Universidad Autónoma del Estado de Morelos

Facultad de Medicina
Manual del Laboratorio de Bioquímica

PRACTICA No. 5
ESCALA COLORIMETRICA DE pH. APLICACIÓN DE LA
ECUACION DE HENDERSON-HASELBACH.

FUNDAMENTO

Las soluciones “buffer” o amortiguadores son mezcla de ácidos débiles, poco

disociados y de sus sales que permiten la adicción de hidrogeniones (protones) u
oxhidriliones sin cambio significativo de pH de solución.

El efecto es muy importante para mantener la concentración de protones (pH) del

medio celular y extracelular dentro de los límites estrechos compatibles con la
vida.

El pH de la sangre se regula por los sistemas amortiguadoras bicarbonato/

carbonato. Hemoglobina Reducida/ oxihemoglobina, proteína básica/proteína
acida, etc. de los cuales es muy significativo el primero, por la facilidad con que se
elimina el bióxido de carbono por los pulmones.

El pH de la sangre arterial normal es de 7.35 a 7.45; de la sangre venosa de

7.32 a 7.42 y los extremos compatibles con la vida son 6.80 a 7.80. La
dosificación de los gases de la sangre pCO2
y Po2 y la lectura potenciométrica en aparatos con escala ensanchada y
aproximación de 0.01 de pH, proporcionan información para manejo de los
estados de alcalosis y acidosis.

Los indicadores son ácidos o bases que se disuelven en forma de moléculas

enteras o se disocian en iones de distinto color, según su pK y el pH de la solución
en que se encuentran, formándose un sistema amortiguador que abarca la zona
viraje.

Este cambio de color a otro no se lleva a cabo en límites estrechos, sino que
existe una zona de viraje de más o menos dos unidades de pH, en donde se
obtienen mezclas de color inicial y de color final.
En este experimento se utilizará un sistema de ácido bórico e hidróxido de sodio
para formar un gradiente de pH. Dependiendo de las circunstancias de estas dos
soluciones agregadas obtendremos la sal de borato de sodio y agua, en misma
concentración mol/l del volumen añadiendo de álcali:

H3BO3 + NaOH NaH2 BO3 + H2O

Este experimento es útil para familiarizarse con la ecuación de Henderson-

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Hasselbach en la obtención del pH.

pH = pKac + log sal = pK + log __ml NaOH______

Ácido mL sol. Ácido débil

Esta misma ecuación es aplicable a los sistemas amortiguadores de la sangre.

OBJETIVOS

Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:

1. Comprender el concepto de pH y su importancia en el organismo, los

conceptos de pK, amortiguador y conocer los principales amortiguadores en el
organismo.

2. Definir Acido, Base y sus implicaciones clínicas

3. Resolución de problemas acido-base a partir de la ecuación de Henderson-

Hasselbach. Conocer el concepto de titulación y de indicador.

MATERIAL

Material de vidriería
Solución de ácido bórico o.1 mol/l pKac= 9.14 (1*)
Solución de hidróxido de sodio 0.1 mol/L (2*)
Solución de agua destilada (3*)
Solución indicador azul de timol (timosulfonftaleína) 0.04 %, zona de viraje es
aproximadamente de 8 a 9.6 (4*)

METODOLOGIA
EXPERIMENTO I
Se prepara una serie de tubos como sigue, fin de obtener mezclas de
borato/ácido bórico = sal/ ácido.

Rotular los tubos del 1 al 11 y añadir cada uno de las soluciones reactivo en el
orden y volumen exacto indicados en la siguiente serie.
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TUBOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
REACTIVOS
1* mL 5 .0 5 .0 5 .0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 0
2* mL 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0
3* mL 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 5.0
4* 3 gotas a cada tubo
mezclar por inversión

RESULTADOS

Los tubos del 1 al 11 constituyen una curva de titulación de una solución

amortiguadora, en donde los tubos del 2 al 10 constituyen la zona útil, es decir
cerca de su pK donde mantiene mínima variación. En estos tubos reacciona un
volumen igual de la solución de NaOH con ácido bórico formando borato de sodio
y siguen la ecuación de Henderson-Hasselbalch, mientras que los tubos 1 al 11 no
la siguen, siendo los extremos de la curva y cuyo pH se obtiene por medición
directa o por cálculo, el pH obtenido para el tubo No.1 es de 5.22

Para calcular pH que corresponde a los tubos del 2 al 10 se aplica la ecuación de

Henderson-Hasselblach en la siguiente forma:

TUBO No.2

pH = pK + log = [sal ] = ml sol NaOH = 0.5 =0.5

[Ácido] mL ácido - mL NaOH 5 - 0.5 4.5

pH = pK ac + log 0.5
4.5

pH = 9.14 + log 0.5

4.5

pH = 9.14 + (-0.95) = 8.19

y, así sucesivamente con los siguientes tubos.

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UN ALUMNO POR EQUIPO:

EXPERIMENTO II

a). Recolectar una orina al entrar al laboratorio.

b). Tomar agua un litro aproximadamente.
c). Hacer ejercicio intenso.(20min)
d). Recolectar una muestra de orina cada hora durante 2 horas.
e). Determinar el pH en las orinas. Calcular concentraciones Hidrógenos y
analizar el porqué de los cambios de pH y comprender en equipo acido/base.
Traer por única ocasión tenis y pants para realizar el ejercicio

pH Concentración
Hidrógenos

INICIAL (hora)

FINAL

EXPERIMENTO III
MEDIR LOS COMPUESTOS Y ELABORAR UN TABLA CON LOS SIGUIENTES

COMPUESTO pH H+
Refresco Coca cola 2.5
Leche Santa Clara 6.9
Por ejemplo

REPORTE

1. Calcular el pH para los tubos del 2 al 10.

2. Medir con el potenciómetro el pH de los tubos 1 y 11.

3. Una vez obtenido el pH de cada tubo, graficar en las ordenadas el valor de

pH y en las abscisas los mL. De NaOH adicionados a los tubos.

4. Representar la serie calorimétrica de tubos con la reacción final, así como

la interpretación de cada uno en lo particular y de la serie como sistema
amortiguador.

5. Reportar los resultados obtenidos en ejercicio por alumno en equipo.

6. Anotar los resultados los elementos solicitados.

7. Sacar los hidrogeniones de los productos solicitados.

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En esta práctica traer por equipo los siguientes compuestos:

Refresco de su preferencia 20 mL.

Leche de su preferencia 20 mL.
Jugo de limón 20 mL
Jugo de naranja 20 mL
Café soluble 20 mL
Jugo de toronja mL
Orina de mujer y de hombre 20 mL.
(En esta práctica lo que se pretende que el alumno observe los diferentes pH, en
los compuestos que se utilizan como alimento)

Una persona por equipo debe traer un par de tenis para el experimento II

CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es el pH en la sangre venosa y arterial en los seres vivos y qué
importancia tiene?
2.- ¿Y cuál sea incompatible?
3.- ¿Menciona que sistema, protege al organismo?
4.- ¿Qué sustancias son degradas en el organismo? ¿Y qué forma al final de cada
ciclo?
5.- ¿El acido carbónico es eliminado en la forma de?
6.- ¿Qué se produce en el metabolismo?
7.-¿Qué es un sistema amortiguadora?
8.-¿En la regulación de PH que aniones y cationes intervienen y cuál es el
proceso?
9.-¿Cómo se puede simplificar las características por el intercambio de aniones
entre las células rojas y el plasma?
10.-¿En qué órgano de cuerpo humano son reguladores efectivos del equilibrio
acido- base?
11.- Explique la diferencia entre el sistema amortiguador y el de una sustancia con
propiedad anti-acida?
12.-¿En qué forma secreta el riñón?
13.- ¿Qué es una acidosis respiratoria?
14.-¿Qué es una acidosis respiratoria?
15.-¿Qué es una acidosis metabólica y alcalosis metabólica?