Nubia Carolina Higuera Mora. Microbióloga Industrial. M. Sc. Agricultura Ecológica.

Programa de
Ingeniería Agroecológica. Corporación Universitaria Minuto de Dios.

Ingeniería Agroecológica
Microbiología

PRÁCTICA No. 1
Reconocimiento de equipos de laboratorio - Microscopía

Prelaboratorio:

1. Busque el uso microbiológico del siguiente material de laboratorio: tubo de

ensayo, caja petri, pipetas bacteriológicas, asas y agujas bacteriológicas,
portaobjetos y cubreobjetos

2. Dibuje y explique el fundamento y utilización de la cámara de flujo. ¿Qué tipos de

cámara de flujo son utilizadas en microbiología?

3. Dibuje y explique qué es y para que se utiliza el autoclave

4. Haga un cuadro indicando la definición de las principales propiedades que posee el

microscopio óptico, poder de definición, poder de resolución, poder de aumento y
profundidad de campo.

Objetivos:
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________

INTRODUCCIÓN

El trabajo en microbiología requiere del reconocimiento y manejo de algunos equipos y

materiales de laboratorio. Los principales materiales que se utilizan en microbiología son
tubo de ensayo, caja petri, pipetas bacteriológicas, asas y agujas bacteriológicas,
portaobjetos y cubreobjetos, entre otras.

El Microscopio:

El microscopio (del griego mikros = pequeño y skopeo= examinar) es un instrumento

destinado a la observación de objetos pequeños. Con él se logran imágenes aumentadas y
es posible identificar detalles estructurales imperceptibles a simple vista. El primer
microscopio fue diseñado en el siglo XVII por Galileo Galilei y perfeccionado
posteriormente por Anton Van Leewenhoek. La invención y el desarrollo de instrumentos
de microscopia, ha abierto la posibilidad de estudiar las estructuras inanimadas y de la
vida a un nivel de resolución inferior al macroscópico, a escala ultraestructural, incluso
atómica.
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Imágenes que se observan al microscopio

El círculo luminoso que se observa a través del ocular de un microscopio se denomina

campo microscópico. La ubicación se hace según las manecillas del reloj.

1
2 3
9

Las imágenes en el microscopio son invertidas por las lentes, por lo tanto los objetos que
se observan en la parte inferior realmente se encuentran en la parte superior y las que se
observan en el lado derecho, realmente están en el izquierdo.

Es importante saber que el desplazamiento de los objetos en el campo microscópico, es

invertido, es decir cuando la lámina se desplaza hacia la derecha, el objeto examinado se
mueve hacia la izquierda, y cuando se mueve la lámina hacia el observador, el objeto se
aleja.

En estos equipos un concepto muy importante es el de magnificación, que es la capacidad

que tiene el microscopio de amplificar la imagen resuelta en varias veces su tamaño
original; esta propiedad es independiente del poder de resolución del microscopio y está
ligada con el poder de aumento de los lentes objetivos (Figura 1) y oculares. El aumento
de cualquier combinación de objetivo y ocular es el producto de los aumentos de estos
componentes por separado, es decir, multiplicando el aumento de cada uno por el valor
del otro. Este aumento es expresado generalmente en diámetros. Por ejemplo: un ocular
de 10X combinado con un objetivo de 40X, pueden dar un aumento total de 400
diámetros (veces) el tamaño original.

Fig. 1. Objetivos A40 y A100 (inmersión), indicando sus características (Fuente; Rojas A.).

Partes de un microscopio óptico compuesto.

La mayoría de los microscopios compuestos tienen los mismos componentes básicos. Sin
embargo la disposición de muchos de sus componentes varía según el modelo, así como,
la posibilidad de presentar otras piezas que son opcionales. La mayoría de los
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microscopios actuales están constituidos por tres componentes fundamentales: La óptica

(conjunto de lentes), la mecánica (soportes del sistema óptico, iluminación y otras
funciones), y el sistema de iluminación (Figura 2).

Fig. 2. Partes del microscopio binocular compuesto, donde se observan: 1. Oculares; 2.

Escala de ajuste interpupilar; 3. Cabezal; 4. Anillo de dioptrías; 5. Revolver; 6. Objetivos;
7. Platina; 8. Palanca del diafragma; 9. Condensador de abertura; 10. Condensador de
campo; 11. Columna; 12. Interruptor-perilla reguladora de voltaje; 13. Carro; 14. Perilla
del carro; 15. Tornillo macrométrico; 16. Tornillo micrométrico y 17. Base (Fuente: Rojas
A.).

Cuidados que se deben tener con el microscopio.

Para que este equipo funcione adecuadamente y se pueda obtener el mayor provecho de
él, se deben tener en cuenta algunas medidas antes y después de su uso.

• Cuando transporte el microscopio, sujételo siempre con las dos manos (por la base y la
columna).
• Sitúe el microscopio a unos 10cm de la orilla de la mesa de trabajo.
• Para cambiar el objetivo, utilice la rosca estirada del revólver, no tirando de los
objetivos.
• No use demasiado aceite de inmersión.
• Asegúrese siempre de tener limpiado el lente de inmersión después de usarlo, con papel
especial para lentes. Si no se limpia el lente después del uso de aceite, queda un residuo
pegajoso que reduce la eficiencia del lente y puede permitir el crecimiento de hongos.
• Cuando no se vaya a utilizar el microscopio o se desee cambiar de muestra, debe
colocarse en el objetivo de menor aumento en posición de enfoque y la platina abajo.
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• Nunca retire la preparación con el objetivo de inmersión en posición de enfoque.

• Aprenda a mirar por el microscopio con los dos ojos abiertos.
• No desarme ninguna parte del microscopio para limpiarlo, esto solo lo hace personal
capacitado.
• Evite tocar con los dedos los lentes del microscopio. Evite emplear el microscopio si
usted tiene pestañina puesta, ya que esta se acumula en los oculares, reduciendo su
eficacia y en cuyo caso deberá usar los capuchones protectores de los oculares.
• Nunca deje placas montadas en el microscopio en posición de observación.
• Encienda la bombilla únicamente en el momento de hacer las observaciones.
• Al momento de apagar el microscopio: coloque el objetivo de menor aumento en
posición de enfoque, retire la muestra, limpie el objetivo de inmersión con papel especial o
gasa y alcohol isopropílico sin frotar el lente; seque de inmediato el lente con otro papel,
baje completamente la platina, ubique en “cero” la perilla de intensidad de luz, apague el
interruptor de la fuente y desconecte el tomacorriente. Deje enfriar el bombillo dejando el
microscopio en la mesa, para que el responsable del equipo lo revise y lo guarde en el
sitio adecuado y nunca enrolle el cable sobre el microscopio.
• Cubra el microscopio con un forro protector.

NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Para el trabajo en el laboratorio de microbiología se deben seguir cuidadosamente normas

de seguridad biológica, estar atentos a la explicación de la práctica, poner en práctica los
conceptos teóricos y concentrar la atención en los procedimientos realizados para evitar
accidentes y obtener resultados confiables.

Antes de comenzar a trabajar se necesita:

1. Durante el trabajo de laboratorio los estudiantes usarán bata totalmente blanca,

apuntada, un gorro que les cubra todo el cabello y tapabocas.
2. Colocar la ropa, meletas, morrales en el lugar dispuesto para tal fin.
3. Lavarse las manos antes y después de finalizar la práctica
4. Trabajar con la puerta del laboratorio cerrada
5. No se podrá comer, beber, masticar chicle ni fumar
6. Se debe mantener en el sitio de trabajo sólo el material necesario para la práctica
7. Desinfectar el área de trabajo con detergente o alcohol y toallas de papel antes y
después de realizar el trabajo
8. Prender el mechero antes de empezar a trabajar, se debe trabajar siempre cerca
del mechero
9. No poner ningún elemento de trabajo en contacto con el cuerpo
10. Evite al máximo transitar por el laboratorio
11. Evite la formación de aerosoles
12. Abrir la caja de Petri, tubos u otros que mantengan medio o cultivos el menor
tiempo posible y cerca al mechero para evitar contaminaciones. e
13. Descartar el material contaminado en las bolsas o recipientes destinados para tal
fin
14. Esterilizar el material contaminado antes de descartarlo
15. Pipetear con los dispositivos adecuado, nunca pipetear con la boca
16. No se podrá utilizar joyas durante el trabajo
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17. En caso de derramamiento o rompimiento de tubos o cajas Petri con cultivos

microbianos, cubrir el tubo con hipoclorito de sodio al 2% o fenol al 5%, tapar con
una hoja de papel durante media hora, recoger el material, envolverlo en papel y
llevarlo a esterilización antes de descartar
18. Identificar/marcar los medios de cultivo y recipientes el uso con la fecha,
abreviatura del medio de cultivo y número de referencia.
19. No utilizar la bata afuera del laboratorio, no lavar la bata ni el gorro junto con otra
ropa de uso diario.

Pasos para la observación de muestras bajo el microscopio compuesto.

1. Coloque la preparación a observar (portaobjetos con la muestra), sobre la platina y

sujétela con las pinzas del carro. Compruebe previamente que el objetivo de menor
aumento está en la posición de enfoque.
2. Realice el enfoque de la muestra, iniciando SIEMPRE por el objetivo de menor aumento
(4X o 5X, dependiendo del fabricante del microscopio), así:

 Gire el tornillo macrométrico para realizar el enfoque grueso de la preparación

(observación de la imagen).
 Cuando observe la imagen, realice el enfoque fino girando el tornillo micrométrico,
hasta lograr total claridad de la imagen.
 Si es necesario, mejore la iluminación de la preparación girando la perillan
reguladora de voltaje.
 Mueva los oculares lateralmente para ajustar la visión a su distancia interpupilar.
 Ajuste la visión binocular con el anillo de dioptrías de la siguiente forma: mire con
el ojo derecho por el ocular respectivo, cubriendo el ocular izquierdo y enfocando
con el tornillo micrométrico lo mejor posible (enfoque fino). Ahora ajuste el ocular
izquierdo, así: Cubra el ocular derecho, mire con el ojo izquierdo por el respectivo
ocular y enfoque con el anillo de dioptrías (no con el tornillo micrométrico).

3. Coloque el objetivo 10X en posición de enfoque, girando el revolver suavemente. No

girando de los mismos oculares. En este paso, solo haga uso del tornillo micrométrico para
aclarar la imagen, NO use el tornillo macrométrico.
4. Continúe con el objetivo 40X, colocándolo en posición de enfoque y suba ligeramente el
condensador. La imagen debe estar casi enfocada (afine con el tornillo micrométrico); si la
imagen no está enfocada, devuélvase al objetivo de menor aumento y repita la operación
completa.
5. Empleo del objetivo de inmersión (100X).
 Gire el revólver hacia el objetivo de inmersión, dejando a medio camino entre éste
y el de 40X.
 Coloque una gota de aceite de inmersión sobre el punto de la luz (recuerde que el
condensador debe estar en la parte alta).
 Termine de girar suavemente el revólver hasta que el objetivo de inmersión quede
en posición de enfoque.
 Enfoque la preparación cuidadosamente con el objetivo micrométrico; esta
preparación debe quedar casi enfocada si ha realizado el enfoque cuidadoso con el
objetivo 40X. De no ser así, inicie el enfoque de la preparación desde el objetivo de
menor aumento, para evitar rayar el objetivo de inmersión. Recuerde que la
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distancia desde el lente frontal del objetivo de inmersión a la preparación es

mínima, por eso el riesgo de accidente es ahora máximo.
 Una vez haya puesto el aceite de inmersión sobre la preparación, ya no puede
volver a enfocar el objetivo de 40X, porque lo mancharía con aceite, por lo tanto si
desea enfocar otro campo, debe retirar el objetivo de inmersión, girando el
revólver hacia el objetivo de menor aumento y seleccionar otro campo, empezando
a enfocar este último.
 Finalizada la observación y antes de retirar la preparación, baje la platina y coloque
el objetivo de menor aumento en posición de enfoque. Nunca retire la preparación
con el objetivo de inmersión en posición de enfoque.
 Retire la preparación y limpie el objetivo de inmersión cuidadosamente empleando
papel especial para óptica. Compruebe que el objetivo de 40X también está limpio.

MATERIALES Y EQUIPOS

Agua destilada
Aceite de inmersión
Bisturi *
Agujas de disección*
Fibras textiles (algodón, lana, tela).*
Goteros
Hoja de papel periódico impreso*
Hoja de papel milimetrado*
Laminas portaobjetos y cubre objetos*
Microscopio óptico
Paños absorbentes
Papel de arroz.
Pincel de punta fina*
Pinzas
Tijeras pequeñas*
Vaso de precipitado pequeño (50ml)
Xilol o alcohol.

Cada grupo de laboratorio debe traer el material que se encuentra marcado con el
asterisco.

METODOLOGÍA

1. Reconocimiento de equipos de laboratorio

Hacer un recorrido con las auxiliares y docente por los equipos que se utilizan en el
laboratorio de microbiología. Escuchar atentamente la explicación y hacer las
preguntas necesarias. Como resultado del informe dibuje los equipos presentados y
describa su utilidad en el laboratorio de microbiología e identifique sus partes.

2. Las partes de un microscopio

Ubique cada una de las partes que componen el microscopio óptico.

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http://www.grupoblascabrera.org/didactica/Imagenes/Microscopio.gif

3. Observaciones microscópicas - propiedades del microscopio

A. Conectar el microscopio, antes de iniciar usa papel de arroz u otro tipo de papel
especial para la limpieza de las lentes expuestas, aplicando movimientos circulares y
suaves para no deteriorar las lentes

B. Preparar un montaje húmedo de la siguiente forma:

• Tomar la lámina portaobjetos y colocar dos gotas de agua en la mitad de la lámina.
• Con ayuda de las pinzas tomar el objeto que va a observar (fibras de algodón,
cabello, etc), tenga presente que su tamaño sea inferior al tamaño de un
cubreobjetos.
• Cubra la preparación con una lámina cubreobjetos, déjela caer suavemente y evita
la formación de burbujas.
• Rotar el revolver hasta alinear el objetivo de menor aumento sobre el centro de la
platina. Ubica la preparación sobre la platina, asegurando la lámina con las pinzas de
sujeción.
• Encender la fuente luz y graduarla con ayuda del condensador y diafragma.
• Observar y proceder a enfocar el objeto con ayuda de los tornillos macro y
micrométrico hasta obtener una imagen clara. Observar la imagen en los objetivos 4X,
10X y 40X. Dibujar lo observado.
• Para usar el objetivo de inmersión (100X) vierta una gota de aceite de inmersión
sobre la preparación y observar, dibuje lo observado.
• Al finalizar retire la preparación de la platina, limpie los objetivos usando papel de
arroz para el objetivo de 100 X.

4X 10X 40X 100X

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Anexo 1. Criterios de evaluación

Los siguientes son los criterios de evaluación de las prácticas de laboratorio:

1. Monitoría: Cada grupo de trabajo será responsable de una práctica de laboratorio.

Entre sus responsabilidades se encuentran preparar previamente todos los
materiales necesarios para la ejecución del laboratorio, tener claridad y explicar la
práctica de laboratorio a los compañeros, sustentar las preguntas del
prelaboratorio y profundizar en el tema de trabajo. Esta tendrá dos calificaciones
que se computan entre si, una equivalente a la valoración de la auxiliar de
laboratorio según su desempeño en la preparación de la práctica y otra de la
docente, de acuerdo al éxito del laboratorio.

2. Prelaboratorio: Deberá hacerse individualmente y se recogerá al azar durante el

laboratorio.

3. Informe de laboratorio: Cada informe debe ser presentado en grupo

(preferiblemente subido al aula virtual), en la siguiente clase después de finalizado
el laboratorio. Debe seguir con los parámetros de presentación expuestos en el
Anexo 2. La siguiente es la rúbrica de evaluación del informe de laboratorio:

Introducción Objetivo Metodología Resultado Discusión Conclusiones Bibliografía Total

0.5 0.5 0.5 1 1 1 0.5 5

Anexo 2. Parámetros para la realización de informe laboratorio

Una vez terminada la práctica se debe elaborar un informe que debe tener
aproximadamente 5 páginas distribuidas así: Introducción y objetivos (1 página),
metodología (1 página), resultados (1 página), discusión (1 página), conclusiones y
bibliografía (1 página). La siguiente es una guía general para su elaboración:

Introducción: Breve información de los elementos que fundamentan la práctica,

conceptos y principios, breve explicación de lo que se hace en la práctica y justificar por
qué se hace.
Objetivos: Al redactarlos, se debe tener cuidado de usar correctamente los verbos,
además deben ser claros, preciso y alcanzables.
Metodología: Paso a paso, se debe describir lo que se realizó en la práctica mediante un
flujograma. NO TRASCRIBIR LA METODOLOGÍA ENTREGADA EN LA GUÍA.
Resultados: Organizar cada resultado y, de acuerdo a lo observado, presentarlos de
manera gráfica mediante dibujos, graficas, tablas o fotografías. Hacer los comentarios
pertinentes para cada uno.
Discusión: Discutir los resultados encontrados mediante la revisión bibliográfica de
artículos, libros u otras fuentes. Una forma de hacerlo, es comparar sus propios
resultados con los de otros autores. No olvidar hacer las respectivas referencias y citas
bibliográficas. Aquí también puede escribir algunas de las recomendaciones que usted
haya evidenciado con las cuales se pueda seguir con el objetivo de superar las dificultades
que haya encontrado en la práctica.
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Conclusiones: Redactar las conclusiones generales de la práctica teniendo en cuenta los

objetivos planteados. Usar términos técnicos y sencillos. Deben estar relacionados con
los resultados obtenidos en la práctica, las conclusiones NO SON UNA REVISIÓN
BIBLIOGRÁFICA DEL TEMA.
Bibliografía: Para citar las fuentes bibliográficas utilizadas durante la práctica y la
elaboración del informe, se deben utilizar las Normas APA.

BIBLIOGRAFIA

Escobar de Rico, M. 1998. Prácticas de laboratorio: Fundamentos de microbiología.

Biblioteca del profesional. Centro editorial javeriano CEJA. Bogotá

Valencia, H. 2004. Manual de prácticas de microbiología básica. Universidad Nacional de

Colombia. Facultad de Ciencias. Editorial UNIBIBLOS. Bogotá

Rojas, A. (2011) Conceptos y prácticas de microbiología general (A Muñoz Aguilera, DA

Jurado, and MA Garcia, Eds.). Taller de publicaciones “Universidad Nacional de
Colombia” sede Palmira., Palmira - Colombia.