CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO EN FERMENTACIÓN BATCH

Miranda Ginneth, *Padilla Maria, *Severiche Jaime, *Villadiego Ligia

*Universidad de Córdoba, facultad de Ingeniería, programa de Ingeniería de Alimentos,
Febrero del 2019.

1. INTRODUCCIÓN

Se define crecimiento como un aumento en la cantidad de constituyentes y estructuras

celulares, cuando hay crecimiento en ausencia de división celular hay aumento en el tamaño
y peso de la célula. Mientras que cuando el crecimiento es seguido de división celular hay un
aumento en el número de células

Los microorganismos en fase de crecimiento realizan réplicas de sí mismos y requieren de

los elementos que se encuentran en su composición química. Se le deben brindar los
elementos nutritivos en una forma accesible desde el punto de vista metabólico. Además, los
microorganismos requieren energía metabólica con el objetivo de sintetizar macromoléculas
conservar los gradientes químicos esenciales a través de sus membranas (Díaz et al., 2001).

El crecimiento microbiano puede estar influido por una variedad de factores, tantofísicos
como nutricionales. Los factores físicos incluyen: la concentración de iones hidróge-no (pH),
la temperatura, la concentración de oxígeno, la humedad, la presión hidrostática, lapresión
osmótica y la radiación. Los factores nutricionales comprenden: la disponibilidad decarbono,
nitrógeno, azufre, fósforo y otros minerales, y en algunos casos vitaminas (Díaz et al., 2001).

La práctica de laboratorio se desarrolló con el objetivo de determinar experimentalmente los

parámetros cinéticos en la fermentación batch sumergida aeróbica de la Saccharomyces
Cerevisiae, en la que se llevó a cabo una fermentación donde se determinó cada hora la el
número de células en cámara de neubauer, absorbancia para DNS (azucares reductores) y
densidad óptica por espectrofotometría
 2. RESULTADOS

Tabla 1. Calibración de curva patrón para prueba DNS

CURVA DE CALIBRACION PARA PRUEBA DNS

MEDICION ABSORBANCIA CONCENTRACION
1 0.009 0
2 0.087 200
3 0.136 400
4 0.209 600

5 0.279 800
6 0.34 1000

Tabla 2. Absorbancia para prueba de DNS

PRUEBA DNS
TIEMPO (h) ABSORBANCIA
0 0.172
1 0.554
2 0.353
3 0.214
4 0.174
5 0.153
6 0.145

Tabla 3. Absorbancia para prueba de densidad óptica

PRUEBA DE DENSIDAD OPTICA

TIEMPO (h) ABSORBANCIA
0 0.122
1 0.2
2 0.215
3 0.23
4 0.257
5 0.265
6 0.347
 Tabla 4. Conteo en cámara de neubawer.

RECUENTO EN PLACA DE
NEUBAWER
TIEMPO (h) CONTEO
0 24
1 85
2 88
3 90
4 100
5 120
6 140

CURVA DE CALIBRACION PARA PRUEBA DNS

(Tiempo vs Absorbancia)
0.4
0.35 y = 0.0003x + 0.0121
0.3 R² = 0.9978
Absorbancia

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 200 400 600 800 1000 1200
concentracion (ppm)

Figura 1. Curva de calibración para prueba DNS (tiempo vs absorbancia)

 PRUEBA DNS (Tiempo vs Absorbancia)
0.6

0.5

0.4
Absorbancia

0.3

0.2

0.1

0
0 1 2 3 4 5 6 7
Tiempo (s)

Figura 2. Prueba DNS (tiempo vs absorbancia)

DENSIDAD OPTICA (Tiempo vs Absorbancia)

0.4
0.35
0.3
Absorbancia

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6 7
Tiempo (s)

Figura 3. Densidad óptica (tiempo vs absorbancia)

 2.1.DETERMINACION DE CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO EN EL
TIEMPO

Para esto se empleó la ecuación obtenida de la figura 1 y se despejó el valor de la x la cual

corresponde a la concentración de sustrato en un tiempo dado.

Sea

Y = 0,0003x - 0,0121

Donde “y” es la absorbancia registrada en el tiempo y “x” es la concentración de sustrato

entonces despejamos “x”

X =( y + 0,0121) / 0,0003

Con los datos de absorbancia obtenidos en la tabla 2 se calculó la concentración de sustrato

en g/L a los tiempos 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, horas, obteniéndose la tabla 5 a continuación.

Tabla 5. Concentración de sustrato en el tiempo.

PRUEBA DNS
TIEMPO (h) ABSORBANCIA ppm g/L
0 0.172 613.6666667 0.61366667
1 0.554 1887 1.887
2 0.353 1217 1.217
3 0.214 753.6666667 0.75366667
4 0.174 620.3333333 0.62033333
5 0.153 550.3333333 0.55033333
6 0.145 523.6666667 0.52366667

2.2.DETERMINACION DE NÚMERO DE CÉLULAS EN EL TIEMPO

Se realizó el conteo celular al microscopio con cámara de Neubawer en los tiempos 0, 1, 2,

3, 4, 5, 6, horas, observados en la tabla 4.
A partir de la fórmula de cálculo de la concentración celular en cámara de Neubawer se
obtuvo la tabla 6.

N° celulas N° total de celulas

=
mL Volumen ∗ (FD)

Tabla 6. Número de células por mL en el tiempo.

RECUENTO EN PLACA DE NEUBAWER

TIEMPO (h) CONTEO # Cel/mL
0 24 1200000
1 85 4250000
2 88 4400000
3 90 4500000
4 100 5000000
5 120 6000000
6 140 7000000

3. ANALISIS DE RESULTADOS

4. CONCLUSIÓN
 5. CONSULTA

¿Qué se entiende por crecimiento diáuxico? Explique

El crecimiento diaxico es aquel en el que se presenta un patrón de crecimiento microbiano

bifásico que tiene lugar cuando hay presentes dos sustratos diferentes que pueden ser
utilizados como fuente de carbono (por ejemplo, glucosa y lactosa). Este tipo de crecimiento
microbiano es debido a la utilización secuencial de las distintas fuentes de carbono. El
metabolismo del microorganismo es selectivo para uno de los sustratos: primero utiliza el
sustrato que permite un crecimiento más rápido y cuando este se agota comienza a
metabolizar el otro.

En la siguiente imagen se presenta una curva de crecimiento diauxico, en la que se observa

una curva de crecimiento con dos fases exponenciales separadas por una fase estacionaria
corta. Esto ocurre porque la bacteria crece primero a expensas de la fuente de carbono
preferente, cuando la agota entra a la fase estacionaria hasta que sintetiza enzimas para
degradar la otra fuente de carbono, entonces reprende el crecimiento exponencial, si bien con
una pendiente más suave.

Figura 11. Crecimiento de un cultivo batch.

 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Alvero C.C. 1998. Biología de los microorganismos y células de interés industrial. En

“Ingeniería Bioquímica” (Gòdia Casablancas F. y López Santín J., Eds). Editorial Síntesis,
Madrid.

Junco Díaz, Raquel & M Rodríguez Pérez, Carlos. (2001). Cultivo y crecimiento de los
microorganismos.

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_
6_crecimiento.pdf