, etoxiquina y sus metabolitos excretados en las heces entrarán en el ambiente del suelo cuando las
heces se aplican como fertilizante a la tierra, en forma de estiércol, en suspensión o de arena. Esto puede presentar dos principales riesgos potenciales:

• acumulación etoxiquina dentro de la capa superior del suelo a concentraciones que presentan riesgos para especies no objetivo en
compartimentos ambientales terrestres.

• Lixiviación de etoxiquina del suelo a tierra aguas en las concentraciones de las especies no objetivo en el compartimiento del medio
ambiente acuático.

Cuando se utiliza en la acuicultura, aditivos para piensos, tales como etoxiquina, pueden ser liberados directamente en el medio acuático más amplia
alrededor de una instalación de acuicultura como la alimentación de residuos o ser absorbidos por los peces y luego excretados en el medio ambiente. El
compartimento de interés para los peces criados en jaulas se supone que es el sedimento, mientras que para los peces de cultivo en los sistemas terrestres
del efluente que fluye hacia el agua superficial se considera que plantea el principal riesgo ambiental.

3.7.1. evaluación de la Fase I

Asesoramiento de exposición

El ingrediente activo no es una sustancia fisiológica / natural de seguridad establecido para el medio ambiente. Una evaluación de fase I tiene
que ser llevado a cabo para determinar las concentraciones ambientales previstas (PEC) de aditivo en los compartimentos ambientales
pertinentes.

La fase solicitante suministrado evaluaciones I para etoxiquina cuando se utiliza como aditivo para piensos.

Aditivos para los animales terrestres

Los PEC para etoxiquina en el suelo y el agua subterránea se calcularon basándose en la inclusión de 50 mg etoxiquina / kg de alimento, y el
100% de la excreción. el PEC suelo osciló entre 0,23 mg / kg para los pavos a 1,07 mg / kg para corderos de engorde. el PEC las aguas subterráneas osciló
desde 2,18 hasta 4,15 mg / L. Desde PEC suelo y PEC las aguas subterráneas superado los valores de activación de <10 g / kg y 0,1 mg / L,
respectivamente, se requiere una evaluación de fase II para la etoxiquina.

Aditivos para animales acuáticos

Los PEC para etoxiquina en el sedimento (PEC SED) y en el agua superficial de la acuicultura (PEC swaq) se calcularon basado en la inclusión de
50 mg etoxiquina / kg de pienso y el 100% de la excreción.

el PEC SED era 0,106 mg / kg de peso húmedo, por encima del valor de activación de 10 mg / kg de peso húmedo. Los valores de PEC swaq estaban debajo del
valor de activación de 0,1 g / L para el salmón, la trucha y el rodaballo, mientras que era 0.125 g / L para la lubina / dorada. Por lo tanto, se requiere una
evaluación de fase II para la etoxiquina.

Destino ambiental

Sobre la base de sus propiedades físico-químicas etoxiquina puede ser considerado como moderadamente volátil. En un estudio de la
hidrólisis, etoxiquina era inestable y se sometió relativamente rápida degradación hidrolítica formando cuatro principales productos de
transformación no identificados. La vida media de etoxiquina en pH 5, 7, y 9 soluciones fue de 4, 7 y 9 días, respectivamente (Reynolds 1995,
citados en DAR (Alemania, 2007)). Etoxiquina no es fácilmente biodegradable basado en una estimación de QSAR, y la movilidad de
etoxiquina en el suelo podría ser clasificada como baja. No se han presentado datos sobre la degradación de etoxiquina, ya sea en el suelo o
sedimentos; en consecuencia, el PEC refinamiento de estos compartimentos ambientales no era posible.

3.7.2. evaluación de la Fase II

Dado que el PEC suelo y PEC SED para etoxiquina exceden los valores de referencia, se requiere una evaluación de fase II para evaluar el potencial
de etoxiquina a afectar a las especies no objetivo en el medio ambiente. Para el medio ambiente terrestre estudios deben incluir toxicidad para
las lombrices de tierra, tres plantas terrestres y el suelo

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Etoxiquina para todas las especies animales

microorganismos. Para las jaulas de mar, la toxicidad del aditivo para piensos debe ser probado en tres especies de sedimentos marinos.

El solicitante describe una prueba de toxicidad con etoxiquina realizado sobre codorniz (Palmer et al.,
1996, citado en el DAR (Alemania, 2007)), la trucha arco iris ( Oncorhynchus mykiss) y la escasez de partículas
Daphnia magna ( Drottar et al., 1996, citado en el DAR (Alemania, 2007)), y el alga de agua dulce
subcapitata Pseudokirchneriella ( Desjardins et al., 2006, citado en el DAR (Alemania, 2007)). El Panel FEEDAP no tuvo en cuenta estos
estudios como relevantes para evaluar la toxicidad de etoxiquina a Soil-o organismos habitantes de los sedimentos. Por otra parte, estaban
disponibles para la evaluación de la posible bioacumulación de etoxiquina y sus metabolitos no hay datos. En consecuencia, no se pudo
establecer el riesgo ambiental de etoxiquina a estos compartimentos ambientales.

Desde la ecotoxicidad de etoxiquina al suelo y los compartimentos de sedimentos no puede ser evaluada, no hay ninguna conclusión sobre la
seguridad para el medio ambiente podría hacerse para el uso de etoxiquina como aditivo en piensos para todas las especies animales.

3.8. Eficacia
No se proporcionaron los estudios típicos de eficacia; En cambio, el solicitante puso a disposición algunas publicaciones en las que se utilizó etoxiquina como
antioxidante en alimentos y materias primas para piensos.

Romoser et al. (1968) y Romoser (1979) llevaron a cabo dos estudios sobre la capacidad de etoxiquina para evitar la auto-oxidación de harina de
pescado. Se midió la generación de calor en la harina de pescado. Se demostró que las dosis de 400 y 750 mg etoxiquina / kg de harina de pescado
prevenirse eficazmente auto-oxidación (es decir, temperatura máxima de aproximadamente 65 ° C después de 16 horas, sin tratar de harina de
pescado> 100 ° C después de 20 horas). La temperatura de la harina de pescado tratada se redujo aún más con el tiempo (<30 ° C después de 17 días).

Un alimento completo para el pollo de engorde (21,5% PC), a base de maíz, maíz harina de gluten, harina de soja descascarillada y 4% de
aceite vegetal (40% de ácidos grasos poliinsaturados) fue suplementado con 125 mg etoxiquina / kg de alimento y se almacenó durante 6
semanas en latas de metal galvanizado expuestos a la luz solar (McGeachin et al., 1992). La temperatura máxima en las latas varió de 38 ° C a
53 o C y humedad relativa de 71% a 84%. Peróxidos y malonaldehído se midieron en muestras de aceite extraído de los piensos almacenados.
En feed etoxiquina suplementada, los niveles de peróxidos y malonaldehído fueron similares durante todo el periodo de estudio. En la
alimentación de control no suplementado, peróxidos aumentaron significativamente después de una semana, y después de dos semanas
malonaldehıdo.

Los estudios de estabilidad también son adecuados para demostrar la eficacia de un aditivo tecnológico (ver 2.2).

Etoxiquina a una dosis de 2,5% en una premezcla fue parcialmente eficaz en la preservación de la vitamina A durante el almacenamiento de 3 a 5
meses.

La protección de los dobles enlaces insaturados de los ácidos grasos se pudo demostrar durante el almacenamiento de un alimento completo aves de
corral que contiene 5% de harina de aves de corral por producto suplementado con 750 mg etoxiquina / kg (37,5 mg / kg de pienso). Después de 6 y 10
semanas de almacenamiento, el número de yodo (indicando ácidos grasos con dobles enlaces) fue mayor que en la alimentación de control sin
suplementar.

4. conclusiones

Etoxiquina en sí no es genotóxico, cancerígeno, y no causa toxicidad para el desarrollo de las crías. El perfil toxicológico de los dímeros
etoxiquina, presentes en tejidos de alimentación y de los animales, se considera que refleja la del monómero precursor. Ninguna conclusión
sobre la ausencia de genotoxicidad de EQI es posible.

pag- Fenetidina, una impureza de la EQ aditivo, es un posible mutágeno.

La concentración máximo propuesto de 50 mg / kg etoxiquina podría considerarse como potencialmente seguro para los pollos y los criadores, pero
la extrapolación a otras aves de corral (incluyendo gallinas ponedoras) no es posible. Ninguna conclusión sobre la seguridad de etoxiquina para
cerdos, rumiantes y peces se pueden extraer. La concentración de etoxiquina potencialmente máxima de seguridad en los alimentos para perros es
de 11 mg de alimentación completa. El Panel FEEDAP no puede concluir en concentraciones seguras para los gatos y otros animales. Teniendo en
cuenta que el aditivo contiene etoxiquina pag- fenetidina, el Grupo FEEDAP no puede concluir en cualquier nivel seguro de etoxiquina en el pienso
para los animales diana.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Una estimación de la exposición del consumidor a los residuos relacionados etoxiquina-en tejidos y productos de animales tratados con
etoxiquina no es posible porque hay considerables lagunas en los datos. Una evaluación de la seguridad para el consumidor se vea impedida
por la falta de un nivel seguro de exposición y la presencia de pag- fenetidina en las cantidades de medición en curso en el aditivo.

Etoxiquina en sí tiene una baja toxicidad por inhalación y no es un irritante cutáneo, pero se debe considerar un irritante potencial para los ojos
y otras membranas mucosas y un sensibilizador de la piel.

Desde la ecotoxicidad de etoxiquina al suelo y los compartimentos de sedimentos no se puede evaluar debido a la falta de datos, no hay ninguna
conclusión sobre la seguridad para el medio ambiente se puede hacer para el uso de etoxiquina como aditivo en piensos para todas las especies
animales.

Etoxiquina es eficaz como un antioxidante en la alimentación; Sin embargo, los estudios presentados no confirman su eficacia en el nivel de
uso propuesto de 50 mg / kg de pienso.

Observación

Las condiciones de uso propuestas por el solicitante contienen, como una extensión al contenido máximo de 50 mg etoxiquina / kg de pienso:
la combinación con BHA y / o BHT no debe exceder de 150 mg / kg piensos completos. El Panel FEEDAP observa que la combinación de uno
o dos otros antioxidantes con etoxiquina no se ha evaluado desde el aditivos BHA y BHT son actualmente objeto de re-evaluación.

Documentación proporcionada a la EFSA

1. Etoxiquina para todas las especies animales. Septiembre de 2010. Enviado por FEFANA asbl.

2. Etoxiquina para todas las especies animales. Información suplementaria. Febrero de 2014. Enviado por FEFANA asbl.

3. Etoxiquina para todas las especies animales. Información suplementaria. Octubre de 2014. Enviado por FEFANA asbl.

4. Etoxiquina para todas las especies animales. Información suplementaria. Julio de 2015. Enviado por FEFANA asbl.

5. Informe de evaluación del Laboratorio de Referencia de la Unión Europea para los aditivos para alimentación animal en los métodos (s) de análisis para
etoxiquina para todas las especies animales.

6. Comentarios de los Estados Miembros recibidas a través del ScienceNet.

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Etoxiquina para todas las especies animales

abreviaturas
• GT gamma-glutamil transferasa

PROMOCIONAME La absorción, distribución, metabolismo y excreción

ALT alanina aminotransferasa

AP fosfatasa alcalina

AST aspartato aminotransferasa

BHA butilhidroxianisol

BHT hidroxitolueno butilado

BOLLO Nitrógeno ureico en sangre

CAS Servicios servicales abstractos

CHO de ovario de hámster chino

CP Proteína cruda

PCN nefropatía crónica progresiva

CXL límite máximo de residuos codex

DAR Proyecto de Informe de Evaluación (preparado conforme a la Directiva del Consejo 91/414 / CEE)

DEQ etoxiquina etiladas-de

DMBA benzantraceno dimetil

DNA Ácido desoxirribonucleico

CE Comisión Europea

AESA Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria

EINECS Inventario Europeo de estructuras químicas comerciales existentes

EQDM dímero etoxiquina

EQI etoxiquina qunone imina

EQQI etoxiquina / etoxiquina quinolona dímero derivado

UE Unión Europea

EURL Laboratorio de Referencia de la Unión Europea para aditivos de piensos

FAO Organización para la Agricultura y la Alimentación

FEEDAP Comisión técnica de aditivos y productos o sustancias utilizados en los piensos

GHS Sistema Globalmente Armonizado de Clasificación y Etiquetado de Productos Químicos

GLM modelo lineal generalizado

GLP Buenas prácticas de laboratorio

GSH glutatión

HDL lipoproteína de alta densidad

HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento

IARC Agencia Intenacional de Investigación del Cáncer

OMI Organización Marítima Internacional

JMPR Reunión conjunta del Grupo de Expertos de la FAO sobre Residuos de Plaguicidas en los Alimentos y el Medio Ambiente

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LD 50 Lethal Dose, 50%

LDL Lipoproteínas de baja densidad

LOD límite de detección

LOQ Límite de cuantificación

YO energía metabolizable

MJ Mega Joule

LMR los niveles máximos de residuos

ARNm ácido ribonucleico mensajero

NOAEL no observado efecto leve adverso

NAVIDAD nivel sin efectos observados

OCDE Organización para la cooperación económica y el desarrollo

Bifenilos
tarjeta de circuito impreso policlorados

PCDD Dibenzo-p-dioxinas

PCDF dibenzofuranos policlorados

PEC concentraciones ambientales previstas

PGS prostaglandina sintetasa

QSAR relación cuantitativa estructura-actividad

RH Humedad relativa

ESCANEAR Comité Científico de la Alimentación Animal

SCF Comité Científico de la Alimentación

SIDS Selección de información del conjunto de datos

EQT factor de equivalencia tóxica

TSH hormona estimulante de la tiroides

Naciones Unidas Naciones Unidas

NTP de EE.UU. Programa de Toxicología Nación Estados Unidos

QUIEN Organización Mundial de la Salud

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Etoxiquina para todas las especies animales

Apéndice A - Resumen de los estudios sobre el destino metabólico y toxicológica


perfil de etoxiquina
A.1. destino metabólico

Las rutas metabólicas que conducen a los principales metabolitos urinarios y biliares de etoxiquina se describen en la Figura 2 y en la Figura 3,
respectivamente.

EQ, etoxiquina; DEQ, etoxiquina de etiladas; O, la oxidación; M, metabolitos identificados; SULT, sulfotransferasa; UGT, glucuronosil transferasa.

Figura 2: esquema metabólico de los metabolitos urinarios de etoxiquina en rata y ratón (adaptado de
Burka et al., 1996).

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Etoxiquina para todas las especies animales

EQ, etoxiquina; EQI, etoxiquina imina quinona; DEQ, etoxiquina de etiladas; O, la oxidación; M, metabolitos identificados; GST, glutatión transferasa; GSH,
glutatión.

Figura 3: esquema metabólico de los metabolitos biliares de etoxiquina en rata y ratón (adaptado de
Burka et al., 1996).

A.2. perfil toxicológico

A.2.1. Toxicidad aguda

La toxicidad aguda de etoxiquina se ha investigado en varios estudios de ratas que se resumen en el DAR (Alemania, 2007) y en la US EPA
(2004). La dosis única por vía oral LD 50 valores de 1.657 a 2.040 mg / kg de peso corporal se informaron, que se clasifican como 'ligeramente
tóxico' en la escala de Hodge y Sterner y como 'Categoría de Toxicidad III' en la escala utilizada por la EPA de Estados Unidos. Los signos de
toxicidad reportados incluyen reducción de la ingesta de alimentos, hipoactividad, la ataxia, la tinción con rojo alrededor de los ojos y el área
urogenital, piloerección, respiración dificultosa y la muerte. Las autopsias y / o histopatología mostraron inflamación gastrointestinal, pulmones
hemorrágicos, ictericia hígado y líquido rojo en la vejiga urinaria.

Una administración oral única de 500 mg etoxiquina / kg de peso corporal a ratas causó una depresión de desarrollo lento que duró 3 días y la
degeneración de los hepatocitos (Nafstad y Skaare, 1978, citado por US EPA, 2004).

En un estudio no publicado afirmado ser realizado de acuerdo con los principios BPL (FAO, 2005), grupos de seis hombres y seis perros beagle
hembra se cápsulas administradas contenían etoxiquina (pureza 98,93%) en una dosis oral única de 50, 100 o 200 mg / kg de peso corporal. Un
grupo de control concurrente recibió cápsulas vacías en un régimen dietético comparable. Cuatro animales de cada sexo por grupo fueron
sometidos a necropsia 24 horas después de la dosificación, mientras que los dos animales restantes de cada sexo por grupo fueron asignados a un
período de recuperación no de dosificación de 14 días. Un aumento estadísticamente significativo en la bilirrubina sérica total se observó
consistentemente 24 horas después de la dosificación en los animales de cualquiera de las dosis de sexo en absoluto probado, pero los valores
volvió a niveles normales en los animales restantes (n = 2 para cada sexo) muestreada

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Etoxiquina para todas las especies animales

14 días después de la administración etoxiquina. En los perros sometidos a necropsia 24 horas después de la dosificación, hallazgos
microscópicos fueron confinados al hígado y consistían en un mínimo a la estasis biliar leve en todos los perros en el Tratado con etoxiquina en
todas las dosis. estasis biliar se caracterizó por acumulaciones esféricas de bilis en canalículos biliares intrahepáticas y fue consistente con
aumento de la concentración de bilirrubina total observado en los perfiles de química en suero. Además de estasis biliar, los depósitos de
glucógeno hepatocelular se agotaron en general en todos los perros tratados con 200 mg / kg de peso corporal. En los perros restantes (n = 2
para cada sexo), que se mataron por la autopsia de los 14 días después de la dosificación, las lesiones fueron restringidos al hígado y
consistía en estasis biliar mínima en el hígado en los machos tratados con 50,

La Agencia de Protección Ambiental de los EE.UU. (US EPA) establece una dosis de referencia aguda (DR aguda) para etoxiquina de 0,3 mg / kg de peso
corporal, establecido por la aplicación de un factor de seguridad de 100 a un NOAEL de 3 mg / kg de peso corporal / día, que fue la más alta dosis
administrada en un estudio de toxicidad para el desarrollo de conejo que no mostró efectos adversos.

A.2.2. Toxicidad oral subcrónica

A.2.2.1 estudios en ratones

Los ratones hembra dadas 0,25 o 0,5% (275 o 750 mg / kg de peso corporal por día) etoxiquina o clorhidrato de etoxiquina en sus dietas durante
20 días experimentaron una pérdida de peso corporal dependiente de la dosis, disminuyendo con el tiempo (Kim, 1985 citado en US EPA, 2004).
Una significativa (P <0,0001 en comparación con los controles) y el aumento dependiente de la dosis en la prevalencia de la hipertrofia hepática
se observó con ambas sustancias. Los pesos del hígado en el grupo de etoxiquina de alta dosis fueron más altos que los del grupo de clorhidrato
de etoxiquina de dosis alta.

A.2.2.2 Los estudios en ratas

Munday et al. (1999) probaron los efectos de diversas sustancias, incluyendo la etoxiquina, sobre la toxicidad de dos naftoquinonas:
2-metil-1,4-naftoquinona y 2-hidroxi-1,4-naftoquinona. Tres grupos de seis ratas hembra Sprague-Dawley se les dio nueve dosis sonda oral
diaria de 250 mg / kg de peso corporal / día de etoxiquina en aceite de maíz. Uno de estos grupos recibieron ningún tratamiento adicional,
mientras que las ratas de otros dos grupos recibieron cada uno, 1 día más tarde, una dosis oral única de 3 mmol / kg de peso corporal
2-hidroxi-
1,4-naftoquinona o 6 mmol / kg de peso corporal 2-metil-1,4-naftoquinona. Grupos de seis ratas de control se les dio aceite de maíz sin
etoxiquina durante 9 días, seguido de o bien ningún tratamiento adicional o el tratamiento con 1,4-naftoquinona o 2-metil-1,4-naftoquinona.
También se usó un grupo de control no tratado de seis ratas. Un día más tarde se sacrificaron las ratas para la necropsia y se extrajo sangre
para el análisis de volumen empaquetado celular (PCV), hemoglobina (Hb), cuerpos de Heinz, y los niveles plasmáticos de urea y creatinina.
órganos seleccionados (hígado, riñones, bazo, tracto gastrointestinal, corazón, vejiga, pulmones) se pesaron y se examinaron
microscópicamente. actividad DT-diaforasa se midió en muestras de los mismos órganos. (DTdiaphorase es una enzima que facilita la
conjugación y la excreción de naftoquinonas). Cuando etoxiquina fue dada por su cuenta, no hubo ningún efecto sobre la ganancia de peso
corporal, pero se aumentaron pesos de los riñones, el hígado y forestomach. La actividad de DT-diaforasa se aumentó en el hígado, los
riñones,

pulmones, estómago glandular, el duodeno, yeyuno, íleon, ciego y colon. los


naftoquinonas causados ​anemia hemolítica, tal como se refleja por un aumento de la formación de eritrocítica cuerpo Heinz, disminución de los
volúmenes de células empaquetadas de sangre y los niveles de hemoglobina, el aumento de los pesos del bazo relativos, congestión
sinusoidal esplénica, eritropoyesis hepática y aumento de los niveles de hierro en el bazo, el hígado y los riñones. El pretratamiento con
etoxiquina incrementó la severidad de la actividad hemolítica de 2-hidroxi-1,4-naftoquinona, pero protegido contra la de
2-metil-1,4-naftoquinona. La gravedad de renal
lesiones (dilatación tubular, necrosis, arroja) causados ​por la 2-hidroxi-1,4-
naftoquinona no se vio afectada por el tratamiento previo con etoxiquina. Un NOAEL para etoxiquina no se identificó a partir de los resultados
de este estudio, pero el estudio no fue diseñado para esto.

Cuando ratas macho Sprague-Dawley fueron alimentados etoxiquina (3,15 mmol / kg de peso corporal por día, equivalente a 684 mg / kg de
peso corporal por día) durante 3 semanas a una concentración igual a la LC hemorrágica 50 ( concentración letal en el 50% de los animales a los
40 días) de hidroxitolueno butilado (BHT), etoxiquina causado algunos animales para la hemorragia de una manera similar a la observada
después de BHT (Takahashi y Hiraga, 1978).

Etoxiquina al 0,8% (equivalente a 720 mg / kg de peso corporal por día), administrados en el agua potable a ratas F344 macho de 4 a 8 semanas,
no tenía ningún efecto observable sobre la mortalidad. Sin embargo, etoxiquina causó la reducción de peso corporal significativa acompañado por
disminución del consumo de alimentos en ambos intervalos.

www.efsa.europa.eu/efsajournal 39 EFSA Journal 2015; 13 (11): 4272


Etoxiquina para todas las especies animales

El consumo de agua se redujo también. Etoxiquina no causó ningún cambio en el pH o de iones de sodio concentración urinaria o en cualquier
otra parámetros urinarios examinados (cristales de cloro, potasio, calcio, fósforo, magnesio, orina). No hubo alteraciones microscópicas o
macroscópicas de la vejiga urinaria en ratas examinadas en ambos intervalos. Frondoso o microcrestas ropey y / o microvellosidades
uniformes de corta se observaron en la superficie epitelial de la vejiga. la síntesis de ADN de la vejiga urinaria fue evaluada por incorporación
de bromodesoxiuridina (BrdU) y se encontró que estaba incrementado significativamente en las ratas etoxiquina tratados en comparación con
los controles no tratados (Shibata et al., 1989).

En un estudio de determinación del intervalo, grupos de cinco ratas Sprague-Dawley de cada sexo recibieron dosis sonda oral (en aceite de maíz) de 0, 50, 250, 500 o 1000 mg

etoxiquina / kg de peso corporal / día durante 28 días (estudio no publicado resumido por la US EPA, 2004). (Un informe completo de este estudio no estaba disponible.) La

etoxiquina fue de grado técnico (98,2% de pureza). Se afirmó que el estudio se realizó de acuerdo con GLP. El protocolo fue ampliamente en línea con OECD Guideline 407 (2008),

pero no incluye la prueba adicional para la neurotoxicidad y la inmunotoxicidad que se introdujo en 1995. En el grupo de dosis de 1 000 mg / kg de peso corporal / día, todos los

animales murieron dentro de los primeros 3 días de tratamiento, mientras que todos los animales tratados con 500 mg / kg de peso corporal / día sobrevivieron hasta el final del

período de tratamiento programado. Las dosis de 250 mg / kg de peso corporal / día o más resultó en signos clínicos adversos, incluyendo salivación, esteras de color amarillo de la

piel y en la orina de color marrón, y los cambios en los parámetros hematológicos (disminución en el recuento de glóbulos rojos, de nivel de Hb y PCV) y la bioquímica plasma

(aumento de la proteína total, globulina, colesterol, fósforo, potasio y calcio y la disminución de la albúmina globulina (A / G) ratio) se observaron. A 500 mg / kg de peso corporal / día

o más, ganancia de peso corporal se redujo y se observaron más cambios en la bioquímica sérica (aumento de la bilirrubina, nitrógeno ureico en sangre (BUN) y

gammaglutamyltransferase (GGT) y la reducción de la glucosa) además de los que se observan en 250 mg / kg de peso corporal / día. En 500 y 1 000 mg / kg de peso corporal / día,

el peso del hígado absolutos y relativos se incrementaron en ambos sexos, y lesiones histopatológicas fueron encontrados en los riñones (dilatación tubular, la infiltración linfocítica y

la regeneración del epitelio tubular). Un bajo nivel de infiltración linfocítica en los riñones de los 50 y 250 mg kg de peso corporal / día grupos, en ausencia de otros efectos, no fue

considerado por los autores para ser tratamiento / relacionados. En ratas que recibieron 1 000 mg / kg de peso corporal / día, lesiones macroscópicas fueron encontrados en el tracto

gastrointestinal, riñones y nódulos linfáticos, y lesiones histopatológicas fueron encontrados en los riñones, el hígado, los pulmones, el estómago y el bazo. El NOAEL para este

estudio fue 50 mg / kg de peso corporal / día, en base a los signos clínicos, cambios hematológicos y los cambios bioquímica de la sangre a dosis de 250 mg / kg de peso corporal /

día o mayor. y lesiones histopatológicas fueron encontrados en los riñones, el hígado, los pulmones, el estómago y el bazo. El NOAEL para este estudio fue 50 mg / kg de peso

corporal / día, en base a los signos clínicos, cambios hematológicos y los cambios bioquímica de la sangre a dosis de 250 mg / kg de peso corporal / día o mayor. y lesiones

histopatológicas fueron encontrados en los riñones, el hígado, los pulmones, el estómago y el bazo. El NOAEL para este estudio fue 50 mg / kg de peso corporal / día, en base a los

signos clínicos, cambios hematológicos y los cambios bioquímica de la sangre a dosis de 250 mg / kg de peso corporal / día o mayor.

En el estudio principal, se les dio grupos de 10 ratas Sprague-Dawley de cada sexo diariamente, mediante sonda, las dosis de 0, 20, 40, 200 o
400 mg etoxiquina / kg de peso corporal en el aceite de maíz durante 90 días. La etoxiquina fue de grado técnico (98,2% de pureza) (estudio
no publicado resumido por la US EPA, 2004). Se afirmó que el estudio se realizó de acuerdo con GLP. Fue ampliamente en línea con OECD
Guideline 408 (1998). Oftalmoscopia se realizó al inicio y al final del periodo de tratamiento y en la semana 12. La patología clínica
(hematología, bioquímica sérica y análisis de orina) se realizó en muestras tomadas al final del experimento. Las autopsias y la histopatología
se realizaron en todos los animales. Todas las ratas sobrevivieron hasta el final del período de tratamiento. Los signos clínicos se registraron
en ambos sexos en los grupos de dosis de peso corporal / día 200 y 400 mg / kg: salivación excesiva, tinción amarilla de la piel, manchas de
color rojo alrededor de la boca y la coloración marrón alrededor de la zona urogenital. el aumento de peso corporal se redujo en los machos a
dosis de 40 mg / kg de peso corporal / día o más en todo el estudio. En ganancia de peso corporal hembras se redujo a 200 mg / kg de peso
corporal / día o más en algunas mediciones, pero estaba dentro del 5% de los valores de control a la terminación. Hematológica (disminución
del recuento de glóbulos blancos (WB), RBC, Hb, PCV, tiempo de protrombina, y aumento del recuento de reticulocitos) y cambios de
bioquímica sérica (aumento de la bilirrubina, GGT y colesterol) se observaron a 200 y 400 mg / kg de peso corporal / día. total de leucocitos
también se redujo en las ratas de ambos sexos en el / kg grupo de peso corporal / día 400 mg. tiroxina en suero (T4) se redujo en los machos
que recibieron la dosis más alta, y la hormona estimulante de la tiroides (TSH) fue elevada en machos que recibieron 200 mg / kg de peso
corporal / día y en ambos sexos dados 40 mg / kg de peso corporal / día. tiroides enrojecidas o agrandados se observaron en 5/10 masculinos
y 9/10 ratas hembras que recibieron 200 mg / kg de peso corporal / día y en todas las ratas a 400 mg / kg de peso corporal / día. orina de color
ámbar se informó en el 200 y 400 mg / kg de peso corporal / día Grupos y 'contenidos anormales' fueron encontrados en las vejigas urinarias
de ratas en el grupo de día 400 mg / kg de peso corporal /. pesos absolutos y relativos de hígado y los riñones se incrementaron en ratas de
cada sexo en los grupos 200 y 400 mg / kg de peso corporal / día. Las lesiones histopatológicas de los riñones (nefropatía y hialinos gotitas en
las células epiteliales tubulares corticales para las hembras sólo, y los cuerpos de necrosis y hialinos papilares en ambos sexos) se
encontraron en las ratas en los grupos bw día 200 y 400 mg / kg /. El NOAEL para este estudio fue 20 mg / kg de peso corporal / día,

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Etoxiquina para todas las especies animales

A.2.2.3 estudios con perros

Un estudio de búsqueda de dosis-gama de 28 días se realizó en grupos de dos macho y dos perros beagle hembra que recibieron 0, 25, 50, 100 y 200 mg etoxiquina / kg de

peso corporal / día en cápsulas de gelatina administrados por vía oral. La etoxiquina fue de grado técnico (98,2% de pureza) (estudio no publicado, que se resumen en la FAO

de 1998, y US EPA, 2004). Se afirmó que el estudio se realizó de acuerdo con GLP. No hay ninguna directriz de la OCDE para los ensayos de toxicidad de 28 días en no

roedores. Se recogió la orina para el análisis a veces no declarados. Al final del período de tratamiento, se tomaron muestras de sangre para hematología y bioquímica sérica.

Las autopsias y la histopatología se realizaron en todos los animales. Todos los perros que recibieron 100 o 200 mg / kg de peso corporal / día y una hembra dado 50 mg / kg

de peso corporal / día tenido que ser sacrificados debido a la mala condición relacionada con el tratamiento, que se caracteriza por pérdida de peso corporal, la reducción del

consumo de alimentos, actividad reducida, emaciación, disminución de la defecación y orina de color marrón. cambios Serum bioquímica en los perros sacrificados incluyen

incrementos en la fosfatasa alcalina (AP), la alanina aminotransferasa (ALT), aspartato aminotransferasa (AST), bilirrubina total, BUN y la glucosa y disminuye en sodio,

potasio, calcio, cloruro y fósforo. Todos los perros sacrificados tenían alteraciones gastrointestinales (incluyendo mucosa enrojecida, úlceras de estómago y de los ganglios

linfáticos agrandados), hígados de color oscuro y la atrofia del timo. pigmentación oscura del hígado también se observó en todas las ratas tratadas que fueron matados a la

hora programada, después de 90 días. peso de los órganos, hematología y análisis de orina no se vieron afectados por el tratamiento. Reducción de la ganancia de peso y la

reducción de la ingesta de alimentos se observaron en ambos sexos a 50 mg / kg de peso corporal / día y reducen la ganancia de peso corporal fue visto en las hembras

dadas 25 mg / kg de peso corporal / día. En los animales que sobrevivieron hasta el final del período de tratamiento programado, hubo cambios en la bioquímica de suero

(incluyendo reducciones en ALT, AST, glucosa y calcio) en todos los niveles de dosis probados. No se observaron cambios hematológicos. Como no se redujo la ganancia de

peso corporal en los machos y los cambios en los parámetros bioquímicos séricos en ambos sexos a todas las dosis probadas, no fue posible identificar un NOAEL para este

estudio. No se observaron cambios hematológicos. Como no se redujo la ganancia de peso corporal en los machos y los cambios en los parámetros bioquímicos séricos en

ambos sexos a todas las dosis probadas, no fue posible identificar un NOAEL para este estudio. No se observaron cambios hematológicos. Como no se redujo la ganancia de

peso corporal en los machos y los cambios en los parámetros bioquímicos séricos en ambos sexos a todas las dosis probadas, no fue posible identificar un NOAEL para este

estudio.

En el estudio principal, grupos de cinco perros beagle de cada sexo recibieron cápsulas orales diarias entrega de dosis de 0, 2, 4, 20 y 40 mg
etoxiquina / kg de peso corporal / día durante hasta 90 días. La etoxiquina fue de grado técnico (98,2% de pureza) (estudio no publicado, que
se resumen en la FAO de 1998, y US EPA, 2004). Se afirmó que el estudio se realizó de acuerdo con GLP. Fue en general de acuerdo con
OECD Guideline Tratamiento 409. fue detenida en el grupo de dosis alta después de 49 días a causa de inaceptablemente alta toxicidad
sistémica, y los perros en este grupo recibió cápsulas vacías durante el resto del período de tratamiento de 90 días previsto. Una hembra en
este grupo tuvieron que ser sacrificados debido a la neumonía. La sangre y la orina se tomaron para el análisis antes del comienzo de la
dosificación y durante las semanas 4 y 13 de tratamiento. Oftalmoscopia se llevó a cabo antes del inicio del tratamiento y en la semana 12. Las
autopsias y la histopatología se realizaron en todos los animales. Una hembra en el grupo de dosis alta tuvo que ser sacrificados en el día 13
del tratamiento, pero todos los otros perros sobrevivieron hasta el final del período de tratamiento. el consumo de alimentos reducido y
reducción de la ganancia de peso corporal se observaron a 20 y fue visto 40 mg / kg de peso corporal día, y / pérdida de peso corporal en el 40
mg / kg de peso corporal / día en perros varias veces durante el período de tratamiento. Los signos clínicos se observaron en los grupos que
recibieron 20 y 40 mg / kg de peso corporal / día, y se incluyen esclerótica marrón, orina marrón-o de color negro, la tinción de la zona
urogenital, heces mucoides negro y emesis. El análisis de orina no mostró cambios distintos de la pigmentación. Los parámetros
hematológicos y oftalmoscópicas no se vieron afectados por el tratamiento. • GT ve en 20 y 40 mg / kg de peso corporal / día, y sólo ALT
afectada en 4 mg / kg de peso corporal / día. hígados de color oscuro se observaron en los kg bw grupos 20 y 40 mg / / día en la autopsia.
pesos de los órganos no se vieron afectados por el tratamiento. El examen microscópico mostró lesiones de los hígados en dosis de 4 mg / kg
de peso corporal / día o mayor: pigmentación (que se describe como 'porfirina de clase') células de Kupffer de los hepatocitos y, vacuolización
hepatocelular, la proliferación de las vías biliares (no en 4 mg / kg de peso corporal / día), y la necrosis hepatocelular (mínima a 4 mg / kg de
peso corporal / día. El NOAEL para este estudio fue de 2 mg / kg de peso corporal / día, en base a la hepatotoxicidad visto en 4 mg / kg de
peso corporal / día o mayor.

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Etoxiquina para todas las especies animales

A.2.3. Los estudios de toxicidad y carcinogenicidad crónicas

A.2.3.1 Un estudio en ratones

La carcinogenicidad parenteral de varios aditivos alimentarios, incluidos etoxiquina, fue probado en ratones suizos infantiles (Epstein et al., 1970).
Cuatro dosis subcutáneas de etoxiquina, que van de 1 a 10 mg / kg de peso corporal, se administraron durante los primeros 21 días de vida. Todos
los regímenes de dosificación causaron toxicidad aguda. Los ratones supervivientes se sacrificaron a 1 año de edad y se examinaron para
tumores. Unos pocos de los ratones desarrollaron linfomas o adenomas pulmonares, pero la prevalencia de los tumores no fueron
estadísticamente diferentes de los encontrados en los animales de control tratados con disolvente y, por tanto, los resultados fueron equívocos en
cuanto a la carcinogenicidad de etoxiquina.

se reportaron concentraciones dietéticas de 0,25 y 0,5% etoxiquina para prolongar la vida de los ratones (Rudra et al., 1974). No se dieron
detalles.

A.2.3.2 Los estudios en ratas

El informe de JMPR (FAO, 1969) resumió una crónica rata de otro modo no disponible
estudio de toxicidad / carcinogenicidad a partir de 1959 que no se ajusten a las directrices actuales de la OCDE. Etoxiquina fue dado a
concentraciones alimentarias de 0, 62, 125, 250, 500, 1000, 2000 o 4000 ppm a grupos de 10 a 10 ratas hembras de una cepa no especificado de
hasta 715 días y masculinos. números no especificado de los animales de cada grupo se mataron después de 200, 400, 600 y 715 días de
tratamiento. reducciones ocasionales en ganancia de peso corporal se observaron en las ratas que recibieron 2.000 ppm. se informó de los
niveles de hemoglobina en la sangre a ser normal para ambos sexos de grupos dados 2000 o 4000 ppm en muestras de sangre tomadas en los
días 100 y 300 de tratamiento. El aumento de los pesos relativos de hígado y los riñones se encontraron en los machos del grupo ppm 250 y
hembras del grupo 1000 ppm que murieron el Día 200. cambios histopatológicos no especificadas a la corteza renal se observaron en los
hombres (pero no las hembras) de los grupos ppm 2000 y 4000 que fueron asesinados en el Día 200. Todos los demás órganos parecían
normales en las ratas que murieron el Día 200. En las ratas macho (pero no hembras) murieron en el día 400, se produjo pyelonephrosis de los
riñones y las lesiones no especificadas de hígado y la tiroides, pero la JMPR no informó que los grupos de dosis se vieron afectados. Lesiones
similares se observaron en ambos sexos en todos los tiempos después de matar, siendo los machos los más afectados. Se encontraron varios
tipos de tumores en todos los grupos, incluyendo los controles, pero no parecen ser relacionado con el tratamiento. La JMPR observó que
'lesiones no claramente definidos estuvieron presentes desde la alimentación de 62 ppm'. La JMPR (FAO, 1969) llegó a la conclusión de que el
NOAEL para este estudio fue de 125 ppm (equivalente a 6,25 mg / kg de peso corporal / día). Se hace notar que el reporte del estudio no es lo
suficientemente clara para permitir que el FEEDAP para confirmar esta NOAEL. Además, el número no especificado pero pequeña de los
animales tratados para la longitud completa del estudio limita severamente la fiabilidad del estudio para evaluar la carcinogenicidad.

El informe de la JMPR (FAO, 1998) resumió dos estudios de toxicidad rata de otro modo no disponibles a partir de 1992. Los estudios fueron
similares a uno-otro, utilizando el mismo nivel de dosis única y la misma cepa de rata. En uno de los estudios, grupos de 6 a 19 ratas F344 de
cada sexo recibieron dietas que contienen 0 o 5000 ppm de etoxiquina (equivalentes a 250 mg / kg de peso corporal / día), ya sea para 18
meses o durante 24 semanas, seguido de 34 semanas sobre el control de dieta. números no especificado de animales fueron sacrificados a las
4, 12 o 14, 24 y 78 semanas del estudio. el aumento de peso corporal y consumo de alimento se redujeron en todos los grupos tratados. Los
varones tenían una degeneración significativa intersticial de la papila de los riñones de semana 4 y progresaron a pielonefritis de la corteza y la
hiperplasia del epitelio de la pelvis renal por semana 24. En las mujeres que sólo había una ligera degeneración intersticial de la papila, que no
apareció hasta la semana 14 y no progresar constantemente. Un pigmento marrón, que se muestra mediante histoquímica para ser lipofuscina,
se detectó en los túbulos proximales de ratas tratadas. Las lesiones renales presentes después de 24 meses de tratamiento no regresan
después de 34 semanas en la dieta control. Este estudio no identificar un NOAEL como se encontraron lesiones renales en ambos sexos en el
único nivel de dosis usado.

En el otro estudio 1.992 toxicidad reportado por JMPR (FAO, 1998), se alimentaron grupos de 4 a 8 ratas F344 macho de 3 u 8 semanas de edad
con una dieta que contenía 5000 ppm etoxiquina (equivalente a 250 mg / kg de peso corporal / día ) durante 20, 26 o 30 semanas, mientras 8
hembras recibieron la misma dosis de etoxiquina durante 30 semanas a partir de las 8 semanas de edad. No se hizo mención de los grupos de
control. el aumento de peso corporal se redujo en todos los grupos tratados. pesos relativos de los riñones se incrementaron en ambos sexos. En
todos los grupos de machos tratados con la concentración urinaria de alfa 2u- globulina se redujo y se incrementó de albúmina. Histoquímica con
bromodesoxiuridina (BrdU) mostró regeneración de las células en los túbulos renales de los machos murieron a las 30 semanas, pero esto no fue
visto en los hombres muertos a las 20 semanas. cambios cortical renal (eosinic

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Etoxiquina para todas las especies animales

inclusiones cytoplasic en las células epiteliales tubulares y la acumulación de proteínas en la lámina de los túbulos) se observaron en grupos
de machos expuestos a etoxiquina a partir de 8 semanas de edad. Los riñones de los machos dosificados a partir de 3 semanas de edad
también tenía los cambios corticales pero además tenía necrosis papilar, ligera deposición de calcio y la hiperplasia del epitelio de transición de
la pelvis renal. Los riñones de las hembras tratadas eran histológicamente similares a los controles, excepto por tener una alta concentración
de deposición de lipofuscina. Se concluyó que el patrón de cambios renales causadas en ratas mediante la etoxiquina depende del sexo del
sujeto y la edad de la exposición inicial. Un NOAEL no pudo ser identificado para este estudio porque se encontraron efectos adversos en el
único nivel de dosis utilizada.

Una serie de experimentos se realizaron en ratas para investigar el efecto de etoxiquina en la modificación de la carcinogenicidad a órganos
específicos de diversos carcinógenos conocidos (Ito, et al, 1986a y 1986b;. Fukushima, et al, 1987a y 1987b;. Miyata, y col ., 1985). Estos
estudios se describen en más detalle a continuación. Estos experimentos utilizaron grupos de control que se había dado etoxiquina dietética en la
ausencia del carcinógeno conocido. Los resultados de estos grupos son de relevancia para las pruebas de carcinogenicidad de etoxiquina. Un
grupo de 25 ratas macho F344 se les dio 0,8% de etoxiquina (equivalente a 720 mg / kg de peso corporal por día) en su alimentación durante 29
semanas, y no desarrolló tumores en el hígado o los riñones. Del mismo modo, no se detectaron tumores se encontraron en el esófago o el
estómago de proa de 20 ratas F344 macho que recibieron 0.8% de etoxiquina en su alimentación durante 32 semanas. No se encontraron
tumores en el conducto del oído o de las glándulas mamarias de 25 hembra Sprague-Dawley ratas que recibieron 0.8% de etoxiquina en su dieta
durante 32 semanas. Un grupo de 15 ratas F344 macho con ligación urotelial unilateral no desarrolló tumores de vejiga cuando se les dio

0,8% etoxiquina durante 22 semanas. Los resultados de estos experimentos no dan ninguna evidencia que sugiera que la etoxiquina es
carcinógeno para ratas, se hace constar que los tamaños de los grupos en estos estudios fueron inferiores a los recomendados en las Directrices
de la OCDE, los estudios no se realizaron en ambos sexos, y sólo un número limitado de los órganos fueron investigados.

En un estudio secuencial de nefrotoxicidad crónica, grupos de ratas F344 macho y hembra fueron alimentados con la dieta que contiene 0
(control) o 0,5% de etoxiquina y mataron después de períodos de exposición de 4 semanas, 12-14 semanas, 24 semanas, 58 semanas o 18
meses ( duro y Neal, 1991). Las dosis medias que reciben eran
65,3 mg / día kg de peso corporal por para los hombres y 70,6 mg / día kg de peso corporal por para las hembras. Se tomaron los riñones para el examen microscópico, que incluía

hematoxilina-eosina convencional secciones teñidas y tinción histoquímica de algunas secciones de lipofuscina y por hierro. Los números de las ratas de cada sexo de cada grupo que

murieron en cada período de tiempo varió entre 6 y 20. Las ratas macho desarrollaron degeneración intersticial de la punta papilar renal tan pronto como 4 semanas, y esto progresaron a

necrosis papilar por 24 semanas. La necrosis papilar fue acompañado constantemente por pielonefritis que afectan a la corteza y por hiperplasia urotelial de la pelvis renal. Las hembras

fueron menos afectados por el tratamiento que los machos, desarrollar degeneración intersticial papilar sólo después de una exposición más larga, la lesión no progresa más allá. La

acumulación de pigmento relacionados lipofuscina-fue visto en los túbulos proximales de las hembras, pero no en los hombres. Espontánea nefropatía crónica progresiva (CPN) se ve

agravada por la etoxiquina en los hombres y en menor medida en las mujeres. hiperplasia túbulo proximal se observó más frecuentemente en los hombres etoxiquina tratados en los tiempos

de muestreo posteriores. En todos los casos, estas lesiones proliferativas se asociaron ya sea con pielonefritis o con las etapas más avanzadas de la CPN. No hubo evidencia de que la

etoxiquina inducida directamente hiperplasia túbulo renal preneoplásicas. hiperplasia túbulo proximal se observó más frecuentemente en los hombres etoxiquina tratados en los tiempos de

muestreo posteriores. En todos los casos, estas lesiones proliferativas se asociaron ya sea con pielonefritis o con las etapas más avanzadas de la CPN. No hubo evidencia de que la

etoxiquina inducida directamente hiperplasia túbulo renal preneoplásicas. hiperplasia túbulo proximal se observó más frecuentemente en los hombres etoxiquina tratados en los tiempos de

muestreo posteriores. En todos los casos, estas lesiones proliferativas se asociaron ya sea con pielonefritis o con las etapas más avanzadas de la CPN. No hubo evidencia de que la

etoxiquina inducida directamente hiperplasia túbulo renal preneoplásicas.

En un estudio posterior, se les dio grupos de ratas F344 etoxiquina (90% puro) en la dieta a concentraciones de 0, 0,01, 0,05, 0,1, 0,25 o 0,5%
para 3 o 6 meses (Neal, et al., 2003). Los tamaños de los grupos eran 5 machos para la parte de tres meses del estudio y 8 hombres y 8
mujeres de la parte 6 meses. Al final de los períodos de tratamiento, se sacrificaron las ratas y sus riñones fueron retirados para el examen
histológico. El consumo de alimento fue similar para todos los grupos; peso corporal no fue registrado. Ninguna de las ratas murió
prematuramente. En las mujeres, sólo había un animal afectado: una hembra de dosis alta que tenía degeneración intersticial mínimo del riñón.
En los machos, tanto a los 3 y 6 meses, había o degeneración intersticial de la papila renal o necrosis franca en los que recibieron la dosis más
alta, pero no en los que recibieron 0,25% o concentraciones más bajas. La microscopía de fluorescencia mostró una 'muy ligero aumento en la
distribución de lisosoma' en los túbulos proximales de 0,25% y 0,5% de machos en ambos 3 y 6 meses, pero no hubo evidencia de
acumulación de gotitas de hialina. La concentración urinaria de albúmina se aumentó en ambos sexos en el nivel de dosis más alta. Tras la
administración de 14 etoxiquina C-etiquetado por vía intraperitoneal u oral, el radiomarcador se asoció con albúmina urinaria y no con
α2u-globulina. La autorradiografía de los riñones no mostró diferencias de sexo en la distribución o la retención de radiomarcador. Además, los
perfiles de metabolitos fecales y urinarias también fueron similares en

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Etoxiquina para todas las especies animales

ambos sexos. El NOAEL para este estudio fue de 0,1%, que es equivalente a 50 mg kg por día / bw (utilizando valores predeterminados de la EFSA para la
exposición crónica de las ratas).

En un estudio que examinó los efectos de etoxiquina en los efectos de AFB1 inducida en el hígado y los riñones en ratas F344, se encontró
que 0,5% etoxiquina dietético dado durante 23 semanas en ausencia de AFB1 causó cambios renales, incluyendo glomerulonefrosis,
hiperplasia tubular, y túbulos preneoplásicas putativo (Manson, et al., 1987). Un estudio de seguimiento se realizó utilizando grupos de 4 a
ratas 8 masculinos y F344 hembra de edad 3 o 8 semanas al inicio del estudio, que fueron alimentados con 0,5% de etoxiquina durante 20 a
30 semanas (Manson, et al., 1992 ). Hubo poca evidencia de cualquier toxicidad renal en las mujeres de cualquiera edad, con efectos limitados
a un aumento de peso del riñón relativa y acumulación de un pigmento marrón en los túbulos. En masculino los efectos adicionales observados
proteinuria incluidos y daños en la corteza renal, con extensa necrosis papilar renal ser también visto en los hombres más jóvenes. Los niveles
urinarios de α2u-globulina no se vieron afectados por el tratamiento. El NOAEL para este estudio fue de 0,5%, que es equivalente a 250 mg /
kg de peso corporal por día, calculada usando los valores por defecto descritos en la Guía de AESA en los valores predeterminados
seleccionados para ser utilizado por el Comité Científico EFSA, técnicas científicas y unidades de la a falta de datos reales medidos (Comité
Científico de la EFSA, 2012).

Ratas Wistar machos fueron alimentados con dieta que contenía 0,1% de etoxiquina (50 mg / kg de peso corporal por día) durante 32 semanas
y se compararon con los controles no tratados. piedras renal y calcificación se observaron desde la papila renal a la región de la pelvis en ratas
tratadas. análisis de elementos químicos de las piedras mostró fósforo y calcio para ser los constituants primarios (texto sacado de US EPA,
2004, que cita Imazawa, et al.,
1989).

Grupos de 5 ratas Wistar recién destetados recibieron ya sea 0 (control) o 0,5% de etoxiquina (equivalente a 250 mg de etoxiquina / kg de peso corporal por
día) en su dieta (Rudra, et al., 1974). Las ratas que recibieron etoxiquina comieron menos que los controles no tratados alimentados ad libitum, pero cuando el
consumo de alimento de los controles fue igualada a la de ratas alimentadas etoxiquina no hubo diferencia en la ganancia de peso corporal durante los
primeros 280 días del estudio. Sin embargo, después de este tiempo las ratas tratadas ganaron menos peso corporal que los controles. Esto era
probablemente debido a la toxicidad renal ya que la mayoría (4/5) de las ratas etoxiquina posteriormente murió de insuficiencia renal grave.

Algunos viejos estudios no publicados de etoxiquina habían sido revisado y resumido en un informe del Programa Nacional de Toxicología de Estados
Unidos (US NTP, 1990). Estos estudios no se realizaron a las normas reglamentarias y científicos actuales, pero podrían proporcionar alguna
información adicional sobre la toxicidad crónica de etoxiquina. Como los informes originales no están disponibles para la Comisión FEEDAP, los
resúmenes de EE.UU. NTP se reproducen aquí ad verbatim según lo informado por la EPA de Estados Unidos (2004).

'En un estudio de alimentación oral crónica, dos de los ensayos se llevaron a cabo experimentos en ratas albinas destete. en el juicio
1, 10 machos y 10 ratas hembra fueron alimentados continuamente una dieta que contiene 0,0, 0,2, 0,4% de etoxiquina en alfalfa. En el día 155, los
machos y hembras en el grupo de dosis 0,4% pesaron significativamente menor (p <0,05 y p <0,01, respectivamente) que las ratas de control. Las
ratas en el grupo de 0,2% también pesaban menos (no significativo) que los controles. En el ensayo 2, se colocaron grupos de 10 ratas machos en
las dietas que contienen 0, 0,0062,
0,0125, 0,025, 0,05, 0,1 y 0,2% etoxiquina y grupos de 10 hembras fueron alimentados con dietas que contienen 0,
0,05, 0,1 y 0,2% etoxiquina para 225 días. Además, 5 hembras fueron alimentados con dietas que contienen 0,0125 y 0,025% de etoxiquina.
La mitad de los animales machos en el 0, 0,2, 0,1, 0,05 y 0,025% etoxiquina y media de las hembras en las 0, 0,2, grupos de dosis 0,1% se
sacrificaron en el día 225. Una pequeña indicación de lesiones renales se observó en el 0,1 y 0,2% de grupos etoxiquina. Los pesos del hígado
entre las mujeres en el grupo de etoxiquina al 0,2% y los machos en los grupos de 0,1%, así como el peso del hígado en todos los grupos de
dosis más altas fueron significativamente mayores (p <0,01) en el 0,2% (ensayos 1 y 2) y 0,4% (ensayo 1) dosis grupos frente a los controles.
Tras la inspección visual de los riñones de 2 ratas macho en el grupo de etoxiquina al 0,4%, se observaron cálculos en la pelvis renal. El
examen microscópico reveló pielonefritis crónica bien desarrollado entre los hombres en los grupos de dosis altas. Dos riñones tenían áreas de
calcificación. Las glándulas tiroides de ratas macho expuestas a dosis más altas de etoxiquina tenían evidencia de hiperplasia. Todas las ratas
macho en el grupo de etoxiquina al 0,2%, 2/3 en el grupo de 0,1% y 2/5 en el

0,05% grupo tenía pequeñas cicatrices renales [Utilización Occidental de Investigación Branch, 1954]. Como suplemento para el estudio anterior, las
ratas supervivientes (5-10 machos y 5-10 hembras) fueron alimentados etoxiquina en su dieta a las mismas concentraciones como la dieta de rata
macho descrito anteriormente. La mortalidad se produjo en el día número 700 debido a la infección. inspección patológico reveló una superficie picada
de los riñones en las ratas macho a la
0,2% y los grupos de dosis etoxiquina 0,1%. Los autores afirman que otros cambios brutos observados no guardaban relación aparente con
etoxiquina incluyendo la infección del tracto respiratorio, tumores, ovarios quísticos y

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Etoxiquina para todas las especies animales

úteros infectada. En este estudio, el NOEL para cambios patológicos microscópicos se calculó que era 13 y 15 mg / kg / día para las ratas
macho y hembra, respectivamente, en el día 225.'

A.2.3.3 estudios con perros

En la década de 1980, hubo varios informes de efectos adversos de la dieta etoxiquina en los perros. Los síntomas observados por los dueños
de perros y veterinarios fueron hígado, riñón, tiroides y disfunción reproductiva, efectos teratogénicos y carcinogénicos, reacciones alérgicas, y
una serie de anormalidades de la piel y del pelo (Błaszczyk, et al., 2013).

Un estudio de toxicidad 1-año se realizó en grupos de cuatro perros Beagle de cada sexo etoxiquina dado en las dietas que proporcionan 0, 0,9, 1,8,
2,7, o 3,6 mg etoxiquina kg de peso corporal por día /. Oftalmoscopia se llevó a cabo el tratamiento previo y justo antes de matar para la autopsia.
Las muestras de sangre y orina fueron tomadas de pretratamiento, después de 3 y 6 meses de tratamiento y antes de la autopsia. Las autopsias se
realizaron en todos los animales al final del período de tratamiento. La histopatología de una selección completa de los órganos se realizó sólo en
animales en el control y los grupos de dosis más altas. Además, todas las lesiones macroscópicas y las glándulas suprarrenales se examinaron
microscópicamente en todos los perros, y el hígado se examinó en todos los perros masculinos en el

2,7 mg de peso corporal grupo / kg por día y en un macho del grupo días 0,9 mg / kg de peso corporal por. El tratamiento no tuvo efectos sobre la
mortalidad, peso corporal, ingesta de alimentos, signos clínicos, oftalmoscopia, la hematología, la bioquímica de la sangre, análisis de orina, pesos de
los órganos o patología macroscópica. Se detectó una cantidad traza de un pigmento anisotrópico en el hígado las células de Kupffer de un perro macho
tratados con 3,6 mg / kg de peso corporal por día, pero no había química clínica asociada o histopatología y el hallazgo no fue considerado por el autor
como un efecto adverso. No se detectaron otros cambios microscópicos relacionados con el tratamiento. El NOEL para este estudio fue el nivel más alto
de dosis, 3,6 mg / kg de peso corporal por día para las mujeres y 2,7 ​mg / kg de peso corporal por día para los hombres.

El informe original de la siguiente estudio no estaba disponible a la Comisión FEEDAP, el resumen de EE.UU. NTP se reproduce
aquí ad verbatim según lo informado por la US EPA, 2004:

'En un estudio de la administración oral crónica uno años, apoyado por Monsanto, 7 hombres y 7 perros mestizos hembras se dividieron en 4 grupos (mixto
masculino y femenino) y pusieron en el régimen de dosis siguiente: no compuesto de ensayo (grupo 1; 1 macho, 1 hembra); 10 mg / kg etoxiquina (grupo 2; 2
machos, 1 hembra); 50 mg / kg etoxiquina (grupo 3; 1 macho, 2 hembras); y 100 mg / kg (grupo 4; 1 macho 2 hembras) dosis .Todos se administraron por vía
oral en forma de cápsula, cinco días por semana, con la excepción del grupo 3, que recibió una dosis por día durante los primeros 6 semanas, y 2 dosis por día
a partir de entonces. administración Grupo 4 se interrumpió después de 6 semanas debido a la toxicidad. Grupo 4 perros fueron sacrificados en la semana 9 y
se sustituye por el grupo 5 (1 macho, 1 hembra), que recibió 3 mg / kg etoxiquina. El examen macroscópico reveló sensibilidad abdominal en un perro en los
grupos 2, 3 y 5, dentro de 5 semanas. La anorexia se produjo en 2 perros en el grupo 4 y 1 perros en el grupo 5. La depresión y las heces blandas, también se
observaron en un grupo de 5 perros. hígados de color marrón oscuro se observaron en los grupos 2 (asociada con evidencia de infección parasitaria intestinal),
3 y 4. La orina también se decoloran en los grupos 3 y 4, con aparición ocasional de glóbulos. Grupo 3 perros desarrollaron irritación del intestino grueso y
delgado. En perro en el grupo de 5 tenía un hígado agrandado. la función hepática Bromsulphalein se redujo en los grupos 2, 3 y 4 ya en la séptima semana.
Todos los perros en grupo 4 y uno en el grupo 3 tenían sedimentación globular. Tras el examen microscópico, se observaron cambios en el hígado y riñón en
todos los grupos. Kidney hinchazón con acumulación de grasa se observó en los grupos 2, 3 y 5. La granulación de las células en los túbulos colectores
también se observó en los grupos 2 y 3. degeneración del hígado y la metamorfosis grasa del hígado se observó en los grupos 2, 3 y 5. Los grupos 3 y 4
exhibieron retención marcada de pigmento exógeno en el hígado. Un perro en el grupo 3 tenía fibrosis masiva. Sin embargo, no había evidencia de daño
permanente o la destrucción de tejido en los animales de ensayo en los que cambios en el hígado y los riñones eran evidentes, lo que sugiere que los cambios
histológicos observados pueden ser. El NOAEL en este estudio para cambios patológicos microscópicos fue de 28 mg / kg / día en el día 84.' lo que sugiere que
los cambios histológicos observados pueden ser. El NOAEL en este estudio para cambios patológicos microscópicos fue de 28 mg / kg / día en el día 84.' lo que
sugiere que los cambios histológicos observados pueden ser. El NOAEL en este estudio para cambios patológicos microscópicos fue de 28 mg / kg / día en el
día 84.'

En un estudio que se informó en 1955, perros recibieron cápsulas etoxiquina (Santoquin®) durante 58 semanas. se administraron grupos de tres
perros (uno o dos de cada sexo) 0, 10, 50 o 100 mg / kg de peso corporal etoxiquina al día (como Santoquin®), en dos dosis divididas, en 5 días por
semana. Después de 6 semanas de tratamiento, los perros que recibieron 100 mg / kg de peso corporal tuvo que ser sacrificados como un perro era
anémico, y los otros dos fueron anoréxica y perder peso. Ellos fueron reemplazados por otro grupo que se le dio 3 mg / kg de peso corporal. Sangre
y orina fueron muestreados durante todo el estudio. Todos los perros fueron sometidos a autopsia en el final del estudio y de los órganos
seleccionados (hígado, riñones, intestino delgado, glándulas suprarrenales y tiroides) se examinaron microscópicamente. la ingesta de alimentos
reducida y menor ganancia de peso corporal se observaron en al menos

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Etoxiquina para todas las especies animales

Un animal de cada uno de los grupos tratados con etoxiquina. Los resultados de pruebas de retención bromsulphthalein demostraron una reducción de la
función hepática en los perros de todos los grupos tratados. los niveles de BUN fueron normales y similares a los controles en todos los grupos.

Hematología mostró que en los grupos de animales que recibieron 50 o 100 mg / kg de peso corporal RBC cuenta, el nivel de hemoglobina y el
hematocrito se reduce. En el examen microscópico de los glóbulos rojos de los animales afectados mostraron anisocitosis, poikilocitosis,
macrocitosis, hipocromia y policromatofilia. Todos los grupos de animales tenían recuentos altos de eosinófilos (típicos de infecciones
parasitarias). La orina de perros que recibieron 50 o 100 mg / kg era de color marrón oscuro y contenía grandes cantidades de proteína. Uno
de los perros que recibieron 3 mg / kg también tenían altamente proteínico orina de color oscuro, y esta orina también contenían sangre oculta.
El examen macroscópico de los órganos de control no mostró alteraciones. Uno de los perros que recibieron 3 mg / kg de peso corporal tenían
un agrandamiento del hígado de color normal, pero los animales de este grupo apareció por lo demás normal en post-mortem. En el grupo que
recibió 10, 50 o 100 mg / kg de peso corporal,

Los parásitos intestinales se encuentran en varios de los perros. Todos los grupos de perros tratados habían aumentado peso de los órganos:
hígado, bazo, riñones y corazón. El examen microscópico del hígado de uno de los perros de control mostró abscesos que se cree que es
debido a una infestación parasitaria. Los perros en el grupo de 3 mg / kg de peso corporal, que tenía un agrandamiento del hígado áreas
también expuestas de ulceración en el intestino delgado, la infiltración granulomatosa del cambio hígado y graso en los hepatocitos y las
células epiteliales tubulares renales, efectos que se informó de que debido a histoplasmosis (infección por Histoplasma capsulatum). Los tejidos
de los otros perros en el grupo de peso corporal / kg 3 mg parecían normales. La pigmentación de los hepatocitos y células de Kupffer del
hígado y el daño a las células epiteliales de los túbulos renales se encontraron en perros que recibieron 10 mg / kg de peso corporal o más. A
50 mg / kg de peso corporal, cambio graso se observó en los hepatocitos, y a 100 mg / kg de peso corporal también había fibrosis hepática. En
puede concluir de este estudio que la exposición crónica a la etoxiquina oral, causó toxicidad renal y hepática. Aunque se observaron efectos
adversos en todas las dosis, la presencia de diversas infecciones en los perros hace que sea difícil saber si estos efectos eran del todo debido
a la exposición a la etoxiquina. No es posible determinar el NOAEL fiable de este estudio.

Un estudio toxicológico de 5 años (iniciado en 1959 y publicado en 1966) se llevó a cabo en perros beagle. Etoxiquina se alimentó a grupos de
siete hombres y siete perros hembra a concentraciones dietéticas de 0 o 300 ppm (w / w) de hasta 5 años. No se quedó constancia del
consumo de alimentos, y los pesos corporales se midieron solamente al inicio del estudio y en la terminación. La sangre y la orina se
recogieron para el análisis en la terminación. exámenes patológicos e histopatológicos brutos se realizaron en todos los animales. Un perro de
control murió prematuramente después de 4 años 9 meses como resultado de una infección pulmonar. No se observaron efectos
treatmentrelated en el peso corporal, hematología, análisis de orina, puntos finales química clínicos limitados (AST sérica, BUN y tiempo de
retención bromosulftaleína), peso de los órganos absolutas y relativas, patología macroscópica o histopatología.

No se reportaron efectos sobre la carcinogénesis para cualquiera de los estudios con perros, aunque ninguno de los estudios fue diseñado para investigar
el cáncer de puntos finales.

La Agencia de Protección Ambiental de los EE.UU. (EPA) establece una dosis de referencia crónica (dosis de referencia crónica) para la exposición alimentaria de
todas las poblaciones humanas a etoxiquina de 0,02 mg / kg de peso corporal / día (Jacquith, 2004). Esto fue establecido por la aplicación de un factor de
seguridad de 100 a un LOAEL de 4 mg / kg de peso corporal / día para las enzimas séricas elevadas y cambios microscópicos en el hígado, incluyendo
vacuolización citoplásmica y necrosis mínima en los hepatocitos, en un estudio de perro de 90 días.

A.2.4. Estudios de los efectos modificadores de la carcinogenicidad y / o la toxicidad de otro


sustancias

A.2.4.1 Los estudios en ratas

En un experimento para investigar los efectos de los antioxidantes en la promoción de los cánceres de esófago y forestomach, un grupo de 20
ratas macho F344 se trataron previamente con N, N-dibutylnitrosamine (DBN) y se trató con etoxiquina y se compararon con un grupo de 21
ratas que recibieron DBN solo y 20 ratas que recibieron etoxiquina solo (Fukushima et al., 1987b). Pretratamiento DBN se administró en el
agua potable a una concentración de 0,05% durante 4 semanas. Etoxiquina fue dada por la dieta a una concentración de 0,8% durante 32
semanas. No hay carcinomas se encontraron en el esófago o forestomach de cualquier animal en cualquiera de los tres grupos. El grupo
etoxiquina se administran solos también desarrolló sin papilomas

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Etoxiquina para todas las especies animales

de la panza y el esófago y sin hiperplasia preneoplásicas del esófago. Seis ratas con papilomas esofágicos se encontraron en el grupo DBN
entregada más etoxiquina, en comparación con ninguno de los que recibieron DBN solo. La prevalencia de hiperplasia esofágicas y
preestómago papilomas preneoplásicas fue similar en el grupo dado DBN y etoxiquina y el grupo dado DBN solo. Se concluye que la
etoxiquina mejoró la producción de papilomas esofágicos en ratas F344 macho.

Takahashi et al. (1979) investigaron los efectos de etoxiquina en tumores de estómago causados ​por el tratamiento de ratas Wistar con
N-metil-N •• nitrosoguanidina (MNNG). Grupos de 20 machos fueron alimentados con una dieta alta en sal (NaCl al 10%) durante todo el
experimento y se les dio 100 mg / L MNNG en su agua potable durante 8 semanas. a continuación, se le dio un grupo 1% etoxiquina en la dieta
durante 32 semanas, mientras que un grupo de control se le dio la dieta basal sin suplementación. Todas las ratas se sacrificaron al final de
este periodo de tratamiento y se determinó el desarrollo de tumores gastroduodenales. El tratamiento con etoxiquina más MNNG se
incrementó el número de tumores en el estómago glandular (en comparación con los controles dados MNNG solo), pero no en el forestomach.
Además, nefrocalcinosis se observó en las ratas que recibieron etoxiquina más MNNG pero no en los que recibieron MNNG solo. Se concluye
que la etoxiquina mejoró la producción de tumores del estómago glandular en ratas Wistar macho.

desarrollo de cáncer de colon, un grupo de 12 ratas macho F344 se trató previamente con cuatro dosis subcutáneas semanales de 20 mg / kg
de peso corporal de 1,2-dimetilhidrazina (DMH) luego se alimentó durante 36 semanas una dieta que contiene 0,8% de etoxiquina (Ito et al.
1986a , b). El número de tumores (adenomas más adenocarcinomas) encontrado en los colon descendente (11 tumores) fue significativamente
mayor que en un grupo de control (tres tumores) que había sido tratado previamente con DMH. No se encontraron tumores en el colon
transverso, y el número de tumores en el colon ascendente y ciego (uno y ninguno respectivamente) fue menor que en los controles (uno y
tres), aunque la diferencia no fue significativamente diferente. Se concluye que la etoxiquina dietético mejorado la carcinogenicidad del DMH en
el colon descendente, pero no tuvo efecto claro en otras regiones del colon y el ciego.

En un experimento para investigar los efectos de los antioxidantes en la promoción de cánceres del conducto mamario y el oído, los animales
pretratados con 7,12-dimetilbenz [a] antraceno (DMBA) y se trataron con etoxiquina se compararon con los demás dadas ya sea DMBA o
etoxiquina solo (Ito et al., 1986a, b). Se utilizaron grupos de 25 ratas hembras Sprague-Dawley. El pretratamiento con DMBA administración
implicada de una dosis única de 25 mg / kg de peso corporal por tubo estomacal. Etoxiquina se le dio en la dieta a una concentración de 0,8%
durante 33 semanas. No hay tumores de la mama o el oído conducto se encontraron en las ratas tratadas con etoxiquina solo. Los números de
los carcinomas mamarios y fibroadenomas de mama fueron significativamente inferiores en el grupo dado DMBA más etoxiquina que en el
grupo dado DMBA solo. También hubo menos carcinomas y adenomas del conducto del oído (no significativo) en el grupo dado DMBA más
etoxiquina. Se concluye que la etoxiquina la dieta inhibe la carcinogénesis de DMBA en la glándula mamaria.

En un experimento para investigar los efectos de los antioxidantes en la promoción de los cánceres de la vejiga urinaria, un grupo de 23 ratas
macho F344 se pretrataron por vía oral con (4hydroxybutyl) nitrosamina-butil-N- N (BBN) y después se trató con etoxiquina y se compararon
con un grupo de 24 ratas que recibieron BBN solo (Ito et al., 1986a). Pretratamiento BBN se administró en el agua potable a una concentración
de 0,05% durante 4 semanas. Etoxiquina se le dio en la dieta a una concentración de 0,8% durante 32 semanas. ligadura urotelial Unilateral se
realizó en todas las ratas La prevalencia de hiperplasia pre-neoplásica (papilar o hiperplasia nodular) y de papiloma de la vejiga, y el número
medio de lesiones por animal, fueron significativamente mayores en el grupo de ratas dado BBN más etoxiquina de en el grupo que recibió
BBN solo. No hubo efecto modificador importante de etoxiquina en la prevalencia o número de tumores malignos en la vejiga. Este resultado
sugiere que, aunque 0,8% etoxiquina dietética mejoró el efecto de BBN en la producción de hiperplasia pre-neoplásica y papilomas benignos
en la vejiga, que no aumentó el cáncer de vejiga iniciado por BBN.

En un experimento similar (Miyata et al., 1985), se les dio grupos de ratas macho F344 0,05% BBN en agua durante 2 semanas seguido de 22
semanas de exposición dietética potable a una serie de productos químicos bajo prueba. Uno de tales química fue etoxiquina, que fue dado a
una concentración en la dieta de 0,8%. ligadura urotelial Unilateral se realizó en todas las ratas al final de la semana 3. La prevalencia de los
tumores de vejiga fue significativamente mayor en un grupo de 14 ratas que recibieron BBN más etoxiquina (5%) que en un grupo de 44 ratas
que recibieron solamente BBN (3% ). No hay tumores de vejiga se encontraron en 15 ratas que recibieron etoxiquina

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Etoxiquina para todas las especies animales

BBN y sin tratamiento previo. Estos resultados sugieren que la etoxiquina aumenta la carcinogenicidad de BBN a la vejiga de rata.

En un experimento de seguimiento (Ito et al, 1986b;.. Fukushima et al, 1987a) que mira en la promoción de efectos en la vejiga, se utilizaron
múltiples niveles de dosis de etoxiquina. Grupos de 13 a 16 ratas macho F344 se les dio concentraciones dietéticas de 0,125, 0,25 o 0,5%
etoxiquina después del pretratamiento con BBN. Un protocolo similar al experimento anterior fue seguido. La única cáncer de vejiga visto en el
experimento fue en una de las ratas que recibieron BBN solo. El tratamiento con BBN más etoxiquina no tuvo efectos significativos sobre la
prevalencia de los papilomas de la vejiga o de la hiperplasia preneoplásicas en cualquiera de los grupos de dosis en comparación con la
prevalencia en los animales de control dado BBN solo. Este resultado indica que hasta un 0,5% de etoxiquina en la dieta no tiene efecto en la
producción por BBN de las lesiones en la vejiga de rata.

En un experimento para investigar los efectos de los antioxidantes en la promoción de cánceres de hígado y los riñones, los animales
pretratados con N-etil-N-hydroxyethylnitrosamine (Ehen) y tratados con etoxiquina se compararon con otros dadas ya sea Ehen o etoxiquina
solo (It, et al ., 1986a, b;. Tsuda et al, 1984). Se utilizaron grupos de 23 a 27 ratas macho F344. Pretratamiento Ehen se administró en el agua
potable a una concentración de 0,1% durante 2 semanas. Etoxiquina se le dio en la dieta a una concentración de 0,8% durante 29 semanas.
No hay tumores del hígado o los riñones fueron encontrados en las ratas tratadas con etoxiquina solo. La prevalencia de adenomas renales y
el número de adenomas renales por rata fueron significativamente mayores en las ratas que recibieron Ehen más etoxiquina que en los que
recibieron Ehen solo. En contraste, la prevalencia de carcinomas hepatocelulares fue significativamente menor, y se redujeron el número y la
zona de focos GGT-positivas en el hígado. No hubo ningún efecto significativo en la prevalencia de nódulos hepáticos hiperplásicos o de
adenocarcinomas renales. Se concluye que la etoxiquina dietética mejoró la carcinogenicidad de Ehen en el riñón pero inhibe su
carcinogenicidad en el hígado.

Masui et al. (1986) investigaron los efectos de varias sustancias, incluyendo etoxiquina, en el hepatocarcinogenicidad de dietilnitrosamina
(DEN) en ratas. Grupos de 17 ratas se les dio una inyección intraperitoneal de 200 mg DEN kg de peso corporal / y luego 2 semanas más tarde
fueron alimentados con una dieta que contenía
0,02% de 2-acetilaminofluoreno (AF) durante 6 semanas. Todas las ratas fueron sometidas a una hepatectomía parcial al final de la semana 3 del
experimento. Las dietas experimentales se alimentaron a estas ratas de semana 12 a la semana 36 y los que recibieron 0,8% etoxiquina se
compararon con los controles dados solamente la dieta basal. Todas las ratas se sacrificaron 2 semanas después del cese de tratamiento con las
dietas de prueba. Significativamente menos ratas con carcinomas hepatocelulares (carcinomas trabeculares más adenocarcinomas) se
encontraron en el grupo de etoxiquina dado (8/17, 57%) que en los controles (15/17, 88%), lo que indica que la etoxiquina suprimió el desarrollo
de cáncer de hígado inducida por tratamiento DEN / AF.

Ito et al. (1986a) investigaron los efectos de etoxiquina en la actividad hepática de la forma placentaria de la glutatión-S-transferasa (GST-P),
una enzima se cree que participan en la inhibición por los antioxidantes de la carcinogénesis química. Grupos de 19 a 22 ratas macho F344 se
trataron previamente con 200 mg / kg de peso corporal por día DEN en su dieta durante 2 semanas. Esto fue seguido por el tratamiento con
0,125, 0,25 o 0,5% de etoxiquina en la dieta durante 6 semanas. Todas las ratas fueron sometidas a una hepatectomía parcial 3 semanas
después de la última dosis de DEN. Hubo una disminución significativa en el número de focos GST-P-positiva en los hígados de las ratas en el
grupo de dosis media, pero no los que recibieron la dosis alta o dosis baja de etoxiquina. La zona de focos GST-P-positivo no se vio afectada
por cualquiera de los tratamientos con etoxiquina. Más amplios resultados de este experimento fueron reportados por Thamavit et al. (1985).
Estos mostraron que hubo una disminución significativa relacionada con la dosis en el número de focos de GGT inducido y en la cantidad de
tejido hepático afectado por estos focos. Estos resultados sugieren que la etoxiquina podría proteger contra el hepatocarcinogenicidad de DEN.
El examen histológico de los hígados de ratas de este estudio mostraron toxicidad biliar (conducto biliar hiperplasia sin cholangiofibrosis o
hiperplasia de las células ovales) pero no hay evidencia de toxicidad hepatocelular (Ward et al., 1989).

Los efectos de la administración dietética de etoxiquina en aflatoxina B1 (AFB1) metabolismo, la formación de aductos de ADN y la eliminación,
y la tumorigénesis hepática se examinaron en ratas F344 macho (Kensler et al.,
1986). Las ratas fueron alimentadas con una dieta que contiene 0,4% de etoxiquina durante 1 semana, a continuación, gavaged con 250 mg de AFB1 por
kg de peso corporal cinco veces por semana durante las siguientes 2 semanas. Por último, la dieta de control fue reinstalado 1 semana después de
finalizar la administración. A los 4 meses, se identificaron áreas focales de alteración hepatocelular y se cuantificaron por tinción secciones de hígado para
GGT. El tratamiento con etoxiquina redujo en> 95% tanto en la zona y el volumen de hígado ocupado por focos GGT-positivo. Utilizando el mismo
protocolo de dosificación múltiple, se determinaron los patrones de modificaciones covalentes del ADN por AFB1. Etoxiquina produjo una

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Etoxiquina para todas las especies animales

dramática reducción en la unión de AFB1 al ADN hepática: 18 veces inicialmente y 3 veces al final del período de dosificación. Aunque la unión
era detectable a los 3 y 4 meses después de la dosificación, no se observó efecto de la etoxiquina, lo que sugiere que estos aductos
persistentes no son de importancia primaria a la AFB1 carcinogénesis. Análisis de bases de ácidos nucleicos mediante HPLC no reveló
diferencias cualitativas en especies de aductos entre grupos de tratamiento. El efecto inhibidor de etoxiquina en AFB1 unión a ADN y la
tumorigénesis parece estar relacionado con la inducción de enzimas desintoxicantes. Las ratas alimentadas con 0,4% de etoxiquina durante 7
días mostró un aumento de 5 veces en las actividades-GST citosólicas específica hepáticas. Se indujeron múltiples formas moleculares de GST,
y se observaron elevaciones concomitantes en los niveles de ARNm que codifican para la síntesis de las subunidades de GST. De manera
correspondiente, eliminación biliar de conjugado AFB1-glutatión se incrementó 4,5 veces en animales en la dieta etoxiquina durante las primeras
2 horas después de la administración oral de 250 mg de AFB1 por kg de peso corporal. Estos resultados sugieren que la inducción por
etoxiquina de enzimas importantes para AFB1 desintoxicación, tales como GST, puede conducir a la eliminación carcinógeno mejorada, así
como a la formación reducida AFB1-ADN aducto y la posterior expresión de lesiones preneoplásicas y, en última instancia, neoplasia, reducidos.

Poder et al. (1987) (citado en US EPA, 2004) encontró que la etoxiquina al 0,5% en el GGT inducida por la dieta en las regiones periportal y mediados de zonales
de lóbulos del hígado durante la carcinogénesis inducida por aflatoxina B1.

Manson et al. (1987) investigaron los efectos de etoxiquina en la dieta sobre el hígado y los riñones de ratas F344 macho en presencia y
ausencia de AFB1. Las dietas contenían 50% de harina de cacahuete, con la dieta que contenía AFB1-estando constituido con comida
contaminada para lograr una concentración de 1% AFB1 y la dieta libre de AFB1 siendo compuesto con comida contaminada. Etoxiquina se
añadió a las dietas en
0,5%. Grupos de 8 a 10 ratas se sometieron a cuatro programas de tratamiento diferentes. Grupo 1 (controles negativos) no se le dio ninguna
AFB1 o etoxiquina; Grupo 2 se le dio dieta libre de AFB1 durante 4 semanas, a continuación, dada una inyección intraperitoneal de 0,25 mg /
kg de peso corporal AFB1 seguido de AFB1 en la dieta; Grupo 3 se trató de forma similar al Grupo 2, excepto que la dieta contenía etoxiquina
durante todo el período experimental; y Grupo 4 recibió etoxiquina en dieta libre de aflatoxina B1. Todas las ratas se sacrificaron al final del
período experimental 23 semanas. Se tomaron los hígados y los riñones para el examen histológico rutinario y el examen usando técnicas de
tinción especiales incluyendo tinción para GGT, hierro y lipofuscina, e inmunohistoquímica para GST-P. Los resultados mostraron que la
etoxiquina dietético impidió completamente la formación por AFB1 de nódulos hepáticos preneoplásicas, como se juzga por los cambios
morfológicos o por los marcadores bioquímicos GGT, GST-P y J1 (un marcador de membrana uncharacterised). Aunque el hígado estaba
protegido, etoxiquina solo causó graves daños a los riñones, incluyendo glomerulonefrosis (los autores comentaron que esto parecía mostrar
que etoxiquina acelerado el proceso de envejecimiento), hiperplasia tubular y túbulos preneoplásicas putativos (los autores sugirieron que esto
puede ser indicativo de una efectos cancerígenos si un período más largo de dosificación eran para ser empleado).

Etoxiquina inhibió la carcinogenicidad hepática de aflatoxina B1 en ratas F344 de una manera relacionada con la dosis (Cabral y Neal, 1983,
citado en US EPA, 2004). La revisión por la EPA de los EE.UU. (2004) informó que 'una dosis de 0,05% redujo la incidencia de nódulos
neoplásicos y tumores de células de hígado y una dosis de
0,5% provocó una inhibición adicional de carcinogenicidad aflatoxinas. Había una alta incidencia de focos alterados, nódulos neoplásicos y tumores
de células de hígado en ratas aflatoxina alimentados solamente. La adición de etoxiquina a una dieta que contenía aflatoxina inhibió
completamente los tumores del hígado. Cuando etoxiquina se administró después de la aflatoxina, hubo una considerable reducción en la
incidencia de focos alterado y nódulos neoplásicos en el hígado. Se obtiene la inhibición más eficaz cuando estos agentes se dan de forma
simultánea. No hay tumores de hígado se encontraron en ratas etoxiquina alimentados solo o en controles no tratados.'

Ratas Wistar machos fueron tratados con 100 ppm N-metil-N •• nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) en su agua potable y cloruro de sodio al 10%
en su dieta durante 8 semanas. Posteriormente, se alimentaron con un suplemento dietético de 0,1% etoxiquina durante 32 semanas. Un
grupo adicional recibió tratamiento etoxiquina solo. La calcificación y los cálculos se observaron en la papila y la pelvis regiones de los riñones
en todos los grupos etoxiquina-tratada. análisis de elementos químicos de los cálculos renal mostró que los constituyentes principales eran
fósforo y calcio. En el examen ultraestructural las microvellosidades en la superficie de las células de la papila renal apareció degenerado o
estaban completamente ausentes en los grupos de ethoxyquintreated. La prevalencia y la gravedad de la lesión fueron mayores en el grupo
que se trató previamente con MNNG y cloruro de sodio (Imazawa, et al., 1989, citado en US EPA, 2004).

Hirose et al. (1986) (citado por US EPA, 2004) estudiaron la inducción de lesiones preestómago en ratas mediante antioxidantes. Un grupo de
ratas macho F344 fue alimentado con una dieta que contenía 0,25% de etoxiquina durante 2 semanas. Durante la segunda semana también se
les dio 1% BHA en su dieta. Las ratas control recibieron ni

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Etoxiquina para todas las especies animales

antioxidantes en su dieta. Todas las ratas se sacrificaron al final del período de tratamiento de 2 semanas. Los hígados y riñones se pesaron y
el estómago se examinó microscópicamente. daño epitelial pronunciado incluyendo la formación de la hiperqueratosis y la úlcera se observó en
la panza de ratas tratadas con etoxiquina más BHA. Se afirmó que la etoxiquina aumentó la hiperplasia leve causada cuando BHA se
administró por sí sola. Etoxiquina inhibió la carcinogenicidad de DMBA en el forestomach del ratón y también inhibió la formación de tumor
mamario producido por la administración oral de DMBA a ratas Sprague-Dawley hembras (Wattenberg, 1972, citado por US EPA, 2004).
Además,

La alimentación de 0,75% de etoxiquina en la dieta durante 4 meses no tuvo efecto sobre la formación de tumores de pulmón en ratones machos
inyectados con uretano (Witschi, 1981, citado en US EPA, 2004).

A.2.5. toxicidad para la reproducción

A.2.5.1 Los estudios en ratas

Un estudio de reproducción en dos generaciones se realizó en etoxiquina usando ratas Sprague-Dawley. Sólo estaba disponible (Delaney et al,
1995) un resumen del estudio. Grupos de 20 generación parental (F 0)
ratas de cada sexo recibieron 0, 75, 150 o 300 mg etoxiquina / kg de peso corporal / día por sonda oral en el aceite de maíz, comenzando 1 semana antes de
la reproducción. Se asume que las generaciones posteriores fueron alimentados con las mismas dosis. La F 0 generación producido dos camadas: el F 1a camadas,
nacidos en las 16 semanas siguientes la cría inicial, murieron edad 1 día para su examen; la segunda camada (F 1b) fue criado por el F 0 presas hasta el
destete. F seleccionada 1b animales recién destetados se mantuvieron hasta la edad de aproximadamente 80 días, cuando se aparearon para producir F 2- camada
generación. La F 1b los padres fueron sacrificados para su examen. pesos corporales reducidas fueron vistos en F 0- y F 1- machos de generación en el grupo de
dosis alta. aumentos relacionados con la dosis en los pesos de hígado y los riñones fueron encontrados en el F 0 y F 1 animales de todos los grupos de dosis.
Los efectos adversos sobre la reproducción se observaron en el F 0 generación en el nivel de dosis alta, como se evidencia por la disminución en el número
de camadas, disminución en el número de crías vivas por camada y la gestación prolongada. En posteriores apareamientos transversal más para determinar
que el sexo fue el más afectado, los cachorros nacidos de hembras tratadas pesaron menos que las crías de control, mientras que los cachorros nacidos de
machos tratados eran de peso similar a las crías de control. No hay efectos de etoxiquina se encontraron en F 1 parejas reproductoras. Los autores
concluyeron que los efectos adversos en la reproducción se observaron a 300 mg / kg de peso corporal / día, pero no a 150 mg / kg de peso corporal / día o
menos, pero un NOAEL no pudieron ser identificados como no había efectos sobre los pesos de hígado y los riñones en todas las dosis probadas (abajo a
75 mg / kg de peso corporal / día).

Los informes de la JMPR (FAO, 1969, 1998) resumen un estudio en ratas de dos generaciones de 1956 a 1959. Los grupos de ratas (cepa y grupo
de tamaño no especificado) fueron alimentados con una dieta que era ligeramente deficiente en tocoferol con adiciones de 0, 250 , 500 o 1.000 mg
etoxiquina / kg de dieta durante 40 días antes del apareamiento. La descendencia (F 1 generación) de la primera camada producida por el 0, 250 y
500 mg / kg grupos fueron entonces acoplado a producir la siguiente (F 2) Generacion. No se explicó por qué el grupo / kg 1000 mg no se utilizó para
producir otra generación. No se observaron efectos sobre la fertilidad, el tamaño de camada o la supervivencia de las crías. Se concluyó que el
NOAEL para este estudio fue de 500 mg / kg (equivalente a 45 mg / kg de peso corporal / día, usando el valor predeterminado AESA de 0,09 para
la exposición sub-crónica).

Los informes de la JMPR (FAO, 1969 y 1998) resumieron un estudio en ratas de una sola generación no estándar de 1956. Grupos de ocho o nueve
ratas hembra (cepa no se da) fueron alimentados con dietas que contenían 0, 125, 375 o 1125 mg etoxiquina / kg de dieta en el día que se
aparearon. Los tratamientos tuvieron ningún efecto sobre la duración de la gestación, pero las concentraciones de 375 mg / kg o tamaño de las
camadas más reducidas causadas, y 1125 mg / kg causó número de mortinatos aumentaron y reducen la supervivencia hasta el destete. Grupos
separados de ratas preñadas fueron dadas hasta 1125 mg / kg etoxiquina en su dieta en los días 1 a 10 de gestación sin efectos sobre el tamaño de
la camada, número de mortinatos, la supervivencia hasta el destete o peso de las crías al destete. Se concluyó que el NOAEL para este estudio no
estándar de la reproducción fue de 125 mg / kg de dieta (equivalente a 11 mg / kg de peso corporal / día).

Un estudio de toxicidad para el desarrollo se realizó en ratas Sprague-Dawley (estudio no publicado, que se resumen en US EPA, 2004, y DAR
(Alemania, 2007)) El estudio fue GLP compatible. Grupos de 21 a 25 hembras apareadas se administraron dosis por sonda diarias de 0, 50,
150 o 350 mg etoxiquina / kg de peso corporal en el aceite de maíz en los días 6 a 19 de gestación. Todos los animales fueron sacrificados
para su examen en el día 20 de la gestación. No hubo mortalidad no programada en las hembras apareadas. En los grupos de dosis bw 150 y
350 mg / kg, hubo una reducción en el peso corporal en los tres primeros días de dosificación (y también en la gestación

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Etoxiquina para todas las especies animales

días 12 a 16 en el grupo de dosis más alta). Muchos de los animales en los grupos de dosis media y alta también tenían amarillo o manchado
marrón y enmarañado pelaje. El consumo de alimento y ganancia de peso corporal fueron significativamente inferiores en los grupos de dosis media
y de dosis alta que en los controles concurrentes. No hubo cambios treatmentrelated a número de cuerpos lúteos, lugares de implantación, los
primeros y los sitios resorciones tardías, fetos viables y fetos muertos. Además, no hubo efectos en el número o tipo de malformaciones externas,
malformaciones de los tejidos blandos o malformaciones esqueléticas. Se concluyó que las dosis orales de hasta 350 mg etoxiquina / kg de peso
corporal / día no causaron ninguna toxicidad para el desarrollo en ratas, aunque las dosis de 150 mg / kg de peso corporal / día o más eran tóxicas
para la madre (NOAEL = 50 mg / kg de peso corporal / día).

Un estudio en ratas toxicidad para el desarrollo se realizó en el producto Santoquin, que contiene 67% etoxiquina (Khera et al., 1979, citado en
US EPA, 2004). Grupos de 20 ratas Wistar embarazadas recibieron Santoquin por sonda oral a dosis de 0, 125, 250 o 500 mg / kg peso
corporal / día en el aceite de maíz en los días de gestación 6 a 15. Las presas murieron el día 22. Los tratamientos no tuvieron efectos en
parámetros de embarazo: la tasa de embarazo, la proporción de sexos, peso fetal y media del número de cuerpos lúteos, fetos vivir por la
presa, implantaciones, resorciones, enanos y fetos muertos. Hubo un aumento en la incidencia de fetos anómalos '' en la mitad de la dosis,
pero no a la dosis más alta. Esto sugiere que el efecto no se treatmentrelated y el NOAEL para el estudio fue de 500 mg Santoquin / kg de
peso corporal / día (335 mg etoxiquina / kg de peso corporal / día).

En un estudio de evaluación de los efectos de la etoxiquina y varios otros antioxidantes sobre la resorción fetal, Telford, et al. (1962) (citado en
US EPA, 2004) administrado etoxiquina en la dieta a 57 mg / kg de peso corporal / día a ratas preñadas en los días de gestación 1 a 22. La
tasa de absorción fetal en las ratas tratadas con etoxiquina fue menor que en los controles.

A.2.5.2 estudios con conejos

Se realizaron experimentos para investigar si etoxiquina causó el aborto y la mortalidad de las crías de conejos blancos de Nueva Zelanda (Isenstein, 1970). En el primer experimento, se les

dio grupos de 16 a 20 conejos hembra ya sea de alimentación libre de etoxiquina, alimentación comercial que contiene 0,0025% etoxiquina o de alimentación que contiene 0,005% de

etoxiquina. Estas dietas se alimentaron a partir de 10 días antes del apareamiento hasta 2 semanas después del parto. Los machos se utilizan para dar servicio a las mujeres se les dio la

misma dieta de al menos 10 días antes del apareamiento. Los conejos se mantuvieron en viviendas sin calefacción. En un segundo experimento en el alojamiento climatizada, algunos de los

conejos del primer experimento se reasignaron aleatoriamente a nuevos grupos de 11 a 16 hembras que recibieron dieta libre de etoxiquina, dieta comercial (0,0025% etoxiquina) o dieta que

contenía 0,01% de etoxiquina. El protocolo del segundo experimento fue de lo contrario la misma que para el primer experimento. períodos de gestación, tamaño de la camada y el número de

nacidos muertos no se vieron afectados por la presencia de etoxiquina en la dieta. No hay abortos se produjeron en ninguno de los experimentos y sin físicamente se encontraron fetos

anormales. En el primer experimento, muchos conejos recién nacidos o jóvenes murieron como resultado del clima frío, pero no parecen ser afectados por la cantidad de etoxiquina en la dieta

mortalidad. En el segundo experimento, hubo una disminución relacionada con la dosis en la mortalidad, con la mortalidad a nivel dietético más alto es aproximadamente un tercio de que en

el grupo libre de etoxiquina. No hay abortos se produjeron en ninguno de los experimentos y sin físicamente se encontraron fetos anormales. En el primer experimento, muchos conejos recién

nacidos o jóvenes murieron como resultado del clima frío, pero no parecen ser afectados por la cantidad de etoxiquina en la dieta mortalidad. En el segundo experimento, hubo una

disminución relacionada con la dosis en la mortalidad, con la mortalidad a nivel dietético más alto es aproximadamente un tercio de que en el grupo libre de etoxiquina. No hay abortos se

produjeron en ninguno de los experimentos y sin físicamente se encontraron fetos anormales. En el primer experimento, muchos conejos recién nacidos o jóvenes murieron como resultado

del clima frío, pero no parecen ser afectados por la cantidad de etoxiquina en la dieta mortalidad. En el segundo experimento, hubo una disminución relacionada con la dosis en la mortalidad,

con la mortalidad a nivel dietético más alto es aproximadamente un tercio de que en el grupo libre de etoxiquina.

A.2.5.3 estudios con perros

Se presentó un informe de un estudio de toxicidad de reproducción en dos generaciones en perros beagle. 25 El estudio fue GLP conforme.
Grupos de 5 macho y 10 hembra F 0- perros generación fueron alimentados con dietas a la que, o se añadió 360 ppm de etoxiquina 0 180,
dando concentraciones medias (por análisis) de 0, 102 y 224 (igual a aproximadamente 0, 2,5 y 6 mg etoxiquina / kg de peso corporal / día)
para 82 días antes del apareamiento. Las mismas dietas se alimentaron a grupos de 8 hombres y 13 mujeres F 1- perros generación que habían
sido seleccionados al azar de los cachorros nacidos de cada grupo de dosis de la F 0- los padres generación. La F 1- perros generación se
aparearon a los 10 años a 30 meses (después de segundo estro de las hembras) para producir el F 2- cachorros generación. Se tomaron
muestras de semen en la época de apareamiento. Se tomaron muestras de sangre antes del tratamiento y al final de la F 0 fase, en las semanas
0, 23, 36, 49 y 62 de la F 1 fase de crecimiento, y en la terminación de la F 1 fase de apareamiento. Oftalmoscopia se realizó al principio y al final
de la F 1 de crecimiento y de apareamiento fases. todos los F 1 adultos o cachorros y F 2 cachorros que mostraban signos clínicos, además de los
perros que murieron prematuramente, se realizó la autopsia y los órganos seleccionados fueron examinados al microscopio. Además, el
examen histopatológico de una selección limitada de los órganos se realizó en F 1 adultos del grupo de dosis más baja. Los resultados del
estudio mostraron que la calidad del semen, el rendimiento reproductivo y los resultados no se vieron afectados por el tratamiento con
etoxiquina. Sin embargo, en tanto

25 expediente técnico / SECCI / Anexo III_2_2_5_1_4

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Etoxiquina para todas las especies animales

concentraciones de ethyoxyquin se produjo un aumento de la prevalencia de algunos signos clínicos en perros de la F 0 y F 1 generaciones
(incluyendo lagrimeo excesivo y deshidratación) que se observa comúnmente en los perros no tratados de la colonia de cría. En las mujeres en
ambos niveles de dosis, no hubo deposición de un pigmento marrón oscuro (identificado como protoporfirina IX) en hepatocitos periportal y
células de Kupffer sin cambios patológicos en el hígado. La intensidad de la pigmentación fue mayor a la dosis más alta. No hubo cambios en
algunos parámetros bioquímicos en sangre en F 1 perros generación. Había disminuciones en la proteína total y albúmina en el suero de las
hembras en ambos niveles de dosis, pero no en todos los puntos de tiempo. la actividad de la ALT sérica se elevó constantemente en las
hembras con la dosis alta desde la semana 23 hasta la semana 62 de vida y se crió en los hombres en el grupo de dosis alta en la semana 36
y 62 solamente. fosfatasa alcalina sérica (AP) se elevó en animales de ambos sexos, y en ambos niveles de dosis, en la semana 10, pero sólo
de vez en cuando en el nivel de dosis más alta a partir de entonces. AP elevada también se detectó en las hembras de los F 0

generación en el grupo de dosis alta. Hematología, análisis de orina y oftalmoscopia resultados no fueron afectados por el tratamiento con
etoxiquina. No fue posible identificar un NOEL para este estudio como la deposición de pigmento en el hígado se observó en todas las dosis
ensayadas. La relevancia toxicológica de este hallazgo no está clara. De lo contrario no había ninguna indicación clara de toxicidad a dosis de 2,5
mg / kg de peso corporal / día o menos.

A.2.6. Estudios de genotoxicidad, mutagenicidad

Los informes de los orginal los siguientes estudios no estaban disponibles. Sin embargo, se describen ampliamente en DAR (Alemania, 2007).

En un ensayo de mutación inversa en bacterias compatible con la OECD Guideline 471 (Mecchi, 2004), etoxiquina (pureza 98,93%) se ensayó
por su capacidad para inducir mutaciones inversas ya sea en presencia o en ausencia de microsomal de mamíferos en Salmonella
typhimurium (cepas TA98 , TA100, TA1535 y TA1537) y en Escherichia coli cepa WP2uvrA, hasta 5 000 g / placa en presencia y ausencia de
mezcla S9 obtenida de hígados de rata inducida por Aroclor. El artículo de prueba no causó un aumento en el número medio de revertientes
por placa con cualquiera de las cepas de ensayo, ya sea en la presencia o ausencia de activación metabólica (S9). Las sustancias de control
positivo dieron como resultado el aumento esperado en las frecuencias mutantes. Etoxiquina (pureza 98,6%) se ensayó para determinar el
potencial mutagénico en la línea celular L5178Y de linfoma de ratón, anotando para las mutaciones hacia adelante en el locus de timidina
quinasa, en ausencia y en presencia de mezcla S9 de Aroclor hígados de ratas adultas 1.254 inducida, de acuerdo a OECD 476 (Riach, 2005).
La sustancia se ensayó hasta concentraciones citotóxicas (25 y 4,4 mg / ml en ausencia y en presencia de mezcla S9, respectivamente)
después de un periodo de exposición de 4 horas, en dos experimentos independientes. Todos los experimentos (con y sin S9

la mezcla) incluyen al menos una concentración que probado significativas a P <0,05 y tenía una tendencia altamente significativa (P <0,001)
lineal en la fracción mutante con nivel de dosis de etoxiquina. El análisis de la tamaño de las colonias indicó que la mutagenicidad de
etoxiquina está más estrechamente asociada con daño cromosómico a gran escala, que con daño de escala o mutaciones puntuales
pequeños.

en una in vitro prueba clastogenicidad, (Murli, 2004), etoxiquina (pureza 98,93%) se analizó para determinar la capacidad de inducir
aberraciones cromosómicas en cultivos de ovario de hámster chino (CHO), en presencia o ausencia de un sistema de activación metabólica
exógena, en cumplimiento con la OCDE Guía
473. Las células diana fueron tratados hasta concentraciones citotóxicas (30,0 y 25,0 mg / ml con y sin activación metabólica,
respectivamente). El tratamiento duró aproximadamente 20 horas sin activación metabólica y 3 horas con activación metabólica. Un aumento
significativo de células con aberraciones cromosómicas se observó tanto con y sin activación metabólica. En la poliploidía concentraciones
superiores se observó en todas las condiciones experimentales. En presencia de activación metabólica, poliploidía fue al menos en parte
debido a la citotoxicidad, tal como se indica por la endorreduplicación observado. La inducción de poliploidía, en particular sin
endorreduplicación, podría indicar una interacción con las proteínas del huso mitótico y ,, por lo tanto, el potencial aneugenicidad. En una
prueba de micronúcleo in vivo (Erexson, 2004), etoxiquina (pureza 98,93%) se ensayó para en vivo actividad clastogénica y / o la interrupción
del aparato mitótico mediante la detección de micronúcleos en eritrocitos policromáticos (PCE) en Crl: CD-1® (ICR) BR hueso ratón ósea, de
conformidad con OECD Guideline 474. La sustancia se administró por sonda oral hasta la dosis máxima tolerada de 1,500 mg / kg de peso
corporal, determinado por un ensayo de dosis telemetría anterior. Se analizaron al menos 2 000 eritrocitos policromáticos (PCE) para la
frecuencia de micronúcleos. La citotoxicidad se evaluó al marcar el número de PCE y eritrocitos normocromáticos (NCEs) en al menos los
primeros 500 eritrocitos totales de cada animal. Etoxiquina no indujo aumentos estadísticamente significativos en los PCE micronucleados en
cualquier dosis artículo de ensayo examinados, mientras que una sustancia de control positivo, ciclofosfamida, resultó en el aumento esperado
de la

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Etoxiquina para todas las especies animales

porcentaje de eritrocitos policromáticos micronucleados. No estadísticamente se observó disminución significativa en la relación / NCE PCE se
observó en cualquier dosis de etoxiquina.

la síntesis de ADN no programada (UDS) se evaluó en los hepatocitos de ratas macho Sprague-Dawley (CD) después del tratamiento con
etoxiquina (pureza> 99%), de conformidad con OECD Guideline 486 (Pritchard, 2006). Dos administraciones orales del producto de ensayo se
les dio con un intervalo de 14 horas: 2 x 225 y 2 x 750 mg / kg de peso corporal, que se consideró la dosis máxima tolerada. signos claros de
toxicidad se produjo en ambos niveles de dosis. Las ratas se sacrificaron 2 horas después de la segunda administración. Los hepatocitos se
aislaron mediante disociación enzimática después de la exposición de los animales a la sustancia de ensayo. Se evaluaron cuatro animales de
los grupos de tratamiento y de control del vehículo y dos animales del grupo control positivo. Los hepatocitos aislados se deja que se unan a
cubreobjetos de vidrio y se cultivaron in vitro con timidina tritiada durante 4 horas para ADN 'radiomarcador' sometidos a la replicación de
reparación, seguido de cultivo de 20 horas en presencia de timidina sin marcar; las células se fijaron en portaobjetos y se procesaron para la
autorradiografía. Cien células por animal (50 • Se analizaron 2 cultivos independientes). Etoxiquina no causó ningún aumento estadísticamente
significativo en el recuento neto de granulaciones nucleares en cualquier nivel de dosis en comparación con los valores de control del vehículo.
La sustancia de control positivo dio la respuesta esperada.

Además del DAR (Alemania, 2007), los siguientes estudios publicados fueron considerados por la Comisión FEEDAP:

Un in vitro cromosoma prueba de aberración en linfocitos humanos se empleó para investigar el potencial en clastogenicidad in vitro de
etoxiquina (Błaszczyk et al., 2003). Los linfocitos humanos procedentes de tres donantes sanos fueron incubadas con 0,01, 0,025, 0,05, 0,1,
0,25 o etoxiquina 0,5 mM, con y sin activación metabólica (S9 mezcla de Aroclor 1254 ratas inducida). Se utilizaron tres esquemas de
tratamiento alternativos: 3 horas de tratamiento sin mezcla S9; tratamiento de 24 horas sin mezcla S9; tratamiento 2 horas con la mezcla S9.
aumentos dependientes de la dosis en la frecuencia de aberraciones cromosómicas se informó en todas las condiciones experimentales. El
agrupamiento junto aberraciones cromosómicas y las lagunas, estos aumentos fueron estadísticamente significativas a partir de 0,05 mM en el
tratamiento de 24 horas sin mezcla S9 y de 0,025 mM en el tratamiento de 2 horas con la mezcla S9. Sin embargo, cabe señalar que,

Un in vitro ensayo de electroforesis en gel de una sola célula alcalina (ensayo cometa) se utilizó para medir el daño del ADN inducido por la
etoxiquina en linfocitos humanos, con y sin activación metabólica (S9 mezcla de Aroclor 1254 ratas inducida) (Błaszczyk et al., 2006). Las
células se trataron con seis concentraciones del producto de ensayo, que van de 1 a 250? M. Una inducción dependiente estadísticamente
significativa y la dosis de daño en el ADN se observó en todas las concentraciones analizadas, con un efecto menor en la presencia de mezcla
S9. Cabe señalar que el ensayo cometa in vitro no es una prueba validada y no se utiliza actualmente para la evaluación de riesgos, también
debido a las incertidumbres sobre la naturaleza de los eventos moleculares responsables del efecto observado.

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Etoxiquina para todas las especies animales

Apéndice B - Resumen de los estudios sobre el destino metabólico y toxicológica


perfil de pag- fenetidina
B.1. destino metabólico

Las principales vías metabólicas de pag- fenetidina se describen en la Figura 4. El conocimiento de la cinética de
pag- fenetidina en el laboratorio y en la especie objetivo es limitada. La mayor parte de los pocos estudios publicados se realizaron hace
muchas décadas utilizando técnicas de análisis de sensibilidad y especificidad limitada. Además, la mayor parte de la información disponible
se ocupa de pag- fenetidina no como un producto químico sino más bien como un metabolito de la fenacetina, es decir, su análogo
N-acetilado, un analgésico ampliamente utilizado y antipirético desarrollado como un profármaco de acetaminofeno (APAP), que se generó a
través de un CYPmediated O-de-etilación. Fenacetina ha sido retirado del mercado, ya que se informó a causar efectos adversos graves,
tales como la formación de metahemoglobina y la insuficiencia renal en un número de pacientes (Jensen y hueco, 1991); recientemente, se
ha clasificado como un carcinógeno del Grupo I por la IARC (2012) debido a la notable incidencia de tumores uroteliales de la pelvis y otros
renales en pacientes que consumen grandes cantidades de analgésicos que contienen fenacetina.

Figura 4: vías metabólicas principales de pag- fenetidina

No hay datos sobre pag- absorción fenetidina y la distribución después de la exposición ya sea oral o por inhalación se pueden encontrar
(Pauluhn y Mohr, 2001). En las especies de mamíferos, el destino metabólico implica tanto el grupo ethoxylic (-O-C2H5) y el grupo amino
(Figura 4). El primero se somete a un CYP mediada Ode-etilación a pag- aminofenol, que luego se conjuga, produciendo derivados
principalmente glucurónido, que se pueden encontrar en la orina. pag- Aminofenol se ha informado para actuar como un nephrotoxicant en
ratas F344 (Newton et al., 1982) y se cree que desempeñan un papel significativo en la generación de metahemoglobinemia en caninos y
felinos eritrocitos (McConkey et al., 2009).

Como para muchas otras arilaminas, las reacciones metabólicas que implica el -NH 2 grupo son de gran importancia en el dictado de la
activación / desintoxicación de pag- fenetidina. La formación de N-glucurónidos Se ha informado que en los conejos por vía oral dosificados
(Smith y Williams, 1949). Además, en común con otras arilaminas, pag- fenetidina puede sufrir N-acetilación por citosólicas N-acetiltransferasas
(NAT), produciendo el fenacetina derivado N-acetilado, que ha sido detectado en la orina de los conejos expuestos oralmente (Smith y
Williams, 1949). Aunque esto puede ser considerado una reacción de desintoxicación, debe tenerse en cuenta que un número de
carboxilesterasas de tejido son capaces de de-acetylate (hidrolizar) fenacetina de nuevo a pag- fenetidina (Watanabe et al., 2010).

Las reacciones de conjugación pueden competir con la ruta de N-oxidación, que genera una (N-hydroxyphenetidine hidroxilamino-derivado,
también informado pag- hydroxyaminophenetol) (Uehleke,
1971), que puede ser oxidado adicionalmente a una pag- nitroso -derivative (ver abajo) y, en general se acepta como la ruta principal para la
bioactivación pag- fenetidina. Ratas macho Sprague-Dawley tratados una vez con alrededor de
12, 19 o 39 mg de N-hydroxyphenetidine / kg de peso corporal por vía intraperitoneal mostraron un rápido inicio de metahemoglobinemia
alcanzando niveles de pico (casi del 60 al 70% de la hemoglobina total) tan pronto como 30 minutos después de la dosificación (Kiese, 1974
citado por Jensen ad Jollow, 1971) .N-hydroxyphenetidine también se ha demostrado que desempeñan un papel predominante en la aparición
de hemólisis y metahemoglobinemia en pacientes humanos como consecuencia de la sobredosis y el abuso crónico de fenacetina (Jensen y

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Jollow, 1991). No hay trazas de N-hydroxyphenetidine podrían ser detectados en la sangre de ratas tratadas, de acuerdo con los hallazgos de
otros autores, lo que sugiere que en los humanos, ratas, perros y este compuesto es solamente un metabolito urinario muy menor de ambos
fenacetina y pag- fenetidina (Kiese, 1974 citado por Jensen ad Jollow, 1971). Una etapa de oxidación adicional para pag- derivados nitrosos (por
ejemplo, pag-
nitrosophenetol) ha sido reportado en perros intavenously inyectados con 12 mg fenetidina / kg de peso corporal (Baader et al., 1960). En ratas
y conejos, la generación de 2-hidroxi-phenetedine ha sido también documentada; este metabolito se excreta principalmente como el derivado
de sulfato en la orina (Smith y Williams, 1949; Dubach y Raaflaub, 1969, citado por IARC, 2012).

prostaglandina sintetasa (PGS) y otras peroxidasas son también responsables de pag- oxidación fenetidina. Tales enzimas se expresan
particularmente en los tejidos extrahepáticos, incluyendo médula renal y la vejiga urinaria, y en muchos casos están implicadas en la formación
de intermediarios y / o productos reactivos con (geno) propiedades tóxicas. La oxidación PGS-mediada de pag- fenetidina por microsomas de
riñón humano y de conejo genera varios metabolitos reactivos que se han demostrado que se unen covalentemente a las proteínas y de ser
inactivada por GSH (Larsson et al., 1985). La oxidación PGS-mediada de pag- fenetidina resultante de la hidrólisis de la fenacetina se piensa
que es la etapa clave en la nefrotoxicidad de este último (Larsson et al., 1985)

metabolismo peroxidasa catalizada de pag- fenetidina también resulta en la generación de especies de unión a ADN que han sido reportados
para inducir roturas en el ADN de una sola hebra en fibroblastos humanos (Andersson et al., 1982).

Se espera que la base de los caminos metabólicos descritos anteriormente, las condiciones conocidas para deprimir la tasa de glucuronidación
y / o N-acetilación de actuar como factores de predisposición que predisponen a pag-
toxicidad fenetidina, en que una mayor cantidad del compuesto estaría disponible para CYP y / o de oxidación rendimiento (geno) metabolitos
tóxicos y reactivos PGSmediated. Esto puede ser el caso de perros y gatos, ya que los gatos sólo expresan NAT1, mientras que los perros
carecen de ambos genes NAT (Trepanier et al., 1997,
1998). A este respecto, se ha proporcionado evidencia que apoya la capacidad de los perros de hidroxilar varias arilaminas (por ejemplo,
2-aminonaftaleno, 4-acetylaminobiphenyl) y la vista de que la vía Nhydroxylation de tales compuestos es un paso clave en el proceso de
bioactivación que conduce por ejemplo a la vejiga cáncer en que las especies (Poirier et al., 1963). Además, los gatos son conocidos largo
para ser más sensible que otras especies a derivados de fenol, incluyendo el pag- metabolito fenetidina pag-

aminofenol, debido a su incapacidad para glucuronidar como el resultado de la mencionada falta de UGT 1A6 y 1A9 enzimas (Court, 2013); la
no conjugada pag- por lo tanto aminofenol es libre para promover la formación de metahemoglobina en eritrocitos felino (McConkey et al., 2009)
.El destino metabólico de fenetidina se ha establecido en el conejo (Smith y Williams, 1949). O-de-etilación dio lugar a pag- aminofenol, que se
acetila para pag- acetamidofenol (acetaminofeno, paracetamol) y se excreta como glucurónido. Otra vía fue la hidroxilación directo a
2-hidroxi-4-etoxi-anilina seguido de sulfatación. Aproximadamente el 2% de pag- fenetidina administrado por vía oral a conejos se excreta sin
cambios en la orina, mientras que el 5-6% se metaboliza a acetilado pag- fenetidina, 30% a los sulfatos etéreos, de los cuales 8 a 9% era
2-hidroxi 4-etoxi-anilina-sulfato, y el 58% se metaboliza a

pag- toluidina en forma glucuronizado. El tres por ciento de la dosis apareció como grupo amino libre y al diazotable pag- acetamidophenylglucuronide
también fue identificado.

B.2. perfil toxicológico

B.2.1 Estudios de genotoxicidad, mutagenicidad

En un estudio de mutación inversa bacteriana de 300 productos químicos, pag- fenetidina se probó en Salmonella typhimurium TA98 y TA100
(ensayo de pre-incubación). La sustancia fue positiva en TA 100 con activación metabólica, mientras que, se informó de resultados equívocos
en las otras condiciones (Zeiger et al.
1988).

En un estudio que tuvo como objetivo caracterizar la mutagenicidad del bucetin analgésico, su metabolito pag-
fenetidina se encontró que era positivo en un ensayo de mutación inversa en bacterias en Salmonella typhimurium TA 100 (prueba de
pre-incubación) (Nohmi 1985). El sistema de activación metabólica contenía fracción S9 preparado a partir del hígado de hámster sirio dorado
PCB inducida, en lugar de la S9 de hígado de rata habitual.

Un ensayo de mutación inversa en bacterias se llevó a cabo en Salmonella typhimurium TA97, TA98, TA100 y TA102 (ensayo de
pre-incubación) (estudio no publicado encargado por el Ministerio de Salud y Bienestar de Japón, sin fecha). El artículo de prueba se probó a
concentraciones de hasta 5 mg / placa con y sin

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activación metabólica (S9 del hígado de las ratas tratadas previamente con fenobarbital / 5,6-benzoflavona). Un ligero aumento en colonias
revertientes sólo se observó en las cepas TA100 y TA102, y sólo en presencia de mezcla S9; sin embargo, este aumento fue menor que el
doble del valor de control y, por lo tanto, el resultado se consideró biológicamente irrelevante.

También se encontró que la sustancia de ensayo a ser positivo para efectos mutagénicos en células de hámster chino CHL, con y sin
activación metabólica, en un informe no publicado del Ministerio Japonés de Salud y Bienestar Social, por parte de la OCDE (1994); Sin
embargo, el informe original no estaba disponible a la Comisión FEEDAP.

Una prueba de micronúcleo después de la administración oral (sonda) se realizó en hombres y Crj hembra: ratones BDF1 para evaluar la en
vivo efecto citogenético de pag- fenetidina (estudio no publicado encargado por el Ministerio de Salud y Bienestar de Japón, sin fecha). Las
dosis máximas toleradas (MTDs) fueron establecidos por una prueba de rango de búsqueda de dosis y eran 600 mg / kg de peso corporal
machos en y 1 000 mg / kg en las hembras. En un ensayo de micronúcleos preliminar, sin controles negativo o positivo, los MTDs se
administraron a cinco animales por frotis de grupo y de médula ósea se prepararon a las 24, 48 y 72 horas después de la administración. En el
tiempo de muestreo de 24 horas, la frecuencia de micronúcleos apareció claramente superior a las 48 y 72 horas, tanto en los hombres y en
las mujeres; Sin embargo, este resultado no podía considerarse una prueba definitiva de genotoxicidad debido a la ausencia de controles
negativos. Sobre la base de este experimento preliminar, sólo se aplicó un tiempo de muestreo de 24 horas en el experimento subsiguiente. En
el experimento principal, las dosis de 150, 300 y 600 mg / kg de peso corporal se administran a los machos y las dosis de 250, 500 y 1 000 mg
/ kg de peso corporal se les administró a las hembras. En los hombres, no se observó aumento estadísticamente significativo en la frecuencia
de micronúcleos en comparación con el grupo control de disolvente en cualquier grupo de administración. En las mujeres, la frecuencia de
micronúcleos se aumentó significativamente en el grupo 1 000 mg / kg. No se observó ninguna supresión de la proliferación de células de
médula ósea en hombres o mujeres en cualquier grupo de administración. Este estudio indica aparentemente una respuesta diferencial entre
machos y hembras. Sin embargo, cabe señalar que en el experimento de búsqueda de dosis de la MTD para los hombres se fijó en 600 mg /
kg de peso corporal sobre la base de una sola observación a 800 mg / kg de peso corporal (un animal muerto de cinco) y que las hembras eran
positiva sólo en 1 000 mg / kg de peso corporal.

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Apéndice C - Resumen de los estudios toxicológicos con etoxiquina


quinona imina
C.1. Estudios de genotoxicidad, mutagenicidad

EQI se ensayó en el Salmonella typhimurium ensayo de mutación inversa con cuatro cepas de histidina que requiere de Salmonella
typhimurium ( TA1535, TA1537, TA98 y TA100) y en el Escherichia coli
ensayo de mutación inversa con una cepa triptófano que requiere de Escherichia coli ( WP2uvrA) siguiendo las directrices de ensayo más
reciente, la OCDE 471. 26 La prueba se realizó en dos experimentos independientes en la presencia y ausencia de S9-mix (de hígado de rata
S9-mix inducida por Aroclor 1254). Un experimento adicional se realizó con el TA1537 cepas y WP2uvrA.

Basándose en los resultados de un experimento de rango de búsqueda de dosis de toxicidad, EQI se puso a prueba en el primer ensayo de
mutación en un intervalo de concentración de 5,4 a 1600 g / placa en ausencia y en presencia de S9-mix (TA1535, TA1537 y TA98). se
observó evidencia de toxicidad en las tres cepas en dosis de 512 g / placa y superior. No cepa produjo un aumento biológicamente significativo
en el número de revertientes.

En el segundo experimento, los tratamientos de todos los cepas de ensayo se realizaron en ausencia y en presencia de mezcla S9 usando un
intervalo de concentraciones de 86 a 1568 mg / placa. Se observó toxicidad en todas las cepas de ensayo, excepto en la cepa WP2uvrA. En el
TA1537 cepa de ensayo en ausencia de S9-mix, la sustancia de ensayo indujo un aumento de hasta 5,1 veces en el número de colonias en
comparación con el control de disolvente. Sin embargo, no se observó este aumento en sólo dos concentraciones tóxicas (878 y 1568 g /
placa). Este aumento no se podría repetir en dos experimentos repetidos y por lo tanto no se consideró biológicamente relevante. Los autores
del estudio sugieren que este aumento podría surgir de la histidina liberadas por las bacterias muertas en el nivel de toxicidad alta y está
disponible para las células supervivientes.

La posible clastogenicidad y aneugenicidad de EQI se ensayaron en un in vitro ensayo de micronúcleos en linfocitos humanos periféricos
cultivados. 27 Dos experimentos independientes en la presencia y ausencia de un sistema de activación metabólica (fenobarbital y ß-naftoflavona
de hígado de rata inducida S9-mix) se llevaron a cabo de conformidad con OECD Guideline 487.

El EQI (pureza 99,4%) se disolvió en sulfóxido de dimetilo. En el primer experimento, el producto de ensayo se probó hasta 14 y 12 g / ml
durante un tiempo de exposición de 3 horas con un tiempo de cosecha 27 horas en ausencia y en presencia de S9-fracción, respectivamente.

En el segundo experimento, el artículo de prueba se probó a concentraciones de hasta 11 mg / ml en ausencia de S9-mix. El tiempo de la cosecha
tiempo de exposición eran ambos de 24 horas. En ambos experimentos se observó una toxicidad grave en el nivel de dosis más alta.

EQI inducida dependiente aumento una dosis, estadísticamente significativa en el número de micronúcleos tanto en ausencia y en presencia
de mezcla S9, en tanto en células de mono y binucleadas, en dos experimentos independientes.

El número de células mono- y binucleadas con micronúcleos que se encuentran en los cultivos de control de disolvente se encontraba dentro del
rango de datos de control del laboratorio histórico. Dos clastógenos conocidos utilizados como productos químicos de control positivo, mitomicina C y
ciclofosfamida, producido aumentos estadísticamente significativos en micronúcleos sólo en las células binucleadas mientras que la colchicina
compuesto aneugénico induce el mismo efecto sólo en las células mononucleadas.

26 Información Suplementaria de julio de 2015 / Anexo 05


27 Información Suplementaria de julio de 2015 / Anexo 06

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Anexo A - Resumen Ejecutivo del Informe de Evaluación de la europea


Laboratorio de Referencia de la Unión de aditivos para alimentación animal en el
Método (s) de Análisis para Etoxiquin

En la aplicación actual se solicita la autorización para la etoxiquina, en virtud del artículo 10 (2) para la categoría / grupo funcional 1 (b) 'aditivos
tecnológicos' / 'antioxidantes', según el sistema de clasificación del artículo 6 del Reglamento (CE) no 1831 / 2003. Se desea obtener
autorización para el uso del aditivo en piensos para todas las especies y categorías de animales. El aditivo para piensos está destinado a ser
mezclado en las premezclas o añadido directamente a completar la alimentación animal. El solicitante propuso un nivel máximo de 150 mg / kg
para la etoxiquina solo o por la suma de etoxiquina con butil hidroxi anisol (BHA, E320) y / o hidroxitolueno butilado (BHT, E321); para los
perros, etoxiquina no excederá 100 mg / kg. Además, el solicitante sugiere límites máximos de residuos (LMR) en los tejidos diana (músculo,
hígado, riñón, grasa, leche, huevos).

Para la determinación de etoxiquina en el aditivo para piensos, el solicitante presentó el método de titulación se describe en la monografía
Etoxiquin 'del Food Chemical Codex (FCC). A pesar de que no se proporcionan características de rendimiento, la EURL recomienda para el
control oficial del método FCC reconocida internacionalmente sobre la base de valoración para determinar la etoxiquina en el aditivo para
piensos. Para la determinación de etoxiquina en las premezclas, la solicitante presentó un único laboratorio validado y más verificada método
multi-analito basa en Invertida Cromatografía Líquida de Alta Fase junto con ultravioleta (RP-HPLC-UV) o de red de diodos Detector (DAD).
Para la determinación de etoxiquina en la alimentación animal, el solicitante presentó el método validado RP-HPLC ensayo anillo acoplada con
detección de fluorescencia (RP-HPLC-FD) publicado por la Asociación de Químicos Analíticos Oficiales (AOAC 996.13 - 'etoxiquina en los
piensos'). Basado en las características de rendimiento que se presentan, la EURL recomienda para el control oficial, el único laboratorio validó
y verificó adicionalmente método de RP-HPLC-UV / DAD para determinar etoxiquina en las premezclas y el método de RP-HPLC-FD ensayo
anillo validado, AOAC 996.13, para la determinación de etoxiquina en la alimentación animal. Para la determinación de etoxiquina en los tejidos
diana el solicitante propuso un único laboratorio y el método de RP-HPLC-FD verificado aún más sobre la base de un procedimiento publicado
en la revista revisada por pares AOAC Internacional. Sobre la base de las características de rendimiento que se presentan,

La prueba adicional o validación de los métodos que se deben realizar a través de la asociación de laboratorios nacionales de referencia como
se especifica en el artículo 10 (Reglamento (CE) nº 378/2005) no se considera necesario.

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