microcine | microscopio de campo oscuro € una modificacién al sistema de campo claro, que consiste en Dloquear los rayos centrales que alcanzan al condensador, por medio de un disco © agin otro tipo de dispositive, de manera tal que el cono iuminador es un ‘eono heco de fuz, con mayor apertura numérica que la del objetivo. Esta forma de luminacion permite que solo aquellos rayos que han sido desviados por la muestra observada, sean captados por el objetivo. Es decir, la imageo microseSpica esié formada €n este e280 ‘8610 por rayos difractadosy constituye un sistema cuyo funcionamiento se basa en ‘el fenémeno de Tyndall. La técnica de campo oscuro ¢s muy til para observar materiales en sus- pensién, permitiendo detecter con gran facilidad partfoulas sotidas con {ndices de refracci6n muy cereainos al del medio en ‘que se encuentran, por esta raz6n, es tun sistema de gran utilidad pare reall- zat conteos de ntimero de particulas en ‘una muestra. De igual forma, resulta una herramiente stil para visvalizar estructu- ras muy delgadas que rebasan los mites ‘consp(cuos de Ia célula v organismo ob- servado. La desventaja principal de esta éenica * Laboratorio de Microcine, Pacultad de Ciencias, UNAM El microscopio de campo oscuro ALEJANDRO MARTINEZ M.” ore BRE ?Roos ope tyeco = REFLEC IO! + oBsETIVO PREPARATION Eaquems del Upos de condensadores para microscope campo oscuro por tansisi. ‘e8 que presenta imdgenes con poca reso- luci6a, ésto debido alla técnica misma, ya {que al formarse imagenes mieroscopicas ‘que solamente estén constituidas de ra- Yyos difractados, hacen evideate la falta ‘de las rayosdirectos para presenter com- pleta la informacion estructural de ta ‘muestra, sila comparames con el micros- copio de campo claro. Existen varias posibilidades para lo- (grata iluminaci6n de campo oscuro, que ‘Gependen det tipo de condensador y hay dos tipas: condensadores por refracci6n yy condensadores por reflexién, En ge- ‘neral los condensadores por refraccién tienen un disco central que obstruye el paso de la luz, formando asf un cono hhueco de luz. ’ El disco se puede co- locar sobre la lente frontal de1 conden- sador 0 en el piano focal pesterior det mismo, es decir, ala altura de! diafragma de apertura, o bien en el portafiltros; pueden ser usados con una dmplia va- Tiedad de aumentos del objetivo (2.5X a 100), su ventaja principal estriba en ser relativamente econdmicos y ser den- trode su campo muy versétiles en ¢} uso para objetivos de poco aumento, hasta 40X. Asimismo, este tipo de condensado- CIENCIAS © revista ceaitusion © 1585orr Bat Pioos ope tubo tes pueden improvisarse afiadiendo sim- plemente un disco de cartéa negro so- bre la lente frontal del condensador (el didmetro del disco deber ser ligeramente ‘menor que el de lalente frontal del obje- tivo). Es importante anotar el hecho de que para usar objetivos 100% en campo ‘oscuro, estos han de tener incorporado tun diafragma variable tipo iris que per- mita reduc laapertura numérica del ob- Jelivo, generalmente se reduce de 1.3 0 10 x 08, con el fin de mastenee mayor apertura numérica del cono ituminador respocto de ta del objetivo. La desventaja principal de tos con- ensadores para campo oscuro por re- fraccidn estd en que la censidad tuminosa ‘que proporcionan ¢s muy baja, si se con- sidere que su porcentaje aproximado es ‘21 20% del total de la luz que alcanza al ‘condensador, una seguada desventaja es ‘que en general estos condensadores se encuentran en el mercado con aperturas naméricas de hasta 0.9. DireacTaDos cope pysco— roRSY SRL COMDENSADOR POR REFRACCION —opsetiv0 PREPARACION Luz j—opsetivo PREPARACION —conpensapor TOROIDAL Los condensadores por reflexién soo principalmente de dos tipos: paraboloi- des y cardioiées. En la parte central tie- nen una superficie reflejante con una cur- vatura de pardbola de cardioide que re- Aeja lateral y periféricamente los rayos hacia otro expejo que circunda el area central, esta superfide tiene una incl. naci6n soficiente para producit uo cono luminoso que es el que proporciona y envfa la luz hacia la mbestra a observar. Los condensacores consuperficie cen- tral de curvatura cn pardbola se denomi- ‘nan parabotoides, mientras que los que presentan superficie con curva de car- dioide se les da el nombre de cardioides. La diferencia principal entre ellos con- siste on que ticaen aperturas muméricas superiores a 0.9, tales como 13.0 Lay siempre son lentes de inmersion enaccite de 1.515 de indice de refraccién, de ma- nera tal que cl aceite queda en contacto con la superficie veatral del portabjetos. La ventaja principal de estos condensa- ores es la alta densidad luminasa de la ‘que proven a la muestra y la posibilidad de usar aumentes del objetivo superio- res a 40X. Distoaes det pfaero Cosnodiaus vite 8 travis un miroacoplo Se campo once, equipeso con ‘ coudenudor por rfraccisa. Ea U imagen ‘hecrvan con clad lo detalles entrectrais que tc acen evdeates pov el ineremento de coats SENS Gon rope al akrwropi Se cme Una variante de estos condensado- res para campo oscuro por refexiones, ta presentan 10s condensadores.t6ricos © toroides. Estos condensadores tienen tuna lente tériea sfladida un condensa- dor cardicide. Dicha lente concentra el 100% de ia luz que Wega at coodensador y la envia al expo de forma tal que el objeto sea luminado con ef 100% de 1a luz que llega del eondensador. Se puede decir que este tipo de condensa- dor €3 | mejor, cuando las condiciones de trabajo involueran aumentos superio- res a 40X en os objetivos, La técnica de campo oscuro puede combinarse con otras como la micros- copla de flourescencia y Ia polarizacia, suméndase entonces las ventajas de estas {écnicas.a las del campo oscuro, Muchos autores recomiendan esta combinacifon de técnicas para los trabajos cotidianos en microscopla de flourescencia. CIENCIAS © revista dedifesife © 1988 47