No puedo tolerar la leche

Enzimas
Intolerancia a la lactosa
Intolerancia a la lactosa
 Enzimas

Gran poder catalítico

Gran especificidad

La inmensa mayoría son proteínas

RNA con propiedades catalíticas: Ribozima
Las enzimas aceleran la velocidad de
las reacciones en los seres vivos
E + S !" ES " E + P

Unión del sustrato Liberación del producto

Breve repaso de lo que es DG
Las enzimas cambian la energía
de activación, pero no DG
Sin la enzima

Con la enzima

Igual !
Las enzimas reducen la energía de activación
 Efecto de la temperatura vs.
Efecto de una enzima

Aumento en la temperatura Adición de enzima

 Cinética enzimática

k1 k3
+ +
k2

k1 k3
E + S ES E + P
k2

k1 = Constante de formación del complejo enzima-sustrato

k2 = Constante de disociación del complejo enzima-sustrato
k3 = Constante de aparición de producto
Formación y disociación del complejo ES
 Cinética enzimática
k1 k3
E + S ES E + P
k2

Velocidad de formación de enzima-sustrato = k1 [E] [S]

Velocidad de disociación de enzima-sustrato = k2 [ES]
Velocidad de aparición del producto= k3 [ES]
(Velocidad catalítica)

Km = k2 + k3
k1
Km = Medida de la afinidad de la enzima por el sustrato
A < Km, mayor afinidad
 “Steady State”
Cuando la velocidad de formación y desaparición
de complejo ES son iguales

=
[S] [ES] [P]
 “Steady State”

En estado estacionario:
Velocidad de formación y disociación de ES son iguales

k1[E][S] = k2[ES] + k3[ES]

Después de varias reorganizaciones llegamos a que:

V= Vmáx [S]
[S]+ Km
Ecuación de Michaelis - Menten
Cinética de tipo “Michaeliano”
Como calcular Km y Vmax experimentalmente ?
Ecuación de Lineweaver - Burk

Ecuación de la recta y = mx + b
Ecuación de LW- B V = Km 1 1
+
V máx [S] V máx

Variando la [S] podemos conocer

Km y V máx de la enzima.
 Gráfico de Lineweaver - Burk

1/V
m= Km/V máx

-1/Km
1/ V máx

1 / [S]

Además de permitir el cálculo de Km y Vmáx

Es muy útil para evaluar la inhibicion enzimática
Gráfico de Lineweaver-Burk
 Inhibición enzimática

Irreversible
El inhibidor se une a enzima de forma covalente
en un complejo de disociación lenta.

Agentes Alquilantes
Gases Neurotóxicos

Reversible
El inhibidor se une a la enzima en forma no covalente,
en un complejo de disociación rápida.

Competitiva o No competitiva
 Inhibición Competitiva Inhibición no competitiva
E
S

I I
S

S
I

Solo se puede formar complejo Se forma complejo enzima-sustrato

enzima-inhibidor, porque el Inh. inhibidor, porque el Inh. Se fija en
se une al sitio activo un sitio distinto al sitio activo.
 Inhibición enzimática

En la inhibición competitiva el inhibidor se une al sitio activo

compitiendo con el sustrato e impidiendo su unión.

En la inhibición no competitiva el inhibidor se une en un sitio

diferente al sitio activo, pero cambia la afinidad de la enzima
por el sustrato, inhibiendo la actividad enzimática.

Los tipos de inhibición enzimática se

distinguen cinéticamente
 Inhibición enzimática competitiva

1/V

V máx permanece
constante

1/[S]
Sin inhibidor
-1/Km aumenta Con inhibidor

La V máx permanece constante, solo que se tarda mas en alcanzarla

Km aumenta, indicando que hay menor formación de complejo ES
La pendiente aumenta, porque Km aumenta (m=Km/V máx)
 Inhibición enzimática NO competitiva

1/V

V máx varía
(disminuye)

1/[S]
Sin inhibidor
-1/Km permanece
constante
Con inhibidor

La V máx se disminuye notoriamente

Km permanece constante, porque no se altera la formación de ES
La pendiente aumenta, porque V máx disminuye (m=Km/V máx)
 Enzimas alostéricas

Algunas enzimas no poseen una cinética “Michaeliana”

Tienen subunidades regulatorias

Tienen 2 centros catalíticos regulados por el sustrato

Tienen cinética “sigmoidea”

Se les llama enzimas

alostéricas
 Enzimas alostéricas

De nuevo V se hace
independiente de [S]

Luego la relación
V Permanece constante

Cambios en [S] inducen

Hay un punto en que se
poco cambio en V
produce un cambio brusco

[S]
La acción de muchas enzimas
depende del pH
Cofactores
Cofactores
Coenzimas
 Regulación de la actividad enzimática

Inhibición por el producto final de la vía:

A B C D
X

Proteínas reguladoras

Por modificación covalente (xe. Fosforilación)

Activación a partir de un ZIMOGENO

Origen de la intolerancia a la lactosa
Origen de la intolerancia a la lactosa