Está en la página 1de 10

Morfología y metabolismo la base para la identificación de las bacterias

Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Departamento de Ciencias Biológicas, Laboratorio de Microbiología,
Santiago de Cali, Colombia marzo 8 de 2020

Natalia Paz, Nicolás Ramos, Wanda Villacorte.

1.INTRODUCCIÓN metabolizar, también incluyen reacciones enzimáticas


Los microorganismos son de especial cromogénicas o pruebas convencionales modificadas
importancia en la actualidad porque intervienen en “hay discos o tabletas comercializados con sustratos
numerosos procesos ecológicos, industriales, inclusive en cromogénicos para uso individualizado” (Fernández,
nuestra salud. Entre estos microorganismos de las más García, Saéz, & Valdezate, 2010), de acuerdo a la prueba
abundantes son las bacterias, las cuales presentan realizada así mismo será el tiempo de la respuesta. De
diversidad de funciones y características. Por ejemplo, esta manera es posible determinar las características
las bacterias nitrificantes, las cuales intervienen en el metabólicas de las bacterias.
ciclo del nitrógeno realizando un proceso de fijación del Es importante tener en cuenta que las bacterias
nitrógeno atmosférico en los suelos, por otra parte, las pueden alterar su respuesta metabólica debido a cambios
bacterias cianotróficas y fotosintéticas intervienen en la en su ambiente, por lo tanto, en los usos humanos es
producción de oxígeno (Oñate, 2010), en el ámbito de la necesario evitar este tipo de cambios. Para estos existen
salud las bacterias permiten la degradación de numerosos estrategias de conservación que permiten mantener
compuestos en los intestinos, al conjunto de estas características intactas y sus condiciones genéticas por
bacterias que viven en una relación simbiótica se les largos periodos de tiempo. Los métodos de conservación
denomina microbiota o flora intestinal y otras bacterias se han clasificado en: “(...) corto, mediano y largo plazo.
llamadas probióticos son suplementos encargados de Entre los métodos a corto plazo se encuentran:
proliferar la microbiota (Rodríguez, 2006) . Subcultivo o pasaje celular. Mediano plazo: Aceite
Debido a los procesos realizados por ellas que mineral, leche descremada, agua, arena o sensidiscos.
se pueden aprovechar han tomado un papel muy Largo plazo. Liofilización, crio preservación con
importante para la ciencia, lo que ha generado la nitrógeno líquido a – 186 °C, dimetil sulfóxido (DMSO)
necesidad de crear ambientes para permitir su y glicerol.” (Aguirre, 2020). Estas técnicas se basan
crecimiento. Para esto se han simulado artificialmente principalmente en la reducción de su actividad
medios de cultivo que deben contener todos los metabólica y buscan que la célula sufra un daño mínimo
macroelementos, microelementos y demás factores de durante el tiempo de cultivo.
crecimiento microbiano, esto con el objetivo de aislar los Por lo general un criterio para escoger un
microorganismos y estudiar su morfología, clasificarlos método de conservación con respecto a la viabilidad de
por sus propiedades bioquímicas y hasta obtener las células, la cual da información de cuántas células
productos biológicos producidos por estos (Serrano, & vivas se mantienen después del método de conservación
Gutiérrez, 2011). El desarrollo de estas condiciones ha utilizado, otros criterios se basan en la pureza y en la
permitido comprender el funcionamiento microbiano y actividad de los microorganismos.
potenciar los diferentes procesos que realizan. En esta práctica nos enfocamos en la
Para escoger el medio de cultivo adecuado, en preparación de medios de cultivo, la realización de
primer lugar, se debe identificar con qué tipo de bacteria pruebas de identificación bioquímica y el desarrollo de
se va a trabajar. Cuando se inicia el proceso de métodos de conservación para medir la viabilidad
identificación, se empieza por las pruebas rápidas: obtenida.
descripción morfológica que incluye tamaño, forma,
consistencia, y en ocasiones por su color, como por
ejemplo la tinción de Gram, también se puede tener en 2.MARCO TEÓRICO
cuenta los ambientes en los que crecen y pruebas como
oxidasa y catalasa, de acuerdo con los resultados 2.1 Medios de cultivo y técnicas de siembra
obtenidos se puede clasificar el organismo de manera Un medio de cultivo tal y como se mencionó
parcial en orden y familias (Fernández, García, Saéz, & anteriormente es el conjunto de nutrientes que son
Valdezate, 2010) indispensables para el crecimiento de los
Si bien los rasgos morfológicos han sido una microorganismos. Para el diseño de un medio de un
base para la identificación y la respectiva clasificación de organismo específico se deben tener en cuenta diferentes
bacterias, no han sido suficientes, pues un gran problema aspectos, en primer lugar, antes de prepararlo es
al que se ven enfrentados los experimentadores a la hora necesario conocer las necesidades básicas. Cualquier
de evaluar un inóculo es que al visualizarlas al medio de cultivo debe contener los siguientes factores:
microscopio encuentran que las bacterias que se están agua, carbono, energía, nitrógeno, minerales, pH y
estudiando cuentan con características morfológicas muy factores de crecimiento, así como también la
similares y es imposible distinguir unas de otras. Una temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
técnica eficaz que permite solucionar este conflicto es la adecuadas (ESPINAL, 2005). Se debe tener en cuenta
realización de pruebas bioquímicas, las cuales se enfocan que la composición dependerá de la especie que se desee
en las actividades metabólicas que permiten una cultivar debido a que las necesidades nutricionales y
identificación más precisa. Estas pruebas detectan la físicas para cada especie difiere considerablemente.
presencia de una enzima preformada, componentes Clasificación de los medios de cultivo
metabólicos o determinan la sensibilidad de un Los medios de cultivo se pueden clasificar de
microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en acuerdo con el estado físico en que se encuentren,
medios de identificación que contienen el sustrato a
pueden ser líquidos, sólidos o semisólidos. También por de esterilización se puede llevar a cabo a través de
su origen ya sean naturales, sintéticos o semisintéticos. filtración, incineración, entre otros. (OLIVAS,2004).
De acuerdo con su utilidad se pueden encontrar medios Después de tener el medio de cultivo se
de tipo selectivo, selectivos diferenciales, procede a inocular el material (inóculo) en el medio,
mantenimiento, entre otros. existen diferentes técnicas por medio de las cuales se
POR SU ESTADO FÍSICO pueden inocular, entre ellas se encuentran la técnica de la
Los líquidos: generalmente se denominan estría cruzada, en la que se utiliza un asa al rojo vivo, se
“caldos” estos están compuestos por nutrientes en deja enfriar, se toma el inoculo y se esparce en el medio
solución acuosa y son similares al caldo de cultivo casero hasta formar un pentágono. En caso de medios líquidos,
que pasó por un proceso de filtrado y esterilizado, son se extrae el inoculo y una vez se siembra se observa
ejemplos de estos el caldo nutritivo y la infusión cerebro turbidez, esta técnica se llama siembra por inmersión, se
corazón (BHI) (NEGRONI, 2008). utiliza para microorganismos aerobios. En la siembra en
Sólidos: se denominan comúnmente “agar”, doble capa se procede de la misma manera que por
resulta de añadir a un medio de cultivo líquido una inmersión luego de haberse solidificado, el medio se
sustancia gelificante, para manipularlos se deben insertar vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir
en cajas Petri, también se pueden usar tubos de ensayo la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este
los cuales se deben dejar solidificar inclinados para método se utiliza para microorganismos anaerobios
obtener una mayor superficie de siembra. facultativos y microaerofílicos. Por último, en la siembra
Semisólidos: son medios de cultivo líquidos con un en superficie se coloca sobre la superficie el inóculo con
agregado de agar al 0,3% o 0,5% son útiles para ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el
determinar la motilidad de gérmenes. inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo.
DE ACUERDO CON SU ORIGEN Este tipo de siembra se recomienda para
MEDIOS NATURALES: se componen de sustancias microorganismos aerobios estrictos. (Santambrosio,
naturales animales o vegetales 2009)
SINTÉTICOS: toda su composición está químicamente
definida y se caracterizan por ser reproducidos en forma 2.2 Tinciones Bacterianas
específica cuando son requeridos Para la preparación de un cultivo para las
SEMI SINTÉTICOS: estos contienen sustancias pruebas de tinción se debe elaborar un frotis bacteriano,
naturales y elementos sintéticos (Gilchrist, 2005) este es un extendido de una cepa bacteriana sobre un
POR SU UTILIDAD medio líquido en un portaobjetos, este se realiza con el
Selectivos: favorece el crecimiento de la bacteria de fin de facilitar la tinción en una capa homogénea de
interés e inhibe el crecimiento de otras. cultivo bacteriano, este frotis se seca y es necesario un
Diferenciales: permiten diferenciar las proceso de fijación, con la finalidad de conservar toda la
estrategias metabólicas de las bacterias arquitectura de la célula tanto a nivel estructural como
Selectivos-diferenciales: se selecciona un solo tipo de químico, de tal forma que se mantengan los componentes
bacterias y es posible obtener información de sus celulares. Hay dos tipos de fijaciones, las químicas y
características metabólicas físicas, dentro de estas últimas método físico con mayor
Mantenimiento: tiene una composición variada utilización en microbiología es el calor seco y en las
la finalidad de este medio es mantener, químicas el uso del etanol.
satisfactoriamente la viabilidad y las características Las bacterias y demás microorganismos se pueden
fisiológicas de un cultivo bacteriano. apreciar por microscopia óptica, para esto se necesitan
Ahora, dependiendo del tipo de agar hacer visibles estos microorganismos, ya que por lo
seleccionado así mismo varía el proceso para su montaje, general son transparentes, por medio de las tinciones
se debe leer con detenimiento las instrucciones de la bacterianas, estas facilitan el estudio morfológico de
etiqueta del producto y seguir el paso a paso. Una vez se bacterias revelando su forma y tamaño, los colorantes
ha escogido el medio que se ha de preparar, se deben empleados actúan por medio de reacciones químicas
revisar que las condiciones bajo las que se esté específicas con los componentes externos e internos de
realizando la preparación sean estériles, es decir los microbios (García & Picazo, 2003).
haciendo uso de instrumentos libres de agentes que Las tinciones más comunes y que fueron
alteren la composición del agar. La esterilización es empleadas en la práctica experimental fueron, la tinción
indispensable para eliminar todos los microorganismos negativa en donde se emplea la tinta china como
presentes en ellos, cuidando que no vuelva a entrar sustancia opaca que no tiñe la bacteria, en cambio resalta
ningún microorganismo. De esta manera sólo se su contorno logrando observar la cápsula, esta última es
cultivarán los organismos deseados. (OLIVAS,2004). una estructura impenetrable de polisacáridos y es por
Existen varios métodos para esterilizar, la esto por lo que se emplea esta tinción de contraste que
esterilización se puede realizar con calor, aquí la tiñe el fondo de la preparación y la cápsula queda
temperatura es elevada lo que permite inactivar enzimas incolora (García & Picazo, 2003). Se empleó también la
o desnaturalizar proteínas dependiendo del tiempo y la tinción simple por azul de metileno, esta tinción se
temperatura aplicada. También es muy usado el calor caracteriza por el uso de un solo colorante que tiñe toda
húmedo este permite la penetración más rápida del calor la muestra de un mismo color, en este caso se forma un
de la célula lo que provoca la coagulación de las complejo de azul de metileno con el ADN bacteriano
proteínas, normalmente se utiliza una autoclave, a 121° (López, Hernández, Colín-Castro, & al, 2014).
C, 15 libras de presión, por 15 min. Otro método consiste Por último, las más útiles son las tinciones
en la utilización de hornos que da lugar a la oxidación de compuestas, ya que son específicas de una característica
componentes celulares vitales, se usa comúnmente para bacteriana, en ese caso se empleó la tinción de gram que
materiales de vidrio. En ocasiones igualmente el proceso nos permite diferenciar entre bacterias con pared celular
grampositivas y gramnegativas (López, Hernández,
Colín-Castro, & al, 2014). Para esta tinción se emplean especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como
diferentes sustancias, primero se tiñe con cristal violeta, aceptor final de electrones en la cadena transportadora de
que es el colorante inicial y tiñe tanto a células electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa
grampositivas y gramnegativas, en el caso de las solo se encuentra en las bacterias aerobias, algunas
grampositivas este colorante básico se une con los ácidos anaerobias facultativas y, excepcionalmente, en alguna
teicoicos de la pared, mientras que en las gramnegativas microaerófila (Vibrio fetus), pero las bacterias anaerobias
este colorante entra hasta el espacio citoplasmático, estrictas carecen de actividad oxidasa. Asimismo, la
después se lava con agua el exceso de cristal violeta, se presencia de oxidasa va ligada a la producción de
añade el reactivo de Lugol que crea un complejo con el catalasa, ya que esta degrada el peróxido de hidrogeno
cristal violeta mediante los enlaces de yoduro, este que se produce como consecuencia de la reducción del
complejo permite que perdure la coloración en las oxígeno y cuya acumulación es tóxica. (Olmos, Fuente,
grampositivas. Este último se lava de las células Nieto, & Ramos, 2010)
gramnegativas con alcohol: acetona, ya que este rompe De igual forma, para las pruebas que tardan un
los enlaces entre lípidos e ingresa al citosol lavando el poco más en poder ser leídas, existen sistemas
cristal violeta. Por último, se añade la safranina como comerciales que permiten la realización de varias pruebas
colorante de contraste, donde las células gramnegativas en simultáneo, como, los sistemas comerciales
previamente decoloradas se tiñen con color rosa claro, en automatizados, en donde la inoculación y la lectura de
tanto, las grampositivas no se afectan con esta estos paneles se suele hacer de forma automática,
contratación. (Rodríguez, Gamboa, Hernández, & incorporándose los datos obtenidos en un ordenador, el
García, 2005). cual proporciona con un Índice alto de fiabilidad, la
identificación del microorganismo. O los sistemas
2.3 Pruebas Bioquímicas comerciales manuales o galerías multipruebas, las cuales
Hay métodos de identificación fenotípica que se basan en celdillas aisladas con un sustrato liofilizado
suelen incorporar reacciones a diferentes productos que se inoculan individualmente y que permiten realizar
químicos como las pruebas bioquímicas, que se basan simultáneamente entre 10 y 50 pruebas bioquímicas.
principalmente en la detección de un carácter metabólico Los resultados de las pruebas se expresan de forma
en cierto microorganismo, es decir, revela la actividad numérica (los resultados de las pruebas se agrupan de
química interna de un microbio y esta bioquímica es una tres en tres, de manera que el resultado de cada trío de
característica altamente precisa a nivel de identificación. pruebas queda reducido a un dígito. Cada especie está
Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que definida por un código numérico, resultado de la
evalúan la presencia de una enzima preformada y su codificación de las reacciones a las pruebas que se
lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. hubieran utilizado. Para codificar el dígito de un trío de
Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del pruebas se establece el siguiente sistema: - Si una prueba
microorganismo con una incubación previa de 18 a 48h; es negativa se asigna un valor 0 (cero) a la prueba. - Si la
a este grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que primera prueba es positiva se asigna un valor de 1. - Si la
detectan componentes metabólicos o aquellas que segunda prueba es positiva se asigna un valor de 2. - Si la
determinan la sensibilidad de un microorganismo a una tercera prueba es positiva se asigna un valor de 4. El
sustancia dada tras cultivo en medios de identificación código numérico se obtiene sumando los valores de las
que contienen el sustrato a metabolizar. (Olmos, Fuente, tres pruebas. Los límites inferior y superior del código
Nieto, & Ramos, 2010) son 0 y 7 respectivamente.
Las pruebas cuya lectura es inmediata son, la Ante un microorganismo problema, se busca el
prueba catalasa y la oxidasa, las cuales se utilizan para código numérico y se comprueba a qué bacteria
obtener un resultado con menor margen de error, la pertenece. Algunos de los sistemas comerciales
primera es utilizada para la bactericida de peróxido de disponibles en el mercado son: API (bioMÈrieux),
hidrógeno, esta reacción ocurre mediante la transferencia Enterotube (BBL), Oxi/Ferm Tube (BD), RapID systems
de dos electrones entre dos moléculas de peróxido de y MicroID (Remel), Biochemical ID systems
hidrógeno en la cual una funciona como donador y otra (Microgen), identificación de la enzima catalasa, que le
como aceptor de electrones. Las bacterias poseedoras de sirve a la bacteria para neutralizar los efectos etc.
la enzima, hidroliza el peróxido de hidrógeno en agua y En el sistema manual API, se encuentran
oxígeno gaseoso que se libera en forma de burbujas, y de pruebas como la ONPG, esta prueba demuestra la
esta forma se evidencia el resultado positivo, que se presencia de la enzima βgalactosidasa. Hay bacterias que
observa en forma de efervescencia. La prueba es esencial a pesar de poseer enzimas que hidrolizan la lactosa (β -
para diferenciar la especiación de ciertos Gram positivos galactosidasas), no pueden actuar sobre ella porque les
de Gram negativos. Además, la prueba de catalasa faltan las enzimas extracelulares apropiadas (permeasas).
también es valiosa en la diferenciación de bacterias Para conocer si un microorganismo es productor de β-
anaerobias, aerobias y obligatorias, como anaerobios que galactosidasa, basta añadir el compuesto orgánico O-
generalmente se sabe que carecen de la enzima, por lo nitrofenilβ-D-galactopiranósido (ONPG) que es incoloro.
que, en este contexto, la prueba de catalasa es valiosa Si la bacteria posee las enzimas hidrolizantes (β
para diferenciar cepas aerotolerantes de Clostridium, que -galactosidasa), el compuesto se transforma en
son catalasas negativas, de Bacillus, que son catalasa ortonitrofenol, un derivado cromogénico de color
positiva. (Reiner, 2016) amarillo. Todas las bacterias fermentadoras lentas de la
La segunda prueba mencionada, oxidasa, sirve lactosa son β -galactosidasa positivas. (Olmos, Fuente,
para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La Nieto, & Ramos, 2010).
reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un También se encuentran las pruebas ADH, LDC
sistema citocromo oxidasa que activa la oxidación del y ODC que se usan para la detección de enterobacterias
citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular productoras de enzimas descarboxilasa, y con esto se
produciéndose agua o peróxido de hidrógeno según la
pueden ser diferenciadas en función de su actividad capaces de la primera, mientras que la segunda ocurre en
descarboxilante hacia los aminoácidos. bacterias reductoras de sulfato. La prueba utiliza un
La ADH, sirve para la observación de la medio con tiosulfato como fuente de azufre y citrato de
enzima arginina dihidrolasa, la cual transforma arginina amonio férrico como "indicador", solo ciertas bacterias
en ornitina, el mecanismo de acción parte desde un entéricas producirán sulfuro de hidrógeno que dará como
aminoácido L-arginina presente en las bacterias, el cual, resultado el desarrollo de un precipitado negro.  El
por medio de una descarboxilación pasa a un sulfuro de hidrógeno se produce por la reducción del
intermediario agmatina, que posteriormente por acción tiosulfato y luego reacciona con la sal férrica para formar
de la arginina dihidrolasa se transforma en ornitina; un precipitado de sulfuro ferroso negro insoluble. Los
además, si el microbio posee también, la ornitina miembros del grupo Enterobacteriacae como Salmonella,
descarboxilasa (ODC), continúa la reacción y pasa de Citrobacter, Clostridium, Klebsiella y Proteus son
ornitina a urea y putrescina y por último en esta capaces de producir sulfuro de hidrógeno en dicho
secuencia, esta urea puede ser cambiada a amoniaco y medio.  
anhídrido carbónico por medio de una hidrólisis de la La prueba de Voges-Proskauer (VP) es
enzima ureasa, que proporciona un resultado positivo utilizada para reconocer enterobacterias, ya que, las
para la prueba URE. bacterias que fermentan azúcares a través de la ruta del
Dentro de estas mismas pruebas se encuentra la butanodiol producen acetoína (es decir, acetil metil
LDC, mencionada anteriormente que, aunque no hace carbinol o 3-hidroxibutanona) como un intermedio que
parte de esta secuencia de posibles reacciones, también puede reducirse aún más a 2,3-butanodiol.
es una enzima encargada de descarboxilar un En presencia de KOH, la acetoína intermedia
aminoácido, en este caso, la L-lisina y pasarla a se oxida a diacetilo, una reacción que es catalizada por a-
cadaverina. Todas estas pruebas se pueden observar por naftol. El diacetilo reacciona con el grupo guanidina
medio de un indicador de pH el bromocresol, el cual se asociado con las moléculas aportadas por la peptona en el
torna amarillo en medio ácido y púrpura o rojizo en medio, para formar un producto de color rojo rosado, El
medios alcalinos. Cuando la bacteria es capaz de a-naftol en la modificación de Barritt de la prueba de VP
fermentar glucosa, vuelve el medio ácido y esto a su vez sirve como un intensificador de color.
estimula la actividad descarboxilasa que transforma el La prueba de indol (IND) es un procedimiento
aminoácido en una amina (putrescina o cadaverina) como cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias
ya se había mencionado; este resultado eleva de nuevo el para producir indol por desaminación de triptófano. Se
pH y por esto se produce el cambio del indicador de realiza con la ayuda del reactivo Kovac, que posee un
amarillo a rojizo. producto químico activo, el p-
La prueba URE, que reconoce la reacción ya dimetilaminocinnamaldehído, con el cual va a reaccionar
mencionada realizada por la enzima ureasa basa su el indol de la bacteria, formando un complejo rojo en la
mecanismo en un indicador de pH, el rojo fenol, el cual superficie.
es amarillo en medios alcalinos y rojo en ácidos, cuando La prueba de reducción de nitrato se basa en la
la ureasa cataliza la reacción de hidrólisis de urea y detección de nitrito en el medio después de la incubación
produce amoníaco, baja el pH de la solución y se obtiene con un organismo. Si está presente en el medio, el nitrito
un resultado positivo a la prueba. La enzima es reaccionará con ácido sulfanílico (reactivo de nitrato A)
característica de todas las especies de Proteus y se usa para formar un complejo incoloro (ácido nitrito-
sobre todo para diferenciar este género de otras sulfanílico). Este complejo producirá un precipitado rojo
enterobacterias que dan negativo o positivo retardado (prontosil) cuando el reactivo de nitrato B (alfa-
(Olmos, Fuente, Nieto, & Ramos, 2010). naftilamina) se agregue a la prueba. 
CIT, la cual sirve para determinar si un Hidrólisis de la gelatina. Esta prueba se utiliza
microorganismo es capaz de utilizar citrato como ˙única para determinar la capacidad de un organismo para
fuente de carbono y compuestos amoniacos como ˙única producir enzimas proteolíticas extracelulares
fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una (gelatinasas) que licúan la gelatina, un componente del
alcalinización del medio que se da cuando se usa un tejido conectivo de vertebrados. La reacción ocurre en
ácido orgánico como el citrato como fuente de carbono y dos pasos secuenciales: en la primera reacción, las
energía, en última instancia se producen carbonatos y gelatinasas hidrolizan la gelatina en polipéptidos y luego
bicarbonatos alcalinos, además que, el hidróxido de los polipéptidos se convierten adicionalmente en
amonio se produce cuando las sales de amonio en el aminoácidos. El aminoácido es absorbido por la célula y
medio se usan como la única fuente de nitrógeno. Para utilizado con fines metabólicos. Por lo que, la presencia
medir el pH, se utiliza el indicador azul de bromo timol, de gelatinasas se detecta utilizando un medio nutritivo de
que a pH neutro es verde y con un aumento del pH medio gelatina, no se le agregan más reactivos, simplemente la
por encima de 7.6, cambia a azul. Entre las gelatina de color negro se difunde por licuefacción o se
enterobacterias estas características se dan en los solidifica y no se difunde porque las bacterias no poseían
siguientes géneros: Enterobacteria, Klebsiella, Serratia, las enzimas.
Citrobacter y algunas especies de Salmonella. La formación de Indol y ácido pirúvico por
La prueba de H2S, en donde se evalúa si la parte de las bacterias se verifica por medio de la prueba
bacteria puede reducir tiosulfato a ácido sulfhídrico de TDA, en donde se evidencia la desaminación del
(H2S). Las bacterias pueden producir sulfuro de triptófano, la cual se puede observar gracias al cloruro
hidrógeno a través del catabolismo anaeróbico de la férrico. La prueba se considera positiva si da un color
cisteína, un aminoácido que contiene el grupo marrón - rojizo y negativa si da naranja.
sulfahidrilo, o mediante el uso de azufre elemental o Las pruebas de fermentación de los azúcares (GLU,
algunos compuestos de azufre oxidado como el receptor MAN, INO, SOR, RHA, SAC, MEL, AMY, ARA),
terminal de electrones en sus procesos metabólicos.  todas son detectadas por medio de un indicador de pH
Todos los miembros del grupo Enterobacteriacae son que es azul en un medio neutro, pero, cuando el azúcar
determinado se fermenta, genera un producto ácido que esta se mantenga estable. Por otro lado, está la técnica
hace que el medio disminuya su pH y el indicador por liofilización en la cual se elimina el agua presente, en
muestre un color amarillo. esta técnica primero se pre congela el cultivo, luego se
Con respecto a la prueba de difusión con disco, se seca para eliminar la mayor parte de agua por
emplearon cuatro antibióticos diferentes para evaluar la sublimación y por último se retira el agua restante
acción de estos en el cultivo bacteriano, la acción de cada (Arencibia, Rosario, & Gómez, 2008).
uno de ellos se describe a continuación. De añadidura con lo anterior se encuentran los
ETP 10 :Ertapenem es un antibiótico carbapenem de métodos a mediano plazo, los cuales se caracterizan por
grupo 1 parenteral 1 beta-metil de acción prolongada que la desecación de los medios por arena, gel de sílice,
tiene un amplio espectro antibacteriano y una dosis diaria aceite mineral, leche descremada o agua, en este método
respaldada por estudios clínicos. Ertapenem es activo se retira el agua de los microorganismos inhibiendo su
contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, crecimiento y multiplicación, también se pueden
incluidas Enterobacterias, Streptococcus pneumoniae y la almacenar los cultivos en tierra, aceite o agua estéril
mayoría de las especies de bacterias anaerobias. (Arencibia, Rosario, & Gómez, 2008). En los tipos de
(Hospital universitario Virgen de la arrixaca, 2008) conservación a corto plazo se encuentra el subcultivo, en
CAZ 30:El clorhidrato de cefepima es una la cual la cepa bacteriana sembrada se transfiere a un
cefalosporina de cuarta generación que pertenece a una nuevo cultivo en el periodo de tiempo que requiera la
clase de antibióticos conocidos como betalactámicos. especie microbiana en estudio, en esta técnica el riesgo
Está indicado para tratar infecciones bacterianas de contaminación es elevado y los cambios genéticos se
grampositivas y gramnegativas que son susceptibles a su incrementaran por este método ya que las células
actividad. Las selecciones de bacterias que son continúan su crecimiento, dentro de las técnicas a corto
susceptibles a la cefepima son las siguientes: plazo se encuentra también el método de suspensión en
Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, agua destilada o en agua de mar estéril, en el cual se
grupo Enterobacter, Haemophilus influenza, suspende las células del cultivo en agua estéril, con una
Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus concentración celular del orden de 10 -4-10-8 células/mL.
mirabilis, Streptococcus pyogenes, Staphylococcusis, (Weng, Esther, & Molina, 2005).
Bacteria, Streptococcus p.  Con el fin de evaluar si un método de
CIP: La ciprofloxacina es una de una nueva conservación es eficaz o no, es necesario medir las
generación de quinolonas fluoradas estructuralmente unidades formadoras de colonia (UFC), este determina el
relacionadas con el ácido nalidíxico. El principal número de colonias provenientes de la cepa original, es
mecanismo de acción de la ciprofloxacina es la importante tomar la medición de este antes y después de
inhibición de la ADN girasa bacteriana. Es un fármaco la incubación del cultivo, pues permite realizar una
antibacteriano de amplio espectro al que la mayoría de comparación del tiempo inicial y final del método de
las bacterias Gram-negativas son altamente susceptibles conservación y así apreciar el grado de viabilidad del
in vitro y muchas bacterias Gram-positivas son cultivo y establecer si el método de conservación fue
susceptibles o moderadamente susceptibles. eficaz. Las unidades de las UFC es células/mL y la forma
AMP: La ampicilina tiene una concentración de calcularlo es la siguiente,
inhibitoria mínima efectiva para la mayoría de los
organismos médicamente importantes en enfermedades
( ¿ de colonias )∗(factor de dilución)
infecciosas como E. coli : MIC = 4 mg / L, S. aureus : UFC= (1)
MIC = 0.6-1 mg / L, Streptococcus pneumoniae : MIC = Volumen de cultivo
0.03-0.06mg / L, H. influenzae : MIC = 0.25 mg / L.
Streptococcus pneumoniae , penicilinasa y
Staphylococcus aureus no productores de penicilinasa ,
3. RESULTADOS
estreptococos beta-hemolíticos del grupo A, Hemophilus
influenzae, bacterias gramnegativas ( Listeria
monocytogens, Neisseria meningitidis ), Escherichia coli 3.1 Medios de Cultivo
y estreptococos del grupo B. Agregar aminoglucósidos Se prepararon medios de cultivo con agar Chromocult, se
aumenta su efectividad contra bacterias gramnegativas sembraron y se incubaron por tres días.
entre otras.((Manuel Cué Brugueras, 2005)

2.4 Conservación Bacteriana 3.2


Para el estudio de los microorganismos es
importante que estos al sembrarse en un medio no alteren
sus características y condiciones genéticas, tal como se
mencionó anteriormente existen diferentes técnicas para
la conservación de estos cultivos, las cuales se clasifican
en técnicas a largo, mediano y corto plazo, a
continuación, se mencionan las principales técnicas de
cada tipo. Las técnicas de conservación a largo plazo se
caracterizan porque los cultivos conservan de mejor
manera sus características genéticas, por ejemplo, la
congelación, aquí las células procariotas se congelan a
temperaturas bajo cero con el fin de detener las
actividades metabólicas y frenar el crecimiento, esta
técnica requiere de un agente crio protector como el Ilustración 3.1.1. Agar Chromocult incubado por tres días
glicerol para controlar las subidas de temperatura y que Tinciones Bacterianas
Se realizaron diferentes tinciones bacterianas a una cepa
de Klesiella phemaniae

Tinción con tinta china


En la figura 3.2.1 se evidencia una tinción
negativa con tinta china del frotis bacteriano del frotis
bacteriano de estudio

Ilustración 3.2.5. Klesiella


Ilustración 3.2.1. Klesiella phemaniae con phemaniae con tinción de gram
tinción de tinta china

3.3 Pruebas Bioquímicas


Tinción simple
En esta sección se realizaron diferentes pruebas
Las figuras 3.2.2 y 3.2.3 muestran la tinción bioquímicas incluyendo un API 20E de la cepa
simple del frotis con colorante azul de metileno problema, junto con una tinción de gram para evaluar
esta característica de la bacteria

Tinción de Gram

Ilustración 3.2.2. Klesiella phemaniae


con azul de metileno

Ilustración 3.2.3. Klesiella phemaniae


con azul de metileno

Tinción de Gram Ilustración 3.3.1


Tinción de gram frotis bacteriano

Las
siguientes ilustraciones Prueba Bioquímica catalasa y oxidasa
muestran la tincion de En las siguientes ilustraciones se evidencian la
gram realizada al prueba de catalasa y oxidasa, esta última se muestra con
frotis bacteriano de Klesiella phemaniae un cambio de color en el papel filtro, mientras que la
prueba de catalasa se muestra la efervescencia de la
solución

Ilustración 3.3.2 Prueba catalasa y oxidasa de la cepa


Ilustración 3.2.4. Klesiella problema
phemaniae con tinción de gram

Prueba API 20E


En la ilustración 3.4.1 se muestra los cultivos
obtenidos de las diluciones del orden de 105, 106, 107 y
108 células/mL de E. Coli.

Ilustración 3.3.3. Prueba API 20E antes de la aplicación del cultivo

Ilustración 3.3.4. Prueba API 20E después de la incubación con el


cultivo

Ilustración 3.4.1. Diluciones del cultivo de E. Coli

Tabla 3.1. Datos UFC y factor dilución de cada grupo del Laboratorio

Factor de Grupo UFC Log (x/x0)


dilución
Ilustración 3.3.5. Resultados de la prueba API 20E
10^7 1 3,69* 10^10 3.567
10^5 2 5,2* 10^7 2.716
10^7 3 2.29*10^8 1.36
Prueba de difusión por disco 10^6 4 1,2* 10^9 3.079
Se sembraron diferentes discos en el cultivo de la 10^6 5 5,2* 10^8 2.716
bacteria con el fin de evaluar ante cuales es susceptible la 10^6 6 2,16* 10^7 2.13
cepa problema. 10^7 7 1.87*10^11 3.27
10^6 8 1,35*10^8 2.13

Figura 3.1. Log (UFC/factor) de cada grupo del laboratorio


Ilustración 3.3.5. Prueba de difusión por disco La siguiente figura muestra las UFC de los grupos del
laboratorio, expresadas en términos de logaritmo por
facilidad de la gráfica

Se observa en la ilustración 3.4.1 los cultivos


obtenidos tras la incubación de las diluciones, de estas se
seleccionó la dilución de 106 células/mL para el calculo
de UFC,
52∗106 7 8
UFC= =52∗1 0 =5.2∗10 (2)
0.1
Tinción de Gram
3.4 Conservación Bacteriana
presencia de los plásmidos (ilustración 3.2.2). Además,
que en una sola bacteria existen varios sectores azules lo
que conlleva a comprobar que la información genética
está esparcida por todo el citoplasma o por superposición
de bacterias.

4.3 Pruebas Bioquímicas

Según los valores arrojados por el sistema API, la


Ilustración 3.4.2. Tinción de Gram frotis de E. Coli bacteria con las características ingresadas, respecto a las
pruebas bioquímicas arrojadas como positivas,
correspondió a la especie pseudomona aureginosa, una
bacteria Gram negativa, aerobia estricta y patógena
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS oportunista.
La prueba catalasa y oxidasa, aunque no pertenecen
al sistema API se realizaron para mayor precisión en la
4.1 Preparación de medios de cultivo
identificación bacteriana y el resultado obtenido para
ambas fue positivo. Lo que rectifica el resultado del API,
Después de pasadas las 48 horas se evaluaron ya que la prueba oxidasa es característica de bacterias
las 10 cajas Petri, no se observó la presencia o el aerobias, como lo es la pseudomona aureginosa,
crecimiento de unidades formadoras de colonias, lo que demostrando que posee una enzima citocromo oxidasa
significa que durante el proceso de preparación se que activa la oxidación del citocromo  y además la
cumplieron con todas las indicaciones de esterilidad segunda prueba mencionada, catalasa, certificó la
debido este medio es de especial cuidado, como se presencia de una enzima catalasa, encargada de
mencionó anteriormente no se puede autoclavar. Por contrarrestar los efectos bactericidas del peróxido de
esto, al momento de realizar el proceso de pesaje y en el hidrógeno, además es característica de bacterias
trasvase del medio a las cajas Petri se tuvo en todo poseedoras de citocromo, con lo que se demuestra tanto
momento cerca del mechero para evitar contaminaciones que el resultado positivo para ambas pruebas fue
los materiales esterilizados en un inicio se encontraban acertado como que muy posiblemente la bacteria que se
cubiertos de papel aluminio lo que permitió disminuir el evalúo si fue efectivamente la pseudomona aureginosa.
error, también en todo momento se procuró que el lugar Las pruebas que dieron como un resultado positivo
de trabajo estuviese desinfectado con etanol. También es en el API, para la bacteria, son las cuales la caracterizan,
importante resaltar es que el medio presentó opaco, esto entres estas están ADH, ODC y URE, las cuales están
pudo verse afectado debido a que probablemente no se muy relacionadas entre sí, ya que significa que la
dejó el tiempo suficiente en la plancha de calentamiento bacteria posee un sistema de descarboxilación de
ya que el grupo experimentador tuvo que trasladarse a aminoácidos y una hidrólisis final, por medio de arginina
observar el proceso de autoclavado lo que no permitió dihidrolasa (ADH) convierte la arginina en ornitina,
que hirviera lo suficiente y llegara a una translucidez después por medio de la ornitina descarboxilasa (ODC)
máxima. transforma este producto en putrescina y urea, para que
finalmente esta urea, sea modificada a amoniaco y
4.2 Tinciones Bacterianas anhídrido carbónico, estás pruebas eran características de
enterobacterias y el resultado, pseudomona, es
De acuerdo con lo observado al microscopio perteneciente a la rama de las y-proteobacterias, misma a
cuando se aplicó la tinta china se observaron zonas claras la que pertenecen las enterobacterias.
a pesar de que el fondo teñido de un color café oscuro También fue un positivo para las siguientes pruebas,
(Ver ilustración 3.2.1), estas zonas muestran la presencia GEL, MEL y ARA, la primera muestra que la bacteria
de cápsulas las cuales se encuentran adheridas a la posee gelatinasas que licúan la gelatina, y normalmente
bacteria que se analizó, este resultado es acorde con lo se evidencia en Gram negativas, característica de la
establecido con la teoría ya que Klesiella phemaniae si bacteria resultante, las últimas eran de esperarse, ya que
presenta una cápsula de polisacáridos la cual la protege es una bacteria de la familia de las y- proteobacterias
contra la fagocitosis. (López & Echeverry,2010) como ya se había mencionado, y la principal
De acuerdo con la ilustración 3.2.4 Klesiella característica de este grupo es que son Gram negativas
phemaniae resultó ser Gram negativa ya que al finalizar fermentativas, ahora bien, según estas pruebas de
la tinción de Gram se obtuvo un color rosa claro, debido fermentación, pseudomona fermenta melodiosa y
la coloración, además se pudo observar que arabinosa.
morfológicamente se puede clasificar como bacilo y son Respecto a las pruebas realizadas con los discos de
muy pequeñas “su tamaño gira alrededor de 0.5 μm y 2.0 antibióticos, la bacteria es inhibida de manera intermedia,
es decir, no la inhibe completamente por Ciprofloxacin, y
μm” [ CITATION Gil15 \l 3082 ]. según la teoría, es un medicamento que inhibe esta clase
Finalmente, con el azul de metileno se pudo de bacterias, ahora bien, con respecto a los otros discos
apreciar la información genética contenida en las encontrados, la bacteria es resistente a la Cefepima y en
bacterias del frotis y que a diferencia de la tinción de teoría no debió haber crecido el disco de Ertapem, ya que
Gram no tiñe a la bacteria por completo, sino que en las no se hallaba información sobre este en la bacteria
partes donde no hay información genética se torna correspondiente, pseudomona aeruginosa, sin embargo,
traslúcida, también hay lugares donde se observa un el disco poseía una contextura diferente al resto y fue
color muy intenso se podría suponer que se debe a la poco lo que creció, 16 mm, por lo que este hecho pudo
haberse debido a errores en la práctica, como por de esterilización que se llevará a cabo. Además, se debe
ejemplo la entrada de dióxido de carbono en los medios tener en cuenta la especie que se va a estudiar ya que de
de cultivos, lo que puede conllevar a la disminución del acuerdo con sus exigencias nutricionales y ambientales
pH del agar afectando los resultados de la prueba
se escogerá el medio adecuado.
(Hudzicki, 2009).
Las tinciones nos permiten caracterizar a las células
de acuerdo con su estructura y con sus características
4.4 Conservación Bacteriana morfológicas podemos llegar a posicionarlas en una
familia u especie determinada.
En el experimento se llevaron a cabo ocho Según las pruebas bioquímicas realizadas, tanto en
diluciones del cultivo líquido de E. Coli, cada una con el API como las inmediatas (oxidasa y catalasa) arrojan
aproximadamente 0.5mL del cultivo, sin embargo, se resultados que sugieren que pseudomona aeruginosa fue
presentó un error de tipo craso, ya que en la preparación la bacteria estudiada, ya que las características arrojadas
de las disoluciones se rego un poco de muestra del
por las pruebas son propias de este género, tales como las
cultivo con agua peptonada, lo que pudo llevar a que
disminuya la concentración de cultivo. Los cultivos se descarboxilaciones de aminoácidos, la hidrólisis de urea,
incubaron por aproximadamente 18 horas y se realizó el la fermentación de azúcares (melodiosa y arabinosa), la
conteo de las colonias presentes en cada cultivo, cabe presencia de gelatinasas, enzimas citocromo oxidasas y
recalcar que los cultivos incubados provenían de las por último catalasas.
disoluciones del orden de 105,106,107 y 108 células/mL Gracias a las pruebas bioquímicas es posible
únicamente, ya que en diluciones menos diluidas el determinar de manera más precisa y con un alto grado de
conteo de las colonias sería más complicado y el número
fiabilidad una especie que se desconozca, así mismo se
de estas no entraría en el rango establecido para
determinar las unidades formadoras de colonia (30-300 puede hacer uso de medicamentos como antibióticos para
colonias). El conteo realizado corresponde al recuento evaluar la resistencia de los microorganismos incluso
inicial de la cepa, y como se menciona en el marco funciona para probar la efectividad de un nuevo
teórico servirá de referencia para el conteo del banco de medicamento.
cepas final de los cultivos incubados a temperaturas de Por último, en el experimento de las técnicas de
-20°C, -4°C y temperatura ambiente en tubos eppendorf, conservación se realizó un recuento inicial del banco de
en donde se espera obtener mayor número de colonia en
cultivos a bajas temperaturas, ya que como se mencionó cepas de E. Coli, en este se midió las UFC del cultivo a
esto disminuya significativamente sus actividades las 18 horas de incubación, se logró observar el
metabólicas. incremento de la cepa y servirá de base cuando se realice
Como se mencionó anteriormente, se realizó un el conteo final de los cultivos incubados en los
conteo de colonias en los cultivos incubados, este conteo eppendorf. En esta practica se aprendieron nuevas
consiste en calcular el número de unidades formadoras técnicas de laboratorio, entre ellas la de siembra con
de colonia por medio de la ecuación 1, para nuestro
rastrillo de vidrio, la realización de diluciones de cultivos
grupo se seleccionó el cultivo de 10 6 células/mL, al
calcular las unidades formadoras de colonia (ecuación 2). para el conteo bacteriano y técnicas de conservación de
De la cepa de E. Coli se evidencia en la ilustración 3.4.2 los cultivos como la de congelación. El conteo del banco
la presencia de células teñidas de color rosa claro, lo que de cepas final no es posible realizarlo todavía, ya que, los
destaca la característica de células gran negativas para cultivos permanecerán en incubación por
este cultivo aproximadamente un mes y medio, por lo que fue el
En la tabla 3.1 y figura 3.1 se observan los datos único objetivo que no se alcanzó de la práctica.
recolectados de las UFC de los cultivos de los grupos de
laboratorio. En la figura se aprecia cultivos con mayor
viabilidad que otros, los grupos 1 y 3 obtuvieron la 6. BIBLIOGRAFÍA
mayor viabilidad de sus colonias, mientras que el grupo 7
obtuvo la menor viabilidad. Lo anterior pude deberse a Aguirre, A. Guía de Laboratorio Microbiología:
diferentes errores en la preparación de los cultivos, como Conservación de Bacterias; Universidad Icesi: Santiago de Cali,
errores en la esterilización de estos que conllevo a la 2020. (1-8).
contaminación de la cepa, un error común fue en la Arencibia, D. F., Rosario, L. A., & Gómez, R. (2008).
Métodos generales de conservación de microorganismos. Centro
utilización del rastrillo de vidrio, pues este se dejaba en
de Productos Naturales, Centro de Química Farmacéutica:
el mechero demasiado tiempo y al ponerlo en contacto Finlay Ediciones.
con el cultivo pudo haber matado las células por el Campoli-Richards, D. M., Monk, J. P., Price, A., Benfield,
exceso de temperatura. Por otro lado, se pudieron P., Todd, P. A., & Ward, A. (1988). Ciprofloxacin. A review of
presentar errores personales en las mediciones de los its antibacterial activity, pharmacokinetic properties and
cultivos, conteo, etc. therapeutic use. Drugs, 35(4), 373–447.
https://doi.org/10.2165/00003495-198835040-00003
Chen, K., Culbertson N., & Kenny, G. (1982). Rapid
Method for simultaneous detection of a Arginine Dihydrolase
5. CONCLUSIONES System and Amino Acid Decarboxylases in
Microorganisms. Journal of clinical Microbiology. p 909-919.
Espinal, G. (2005). Manual de prácticas de Microbiología
La esterilidad a la hora de preparar un medio de I. Santo Domingo: Instituto Tecnológico de Santo Domingo
cultivo juega un papel de gran importancia pues Fernández, A. García, C. Saéz, J. A. Valdezate, S. (2010).
dependiendo del tipo de medio así mismo será el proceso Sylvia McDevitt. 2009. Methyl red and voges-proskauer
test protocolos.
Sagar, A. (2019). Gelatin Hydrolysis Test – Principle, Rodríguez, J. M. (2006). Microorganismo y salud. Madrid:
Procedure, Uses and Interpretation. Lugar de publicación: Editorial Complutense.
MicrobiologyInfo. https://microbiologyinfo.com/gelatin- Serrano, C. Gutiérrez, R. (2011). Manual de
hydrolysis-test/ Microbiología. Santiago Chile: Pontificia Universidad Católica
Métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de de Chile.
microbiología. Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas Rodríguez, E., Gamboa, M. d., Hernández, F., & García, J.
y Microbiología Clínica. Obtenido de D. (2005). Bacteriología General, principios y prácticas
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/proce laboratorio. San José: Universidad de Costa Rica.
dimientosmicrobiologia/seimc- Santambrosio, E. Ortega, M. (2009). Trabajo práctico No.
procedimientomicrobiologia37.pdf 3 siembra y recuento de microorganismos. Universidad
McDADE, J. J., & WEAVER, R. H. (1959). Rapid tecnológica Nacional. Obtenido de
methods for the detection of gelatin hydrolysis. Journal of https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/
bacteriology, 77(1), 60–64. biotecnologia/practicoIII.pdf
Gilchrist, L. Fuentes, C. Martínez, R. M. et al. (2005). Tankeshwar, A. (2013, 17 de Mayo). Citrate utilization
Guía para la identificación de algunas enfermedades de trigo y test: Principle, Procedure and Results. Microbe Online.
cebada. Ciudad de México: Centro Internacional de Recuperado de https://microbeonline.com/citrate-utilization-
Mejoramiento de Maíz y Trigo. test-principle-procedure-expected-results-and-positive-
Gil, m. (20 de abril de 2015). Microbitos. Obtenido de organisms/
Klebsiella pneumoniae, K. oxytoca, K. ozanae. morfologia, Weng, Z., Esther, R., & Molina, I. (2005). Conservación
medio de cultivo, enfermedades y más: de microorganismos: ¿qué debemos conocer? Rev. Cubana Hig
http://microbitosblog.com/2015/04/20/klebsiella_medio_cultivo Epidemiol, 43(3). Obtenido de http://scielo.sld.cu/scielo.php?
_infeccion_gram/ script=sci_arttext&pid=S1561-30032005000300006
García, J. A., & Picazo, J. J. (2003). Compendio de
Microbiología Médica. Madrid: Harcourt. Win, W., Allen, S., Janda, W., Koneman, E., Procop, G.,
Graham, D. Y., & Miftahussurur, M. (2018). Helicobacter Schreckenberger, P., Woods, G. . (2006), "Koneman,
pylori urease for diagnosis of Helicobacter pylori infection: A Diagnóstico microbiológico, Texto y Atlas en color", Buenos
mini review. Journal of advanced research, 13, 51–57. Aires - Argentina, Editorial Médica Panamericana S.A.
https://doi.org/10.1016/j.jare.2018.01.006
Hudzicki, J. (2009). Kirby-Bauer Disk Diffusion
Susceptibility Test Protocol. AMERICAN SOCIETY FOR Zimbro, Mary Jo.Power, David A. (Eds.) (2003) Difco &
MICROBIOLOGY. BBL manual :manual of microbiological culture media Sparks,
Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. (2008). MD : Difco Laboratories, Division of Becton Dickinson and
INFORME TÉCNICO DE EVALUACIÓN ERTAPENEM. Co.,
Comisión de farmacia y terapéutica. Obtenido de
http://gruposdetrabajo.sefh.es/genesis/informes-
genesis/INFO_EVAL_ERTAPENEM.pdf  
Indole Test Reagents - Kovacs, DMACA, spot test.
(1996). Hardy Diagnostics. Recuperado de
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/Ind
oleTestRgnts.htm
López, L. E., Hernández, M., Colín-Castro, C. A., & al, e.
(2014). Las tinciones básicas en el laboratorio. Investigación en
discapacidad, III(1), 10-18. Obtenido de
https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
López, J. A. Echeverri, L. M. (2009). K. pneumoniae: ¿la
nueva “superbacteria”? Patogenicidad, epidemiología y
mecanismos de resistencia. IATREIA, 23(2). Obtenido de
http://www.scielo.org.co/pdf/iat/v23n2/v23n2a7.pdf
Manuel Cué Brugueras, M. M. (2005). Actualidad de las
quinolonas. Scielo. Obtenido de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0034-75152005000100011
Mosley, L., & Sharp, D., (2005). THE HYDROGEN
SULPHIDE (H2S) PAPER-STRIP TES. SOPAC Technical
Report 373,
Negroni, M. (2008). Microbiología estomatológica:
fundamentos y guía práctica. Buenos Aires: Médica
Panamericana.
Oñate, L. (2010). Biología I. Madrid: Cengage
Learning.
Olivas, E. Alarcón, L. (2004). Manual de Prácticas de
Microbiología básica y Microbiología de alimentos. Ciudad
Juárez: Universidad Autónoma de Ciudad Juárez
O'Connor, A. (2019, Octubre). Cefepime.
Pubmed. Recuperado
de https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK542232/
Peechakara BV., Basit H., & Gupta M. (2019, Diciem6).
Ampicillin. Pubmed. Recuperado
de https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC272502/?
page=1
Posteraro, B., Posteraro P., & Sanguinetti, M. (2015).
Chapter 68 - Helicobacter pylori. Molecular Medical
Microbiology , 2, 1237-1258. https://doi.org/10.1016/B978-0-
12-397169-2.00068-8

También podría gustarte