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Campus Monterrey

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA 2

INTRODUCCIÓN A LA MICROSCOPÍA
OBJETIVO GENERAL: Que el alumno identifique y reconozca los componentes de un
microscopio óptico, su funcionalidad así como las diferencias con un microscopio
electrónico

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
➢ Identificar los componentes de un microscopio compuesto de campo claro.
➢ Saber emplear el microscopio de campo claro
➢ Realizar observaciones de diferentes tipos de células en aumento 10X, 40X y 100X

1. Microscópio óptico
Cualquier microscopio óptico está constituido por dos partes: una mecánica y
otra óptica. La parte mecánica está formada por una base, en la cual soporta o fija al
estativo.
El estativo en su parte inferior puede tener una fuente lumínica o un espejo de dos caras,
una plana y otra cóncava, el cual gira en dos planos. Un poco más arriba se encuentra un
mecanismo de tornillo de cremallera al cual se le denomina condensador y se desplaza
verticalmente. Inmediatamente después, está la platina. Ésta, es una placa cuadrática con
superficie plana y con un agujero en su parte central, por el cual se asoma el condensador.
La platina puede tener dos pinzas para fijar la preparación o bien, un dispositivo mecánico
llamado platina móvil que desplaza a la preparación (portaobjetos) en direcciones de
coordenadas.

En la parte superior del estativo se encuentra el tubo óptico, el cual se desplaza


verticalmente mediante un tornillo de cremallera. Los movimientos rápidos se llevan a cabo
mediante el tornillo macrométrico, mientras los lentos se realizan con el tornillo
micrométrico, los cuales están colocados en el estativo.

El tubo óptico consta de un revolver de lentes también denominados objetivos (5X,


10X, 40X, 100X). En la parte superior tiene la lente ocular. En los microscopios binoculares,
el tubo óptico tiene un juego de prismas que permiten la formación de la imagen en ambos
oculares.
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Los materiales o productos para ser observados microscópicamente deberán


montarse sobre un portaobjetos, el cual es una laminilla de vidrio de aproximadamente 2 x
7 cm. Las preparaciones podrán ser secas o húmedas según la naturaleza de los materiales
por observar. En el segundo caso podrán ser en gota suspendida o entre el portaobjetos y el
cubreobjetos.

Para el uso del microscopio se debe utilizar una fuente lumínica natural o bien
artificial, en este caso debe estar colocada de 8 a 10 pulgadas de distancia del espejo del
microscopio. Una vez colocada la preparación sobre la platina y antes de asomarse al
microscopio, debe acercarse lo más posible el lente objetivo a la preparación. Después se
procura una iluminación adecuada y en seguida, retirar el tupo óptico mediante el tornillo
macrométrico hasta obtener la formación de la imagen. Para precisar el enfoque se deberá
utilizar el tornillo micrométrico. Para recorrer la preparación en sus diferentes campos se
deberán utilizar los tornillos de la platina móvil.

Componentes del microscopio.

Cuidados en el uso del microscopio.


El microscopio es una herramienta muy importante en la microbiología y debe ser usado
correcta y cuidadosamente. Siga estas indicaciones cada vez que use un microscopio:
1. Tome el microscopio con ambas manos, una debajo de la base y otra en el brazo.
2. No incline el microscopio; en cambio, ajuste su banquillo de manera que esté
cómodo.
3. Observe el espécimen con ambos ojos abiertos para evitar vista cansada. No olvide
ajustar los oculares a la posición más adecuada para usted.
4. Siempre enfoque lenta y cuidadosamente. No toque los lentes con sus manos.
5. Debe enfocar inicialmente con un lente de bajo poder (objetivo 10X). Ajuste el
diafragma (apenas abierto) para realizar un buen contraste.
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6. Una vez enfocada la muestra con el objetivo de menor magnificación, cambie a uno
de magnificación mayor. No olvide hacer el ajuste debido en el diafragma para
permitir un mayor paso de luz. En caso de requerir el uso de objetivo 100X coloque
aceite de inmersión primero sobre la muestra. Una vez empleado el aceite de
inmersión, ya no deberá usar objetivos de menor poder.
7. Después de usar el microscopio, deje la plataforma y los lentes libres de aceite,
utilizando papel especial para limpiarlos. Coloque la platina en la posición inferior.
Posteriormente cubra el equipo y desconéctelo.
8. Cuando surja un problema con el microscopio, obtenga ayuda de su instructor.

MATERIALES Y MÉTODOS:

Materiales:
● Microscopio compuesto de campo claro.
● Aceite de inmersión.
● Papel para limpiar objetivos.
● Isopropanol al 50%.
● Portaobjetos.
● Cubreobjetos.
● Mango y hojas de bisturí.
● Solución salina fisiológica (0.85%).
● Yodo lugol.
● Muestra biológica a analizar: cebolla.
● Laminillas preparadas.
● Equipo de protección personal: bata de laboratorio, guantes.

Metodología:

a) Elaboración y análisis microscópico de películas húmedas.


1. Con la ayuda de un bisturí, tome un corte pequeño de la muestra biológica (cebolla)
y colóquelo sobre un portaobjetos limpio.
2. Adicione una gota pequeña de a) solución salina isotónica o b) yodo lugol sobre la
muestra y luego coloque sobre ella un cubreobjetos, tomándolo por los bordes y
dejándolo caer de manera inclinada.
Nota: deberá hacer 2 laminillas con muestra, una para la adición de solución salina y otra
para la adición de yodo lugol, a fin de generar una muestra sin teñir y otra teñida.
3. Observe la película húmeda con el objetivo 10X y posteriormente, con el de 40X del
microscopio compuesto de luz.
4. Registre sus observaciones, dibujando lo que vio y posteriormente, tomando
fotografías.

b) Análisis de laminillas preparadas.


1. Realice visualización directa de la(s) laminilla(s) proporcionada(s).
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2. Inicie con el objetivo de menor magnificación y posteriormente, realice


visualizaciones en los objetivos de mayor poder.
3. Registre sus observaciones.
4. Determine cuál objetivo fue el óptimo para el análisis.
RESULTADOS:

Dibujar cada una de las observaciones realizadas en el microscopio y anexar la descripción


indicando si observó algún tipo de morfología de cocos, bacilos, espirilos, y si la muestra
contenía hifas, esporas, etc.

HOJA DE REGISTRO DE OBSERVACIONES

Muestra analizada:__________________ Aumento:

Muestra analizada:__________________ Aumento:

Muestra analizada:__________________ Aumento:


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HOJA DE REGISTRO DE OBSERVACIONES

Muestra analizada:__________________ Aumento:

Muestra analizada:__________________ Aumento:

Muestra analizada:__________________ Aumento:


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Investigación para el reporte

1. Investigue cuáles son los principales tipos de microscopios, cuáles son sus
aplicaciones y en qué se basa su funcionamiento.
2. Explique por qué debe utilizarse aceite de inmersión al emplear el objetivo 100 X del
microscopio compuesto. ¿Cómo es el índice de refracción del aceite comparado con
el del aire?
3. Explique las diferencias estructurales que observó en cada una de las muestras con
las que trabajó en su práctica.

Esta práctica fue adaptada de las siguientes fuentes bibliográficas:

Elizondo, A., Pérez, E. Prácticas de laboratorio de Microbiología General. Instituto


Tecnológico y de Estudios Superiores de Monterrey. Departamento de Química. Monterrey,
N. L., México.

Viramontes-Ramos, S., Portillo-Ruíz, M. 2010. Identificación de Microorganismos:


Actividades prácticas para el laboratorio. Textos universitarios. Chihuahua, Chih., México.

Martínez-López, J. M. 2017. Curso de Microscopía Básica. Química Tech, S.A. de C.V.

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