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Revisión crítica

Una revisión exhaustiva sobre las flavanonas,


los principales polifenoles cítricos
Los enlaces del autor abren el panel de superposiciónMuhammad Kamran Khan  Zill-E-Huma  Olivier Dangles 
a b c

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https://doi.org/10.1016/j.jfca.2013.11.004Obtenga derechos y contenido

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Una revisión sobre las flavanonas , los principales y típicos polifenoles de los
cítricos.

Una actualización de estructuras y distribución en plantas.

Se informan nuevos métodos de extracción.

La síntesis química está cubierta con un enfoque en los metabolitos
humanos (glucurónidos).

Se revisan la biodisponibilidad y los efectos sobre la salud (principalmente no
antioxidantes).

Resumen
El consumo de cítricos y jugos ha sido ampliamente investigado por su posible papel
en la prevención de enfermedades cardiovasculares y cáncer. Estos efectos
beneficiosos se atribuyen principalmente a las flavanonas, los polifenoles típicos de
los cítricos.especies. Las principales flavanonas en especies de plantas incluyen
hesperetina, naringenina, eriodictyol, isosakuranetina y sus respectivos glucósidos. La
hesperetina y sus derivados son flavanonas características de naranja dulce, tangelo,
limón y lima, mientras que la naringenina y sus derivados son los de toronja y naranja
agria. Los avances en técnicas analíticas como la cromatografía líquida de ultra alto
rendimiento (UPLC) junto con la espectrometría de masas han facilitado (a) la
estimación del contenido de flavanona en otras especies de plantas y en humanos
después de la ingestión y (b) la determinación de metabolitos de flavanona más
rápidamente y con mayor eficiencia. La presente revisión resumirá el conocimiento
actual sobre las flavanonas desde su aparición en plantas hasta la bioactividad de sus
metabolitos en humanos.
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Palabras clave

Fruta cítrica
naranja
Pomelo
Polifenol
Flavanona
Chalcone
Conjugado
Glucurónido
Metabolitos
Síntesis
Extracción
Análisis
Biodisponibilidad
Bioactividad
Composición de los alimentos

1 . Introducción
Ahora está bien aceptado que un bajo consumo de alimentos grasos, una actividad
física regular y un alto consumo de alimentos derivados de plantas ayudan a mantener
un buen estado de salud. En particular, existe una asociación entre un mayor nivel de
frutas y verduras en la dieta y un menor riesgo de algunas enfermedades que
amenazan la vida, como las enfermedades cardiovasculares y el cáncer ( Parr y
Bolwell, 2000 ). También hay una creciente aceptación de que muchos metabolitos
secundarios fenólicos (polifenoles) presentes en los alimentos derivados de plantas
ejercen efectos beneficiosos en la prevención de estas enfermedades degenerativas
( Benavente-García y Castillo, 2008 , Del Rio et al., 2010 ). Por otra parte, cítricosLas
frutas y los jugos son muy consumidos en todo el mundo y este consumo ha
aumentado significativamente durante los últimos años. La producción mundial
de cítricos alcanzó los 82 millones de toneladas en los años 2009–2010, de los cuales
las naranjas, comercialmente la fruta cítrica más importante, representan alrededor de
50 millones de toneladas ( USDA, 2010 ). El consumo mundial de cítricos ha
estimulado así la investigación sobre los fenoles cítricos más abundantes , es decir ,
las flavanonas . Basado en el criterio del contenido de flavanona , plantas
de cítricos pertenecientes a la Rutaceae La familia parece especialmente
importante. Esta revisión cubrirá la literatura actualizada disponible sobre la química
y bioquímica de las principales flavanonas cítricas , hesperetina y naringenina .

2 . Estructuras y clasificación
Hace unas décadas, las flavanonas se consideraban solo flavonoides menores ( Bohm,
1994 ), como chalcones , dihidrochalcones , dihidroflavonoles y auronas . Sin
embargo, durante los últimos 15 años, el número total de flavanonas conocidas ha
aumentado hasta el punto de que ahora se las considera una clase importante de
flavonoides como flavonas , isoflavonas ,
flavanoles, flavonoles y antocianidinas ( Veitch y Grayer, 2006 ). Hasta ahora,
alrededor de 350 agliconas de flavanona y 100 glucósidos de flavanonahan sido
identificados en la naturaleza ( Iwashina, 2000 ).
En general, los polifenoles se clasifican en dos clases principales: flavonoides y no
flavonoides. Estos últimos incluyen moléculas estructuralmente simples como los
ácidos fenólicos ( ácidos hidroxibenzoicos y ácidos hidroxicinámicos) y estilbenos , y
moléculas altamente complejas como los oligómeros , taninos y ligninas
de estilbenos ( Cheynier, 2005). La primera, la clase de polifenoles más estudiada,
incluye más de 9000 compuestos identificados (Martens y Mithöfer, 2005,Pietta,
2000 ). Los flavonoides comúnmente comparten la misma estructura genérica,
el núcleo flavánico , que consta de dos anillos aromáticos.(A y B) unidos por un anillo
de piran (C). Las diferencias en la ubicación del enlace del anillo B con el anillo C
permiten distinguir entre flavonoides (2-fenilbenzopiranos), isoflavonoides (3-
fenilbenzopiranos) y neoflavonoides (4-fenilbenzopiranos). El grupo de 2-
fenilbenzopirano más abundante puede dividirse en 3-hidroxiflavonoides (flavonoles,
flavanoles, antocianidinas, dihidroflavonoles) y flavonoides sin sustituyentes en C3
(flavanonas y flavonas). Las flavonas difieren de las flavanonas por un  doble
enlace C2 C3 (Marais et al., 2006). La clase de flavanona abarca una amplia gama de
compuestos consustituciones Oy / oCen el anillo A o B,p.Ej., Hidroxi, metoxi,
metilendioxi, O - y C -glycosyl, C -metil, C bencil, C -hidroximetil, C formil, los
sustituyentes C-isoprenilo (incluyendo furano o dihydrofurano arandelas),
conjugaciones a estilbeno, anastatin, ácido fenólico y restos diarilheptanoides ( Fig.
1 ) ( Veitch y Grayer, 2006 , Veitch y Grayer, 2008 ).
1. Descargar: Descargar imagen a tamaño completo
Fig.1 . Diversidad química de flavanonas en la naturaleza.
3 . Biosíntesis de flavanonas en plantas.
Debido a las diversas funciones fisiológicas en las plantas y los efectos beneficiosos
para la salud humana, los flavonoides ahora son objetivos atractivos para las
estrategias de ingeniería genética. En la mayoría de las especies de plantas, la vía
biosintética de flavonoides se ha dilucidado casi por completo. En general,
la biosíntesis de flavonoides es iniciada por los dos precursores, malonil-CoA yp -
cumaroil-CoA, que se originan a partir del metabolismo de los carbohidratos y
la vía fenilpropanoide , respectivamente. Después de la condensación de tres
moléculas de malonil-CoA con una molécula dep -cumaroil-CoA, se forma la amarilla
2 ', 4,4', 6'-tetrahidroxicalcona. Este paso es catalizado por chalconesintasa (CHS). La
chalcona inestable se cicla luego a la correspondiente 4 ', 5,7-trihidroxiflavanona por
la enzima chalcona isomerasa (CHI). Las flavanonas pueden considerarse la piedra
angular de la biosíntesis de flavonoides, ya que son los precursores de todas las demás
clases de flavonoides ( Fig. 2 ) ( Martens y Mithöfer, 2005 , Schijlen et al.,
2004 ). Además, en lasespecies cítricas , UDP-glucosa flavanona-7- O -
glucosiltransferasa (UFGT) y UDP-ramnosa flavanona glucósido rhamnosiltransferasa
(UFGRT) convierten secuencialmente los aglicones de flavanona en sus 7- O -β- D -
glucósidos y ramnoglucósidos (Lewinsohn et al., 1989 ) ( Fig. 3 ).
1. Descargar: Descargar imagen a tamaño completo
Fig.2 . Biosíntesis de flavonoides . R es generalmente OH u OMe, aunque pueden
producirse otras sustituciones en estas posiciones. CHS, calcona sintasa; CHI, chalcona
isomerasa; FHT, flavanona 3-hidroxilasa; DFR, dihidroflavonol 4′-reductasa; LAR,
leucoantocianidina 4-
reductasa; ANS, antocianidina sintasa; FSI, flavona sintasa; FLS, flavonol sintasa; IFS, 2-
hidroxiisoflavona sintasa.
1. Descargar: Descargar imagen a tamaño completo
Fig.3 . Algunos aglicones de flavanona comunes y sus respectivos glucósidos .
Las flavanonas naturales presentan la configuración ( S ) en C 2 ( Tomas-Barberan y
Clifford, 2000 ) como consecuencia de la enantioselectividad de la adición de Michael
intramolecular catalizada por chalcona isomerasa (CHI) dentro del precursor de
chalcona ( Jez y Noel, 2002a ) . Sin embargo, se detectaron mezclas de epímeros de
(2 R ) y (2 S ) -hesperidina en una relación molar aproximada de 1/6 en jugo de
naranja ( Si-Ahmed et al., 2010 ), posiblemente debido a la propensión de
los glucósidos de flavanona. someterse a epimerización en C2 a través deLa forma
chalcona. En la ciclación catalizada por CHI , el resto enone de 2 ', 4,4', 6′-
tetrahidroxicalcona está bloqueado en una conformación s - trans . La activación
electrófila del  grupo CO implica una molécula de agua unida al grupo OH fenólico
Tyr106 y al grupo OH de la cadena lateral Thr48. Los principales enlaces de
hidrógeno establecidos entre CHI y el producto de flavanona se representan en la Fig.
4 ( Jez et al., 2002b ).
1. Descargar: Descargar imagen a tamaño completo
Fig.4 . La red de enlace de hidrógeno en el complejo de ( S ) -4 ', 7-dihidroxiflavanona-
chalcona isomerasa.
Adaptado de Jez et al. (2002b)
Las concentraciones de enzimas de biosíntesis pueden desempeñar un papel
importante en la definición de la distribución de flavanonas en las diferentes partes de
la fruta. Por ejemplo, en la cáscara de Solanum lycopersicum (una variedad de
tomate), el nivel de expresión génica es más bajo para CHI que para CHS y flavanona
3-hidroxilasa, lo que resulta en una alta acumulación de naringenina calcona ( Iijima
et al., 2008 ) . Esta vía biosintética se investiga ampliamente para describir el papel de
los flavonoides en diferentes funciones fisiológicas de las plantas, como las
interacciones entre insectos y plantas ( Simmonds, 2001 ), la pigmentación ( Mato et
al., 2000 ), la tolerancia a metales pesados ( Keilig y Ludwig-Müller, 2009),
resistencia a enfermedades y detección UV ( Cooper-driver y Bhattacharya,
1998 ). Recientemente, Fowler y Koffas (2009) han revisado la producción
biotecnológica de flavanonas mediante el uso de diversos
microorganismos. Alternativamente, algunos trabajos han tratado de reducir los
niveles de flavanonas debido a su sabor amargo. Por ejemplo, se ha
utilizado un enfoque mediado por Agrobacterium dirigido a los genes CHS y CHI
para reducir el contenido de naringina en la toronja ( Koca et al., 2009 ).

4 . Diversidad y distribución de flavanonas.


Las flavanonas están ampliamente distribuidas en aproximadamente 42 familias de
plantas superiores, especialmente
en Compositae , Leguminosae y Rutaceae ( Iwashina, 2000 ). Dependiendo del tipo
de planta, flavanonas se pueden encontrar en todas las partes de la planta, por encima
y por debajo del suelo, de la parte vegetativa de los órganos generativos: tallo, ramas,
corteza, flores, hojas, raíces, rizomas, semillas, frutas, cáscaras , etc ... El Las
concentraciones más altas de flavanonas se encuentran en la cáscara en comparación
con la parte carnosa de los cítricos ( Nogata et al., 2006 ). Entre las flavanonas,
los aglicones de naringenina y hesperetina y sus glucósidos son de particular interés
debido a su alta prevalencia en los alimentos.

4.1 . Naringenin

La naringenina (5,7,4′-trihidroxiflavanona) se encuentra en altas concentraciones en


los cítricos, mientras que también se encuentran bajas concentraciones en los tomates
y sus productos ( Erlund, 2004 ). La naringenina se puede encontrar como aglicona y /
o como glucósidos. Entre estos últimos, naringin y narirutin son especialmente
abundantes. La naringina (naringenina-7-neohesperidosido, Fig. 3 ) tiene un sabor
amargo debido a su resto de glucosa. Es el principal flavonoide en la toronja y la
naranja agria ( Igual et al., 2013 ), que presentan diferentes contenidos de naringina
según sus variedades ( Tabla 1 ). Otros cítricosespecies como naranja dulce, tangelo,
limón y lima exhiben bajas cantidades de naringina. Otro glucósido de naringenina
importante, la narirutina (naringenina-7-rutinósido, Fig. 3 ) es más abundante en la
toronja, aunque menos que la naringina. También se detectan niveles significativos de
narirutina en tangor, naranja dulce, mandarina y tangelo ( Peterson et al., 2006a ). El
procesamiento de estas frutas puede afectar significativamente el contenido de
naringenina debido a la liberación de flavanonas unidas y / o la degradación de estos
compuestos sensibles al calor. El efecto se puede observar claramente comparando el
contenido de naringenina del pomelo y su mermelada (ver Tabla 1 ) ( Igual et al.,
2013 ). El naringenin chalconese encuentra en mayores cantidades en tomate pelado,
que también contiene algunos otros flavanona chalconas (Slimestad et al., 2008).
Tabla 1 . Glucósidos de flavanona en diferentes variedades de plantas y sus productos.
Contenido de flavanona (mg de aglicona / 100  g de jugo o fruta comestible (sin cáscara,
No. Tipo de planta
médula y semillas))
Nariruti Naringi Hesperidi Neohesperidi Eriocitri Neoeriocitri Didymi Ponc
na n na na na na n n
53
Granos de sorgo negro 66
1 (aglicona - - - - - -
( Sorghum bicolor ) c (aglicona)
)
Jugo
2 de clementina ( clemen 46,4 0.8 399 - - - - -
tina cítrica ) b
3 Aceituna desgrasada - - 8.01% - - - - -
44 Soja desgrasada - - 17,21% - - - - -

55 Pomelo ( C. paradisi ) 29,4 84 2,4 2,92 - - 1,42 1,92

Zumo de pomelo ( C.


66 76 230 9.3 12,1 4.1 3.2 3.0 12,6
paradisi ) b
Mermelada de pomelo
77 20 84 1,72 2,64 - - 1.16 0.6
( C. paradisi )

8 Pomelo rojo y rosa 3,34 13,87 0.27 0,42 - - - -

99 Toronja blanca 5.36 16,90 3.95 0.25 0,16 0,05 0,09 0,20

10 Limón ( C. limon ) 0,80 0,18 15,78 - 9.46 - 0,17 -

Jugo de limón ( C.


11 3.8 - 205 14,5 167 - - -
limon ) b
Jugo de limón ( Citrus
12 limetta Risso ) - - 4.29 - 2.10 - - -
Mediterráneo b

13 Lima ( Citrus latifolia ) 0.23 - 15,64 - 1,38 0,04 - -

Jugo de lima ( Citrus


14 - - 386 - - - 44,14 -
latifolia ) Mexicano

Mandarina ( C.
15 2,70 - 19,26 - 0,02 - 1.11 -
reticulata )

diecisé Jugo de mandarina


39,2 - 243 - 3.1 0.5 0.5 14,4 -
is (Citrus reticulata ) b
Contenido de flavanona (mg de aglicona / 100  g de jugo o fruta comestible (sin cáscara,
No. Tipo de planta
médula y semillas))
Nariruti Naringi Hesperidi Neohesperidi Eriocitri Neoeriocitri Didymi Ponc
na n na na na na n n
Mandarina ( C.
17 43,9 - 261 - - - - -
reticulata ) f joven
18 Shiikuwasha ( C.
39,18 11,88 467,31 5.16 - - - -
años depressa ) pelar un
Naranja agria ( C.
19 0,08 18,83 0.00 11.09 0,53 14.01 2,89 -
aurantium )
Jugo de naranja agria
20 - 19,7 - 8.7 - 7.7 - 7.3
( C. aurantium ) b
Naranja dulce ( C.
21 sinensis Valencia) 787 13 6024 - - - - -
Chipre d
Naranja dulce ( Citrus
22 16,77 - 19,93 - - 1.07 2,70 0,12
sinensis ) e mauriciana
Naranja dulce ( C.
23 2,33 0,17 15.25 - 0.28 0,04 0,45 -
sinensis Valencia)
Jugo de naranja dulce
24 ( C. 51,4 - 257 - - - 18,9 3.1
sinensis Valencia) b
Jugo fermentado
de naranja dulce
25 413 - 311 - - - 60,9 -
( Citrus sinensis L. var.
Ombligo tardío) b

26 Tangelo 2,42 5,60 4.21 13,56 1,69 1.11 0,60 -

27 Tangor 7.10 - 15,42 - 1.01 1,77 - -

24,64
3.01
28 Thymus Pulegioides c (aglicona - - - - - -
(aglicona)
)
18,18
Tomate ( Lycopersicon
29 (aglicona - - - - - - -
esculentum )
)

un
mg / 100  g de peso flavedo fresco.
si
mg / l.
C
μg / g.
re
μg / g de materia seca.
mi
mg / g de peso fresco.
F
mg / g de peso seco.

4.2 . Hesperetina

Como naringenina, la hesperetina (4′-metoxi-5,7,3′-trihidroxiflavanona) y sus


glucósidos también están presentes principalmente en los cítricos . La aglicona es
menos dominante en la naturaleza que los glucósidos. Los glucósidos de hesperetina
más ampliamente distribuidos son hesperidina y neohesperidina, que son conjugados
con rutinosa y neohesperidosa, respectivamente. La hesperidina (hesperetina-7-
rutinosida, Fig. 3 ) está presente en mayor medida en limones, limas, naranjas dulces,
mandarinas y especies de cítricos ( Cano et al., 2008 ), mientras que la neohesperidina
(hesperetina-7-neohesperidosida) La figura 3 ) está ausente en ellos. Entre todas, las
naranjas dulces son muy estudiadas por su contenido fenólico yLa Tabla 1 presenta
los datos para frutas de diferentes regiones (Chipre, Mauricioso). Aunque se detectan
variaciones en el contenido de hesperetina, la relación entre los contenidos de
hesperetina y naringenina es aproximadamente constante ( Goulas y Manganaris,
2012 , Ramful et al., 2011 ). También se producen cantidades significativas de
hesperetina en las toronjas, mientras que el tangelo y la naranja agria son
especialmente ricos en neohesperidina ( Peterson et al., 2006a , Peterson et al.,
2006b ).

5 . Extracción y análisis de flavanonas.


Debido a la complejidad química y la gran distribución de flavanonas en la planta, la
extracción y el análisis de flavanonas siguen siendo tan desafiantes como siempre, a
pesar de los recientes avances en instrumentación analítica. Después del análisis
detallado de la composición fenólica de cítricos y jugos (partes comestibles), hoy en
día, se presta más atención a sus subproductos. De hecho, el uso doméstico e
industrial de grandes cantidades de cítricos , especialmente para la producción de
jugo, da como resultado la acumulación de grandes cantidades de subproductos como
cáscaras, semillas, residuos de células y membranas, que representan
aproximadamente la mitad de El peso de la fruta. Estos subproductos se pueden usar
para la producción de melaza , pectinas , aceites esenciales,limoneno y alimento para
ganado ( Bocco et al., 1998 , Jeong et al., 2004 , Li et al., 2006a , Li et al.,
2006b ). Además, los subproductos cítricos son una buena fuente de compuestos
fenólicos , especialmente los glucósidos de flavanona característicos ,
principalmente naringina , hesperidina , narirutina y neohesperidina. Actualmente, la
extracción de compuestos fenólicos de las cáscaras de cítricos ha atraído un
considerable interés científico con el objetivo de usarlos
como antioxidantes naturales principalmente en alimentos para prevenir la alteración
oxidativa de los lípidos (Anagnostopoulou et al., 2006 , Peschel et al., 2006 , Zia-ur-
Rehman, 2006 ). De hecho, los extractos de plantas baratos y ricos en antioxidantes
podrían reemplazar los aditivos sintéticos como el hidroxianisol butilado (BHA) y
el hidroxitolueno butilado (BHT), que podrían ser tóxicos ( Moure et al., 2001 ), en
particular dañinos para el hígado y cancerígenos ( Ak y Gülçin, 2008 ).
Hasta ahora, se han informado varias técnicas de extracción convencionales e
innovadoras para la extracción de fenoles de subproductos cítricos ( Tabla 2 ). El
método más común utilizado es la maceración en solventes ( Anagnostopoulou et al.,
2006 , Jeong et al., 2004 , Li et al., 2006a , Manthey y Grohmann, 1996 , Xu et al.,
2007 , Zia-ur-Rehman, 2006 ), que también se considera adecuado a nivel ampliado
( Peschel et al., 2006 ). Sin embargo, esta técnica de extracción generalmente requiere
altas temperaturas (50-150 ° C), largos tiempos de extracción (hasta varias horas) y
altas solventes de polaridad como agua y etanol. Se han desarrollado diferentes tipos
de técnicas de extracción con solventes : extracción con agua caliente ( Xu et al.,
2008 ), extracción alcalina ( Bocco et al., 1998 , Curto et al., 1992 ), extracción
asistida por resinas ( Calvarano et al., 1996 , Kim et al., 2007a ), enzimas ( Li et al.,
2006b ), haz de electrones e irradiación γ ( Kim et al., 2008 , Oufedjikh et al.,
2000) Sin embargo, los inconvenientes comunes siguen siendo la degradación de los
compuestos objetivo debido a la alta temperatura y largos períodos de extracción y,
más específicamente, criterios de seguridad restrictivos (extracción bajo irradiación) y
problemas de desnaturalización enzimática . La extracción de fluido
supercrítico (SFE) es una técnica suave y eficiente que ha sido poco estudiada para la
extracción de compuestos fenólicos de subproductos cítricos ( Giannuzzo et al.,
2003 , Yu et al., 2007 ), posiblemente debido a su mayor costos en comparación con
otras técnicas innovadoras.
Tabla 2 . Extracción y análisis de contenidos de flavanona de diversas fuentes vegetales.

Parte de la Extracci Flavanones


Técnica analítica Comentarios Referencias
planta ón estudiados
La fracción
2D-TLC (80:20:40,
Cáscara metanólica con
Extracci acetato de etilo: ácido Anagnostopo
de naranja dulce Hesperidina acetato de etilo
ón de acético: agua y ácido ulou y
( Citrus , TPC mostró TPC y
Soxhlet acético al 15%); Prueba de col. (2006)
sinensis ) RSA
Folin-Ciocalteu
significativos
Los EAU pueden
mejorar
significativament
Extracci
e el contenido de
ón HPLC (columna RP C18
Cáscara de compuestos
asistida (250  mm  ×  4,6  mm,
mandarina Narirutina, fenólicos y Ma y
por 5  μm), ácido acético al
Satsuma ( C. hesperidina actividades col. (2008b)
ultrasoni 4% / metanol al 100%
unshiu Marc.) antioxidantes en
do (80:20, v / v))
muestras sin
(EAU)
ningún
tratamiento
térmico intensivo
La irradiación γ
Naringina, estimula la
Extracci
hesperidina, actividad PAL y
ón HPLC (columna RP C18
didima, la síntesis de
Clementinas solvente (150  mm  ×  4,5  mm, Oufedjikh y
eriocitrina, compuestos
( C. clementina ) de frutos 5  μm), ácido acético al col. (2000)
poncirina y fenólicos. Así, se
irradiado 4% / acetonitrilo al 100%)
neoeriocitri obtienen mayores
s con γ
na cantidades de
flavanonas.
Después de la
implementación
del diseño
Extracci
experimental, el
Semillas ón de HPLC (columna
factor crucial Yu y
de pomelo ( C. fluido Naringin Spherisorb ODS
durante la col. (2007)
paradisi Macf.) supercríti (250  mm  ×  4,6  mm))
extracción de
co
naringina fue la
presión seguida
de la temperatura.
Jugos cítricos de Extracci Eriocitrina, RP-HPLC, MS (uno para La contribución Abad-Garcia
naranja dulce, ón con narirutina, el modo de escaneo más importante y col. (2012)
Parte de la Extracci Flavanones
Técnica analítica Comentarios Referencias
planta ón estudiados
de este trabajo es
solvente
naringina, completo MS 1 y otro para la caracterización
de
mandarina, hesperidina, el modo de escaneo de de flavanonas
muestras
limón y pomelo neohesperid producción de usando HPLC-
liofilizad
ina y didima iones MS 2 ) DAD-ESI-CID-
as
MS / MS
Los subproductos
Tecnolog
de la cáscara,
ía de
tratados
caída de
HPLC (columna RP C18 sucesivamente
presión
Cáscara (250  mm  ×  4  mm, por ICPD
controlad Naringin, Allaf y
de naranja ( C. 5  μm) 0.5% de ácido (extracción de
a hesperidina col. (2013)
sinensis ) acético y 100% de aceite esencial) y
instantán
acetonitrilo) EAU, dieron
ea
extractos más
(ICPD) y
ricos en
EAU
flavanonas.
HPLC (columna
Análisis más
Chromolith Performance
rápido debido al
Extracci RP-18e
Naringenin, menor tiempo de Biesaga y
Fruta de tomate on (100  mm  ×  64,6  mm),  t
naringin retención de col. (2009)
solvente ampón fosfato 50 mM a
flavonoides
pH 2,2 / acetonitrilo
prominentes.
(75:25, v / v))
Extracci
Se obtuvo una
ón de
HPLC (RP C18 mayor cantidad
dióxido
Hojas de menta (25  cm  ×  4,6  mm, de naringenina
de Bimakr y
verde ( Mentha Naringenin 5  μm), pH TFA 2.5 en por SC-
carbono col. (2011)
spicata L.) agua desionizada y CO 2 (60  ° C,
supercríti
metanol al 100%) 200 bares,
co (SC-
60  min)
CO 2 )
Toronjas rojas Extracci Narirutina, HPLC, LC – MS (ESI−, Los parámetros Chebrolua y
on naringina, capilar (250  ° C, −15  V), optimizados col. (2011)
solvente neohesperid N2) incluyen la
ina, didima técnica de
y poncirina extracción
(MW vs ultrasoni
dos), solvente,
velocidad
centrífuga,
temperatura,
relación muestra /
solvente, ciclos
de extracción,
tiempo de
extracción y sus
Parte de la Extracci Flavanones
Técnica analítica Comentarios Referencias
planta ón estudiados
interacciones.
Esta técnica
amigable con el
Extracci
medio ambiente
ón de HPLC, LC – MS (ESI +,
Hesperidina proporcionó una Cheigh y
C. pelar unshiu agua capilar (350  ° C, 5,5  kV),
, narirutina mayor cantidad col. (2012)
subcrític N2)
de flavanonas en
a
comparación con
la convencional.
Extracci PLE en
ón de LC – DAD – ESI / MS comparación con
C. cáscara reticu Li y
líquido a Hesperidina (ESI +, capilar (350  ° C, UAE, Soxhlet y
lada col. (2012)
presión 4  kV)) extracciones de
(PLE) reflujo de calor
Eriodictyol,
naringenina,
hesperetina, UHPLC-ESI-MS / MS
eriocitrina, (columna C18 RP Un ensayo
Extracci narirutina, (2,1  mm  ×  50  mm, completo y de
Jugos y bebidas ón hesperidina, 2,6  ! M), H 2 O (0,1% rendimiento de Di Donna y
cítricas líquido- neoeriocitri HCOOH) y CH 3 CN, las flavanonas en col. (2013)
líquido na, 0,3  ml / min, climatizada jugos cítricos
naringina, ESI + rociar voltaje utilizando UPLC
neohesperid (4,7  kV, 270  ° C))
ina, didima,
poncirina
Se describió un
UHPLC – QqQ-MS
método UPLC –
(columna BEH C18
QqQ-MS fácil,
Tomates cherry, Extracci (50  mm  ×  2.1  mm,
rápido y sensible
salsa de tomate ón 1.7  μm), ácido fórmico y Di Lecce y
Naringenin para identificar y
y jugo de líquido- acetonitrilo al 0.1%, col. (2013)
cuantificar los
tomate. líquido 0.4  mL / min, ESI−,
compuestos
capilar (−3.5  kV, 400  °
fenólicos más
C), N2)
abundantes.
El tratamiento
con microondas
Extracci
como un proceso
ón HPLC (columna RP C18
Orujo de Naringenin, eficiente para Hayat et al.,
asistida (4,6  mm  ×  150  mm,
mandarina naringin, liberar 2010a , Hayat
por 5  μm), ácido fórmico al
cítrica hesperidin compuestos et al., 2010b
microon 0,1% y metanol al 100%)
fenólicos unidos
das
de la matriz de la
planta.
Abreviaturas : TPC  =  contenido fenólico total; RSA  =  actividad de eliminación de radicales; 2D-
TLC  =  cromatografía de capa fina bidimensional; PAL  = fenilalanina amoniaco-
liasa; HPLC = cromatografía líquida de alto rendimiento ; UPLC = cromatografía líquida de ultra alto
rendimiento ; MS = espectrometría de masas ; ESI = ionización por pulverización de electrones; TFA = ácido
trifluoroacético .           

Con el aumento de los precios de la energía y la preocupación medioambiental, las


industrias químicas y alimentarias tienen el desafío de encontrar nuevas tecnologías
para reducir el consumo de energía, cumplir con los requisitos legales sobre emisiones
de CO 2 , seguridad y control de productos / procesos, y aumentar la calidad y la
funcionalidad. La tecnología de separación (como extracción, destilación y
cristalización) es uno de los campos prometedores que podría contribuir al
crecimiento sostenible de las industrias química y alimentaria. Por ejemplo, las
tecnologías de extracción existentes tienen importantes cuellos de botella tecnológicos
y científicos que superar: a menudo requieren hasta el 50% de las inversiones en una
nueva planta y más del 70% de la energía total del proceso utilizada en las
industrias alimentaria, química y farmacéutica.. Estas deficiencias han llevado a
investigar nuevas técnicas de extracción "verde", destinadas a ahorrar energía y
reducir costos, como la extracción asistida por microondas o ultrasonido ,
ultrafiltración, destilación instantánea y procesamiento controlado de caída de presión
( Chemat et al., 2009 ). Entre ellos, la extracción asistida por ultrasonido (EAU) se ha
estudiado en detalle para la preparación de extractos ricos en flavanonade
subproductos cítricos .
Con el desarrollo del concepto de “Química Verde” durante los últimos años, las
técnicas amigables con el medio ambiente se están volviendo cada vez más
atractivas. La extracción de compuestos bioactivos bajo radiación de ultrasonido (20–
100  kHz) es una de las próximas técnicas de extracción que puede ofrecer una alta
reproducibilidad en tiempos más cortos, manipulación simplificada, consumo y
temperatura de solvente reducidos y menor aporte de energía ( Chemat et al.,
2008 ) . Durante la sonicación , el proceso de cavitación provoca la hinchazón de las
células o la descomposición de las paredes celulares, lo que permite altas tasas de
difusión a través de la pared celular en el primer caso o un simple lavado del
contenido celular en el segundo (Vinatoru, 2001 ). Se sabe que el estallido de
pequeñas burbujas de cavitación puede provocar una temperatura y presión locales de
hasta 5000  ° C y 1000  atm, respectivamente. Sin embargo, estas explosiones de
energía locales no pueden afectar significativamente las condiciones de volumen, ya
que se disipan al medio en períodos de tiempo muy cortos ( Luque-Garcia y Luque de
Castro, 2003 ). Los EAU en realidad dependen de los efectos destructivos de las ondas
ultrasónicas en las matrices sólidas, incluidos los materiales vegetales. Además de
optimizar las condiciones de solvente y temperatura, se puede obtener una mejor
recuperación del contenido celular al optimizar la frecuencia de ultrasonido, la
potencia de sonicación y el período, así como la distribución de ondas ultrasónicas
( Wang y Weller, 2006) Los EAU se han aplicado recientemente a la extracción de
hesperidina de la piel de Penggan ( Citrus reticulata ) ( Ma et al., 2008a ), ácidos
fenólicos y glucósidos de flavanona de la piel de Mandarina Satsuma ( Citrus
unshiu Marc) ( Ma et al., 2008b , Ma et al. al., 2009 ) y el contenido fenólico total de
la piel de Penggan ( Ma et al., 2008c ). En estos trabajos, el metanol surgió como un
solvente de extracción adecuado para alcanzar buenos rendimientos. Sin embargo, la
Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos recomienda los
solventes orgánicos de grado alimenticio ambientalmente benignos y no tóxicos como
etanol, n-butanol e isopropanol (Bartnick et al., 2006 ). Usando etanol, los EAU se
encontraron más eficientes para la extracción de polifenoles a partir de desechos de
cáscara de naranja que la extracción con solvente convencional ( Khan et al.,
2010a , Khan et al., 2010b ). Además, para la extracción de productos naturales, los
EAU dieron mayores rendimientos que las técnicas convencionales, no solo a escala
de laboratorio sino también a escala de planta piloto ( Boonkird et al., 2008 ).
Recientemente, la extracción de fenoles de las cáscaras de cítricos se realizó con éxito
bajo irradiación de microondas ( Hayat et al., 2009 , Hayat et al., 2010a , Hayat et al.,
2010b ). Además, la extracción de flavonoides de cebolla sin ningún solvente
agregado se ha desarrollado utilizando la técnica de hidrodifusión y gravedad de
microondas (MHG) ( Zill-e-Huma et al., 2009 ). En el proceso, la extracción se inicia
mediante el calentamiento selectivo del contenido de agua de la planta. MHG también
podría usarse para la extracción eficiente de flavanonas de fuentes vegetales.
Los extractos naturales de los subproductos cítricos son ricos en fenoles que
muestran antioxidantes, antibacterianos,
antimicrobianos, antiinflamatorios y anticancerígenos in vitro.propiedades. Como tal,
podrían tener una variedad de aplicaciones en las industrias alimentaria, farmacéutica
y cosmética. También podrían atraer a los consumidores debido a su estado de
ingredientes derivados de fuentes naturales sin ningún procesamiento químico. Uno
de los factores limitantes en el mercado de extractos naturales sigue siendo sus precios
significativamente más altos en comparación con los aditivos sintéticos. Los extractos
naturales de los subproductos de la industria alimentaria podrían superar este
inconveniente debido al material de partida barato utilizado. Además, varios estudios
han demostrado que los extractos naturales pueden exhibir una mayor actividad
biológica que los compuestos purificados, debido a las interacciones sinérgicas
positivas entre los componentes bioactivos ( Giménez-Bastida et al., 2009 , Menichini
et al., 2009 , Sood et al., 2009, Sood et al., 2010 ).
Para la determinación del contenido de flavanona, todavía se utilizan métodos
espectrométricos, que son rápidos y simples. Sin embargo, carecen de especificidad
para compuestos individuales. En general, los espectros ultravioleta de las flavanonas
y sus glucósidos muestran dos fuertes bandas de absorción comúnmente denominadas
banda A (330  nm) y banda B (280  nm). La banda A está asociada con el anillo B en
conjugación con el grupo ceto, mientras que la banda B es la típica banda de
absorción de fenoles e implica una fuerte contribución del anillo A. Las sustituciones
en el anillo A o B pueden producir cambios hipsocrómicos o batocromáticos, que
podrían usarse para la aclaración estructural ( Tsimogiannis et al., 2007 ).
Las técnicas analíticas más eficientes para la identificación y valoración de flavanonas
en extractos (ver Tabla 2 ) son la cromatografía líquida de alto o ultra alto
rendimiento (HPLC, UPLC) junto con un detector de matriz de diodos (DAD) y un
espectrómetro de masas ( Allaf et al., 2013 , Bimakr et al., 2011 , Cheigh et al.,
2012 ). El desarrollo de UPLC ha mejorado significativamente el rendimiento de la
separación al proporcionar una mayor eficiencia y reducir drásticamente el tiempo
analítico ( Di Donna et al., 2013 , Di Lecce et al., 2013 ).

6 . Síntesis química de flavanonas.


6.1 . Aglicones

Hasta ahora, la vía más común para la síntesis de agliconas de flavanona es


la condensación aldólica de 2-hidroxiacetofenonas con benzaldehídos (condensación
aldólica de Claisen-Schmidt) ( Fig. 5 ). La reacción se realiza generalmente bajo
calentamiento usando condiciones ácidas o alcalinas. Los chalcones formados
inicialmente experimentan ciclación a sus respectivas flavanonas en las mismas
condiciones ( French et al., 2010 , Krbechek et al., 1968 , Shi et al.,
2010 ). La condensaciónaún está en estudio para desarrollar condiciones eficientes y
favorables al medio ambiente. Por ejemplo, el hidróxido de sodio y el
etóxido fuertemente alcalinos fueron reemplazados por hidrotalcitas de Mg-Al
( Climent et al., 1995 ). Además, también se prepararon diferentes derivados de
chalcones y flavanonas por condensación aldólica ( Hsieh et al., 1998 ). Actualmente,
el énfasis está en desarrollar nuevos catalizadores que puedan ser efectivos en las
condensaciones de aldol y métodos alternativos ( Chandrasekhar et al.,
2005 ). Recientemente, se demostró que la introducción de Li aumenta la basicidad
de la superficie y la actividad catalítica de MgO en la síntesis de agliconas de
flavanona ( Cortes-Concepcion et al., 2010 ).

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Fig.5 . Síntesis orgánica de flavanonas .

6.2 . Chalcones

La escasez de chalcones de flavanona en la naturaleza se debe principalmente a su


inestabilidad, ya que en el medio neutro, los 2′-hidroxicchalcones experimentan
ciclación a las flavanonas correspondientes (adición intramolecular de Michael). Sin
embargo, los chalcones pueden prepararse simplemente por reacción inversa (apertura
del anillo C de flavanonas) en condiciones fuertemente alcalinas. En tales
condiciones, los aniones fenolato de flavanona se forman primero. Luego, la
eliminación de un protón en C2 produce un anión enolato , desde el cual la apertura
del anillo C puede tener lugar con la formación simultánea
de iones chalcone ( Andújar et al., 2003 ). Acidificación rápidaconduce a la
precipitación de la calcona neutra, que luego se puede aislar por filtración simple. Por
el contrario, en condiciones débilmente básicas, los aniones fenolato de calcona se
ciclan a flavanonas a través de un intermedio de enolato como se describe
para naringina ( González et al., 2002 ) y 2 ', 6′-dihidroxi-4,4′-dimetoxicchalcona
( Miles y Main 1985 ).

6.3 . Glucósidos

Los derivados de flavanona más prevalentes en la naturaleza son los


7- O - β- glucósidos. La glicosilación selectiva del grupo C7-OH más ácido puede
realizarse mediante bromuro de glicosil protegido activado por carbonato de plata
( Oyama y Kondo, 2004 ). Con algunas modificaciones, este método todavía se usa no
solo para la glicosilación de compuestos fenólicos ( Esaki et al., 1994 ) sino también
para la glucuronidación ( Moon et al., 2001 ). Una ruta simple a flavanona
7- O - β - D- glucósido es la hidrólisis parcial de naringina y hesperidina usando ácido
fórmicoen ciclohexanol . Sin embargo, los rendimientos son bajos ( aprox.10%) (Fox
et al., 1953). También se describióla síntesis enzimática de glucósidos de
flavanona(Kometani et al., 1996), así como la síntesis de análogos de naringina
con grupos amino para su uso como andamios en el descubrimiento de fármacos
(Hanessian y Kothakonda, 2005 ) y complejos de metal-naringina para aumentar
la actividades antioxidantes y antiinflamatorias (Pereira et al., 2007).

6.4 . Glucurónidos

Un mejor conocimiento de los mecanismos bioquímicos por los cuales las flavanonas
en la dieta ejercen sus posibles efectos sobre la salud requiere investigaciones sobre
modelos celulares apropiados ( p . Ej. , Células endoteliales o de músculo liso) con
los auténticos metabolitos circulantes (de los cuales los glucurónidos hacen la mayor
contribución) en lugar de los disponibles comercialmente. glucósidos y aglicones que
se utilizan con frecuencia como primer enfoque a pesar de la importancia biológica
limitada. Como alternativa a la extracción costosa, inconveniente y de bajo
rendimiento de conjugados de fluidos biológicos, la síntesis química aparece como la
estrategia más directa para obtener cantidades sustanciales
de metabolitos de polifenoles para biodisponibilidad e in vitro.estudios celulares. En
particular, existe un interés creciente por la síntesis de glucurónidos de polifenoles
como estándares para la identificación y titulación de metabolitos in vivo y como
compuestos biológicamente pertinentes para los estudios celulares con el objetivo de
dilucidar los posibles efectos sobre la salud de los polifenoles. Se han publicado
varios trabajos sobre la síntesis química de glucurónidos de polifenol.
Por ejemplo, el procedimiento popular, basado en el acoplamiento activado por ácido
de Lewis de metil-2,3,4-tri- O -acetil-1- O - (tricloroacetimidoil) - α - D -glucuronato
( Tomas-Barberan y Clifford, 2000 ) con polifenoles parcialmente protegidos, se
aplicó a la síntesis de isoflavona 7- O - β - D- glucurónidos ( Al-Maharik y Botting,
2006 ), quercetina 3- O - β - D- glucurónido ( Needs and Kroon, 2006 ) y ácido
hidroxicinámico O - β- D- glucurónidos ( Galland et al., 2008 , Fumeaux et al., 2010 ).
Catechin O - β - D -glucuronides también se prepararon con metil-2,3,4-tri- O -acetyl-
1- O -bromo- α - D -glucuronate como donador de glucuronyl ( González-Manzano et
al., 2009 ) Recientemente, la síntesis de un glucurónido de flavanona (persicogenina
3′- O - β - D -glucurónido) se llevó a cabo con metil-2,3,4-tri- O -acetil-1- O -
(trifluoroacetimidoil) - α - D -glucuronato, seguido de una etapa de desprotección final
que involucra esterasa de hígado de cerdo (PLE) para la hidrólisis deéster metílico del
residuo de glucuronilo ( Boumendjel et al., 2009 ). También se realizó una síntesis de
quercetina 3- O - β - D- glucurónido por oxidación regioselectiva de los
correspondientes 3- O - β - D- glucósido (grupos OH fenólicos protegidos como
bencil éteres) usando TEMPO / NaOCl / NaBr en condiciones de transferencia de fase
( Bouktaib et al., 2002 ). Recientemente, nuestro grupo de investigación informó sobre
la síntesis de cuatro glucurónidos de flavanona basada en una protección
regioselectiva del núcleo de flavanona ( Khan et al., 2010a , Khan et al., 2010b ). En
este trabajo, glucurónidos de naringenina(4′- y 7- O - β - D- glucurónidos)
y hesperetina (3′- y 7- O - β - D- glucurónidos), los aglicones de flavanona principales
en toronja y naranja respectivamente, se sintetizaron químicamente ( Fig. 6 A y
B ). Por un lado, el grupo hidroxilo más reactivo 7-OH se protegió
mediante benzoilación selectiva para permitir la posterior glucuronidación de 4'-OH
(naringenina) o 3'-OH (hesperetina) (anillo B). Por otro lado,
la deszozoilación selectivaa 7-OH de las agliconas de flavanona perbenzoiladas
permitieron la glucuronidación en la misma posición (anillo A). Después de una
desprotección cuidadosa, los compuestos objetivo fueron purificados y caracterizados
por resonancia magnética nuclear y espectrometría de masas . Hasta ahora, no se ha
informado sobre la síntesis de otros metabolitos de flavanona menos comunes
(diglucurónidos, sulfoglucurónidos, sulfatos).

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Fig.6 . (A) Glucuronidación de flavanonas cítricas en el anillo B. (i) BzCl (1.1–
1.5  equiv.), Piridina (ii) (1), BF 3 -OEt 2 (2  equiv.), CH 2 Cl 2 (iii) Na 2 CO 3 (1.2  equiv.
por grupo éster) , H 2 O / MeOH (2/5), entonces la acidificación a pH 6 por la resina
Dowex (H + formulario). (B) Glucuronidación de flavanonas cítricas en el anillo A. (i)
BzCl (exceso), NEt 3 , THF, 0  ° C (ii) PhSH (1 equiv.), imidazol , NMP (iii) (1), BF 3 -
OEt 2 (2  equiv.), CH 2 Cl 2 (iv) Na 2 CO 3 (1,2  equiv. Grupo de por éster), H 2 O / MeOH
(2/5), entonces la acidificación a pH 6 por la resina Dowex (H + formulario) .

7 . Biodisponibilidad de flavanonas
La biodisponibilidad oral de un nutriente dado describe su destino una vez ingerido:
liberación de la matriz alimentaria (bioaccesibilidad, típicamente evaluada in
vitro , Bouayed et al., 2012 ), absorción intestinal, metabolismo, transporte en la
circulación general, entrega a los tejidos y excreción. A pesar del alto consumo de
cítricos y jugos en todo el mundo, la biodisponibilidad de las flavanonas todavía se
conoce de manera incompleta. Su ingesta diaria no se ha estimado en diferentes
poblaciones, pero podría ser bastante alta en comparación con la ingesta promedio
de flavonol (25  mg / día) en varios países europeos ( Manach et al., 2003) Por
ejemplo, la ingesta dietética media en Finlandia se ha evaluado en 8,3  mg / día y
28,3 mg / día para naringenina y hesperetina , respectivamente ( Erlund,
2004 , Manach et al., 2003 ). 
Después de la ingesta oral, los glucósidos de flavanona y otros glucósidos se
hidrolizan en el intestino delgado y en el colon, respectivamente, y los aglicones
liberados se convierten en sus respectivos glucurónidos, sulfatos y sulfoglucurónidos
durante su paso por el intestino delgado y el hígado. Finalmente, las formas bioactivas
(metabolitos) se distribuyen a través del plasma en varios sitios celulares y también se
pueden encontrar cantidades significativas en las excreciones urinarias (Matsumoto et
al., 2004). El destino de las flavanonas después de la ingestión se resume en lafigura
7.
1. Descargar: Descargar imagen a tamaño completo
Fig.7 . Destino metabólico de las flavanonas .

7.1 . Absorción intestinal

La absorción intestinal implica la absorción de la luz intestinal de nutrientes hacia las


células epiteliales intestinales, la sangre, la linfa o los líquidos intersticiales. El
estudio de la farmacocinética en humanos y animales puede proporcionar
conocimiento sobre la tasa de absorción a través del intestino. Por ejemplo, la
naringenina y sus glucurónidos se detectaron en el plasma y el cerebro de las ratas
(relación de conjugación cuatro veces mayor en plasma que en el cerebro) solo
10  minutos después de la administración de naringenina (20  mg / kg) ( Peng et al.,
1998 ). El estudio se extendió para determinar los niveles de naringenina en cerebro,
hígado y bilis de rata mediante microdiálisis junto con un sistema de HPLC. Los
resultados han demostrado una mayor concentración de naringina.en hígado y bilis
( Tsai, 2002 ). Hasta donde sabemos, el primer informe sobre la farmacocinética de
flavanonas en humanos fue publicado por Erlund y coautores en 2001. Después de la
ingestión de jugo de naranja o pomelo (8 ml / kg de peso corporal), la concentración
plasmática de Se encontraron agliconas de hesperetina y naringenina en el rango de
0.6–6.0 μmol / L, con una concentración plasmática máxima ( C  max ) de
6.0 ± 5.4 μmol / L para la naringenina del jugo de toronja y 2.2 ± 1.6 μmol / L para la
hesperetina del jugo de naranja. Además, la vida media de eliminación ( t  1/2 ) en el
rango de 1.3–2.2         h apuntan a un despeje relativamente rápido de la circulación
general. El porcentaje de flavanonas excretadas en la orina (5–30% de la cantidad
total ingerida) fue menor que el de su absorción, lo que sugiere una distribución
sustancial a los tejidos de estos compuestos fenólicos ( Erlund et al., 2001 ). En otro
estudio en el que participaron seis voluntarios, la ingestión de hesperetina y
naringenina (135  mg de cada uno) en ayunas resultó en su aparición como
metabolitos en el plasma sanguíneo 20  minutos después. La C  max de 2.7  μmol / L
para hesperetina y 7.4  μmol / L para naringenina se alcanzó 4.0 y 3.5  h después de la
ingestión, respectivamente ( Kanaze et al., 2007 ).
La absorción intestinal varía según la concentración de glucósidos y la estructura de
flavanona. Después de la ingestión de 1  L de zumo de naranja que contiene 444 mg
de hesperidina y 96,4 mg de narirutina, el análisis de sangre durante 24 h condujo
a valores de C  max para hesperetina y naringenina (después de la desconjugación) a
1,28 ± 0,13 μmol / L y 0,20 ± 0,04 μmol / L, respectivamente. Los niveles de
flavanonas en orina se expresaron como porcentaje de su consumo y ascendieron a
7.87 ± 1.69% para naringenina y 6.41 ± 1.32% para hesperetina. La excreción urinaria
relativa de flavanonas no se vio afectada significativamente por la dosis ingerida
(             Manach et al., 2003 ). En otro estudio, se detectaron altas concentraciones de
naringenina de 128  ±  2  μM, 144  ±  8  μM y 139  ±  15  μM después de 10  h en el
plasma de ratas alimentadas con naringenina (0.25% de la dieta total), naringenina-
7- O - β -glucósido (0.38%) y naringenina-7- O - β- ramnoglucósido (0.50%),
respectivamente. La excreción urinaria de naringenina fue dos veces mayor en las
ratas alimentadas con naringenina que en las alimentadas con naringenina-7-
ramnoglucósido ( Felgines et al., 2000 ). Los análisis de plasma y orina señalaron que
la naringenina es más biodisponible que la hesperetina (Gardana et al., 2007 , Kanaze
et al., 2007 ). Una hidrólisis in vitro mostró una tasa de hidrólisis más rápida para
hesperidina y narirutina (rutinosidos de flavanona) que para naringina y
neohesperidina (neohesperiósidos de flavanona) ( Wang et al., 2008 ). Más
recientemente, el mismo grupo estudió la biodisponibilidad de hesperetina y
naringenina después del consumo de Citrus aurantium L. y Citrus
sinensis Osbeck. Estas variedades de cítricos se utilizan en la formulación de Zhi Zhu
Wan, una medicina tradicional china utilizada para el tratamiento de la dispepsia
funcional. La T  max (tiempo para alcanzar C  max ) de hesperetina se encontró en 3.7 y
8.5  h después de la administración oral de C. aurantium y C. sinensis ,
respectivamente, lo que probablemente refleja diferencias en la estructura y el entorno
de los glucósidos de hesperetina dependiendo de la fuente ( Cao et al., 2010 ).
La permeabilidad de las células epiteliales a las flavanonas también es un buen
determinante de su absorción intestinal. Las flavanonas se transportan desde el lado
apical (luz intestinal) al lado basolateral (sangre). En modelos in vitro , se descubrió
que la hesperetina (aglicona) se absorbe eficazmente a través de monocapas de células
Caco-2 en comparación con la hesperidina (glucósido de hesperetina). Los
mecanismos de absorción involucraron la difusión pasiva transcelular junto con un
mecanismo recientemente propuesto de transporte activo acoplado a protones
( Kobayashi et al., 2008 ). El estudio se elaboró para explicar la absorción polarizada
impulsada por H + y se encontraron mecanismos similares para la naringenina y
los aglicones de eriodictyol ( Kobayashi y Konishi, 2008) La absorción más rápida de
agliconas de flavanona en comparación con los glucósidos de flavanona se confirmó
para eriodictyol y eriocitrina en humanos ( Miyake et al., 2006 ). El transporte
de flavonoides.a través de las membranas celulares involucra transportadores de
casete de unión a ATP (ABC), que están presentes en la membrana apical (lado de la
luz) o basolateral (lado de la circulación sanguínea) de los enterocitos y facilitan la
excreción hacia la luz intestinal o la absorción en la sangre, respectivamente. Los
transportadores intestinales ABC que se han relacionado con el transporte de
flavonoides incluyen la glicoproteína P (Pgp / MDR1 / ABCB1), las proteínas de
resistencia a múltiples fármacos (MRP / ABCC) y la proteína de resistencia al cáncer
de mama (BCRP / ABCG2), de las cuales Pgp, MRP2 y BCRP están localizados en la
membrana apical. Un estudio sobre el metabolismo de la hesperetina en monocapas de
Caco-2 ha demostrado que la hesperetina 7- O - β - D -glucurónido y 7- O-sulfato se
transportan predominantemente al lado apical. Por el contrario, la aglicona de
hesperetina también impregna el lado basolateral de la monocapa de células Caco-
2. El patrón de inhibición por diferentes inhibidores del transportador ABC sugiere
que el flujo de salida apical de los metabolitos de hesperetina implica principalmente
BCRP. En conjunto, estos hallazgos aclaran una nueva vía de metabolismo y
transporte de hesperetina y muestran que el transporte mediado por BCRP podría ser
uno de los principales pasos limitantes para la biodisponibilidad de hesperetina
( Brand et al., 2008 ). El trabajo fue elaborado para distinguir entre (2 R ) y (2 S)
-enantiómeros de flavanonas. Se descubrió que la absorción intestinal de flavanonas
racémicas disponibles comercialmente era similar a la de
los enantiómeros predominantemente naturales ( 2S ) ( Brand et al., 2010 ).
Aún así, la parte que falta en la mayoría de los estudios de biodisponibilidad es la
disponibilidad de conjugados auténticos para su uso como estándares. Esos
conjugados también son muy necesarios para investigar los mecanismos de su
bioactividad en modelos celulares.

7.2 . Metabolismo

Una gran parte de los estudios de biodisponibilidad se ha dedicado a la naringenina, la


hesperetina y sus glucósidos. Las mejoras en los métodos para analizar los
metabolitos de flavanona en plasma y orina humanos han permitido estimar la
biodisponibilidad de flavanona en humanos. El primer paso en el metabolismo de la
flavanona es la desglicosilación extensa de los glucósidos de flavanona dentro del
epitelio intestinal por enzimas humanas y bacterianas como las β- glucosidasas,
ramnosidasas, rutinosidasas, etc. ( Fig. 8 ). Las investigaciones en ratas demostraron
que la desglicosilación de la naringenina-7- O - β - D- glucósido ocurrió temprano en
el intestino delgado ( Choudhury et al., 1999) mientras que la de naringenina-
7- O - β - D- ramnoglucósidos ocurrió en el colon (intestino grueso). De hecho, los
conjugados de naringenina (glucurónidos y / o sulfatos) aparecieron dentro de las 3  h
en el plasma de ratas alimentadas con naringenina o su 7- O - β - D- glucósido,
mientras que todavía no se detectaron metabolitos de naringenina en ratas alimentadas
con naringenina-7- O - β - D- ramnoglucósido. Sin embargo, 10  h después de la
ingestión, se encontraron concentraciones de naringenina similares
independientemente de la dieta, lo que mostró claramente la absorción intestinal
retardada de los ramnoglucósidos de naringenina ( Felgines et al., 2000) Se confirmó
en humanos que la hesperidina y la naringina se absorben en la parte distal del
intestino (ciego). Una vez desglucosilados, los aglicones son glucuronizados y / o
sulfatados durante su transferencia desde el lado luminal del intestino a la vena porta
por la acción de las enzimas UDP-glucuronosiltransferasa y sulfotransferasa ( Manach
et al., 2003 ). En el ciego, la microflora intestinal no solo escinde los enlaces
glucosídicos sino que también degrada los aglicones en ácidos fenólicos como
el ácido p -hidroxifenilpropiónico, el ácido p -cumarico y el ácido p -hidroxibenzoico
( Felgines et al., 2000 , Manach et al., 2003 ). Asimismo, eriocitrina (eriodictyol-
7- O- β - D -rutinósido) es metabolizado por la microflora intestinal ( Bacteroides
distasomis o Bacteroides uniformis ) a eriodictyol, que luego es convertido en ácido
3,4-dihidroxicinámico por Clostridium butyricum ( Miyake et al., 2000 ). Después de
la absorción intestinal, los aglicones y los ácidos fenólicos llegan al hígado, el
principal órgano involucrado en el metabolismo de la flavanona, donde se produce
una mayor glucuronidación, sulfatación y, en algunos casos, metilación , convirtiendo
el resto de los aglicones y los ácidos fenólicos en sus respectivos metabolitos. Debido
a la falta de grupos catecol en hesperetina y naringenina, no hay metilación por
catecol- Ose observó metiltransferasa , que contrasta con la catequina y
la quercetina ( Felgines et al., 2000 ). Por el contrario, se informó la conversión de
eriodictyol en homoeriodictyol y hesperetina a través de la metilación en el hígado
( Miyake et al., 2000 ).

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Fig.8 . Presentación esquemática ampliada del metabolismo de flavanona en el intestino
delgado y grueso.
Recientemente, se realizó un estudio para determinar el efecto del tumor en la
biodisponibilidad de flavanona. Se estimaron concentraciones similares de
naringenina en el hígado y el riñón de ratas sanas y portadoras de tumores ( Silberberg
et al., 2006 ).
El impacto del yogur con toda la grasa en la biodisponibilidad y el metabolismo de las
flavanonas anaranjadas en humanos se investigó analizando el plasma y la orina en
diferentes intervalos de tiempo. La adición de yogurt al jugo de naranja redujo
significativamente la cantidad de metabolitos de flavanona excretados hasta 5  h
después de la ingestión. Sin embargo, un análisis estadístico durante un período de
tiempo más largo (0-24  h) no mostró ningún efecto significativo de la adición de
yogurt ( Mullen et al., 2008 ). Por lo tanto, se puede concluir que las matrices de
alimentos lácteos pueden retrasar la absorción intestinal de flavanonas sin impacto en
la biodisponibilidad general. Otro estudio demostró que la cantidad de metabolitos de
flavanona se excreta en la orina después de 24 h de ingesta de jugo de naranja se ha
reducido aproximadamente 7 veces cuando se toma jugo con yogur ( Roowi et al.,
2009 ). Los autores propusieron que esta reducción se produjo en el intestino grueso
debido a la alteración del metabolismo de flavanona por parte de la microflora.
Las flavanonas parecían resistentes a la oxidación, mientras que
su isomerización en chalcones (38–55%) se observó significativamente para el jugo
de naranja (pH 7,5). Además, el procesamiento (pasteurización durante 30  s a 95 ° C,
congelación y concentración de Brix a 60 °) de jugo de naranja no mostró ningún
efecto sobre labioaccesibilidad in vitro de flavanonas ( Gil-Izquierdo et al.,
2003 ). Sin embargo, se encontraron chalcones en cantidades más altas enjugo
prensadoindustrialmente (en comparación con el manual).
La glucuronidación y la sulfatación son las principales vías de conjugación de los
aglicones de flavanona. Los estudios estructurales del plasma y los metabolitos
urinarios mostraron que los principales metabolitos de la naringenina son naringenina-
7- O - β - D- glucurónido, naringenina-4′- O - β - D- glucurónido, naringenina-
4′- O - β - D -glucurónido-7- O -sulfato , naringenina-4′- O -sulfato-
7- O - β - D- glucurónido y naringenina-4 ′, 7- O- disulfato ( Tripoli et al., 2007 ,Brett
et al., 2009 ). Del mismo modo, los principales conjugados de hesperetina son
hesperetina-7- O - β - D- glucurónido, hesperetina-3′- O - β - D- glucurónido,
diglucurónido de hesperetina y sulfoglucurónido ( Matsumoto et al., 2004 , Mullen et
al., 2008 ) Entre todos estos metabolitos, los glucurónidos prevalecen en gran medida
(87%), pero no se debe subestimar la importancia de los otros metabolitos ( Manach et
al., 2003 ). La posición en la que se produce la glucuronidación puede influir en la
bioactividad resultante, incluida la actividad antioxidante y la afinidad por proteínas
específicas (Trípoli et al., 2007 ). Hasta ahora, no se han reportado datos sobre la
actividad antioxidante de los glucurónidos de flavanona. Sin embargo, dado que las
flavanonas comunes hesperetina y naringenina carecen del grupo catecol, que es el
determinante estructural crítico de la actividad antioxidante (reductora) de
los polifenoles , ambos son antioxidantes débiles y se espera que sus glucurónidos
(con un grupo OH fenólico libre menos) ser aún menos potente Por lo tanto, es
bastante probable que la bioactividad expresada por los glucurónidos de flavanona no
esté relacionada en gran medida con sus propiedades redox y más bien refleje sus
interacciones con proteínas específicas.

8 . Interacción de flavanonas con albúmina sérica humana


En la última década, los estudios que exploraron los posibles efectos de las flavanonas
en la salud se dedicaron a evaluar su metabolismo y biodisponibilidad o su posible
valor terapéutico como fármacos potenciales. Desafortunadamente, el suministro de
las flavanonas circulantes y sus metabolitos a sitios biológicos específicos aún está
poco documentado. La interacción de los flavonoides con la albúmina sérica humana
(HSA) podría ser un factor importante para controlar su vida media en plasma y el
transporte a sitios biológicos. De hecho, la albúmina sérica es la principal proteína del
plasma sanguíneo con una concentración tan alta como 0.6  mM. La literatura sobre
los aspectos estructurales y las ubicaciones de unión de HSA está bien descrita por
una serie de revisiones exhaustivas (Él y Carter, 1992 , Sugio et al., 1999 ). Además
de su papel en el mantenimiento de la presión arterial osmótica coloidal y
la desintoxicación corporal , HSA transporta ácidos grasos y una gran variedad de
medicamentos ( Varshney et al., 2010 ) y componentes alimenticios, incluidos
los polifenoles ( Dufour y Dangles, 2005 ) ( Fig. 9 ) . Curiosamente, se ha demostrado
que HSA se acumula en tumores sólidos y en articulaciones inflamadas en la
enfermedad artrítica y, por lo tanto, podría alentar la entrega específica de
medicamentos en esos sitios ( Kratz, 2008 ).

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Fig.9 . Estructura tridimensional de HSA con ligandos comunes unidos en diferentes
sitios de unión.
Adaptado de Ghuman et al. (2005)
Una cantidad significativa de la literatura disponible sobre interacciones albúmina-
flavonoides informa no solo datos termodinámicos cuantitativos (constantes de
unión), sino también análisis cualitativos destinados a localizar los posibles sitios de
unión ( Banerjee et al., 2008 , Dufour y Dangles, 2005 , Lu et al., 2007 , Rawel et al.,
2005 ). En particular, se estudió la quercetina y sus metabolitos por su afinidad con
HSA ( Murota et al., 2007 , Zsila et al., 2003 ). Además de otras técnicas
convencionales, la espectroscopía de fluorescencia es la herramienta analítica más
utilizada para investigar la unión a HSA ( Oravcová et al., 1996) De hecho, el
único residuo de triptófano de HSA (Trp214, sitio I) puede excitarse a 295  nm y
emite fluorescencia a 340  nm. A partir del apagado de esta fluorescencia por un
ligando dado, se puede estimar la constante de unión ( Sulkowska, 2002 ).
La afinidad de las flavanonas por la HSA ha sido investigada más recientemente. En
un estudio original, se realizó un análisis de impedancia de cristal de cuarzo
piezoeléctrico (PQCI) para medir la afinidad de la hesperidina por la HSA
inmovilizada. La constante de asociación se estimó en 3,42  mg  ml -1 utilizando el
análisis Scatchard ( Liu et al., 2004 ). La interacción de la hesperidina con la albúmina
de suero bovino (BSA) también se investigó mediante espectroscopía de fluorescencia
( Wang et al., 2007 ). Xie y sus coautores utilizaron espectroscopía de fluorescencia
con soporte de espectroscopias infrarrojas transformadas de Fourier (FT-IR) y UV-
vis para determinar la constante de unión, el sitio de unión y el mecanismo de unión
de hesperetinaa HSA. A partir de la ecuación de Stern-Volmer,  se estimó una
constante de unión de aproximadamente 81 ×  10 3  M −1 a pH 7,4. El valor
de K disminuyó al aumentar el pH de 6,4 a 8,4 debido a, (a) cambios
conformacionales en HSA que afectan la forma de las cavidades de unión hidrófobas
y (b) la disociación aumentada de los grupos fenólicos hidroxilo de
hesperetina. Además, la espectroscopía FT-IR sugirió que la hesperetina se une al
subdominio IIA ( Xie et al., 2005a ). El estudio se amplió aún más para investigar la
asociación de naringenina ( K  =  127  ×  10 3  M −1 ) con HSA (Xie et al., 2005b ). La
conjugación de agliconas de flavanona puede afectar su afinidad por la HSA. Por
ejemplo, la constante de unión de la naringina , un diglicósido de naringenina, se
encontró más baja ( K  =  18  ×  10 3  M −1 ) que la de la naringenina ( Zhang et al.,
2008 ). Además, la presencia de iones metálicos en el medio también puede reducir la
afinidad de las flavanonas por HSA ( Hu et al., 2010 ). Los principales mecanismos
involucrados en la interacción incluyen el efecto hidrofóbico (interacciones de van der
Waals entre el ligando y los residuos de aminoácidos hidrofóbicos ).con desolvatación
concomitante), interacciones electrostáticas entre los residuos de Lys y el ión fenolato
de flavanona , formadas después de la desprotonación del grupo OH más ácido en la
posición C7, y el enlace de hidrógeno entre los grupos fenólicos OH y ceto de
hesperetina y la cadena polipeptídica u otro aminoácido polar residuos ( Xie et al.,
2005a ). Los cálculos termodinámicos (cambio de entalpía ΔH , cambio de energía
libre ΔG , cambio de entropía positivo ΔS ) sugieren que las interacciones
electrostáticas son más efectivas en la unión de flavanona - HSA que otras fuerzas
( Hu et al., 2010) Hasta hace poco, no se había investigado la afinidad por el HSA de
los metabolitos de flavanona circulantes verdaderos. Por lo tanto, nuestro grupo
estudió la interacción de glucurónidos de flavanona sintetizados químicamente
(metabolitos circulantes principales en humanos) con HSA ( Khan et al., 2011 ). En
comparación con la naringenina y la hesperetina, se observó que la glucuronidación
solo desestabiliza débilmente los complejos de flavanona-HSA, siendo el efecto
ligeramente más fuerte en el caso de la glucuronidación del anillo B. Las
investigaciones se extendieron además a flavanona chalconas , que resultaron mejores
ligandos de HSA que sus contrapartes de flavanona.

9 . Bioactividad de flavanonas
En las últimas décadas, se han realizado investigaciones exhaustivas sobre
compuestos dietéticos que podrían proteger contra enfermedades letales, en particular
enfermedades cardiovasculares y
cánceres. Estos compuestos potencialmente bioactivos incluyen fitoestrógenos , carote
noides , ácido ascórbico , limonoides cítricos , compuestos organosulfurados y una
buena cantidad de polifenoles . Los mecanismos básicos implicados en los posibles
efectos sobre la salud de los polifenoles son principalmente la inhibición de la
oxidación de lípidos y ADN (actividad antioxidante) y la regulación de la expresión
génica (Kris-etherton et al., 2002,Patil et al., 2009a,Patil et al., 2009b ). Al igual que
otros polifenoles, las flavanonas también se estudian por sus efectos en células
específicas. Sin embargo, la parte que falta sigue siendo la investigación de
los metabolitos de flavanona verdaderos . A continuación se analizan ejemplos
de estudios in vitro / in vivo realizados para explorar los efectos beneficiosos de las
flavanonas y los mecanismos involucrados.

9.1 . Efectos de barrido radical

Las especies reactivas de oxígeno (ROS) / especies reactivas de nitrógeno (RNS) en


los sistemas biológicos son típicamente inestables y se producen en baja
concentración para las vías de señalización fisiológica y en mayor concentración
(estrés oxidativo) para destruir virus y bacterias en los leucocitos durante la infección
(respuesta inflamatoria). La exposición crónica al estrés oxidativo se considera un
evento iniciador en el desarrollo de enfermedades degenerativas (Brown y Borutaite,
2006,Forman et al., 2008). ROS / RNS incluyen el anión superóxido (O2 -), peróxido
de hidrógeno (H2O2), elradical hidroxilo (HO ), el ión hipoclorito (ClO - ), el dióxido
de nitrógeno (NO 2 ) y el peroxinitrito (ONOO - ), los radicales lípido oxilo y peroxilo
(RO  , ROO  ) producidos durante la autoxidación de ácidos grasos
poliinsaturados . Los compuestos fenólicos se estudian ampliamente por su capacidad
para reducir ROS / RNS (actividad antioxidante, AA), evitando así el daño oxidativo
que causan a las biomoléculas del huésped.
La actividad antioxidante de las flavanonas depende del número y la disposición
espacial de los grupos OH fenólicos ( Cai et al., 2006 , Sadeghipour et al.,
2005 ). Hasta ahora, se han realizado investigaciones in vitro e in vivo para
determinar el potencial antioxidante de los aglicones, chalcones y glucósidos de
flavanona . No hay literatura disponible sobre la capacidad antioxidante de los
glucurónidos de flavanona.
Un estudio comparativo sobre las propiedades antioxidantes de nueve flavanonas
diferentes (naringina, neohesperidina, neoeriocitrina, hesperidina ,
narirutina, naringenina , hesperetina , eriodictyol e isosakuraternina) utilizando el
ensayo de inhibición de blanqueo de crocina mostró que la presencia de un núcleo
de catecol (3 ', 4' -dihidroxi sustitución en el anillo B) y su O- metilación no tienen un
efecto significativo sobre la actividad antioxidante (AA) de aglicones, lo cual es
sorprendente. Por el contrario, se observó un aumento en AA con los glucósidos que
tienen un núcleo de catecol mientras que la O- metilación del catecol tiene un efecto
opuesto ( Di Majo et al., 2005 ).La O- glucosilación a menudo reduce el AA, lo que
apunta a la participación en la reacción de eliminación de radicales del grupo OH
involucrado en el enlace glucosídico ( Van Acker et al., 1996 ). Los diferentes restos
de glicosilo también pueden tener un pequeño efecto sobre AA. Por ejemplo,
la glicosilación de hesperetina en el grupo C7-OH por la neohesperidosa afecta al AA
mientras que la glicosilación por la rutinosa no tiene ningún efecto ( Di Majo et al.,
2005 ). Mientras que la sustitución en un grupo hidroxilo típicamente disminuye el
AA, la adición de un grupo hidroxilo puede aumentarlo fuertemente. Por ejemplo, 3 ',
5′-dihidroxinaringina (anillo B de pirogalol) es ca. 70 veces más potente que la
naringenina ( Ye et al., 2009) Las flavanonas presentan un AA más alto en un entorno
hidrófilo. En un entorno lipofílico, algunas flavanonas (neohesperidina, hesperetina,
isosakuranetina) mostraron un potencial antioxidante reducido, mientras que otras
(naringina, narirutina, naringenina, neoeriocitrina, eriodictyol) incluso se vuelven
prooxidantes ( Finotti y Di Majo, 2003 ). En general, las flavanonas dietéticas
comunes que carecen de un núcleo de catecol son solo antioxidantes pobres y se
espera que sus metabolitos sean aún menos potentes. Por lo tanto, los mecanismos
más importantes involucrados en sus efectos sobre la salud no deben estar
relacionados con su actividad antioxidante.

9.2 . Efectos antiinflamatorios

Los fenómenos de inflamación han sido bien descritos en la literatura a través de


muchas revisiones. La inflamación es la manifestación más obvia de la defensa
inmune. Se manifiesta por hinchazón, dolor, calor y enrojecimiento en el tejido
afectado y ayuda a eliminar las fuentes de daño (virus, bacterias) e iniciar la
curación. La inflamación es producida por las células inmunes dentro del tejido,
liberando mediadores específicos que controlan la circulación local y las actividades
celulares ( Silverstein, 2009 ). La respuesta a la inflamación a estímulos externos
puede surgir de la acción de aminas (histamina y 5-hidroxitriptamina), péptidos cortos
(bradiquinina), péptidos largos (interleucina-1 (IL-1)), lípidos (prostaglandinas (PG)
y leucotrienos.(LT)) y muchas enzimas reguladoras (proteína quinasa C,
fosfodiesterasa, lipoxigenasa y ciclooxigenasa) ( Vane y Botting, 1987 ). Muchas de
las enfermedades crónicas y no curadas que afectan a las poblaciones humanas se
deben a una disfunción de la respuesta inmune.
Se descubrió que la hesperidina (hesperetina 7-rutinósido) inhibía las quinasas y las
fosfodiesterasas responsables de la transducción y activación
de la señal celular durante una respuesta inflamatoria ( Manthey et al.,
2001 ). Se investigó en ratas un efecto inhibidor de la hesperidina sobre la pleuresía
(inflamación crónica de los pulmones) inducida por carragenina . Los resultados
mostraron una reducción en el volumen de exudados y el número de leucocitos
migratorios en un 48% y 34%, respectivamente, lo que hace que la hesperidina sea
un agente levemente antiinflamatorio . Además, este grupo de investigación observó
que la hesperidina puede reducir la hipertermia inducida por levaduras en ratas
( Emim et al., 1994 ). En otro estudio, la hesperidina mostró un efecto inhibidor
sobreSobreexpresión inducida por lipopolisacárido (LPS) de ciclooxigenasa-2,
óxido nítrico sintasa inducible (iNOS), sobreproducción de prostaglandina E2 y óxido
nítrico (NO) ( Sakata et al., 2003 ). También se encontraron efectos
antiinflamatorios similares para la poncirina en las células RAW 264.7 de macrófagos
( Kim et al., 2007b ). Un estudio también mostró la actividad antiinflamatoria de la
hesperidina al inhibir el ácido araquidónico y la liberación de histamina ( Galati et al.,
1994) La literatura significativa también informa sobre la actividad antiinflamatoria
de la naringenina y sus glucósidos. Estas flavanonas son efectivas en la inhibición de
las citocinas proinflamatorias inducidas por LPS en macrófagos y modelos de sangre
completa humana ex vivo para prevenir la periodontitis ( Bodet et al., 2008 ). También
ayudan a atenuar la producción de factor de necrosis tumoral (TNF) -α inducida por
LPS / interferón (IFN) -γ en las células gliales al inhibir la expresión de iNOS y la
producción de óxido nítrico, la fosforilación de la proteína quinasa activada por
mitógeno p38 (MAPK) y el transductor de señal descendente y activador de la
transcripción-1 (STAT-1) para proteger la lesión neuroinflamatoria ( Vafeiadou et al.,
2009 ). Finalmente, ayudan a reducir la producción de nitrato.y nitrito (indicadores del
proceso inflamatorio) en modelos de ratones con colitis ulcerosa inducida por DSS
(sulfato de sodio dextrano) para controlar la formación de edema intestinal ( Amaro et
al., 2009 ).

9.3 . Efectos anticancerígenos

Los avances en la investigación del cáncer han sido espectaculares durante la última
década. Sin embargo, es muy lamentable que la tasa de incidencia de cáncer aumente
a un ritmo alarmante. Una estimación reciente en Francia ha dado la cifra de 320,000
casos diagnosticados en 2005, entre los cuales 180,000 en hombres y 140,000 en
mujeres (informe INC). Está claro que la investigación seria en la lucha contra el
cáncer es más que nunca esencial.
El cáncer es una familia compleja de enfermedades. En términos de biología
molecular y celular, el cáncer es una enfermedad caracterizada por una expresión
génica anormal. Esta expresión genética alterada se produce a través de una serie de
mecanismos, incluidos los insultos directos al ADN (como mutaciones genéticas,
translocaciones o amplificaciones) y la transcripción o traducción anormal de
genes. Cuando el ADN de las células normales se expone a sustancias dañinas
(carcinógenos), las células pueden sufrir alteraciones genéticas que resultan en
transformaciones malignas, un proceso conocido como carcinogénesis. Los
carcinógenos incluyen agentes químicos (de contaminantes industriales , tabaco, etc.),
virus (virus del papiloma humano, virus de la hepatitis B y C), ionizantes (rayos X) y
radiaciones ultravioletas, partículas (asbesto, polvo de madera) y muchos otros. Los
ROS (superóxido, peróxido de hidrógeno, radical hidroxilo) también se encuentran
como causas principales no solo de daño en el ADN sino también de proteínas y
lípidos que conducen al envejecimiento ( Ames y Gold, 1998 ).
A diferencia de otros flavonoides , las flavanonas no se han estudiado ampliamente
por sus actividades contra el cáncer. Además, los estudios se han limitado a aglicones
y glucósidos. Recientemente, se demostró que el 7-glucurónido de hesperetina
(Hp7G) afecta la diferenciación de los osteoblastos ( Trzeciakiewicz et al., 2010 ). Las
principales flavanonas cítricas pueden ser efectivas para combatir la carcinogénesis al
minimizar el daño al ADN, el desarrollo de tumores y la proliferación.

9.3.1 . Efectos antimutagénicos

Las flavanonas pueden proteger el daño del ADN por su capacidad de absorber la luz
UV. Los resultados de un modelo de ADN plasmídico irradiado con radiación UV
mostraron un efecto protector considerable de la naringenina contra el daño del ADN
inducido por la radiación UV ( Kootstra, 1994 ). La capacidad antioxidante moderada
de las flavanonas también puede ser útil para proteger contra la mutación por radicales
libres generados cerca del ADN. Además, naringina también inhibe
H 2 O 2 citotoxicidad inducida y la apoptosis, posiblemente a través de su efecto sobre
el H 2 O 2 inducida por la expresión de un gen asociado a la apoptosis ( Kanno et al.,
2003) La naringenina puede exhibir cambios antimutagénicos al estimular la
reparación del ADN, luego del daño oxidativo en las células de cáncer de próstata
humano ( Gao et al., 2006 ).

9.3.2 . Inhibición del desarrollo tumoral.

La importancia farmacológica de las flavanonas también puede evaluarse por su


acción contra el desarrollo tumoral. So y col. (1996) estudiaron el efecto de la
hesperetina y la naringenina en el desarrollo del cáncer de mama inducido por
antraceno 7,12-dimetilbenz [a] en ratas hembras. Los resultados mostraron que el
desarrollo del tumor se retrasó en ratas alimentadas con una dieta suplementada con
jugo de naranja / naringina ( So et al., 1996 ). Más tarde, en relación con el efecto
antiangiogénico de las flavanonas, se utilizó un ensayo inmunoabsorbente ligado a
enzimas (ELISA) para medir la liberación del factor de crecimiento endotelial
vascular (VEGF) de las células de cáncer de mama humano con adenocarcinoma
mamario. La naringina parecía más potente que la rutina , la apigenina y
el kaempferol.y crisina ( Schindler y Mentlein, 2006). 8-Prenylnaringenin, un
derivado de la naringenina, inhibe la angiogénesis inducida por el factor básico de
crecimiento de fibroblastos (VEGF) o el efecto sinérgico de dos citocinas en
combinación, en un estudioin vitroein vivo(Pepper et al., 2004 ). Ocho flavanonas,
incluyendo flavanona, 2′-hidroxiflavanona, 4′-hidroxiflavanona, 6-hidroxiflavanona,
7-hidroxiflavanona, naringenina, naringina y taxifolina, fueron investigadas por
sus efectos antitumorales.en células de carcinoma colorrectal (HT29, COLO205 y
COLO320HSR). La 2′-hidroxiflavanona surgió como el agente quimiopreventivo más
potente y, por lo tanto, mostró un efecto inhibitorio significativo sobre la formación
de tumores. Un estudio reciente sobre la suplementación con hesperetina en ratas
Wistar macho albinas mostró su inhibición de la carcinogénesis de colon inducida por
1,2-demitilhidrazina (DMH). La investigación sugirió que la hesperetina puede inhibir
las enzimas de fase I (involucradas en la activación del carcinógeno), inducir enzimas
metabolizadoras xenobióticas de fase II y eliminar
las especies carcinógenas electrofílicas ( Aranganathan et al., 2009 ).

9.3.3 . Efectos antiproliferativos

Naringenin fue investigado con éxito por su efecto antiproliferación celular en una
línea celular de cáncer de colon HT-29. La proliferación celular medida mediante un
ensayo colorimétrico se inhibió significativamente, especialmente cuando las células
HT-29 se expusieron a naringenina a dosis superiores a 0,7  mM. Los resultados
sugirieron un papel potencial para los cítricos como fuente de agentes
quimioprotectores contra el cáncer de colon ( Frydoonfar et al., 2003 ). En un estudio
comparativo, las flavanonas mostraron una actividad antiproliferativa significativa
contra las líneas celulares cancerosas de pulmón, colon, mama, próstata y
melanoma. Además, la glicosilación redujo la actividad antiproliferativa en ambas
clases de flavonoides ( Manthey y Guthrie, 2002 ). Un C2 El doble enlace C3 parece
importante para la actividad antiproliferativa de los flavonoides y, de hecho,
las flavonas suelen ser más potentes que las flavanonas ( Agullo et al., 1996 , Kawaii
et al., 1999 , Manthey y Guthrie, 2002 , Rodriguez et al., 2002 ) . Curiosamente,
la metilación de hesperetina y eriodictyol en C7-OH aumentó la capacidad
antiproliferativa ( Benavente-García y Castillo, 2008 ). Se han presentado varios
mecanismos para explicar la actividad antiproliferativa de los flavonoides. La
hipótesis más aceptada es la inhibición de varias quinasas involucradas en la
transducción de señales, como las proteínas quinasas C, tirosina.quinasas, PI 3-
quinasas o quinasa S6 ( Casagrande y Darbon, 2001 ).
Los efectos de la hormona 17β-estradiol (E2) cubren una amplia gama de procesos
fisiológicos en mamíferos como la reproducción, la salud cardiovascular, la integridad
ósea, la cognición y el comportamiento. Además de sus funciones en la fisiología
humana, E2 también participa en el desarrollo de muchas enfermedades, incluidos
varios tipos de cáncer. El mecanismo propuesto para explicar la actividad
quimioprotectora de la naringenina sugiere que la flavanona se une a ERα (receptor de
estrógeno α) como antagonista, lo que limita el efecto de E2 en la promoción de la
proliferación celular ( Bulzomi et al., 2010 ).

9.4 . Efectos cardiovasculares

Las enfermedades cardiovasculares (ECV) afectan el corazón y los vasos sanguíneos


circundantes y pueden tomar muchas formas, como presión arterial alta, enfermedad
de las arterias coronarias, enfermedades del corazón y derrames cerebrales. La ECV
es la principal causa de mortalidad en la UE y representa aproximadamente el 40% de
las muertes (2 millones de muertes por año). El estrés oxidativo crónico y la
inflamación se encuentran entre los principales factores que causan ECV y su control
por antioxidantes, incluidos los polifenoles, es de gran importancia biológica.

9.4.1 . Vasorelaxant y efectos vasoprotectores

Las células endoteliales vasculares son muy importantes en las funciones coronarias
normales. La regulación del tono vascular y el flujo sanguíneo a los órganos está
controlada por las células endoteliales, que sintetizan y liberan una serie de factores
como la prostaciclina , el óxido nítrico (NO), el factor de hiperpolarización derivado
del endotelio (EDHF) y la endotelina . Entre estos factores, el NO es crítico en la
preservación de las funciones vasculares normales, y existe una relación clara entre la
enfermedad de la arteria coronaria y la disfunción del NO ( Benavente-García y
Castillo, 2008 ).
Los flavonoides promueven la NO sintasa endotelial (eNOS) y al mismo tiempo
inhiben la NOS inducible (iNOS) ( Olszanecki et al., 2002 ). In vitro , la inhibición de
iNOS en células RAW 264.7 activadas por LPS no es significativa con flavanonas
(naringenina) en comparación con flavonas y flavonoles (apigenina, luteolina ,
quercetina), que pueden demostrar la importancia de un  doble enlace C2 C3 ( Kim
et al. ., 1999 ). Recientemente, el potencial vasorelajante de hesperetina y hesperidina
( Orallo et al., 2004 ), así como de naringenina y naringina ( Orallo et al., 2005) se
demostró en ratas. Estos efectos vasorelajantes se deben probablemente a la inhibición
de diferentes isoenzimas de fosfodiesterasa.

9.4.2 . Efecto sobre la aterosclerosis y la enfermedad coronaria

Existe evidencia convincente de que la enfermedad coronaria (CHD) está relacionada


principalmente con una elevación del colesterol de lipoproteínas de baja
densidad (LDL). El colesterol, los ésteres de colesterol y los triglicéridos se
transportan dentro de las partículas de LDL (componente proteico ApoB) desde sus
sitios de absorción o síntesis a sitios de bioactividad. En la pared de la arteria, la
oxidación y acumulación de LDL en los macrófagos (diferenciados de los monocitos
circulantes después de la adhesión a la pared del vaso) son eventos tempranos de
formación de placa (aterosclerosis). La aterosclerosis provoca el endurecimiento y el
estrechamiento de las arterias, lo que pone en riesgo el flujo sanguíneo. Es la causa
habitual de enfermedad cardíaca, accidente cerebrovascular y enfermedad vascular
periférica.
El potencial anti-aterosclerosis de las flavanonas cítricas, hesperetina y naringenina,
se atribuyó a su capacidad para regular la secreción de ApoB y la homeostasis del
colesterol celular en la línea de células de hepatoma humano HepG2. Se observó una
disminución en la acumulación de ApoB en los medios después de una incubación de
24 h con hesperetina y naringenina. Esta secreción reducida de ApoB estaba
relacionada con una concentración celular reducida de éster de colesterilo ( Wilcox et
al., 2001 ). El mecanismo involucrado en la actividad anti-aterosclerosis de
naringenina fue una secreción reducida de ApoB debido principalmente a la
inhibición de la proteína de transferencia de triglicéridos microsomales y al aumento
de la captación de lipoproteína mediada por el receptor de LDL (LDLr) (Borradaile et
al., 2003 ).
También se demostró que la hesperetina limita el aumento del contenido de lípidos
hepáticos y las actividades enzimáticas involucradas en la síntesis de triacilglicerol en
ratas alimentadas con ácido orótico al 1% ( Cha et al., 2001 ). Además, también se
informó un efecto hipolipidémico de hesperetina incluso durante las altas
concentraciones de lípidos ( Kim et al., 2003 ).
En ratas alimentadas con una dieta alta en colesterol, la naringenina al 0.1% redujo los
niveles de colesterol en plasma y triacilgliceroles hepáticos. Este efecto fue
acompañado por una disminución en la actividad de 3-hidroxi-3-metilglutaril-
coenzima A reductasa y acil-CoA colesterol aciltransferasa ( Lee et al., 1999 , Lee et
al., 2003 ). En otro estudio en conejos alimentados con una dieta rica en colesterol, la
naringina causó un aumento en las actividades de superóxido dismutasa y catalasa ,
contribuyendo así a combatir el estrés oxidativo. Además, también se demostró que
naringina regula la expresión génica de la superóxido dismutasa, catalasa
y glutatión peroxidasa ( Jeon et al., 2001) Más recientemente, la naringina, el
principal flavonoide de la toronja, se estudió por su efecto anti-aterosclerosis en la
hipercolesterolemia inducida por la dieta en ratones ( Chanet et al., 2012a ). El estudio
demostró que la suplementación con naringenina a un nivel nutricionalmente
relevante puede reducir la aterosclerosis en ratones alimentados con una dieta alta en
grasas y colesterol alto. Este efecto protector podría estar relacionado con una mejor
dislipidemia y biomarcadores de disfunción endotelial, pero también con cambios en
la expresión génica que pueden conducir a la preservación de la pared vascular, como
lo demuestra el análisis transcriptómico de la aorta. Los autores también han
publicado una revisión que describe el papel de las flavanonas cítricas en la
protección de la enfermedad cardiovascular ( Chanet et al., 2012b ).

9.5 . Otros efectos biológicos

A continuación se enumeran algunos ejemplos de otras bioactividades interesantes de


la flavanona cítrica:

La actividad antiviral de la hesperidina se ha demostrado contra el herpes
simple, la poliomielitis, la parainfluenza y las infecciones virales sincitiales,
mientras que la naringina estaba inactiva ( Kaul et al., 1985 ). En un estudio
reciente, la hesperetina mostró una actividad antimicrobiana moderada
contra Salmonella typhi y Salmonella typhimurium ( Kawaguchi et al., 2004 ).

Un estudio de Matsuda et al. (1991) sugirieron que la hesperidina tiene una
actividad antialérgica a través de la inhibición de la liberación de histamina de
los mastocitos pertinentes en ratas.

La administración oral de hesperidina causó una disminución en el índice de
actividad de la enfermedad, la actividad mieloperoxidasa (MPO) y el contenido
de malondialdehído (MDA) en la colitis ulcerosa inducida por dextrano sulfato
de sodio (DSS) en ratones ( Xu et al., 2009 ).

Knekt y col. (2002) encontraron una asociación entre un alto consumo de
hesperetina y naringenina y una menor incidencia de enfermedad
cerebrovascular y asma. Los hallazgos respaldan la importancia clínica de los
inhibidores de la monoaminooxidasa (MAO-A y B) en el tratamiento de varios
trastornos neurológicos y psiquiátricos. Entre los varios flavonoides (flavonas,
tioflavonas, flavanonas) probados, los más activos fueron las flavanonas con
mayor actividad inhibitoria selectiva contra MAO-B ( Chimenti et al., 2010 ).

Los efectos beneficiosos de naringenina en cis nefrotoxicidad inducida por
-platino ( Badarya et al., 2005 se informó).

10 . Conclusión
En las últimas dos o tres décadas, ha habido una creciente conciencia del papel de la
dieta en la etiología de las enfermedades crónicas, en particular las enfermedades
cardiovasculares (ECV) y algunos tipos de cáncer que contribuyen en gran medida a
la morbilidad y mortalidad en países industrializados como Canadá, Australia ,
Estados Unidos y países europeos. Ya se ha identificado una amplia gama de
sustancias bioactivas, incluidos los polifenoles, en alimentos y bebidas, y es probable
que existan muchos más. Las frutas y jugos cítricos se han considerado durante mucho
tiempo una parte valiosa de una dieta saludable y nutritiva, y generalmente se supone
que algunos de los micronutrientes en los cítricos promueven la salud y brindan
protección contra enfermedades crónicas. Estos micronutrientes incluyen
principalmente las flavanonas simples hesperetina , naringenina , eriodictyol e
isosakuranetina, pero también compuestos más complejos como la calixina. Aún no se
ha alcanzado un conocimiento profundo de la composición de todos los productos
cítricos. Sin embargo, se puede concluir que los químicos y nutricionistas están
progresando cada vez más rápidamente. Se están empleando varias técnicas
innovadoras y respetuosas con el medio ambiente para extraer flavanonas de una
amplia gama de fuentes vegetales. Además, los métodos analíticos están mejorando en
su eficiencia, sensibilidad en la detección de pequeñas cantidades de flavanonas
complejas, cuantificación simultánea de una gama más amplia de compuestos y
reducción del tiempo de análisis.
Se han llevado a cabo amplios estudios sobre la bioactividad de
los aglicones de flavanona y sus glucósidos . Sin embargo, un eslabón perdido crucial
es la validación de los mecanismos propuestos con los metabolitos de flavanona
circulantes reales. Curiosamente, una investigación muy reciente mostró que, a
diferencia de los conjugados de anillo A (hesperetina-7-glucurónido y naringenina-7-
glucurónido), los conjugados de anillo B son hesperetina-3′-sulfato, hesperetina-3′-
glucurónido y naringenina-4 ′ -glucurónido en bajas concentraciones (2  μmol  L- 1 )
fueron tan potentes como los aglicones correspondientes para atenuar la adhesión de
monocitos a las células endoteliales de la vena umbilical humana activadas por TNF-α
(HUVEC) al afectar la expresión de genes relacionados ( Chanet et al., 2013) Este
trabajo proporciona una posible explicación de los efectos vasculoprotectores de las
flavanonas.
En conclusión, ahora se acepta cada vez más que los fitoquímicos que se encuentran
en los cítricos y otras plantas consumidas en la dieta humana pueden ser útiles para
reducir el riesgo de muchas enfermedades crónicas. En nuestra dieta, el consumo de
cítricos tiene un potencial considerable para expandirse como parte del aumento
general recomendado en el consumo de frutas y verduras. Hay un dicho bien
conocido:
" Una manzana al día mantiene alejado al médico ".
Después de esta encuesta de la literatura, nos gustaría hacer hincapié en las
recomendaciones del Programa francés de nutrición y salud (PNNS) y afirmar:
" Cinco frutas y verduras al día mantienen alejadas las enfermedades crónicas ".