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Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Departamento de Ciencias Químicas


Sección de Química Analítica

MANUAL DE PRÁCTICAS

ANÁLISIS INSTRUMENTAL

LICENCIADO EN BIOQUIMICO DIAGNÓSTICO


Clave de la Carrera: 105-39
Clave de la asignatura: 1439

M.C. Miriam A. Castillo Rodríguez


M.C. Pablo Hernández Matamoros
M.C. Enrique Ramos López
Q.F.B. Elia Granados Enríquez
Q.F.B. Iván Santillán Cano
Q. Ma. Del Carmen Campo-Garrido
Dr. José de Jesús Olmos Espejel

Vigente a partir de: 2020- II


Direcciones electrónicas para los exámenes de conocimientos
previos por grupo (Semestre 2020-II)

Dar clíc al link para abrir el cuestionario, si esto no sucede, copiar


y pegar la dirección en el explorador

Disponibles a partir del lunes 27 de enero de 2020

Grupo 2501 A/C

https://forms.gle/nbanyTTG4ETVC11ZA

Grupo 2501 B/D

https://forms.gle/N1X4TrqxeFwSMMM8A

Grupo 2551 A/C

https://forms.gle/tw29isyrkdFekHSR9

Grupo 2551 B/D

https://forms.gle/azzgKvxfnVg2bPTw7
Introducción
Con la amplia gama de técnicas instrumentales de análisis con las que se cuenta en la

actualidad y a su incesante desarrollo, el dominio de todos ellas es difícil de abordar en

su totalidad en un curso de licenciatura, por lo tanto es necesario adquirir conocimiento

de una manera general, que nos permita interpretar y manejar datos obtenidos con

cualquiera de ellas.

La gran variedad de técnicas instrumentadas de análisis se basan en una relación que

existe entre la propiedad (absorbancia, índice de refracción, pH, área de pico, potencial,

conductancia, intensidad de corriente, etc.) con la composición del sistema (análisis

cualitativo) o bien la cantidad de alguno de sus componentes (análisis cuantitativo).

Generalmente algunas de las técnicas se utilizan básicamente para el análisis cualitativo,

otras más en el análisis cuantitativo y un buen grupo de ellas es capaz de cumplir con

ambas funciones.

La propiedad (P) , no es solamente afectada por la composición del sistema también por

variables como temperatura, presión, tiempo, perturbaciones ocasionadas al realizar la

medición, presencia de sustancias químicas interferentes, etc. es por esta razón en este

curso se estudia la relación entre la propiedad y la composición; relación en donde es

necesario ejercer un control efectivo sobre las demás variables que además de la

composición afectan la propiedad, todo esto a fin de obtener información útil desde el

punto de vista analítico de esta manera P será función de la composición. Pudiendo así

proponer métodos basados en esta relación para poder conocer la composición de cierta

sustancia(s) en muestras de interés.

Este enfoque contribuye a la formación profesional en análisis instrumental y al perfil

profesional en su área.

I
OBJETIVOS

OBJETIVO(S) GENERALES DE LA ASIGNATURA

Que el alumno conozca las técnicas y métodos más utilizados en el Análisis Instrumental al

obtener y utilizar información obtenida con estos para en la cuantificación de sustancias en

muestras de interés en el ámbito farmacéutico para que desarrolle habilidades, actitudes y

criterio apropiados a fin de resolver problemas en su área.

OBJETIVOS DEL CURSO EXPERIMENTAL


PRÁCTICAS CONVENCIONALES: Reafirmar los conocimientos teóricos en la aplicación

de las metodologías analíticas empleando un equipo instrumental para identificar y

cuantificar una sustancia en una muestra de interés en el área bioquímica clínica

1) Conocer e identificar las partes básicas del equipo utilizado para su manejo adecuado a

fin de obtener resultados confiables.

2) Conocer la información que el equipo genera y su uso para análisis cuantitativo.

3) Interpretar y relacionar variables a utilizar para efectuar el cálculo de contenido de una

sustancia en una muestra real.

PRÁCTICA DE DISEÑO: Elaborar un formato experimental fundamentado química e

instrumentalmente para cuantificar sustancias de interés en su área a través de las

siguientes etapas

1) Realizar una investigación respecto a un procedimiento base y con ello:

2) Estructurar un diseño experimental (protocolo).

3) Consultar la metodología propuesta con el asesor con la finalidad de mejora.

4) Desarrollar en laboratorio el diseño propuesto para la cuantificación de una muestra.

5) Contrastar los resultados obtenidos con el diseño propuesto a fin de identificar fuentes

de error tanto de diseño como experimental a fin de optimizar el protocolo.

6) Desarrollar nuevamente el experimento corregido y cuantificar.

II
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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA
CODIGO: FPE-CQ-DEX-01-02
FPE-CQ-DEX-03-02
CALENDARIZACIÓN FPE-CQ-DEX-04-02.

No de REVISIÓN: 00

Asignatura: ________________________________________________ Grupo:_________________

Carrera: ______________________ Período: _______________ No. de equipos: ___________

SEMANA/
ACTIVIDAD FECHA OBSERVACIONES
ETAPA

a) INSCRIPCIÓN.

b)Presentación

c) Información sobre el Sistema de Gestión de


Llevar tira de
Calidad (SGC).
materias, hoja de
d) Organización para trabajo en equipo.
control con foto, bata
e) Preparación de soluciones, manejo de material y
y manual impreso.
equipo común en el laboratorio de Análisis

Instrumental.

f) Examen diagnóstico en línea.

Práctica 1 Determinación de Azul Timol


C. Previo 1
por Espectrofotometría UV/VIS.

Práctica 2 Determinación de ácido C. Previo 2

Ascórbico por curva de calibración Informe Práctica 1

III
Práctica 3 Determinación de Zn(II) C. previo 3

por Absorción Atómica. Informe práctica 2

Discusión de los Ejercicios Unidad I.


Informe práctica 3
Análisis de resultados de las practicas.

Primer Examen escrito

Asignación del proyecto para Diseño

Experimental

Práctica 4. Determinación de filtros UV por HPLC C. previo 4

C. previo 5
Práctica No. 5 Determinación de etanol por
Informe práctica 4
Cromatografía de Gases en enjuague bucal
C. previo 6
Práctica No.6 Determinación de plata en un
Informe práctica 5
desinfectante
Entrega y discusión de los de Ejercicios Unidad 2.
Informe práctica 6
Análisis de resultados de las practicas.
Avances del diseño
Revisión del Formato de Diseño Experimental (FDE) y
experimental
experimentos preliminares.

Segundo Examen escrito Avances del diseño

Dudas protocolo final. experimental

1ª Sesión práctica de Diseño Experimental.

2ª Sesión práctica de Diseño Experimental.

Presentación oral del Diseño Experimental Informe de Trabajo del

Aplicación de la encuesta FPG02-FESC-01 Diseño Exp.

Entrega de Promedios finales Desocupar gavetas

Elaborado en Junta de Asignatura del Jueves 17 de enero de 2019

IV
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SECCIÓN QUÍMICA ANALÍTICA

CRONOGRAMA ESPECÍFICO DEL CODIGO: FPE-CQ-DEX-01-01


LABORATORIO FPE-CQ-DEX-02-01
FPE-CQ-DEX-03-01
FPE-CQ-DEX-04-01

No. de REVISIÓN: 00

ASIGNATURA: Análisis Instrumental CARRERA: BQD

NO. DE NO. ACTIVIDADES TÉCNICAS DIDÁCTICAS EVALUACIÓN NO. DE


SEMANA SESIONES/ETAPA SUGERIDAS * SUGERIDAS SUGERIDA HORAS/SESIÓN

1/Presentación del Entregar tira de materias y 3


curso y preparación hoja de control.
de sioluciones
Formar equipos.

Explicar metodología de
trabajo y evaluación.

Preparar disoluciones
asignadas.

1/Desarrollo del Leer la práctica Realizar diagrama de flujo. Examen previo 3


curso previamente y explicar los
objetivos Estudiar temas de
absorción molecular y
curvas de calibración

1/Desarrollo del Leer la práctica Realizar diagrama de flujo. Examen previo 3


curso previamente y explicar los
objetivos Estudiar tema de curvas
de calibración indirectas

1/Desarrollo del Leer la práctica Realizar diagrama de flujo. Examen previo 3


curso previamente y explicar los
objetivos Estudiar tema de
espectrofotometría de
absoricón atómica

I
NO. DE NO. ACTIVIDADES TÉCNICAS DIDÁCTICAS EVALUACIÓN NO. DE
SEMANA SESIONES/ETAPA SUGERIDAS * SUGERIDAS SUGERIDA HORAS/SESIÓN

1/Desarrollo del Resolución de dudas y Resolución de serie de 3


curso análisis de resultados de ejercicios.
las prácticas

1/Evaluación Aplicación de primer Asesoría del proyecto. Primer 3


parcial examen parcial. parcialparcial

1/Desarrollo del Leer la práctica Estudiar el tema de Examen previo 3


curso previamente y explicar los cromatografía de líquidos
objetivos de alta resolución

1/Desarrollo del Leer la práctica Estudiar el tema de Examen previo 3


curso previamente y explicar los cromatografía de gases
objetivos

1/Desarrollo del Leer la práctica Estudiar el tema de Examen previo 3


curso previamente y explicar los cromatografía de gases
objetivos

1/Desarrollo del Resolución de dudas y Resolución de serie de 3


curso análisis de resultados de ejercicios.
las prácticas

1/Evaluación Aplicación de segundo Resolución de serie de Segundo 3


examen parcial. ejercicios. Asesoría del parcial
proyecto.

1/Desarrollo del Revisión del proyecto Experimentación y Análisis Análisis de 3


curso de resultados resultados del
proyecto

1/Desarrollo del Realización del proyecto Experimentación y Análisis de 3


curso Conclusión del proyecto resultados del
proyecto

1/Evaluación Aplicación del tercer Presentación oral de los Aplicación de la 3


examen parcial resultados del proyecto encuesta de
calidad

1/Fin de curso Realización de promedios Balance del semestre 3


y entrega de calificaciones

II
SISTEMA DE EVALUACIÓN
I.-En Prácticas Convencionales

1) Cuestionario previo (CP). Se evalúa una revisión previa del procedimiento a realizar en la
práctica.

2) Informe de trabajo (IT). Se evalúa el informe en cuanto a claridad y presentación, así como
la consistencia entre los resultados experimentales, el resultado del análisis reportado y si la
información se procesó adecuadamente. La puntuación concreta en base 10 para cada punto
del informe es:

a) Nombre del experimento, fecha y Datos completos como contenidos del producto
analizado (en caso tenerlo) pesadas, preparación de soluciones y estándares,
concentraciones de estos. (1.0 punto)

b) Resultados (gráfica, tablas, volúmenes utilizados) (2.0 puntos)

c) Análisis de resultados incluyendo: reacciones y constante de equilibrio condicional, en


caso de que se efectúe, regresiones lineales y cálculos de contenido (5.0 puntos)

d) Conclusiones justificadas química e instrumentalmente (1.5 puntos)

e) Referencias consultadas (0.5 puntos)

II.-En práctica de Diseño Experimental.

1) Formato del diseño experimental (FD). Se evalúa si el proyecto planteado por el equipo de
alumnos se llevará de manera adecuada a la solución del problema planteado.

2) Informe de Diseño (ID) (se evalúan los mismos puntos que el Informe de práctica
convencional). Tendrá la misma calificación que cada Informe de Trabajo (IT).

PARA LOS ALUMNOS QUE HAYAN ACREDITADO EL

LABORATORIO Y LO VUELVAN A INSCRIBIR, SE TOMARÁ LA

PRIMER CALIFICACIÓN APROBATORIA DE LABORATORIO PARA

SU PROMEDIO CON LA TEORÍA

III
La puntuación en una escala de 100 puntos se presenta en la siguiente tabla:

TIPO DE ACTIVIDAD ASPECTO A # DE ACTIVIDADES % FINAL

EVALUAR REALIZADAS

Cuesitonario
Previo (CP), CP (15%)
Informe de
Práctica Convencional 7 40
trabajo e
informe de FIT-IP (25%)
diseño (IT-ID)
8

Formato de
Práctica de Diseño 1 10
diseño (FD)

Examen destreza y 3* 50

habilidades de *dos escritos (40%)

manejo de equipo y y uno oral (10%)

cálculos de

contenido individual

100

LA CALIFICACIÓN EN EL ACTA SERÁ 50 %


TEORÍA Y 50 % LABORATORIO.
*ES IMPORTANTE QUE SE ACREDITE AL MENOS UNO
DE LOS DOS EXÁMENES ESCRITOS PARA
CONSIDERAR EL PROMEDIO FINAL.

IV
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FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

DIVISIÓN DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS

REGLAMENTO GENERAL DE SEGURIDAD E HIGIENE PARA LOS


LABORATORIOS DE LA SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA

OBJETO DEL REGLAMENTO


Dar a conocer las reglas de seguridad e higiene que deben cumplirse al ingresar a los
Laboratorios de Química Analítica.

ART. 1.- Al ingresar Alumnos, Profesores, personal de la Sección y visitas deben portar bata
blanca, se realice actividad experimental, examen o cualquier otra actividad dentro del
laboratorio, (excepto personal de limpieza o mantenimiento quienes usan su uniforme).
Durante la actividad experimental debe usarse lentes de seguridad y zapato cerrado en el
laboratorio.
ART. 2.- Se deberán conservar limpias las instalaciones (en especial las campanas de extracción,
canaletas y tarjas de las mesas de laboratorio), el material y el equipo de trabajo (incluyendo las
balanzas analíticas) al inicio y al final de cada sesión experimental.

ART. 3.- Se deberá guardar orden y disciplina dentro del laboratorio, durante la sesión experimental
deberán colocar las mochilas en los anaqueles que están indicados, no jugar, no correr.

ART. 4.- Queda estrictamente prohibido fumar, consumir alimentos y bebidas dentro del laboratorio
y en el inter del mismo, ya que muchas de las sustancias químicas que se emplean son corrosivas
y/o tóxicas.

ART. 5.- Es importante que antes de trabajar, el estudiante conozca las características de las
sustancias químicas que va a utilizar para que pueda manipularlas adecuadamente (se deberá
apoyar en la consulta de las hojas de seguridad).

ART. 6.- Para la extracción de reactivos líquidos, se deberán emplear perillas de hule y nunca
succionar con la boca.

ART. 7.- Los reactivos químicos no deberán ser manipulados directamente, se deberán usar
implementos como pipetas, espátulas, cucharas, etc.

ART. 8.- Después de manipular sustancias químicas es necesario lavarse las manos con agua y
jabón.

V
ART. 9.- Si se utilizan parrillas o cualquier otro equipo, se deberá estar atento en su manejo para
evitar un accidente.

ART. 10.- En caso de ingestión, derrame o inhalación de algún reactivo por parte de algún
estudiante, deberá ser notificado al asesor del grupo, el cual tomará las acciones pertinentes,
previa consulta de las hojas de seguridad.

ART. 11.- Al término de la sesión experimental, el asesor de grupo, deberá regresar los reactivos
al inter-laboratorio y las disoluciones empleadas a su lugar de resguardo correctamente
etiquetadas con la etiqueta del Sistema de Gestión de Calidad.

ART. 12.- Todas las personas que elaboren disoluciones y/o generen residuos deben etiquetar
correctamente los frascos que se utilicen para este propósito utilizando la etiqueta del Sistema de
Gestión de Calidad (solicitar al laboratorista) y colocarse en los lugares asignados.

ART. 13.- Los residuos de cada experimento deberán tratarse y eliminarse adecuadamente por los
alumnos, previa consulta del diagrama ecológico incluido en el manual de prácticas y con el apoyo
del asesor. Los ácidos y bases deben ser tratados sin demora.

ART. 14.- Cuando el residuo no pueda ser eliminado, el alumno deberá resguardarlo, en un
contenedor, debidamente etiquetado y cerrado, y colocarlo en el anaquel destinado para ello.

ART. 15.- Antes de iniciar las actividades experimentales se le solicitará al laboratorista el material
y equipo necesarios, para ello, una persona responsable del equipo dejará su credencial
(únicamente de la UNAM) en depósito y firmará un vale por el material y equipo recibidos. En caso
de que existiera un defecto en el material o equipo recibido, éste deberá ser anotado en el vale.

ART. 16.- Es responsabilidad del alumno revisar el estado en que recibe el material, ya que al
término de la sesión experimental lo debe regresar en las mismas condiciones en las que lo recibió
y perfectamente limpio.

ART. 17.- En caso de extravío o daño del material o equipo de laboratorio, se resguardará el vale
de solicitud de material y la credencial del estudiante responsable del daño o extravío hasta su
reposición con iguales características.

ART. 18.- Los alumnos que adeuden material de laboratorio, deberán reponerlo a la mayor
brevedad posible o a más tardar el último día de realización de prácticas, de lo contrario los
deudores serán reportados al Departamento de Servicios Escolares.

ART. 19.- El número máximo de alumnos que podrán permanecer en el cuarto de balanzas (L-101-
102) será el mismo que el número de balanzas disponibles.

ART. 20.- Cuando sea asignada, una gaveta a los alumnos y por razones de olvido o pérdida de
la llave, queda prohibido forzarla. En tal situación los alumnos deberán solicitar su apertura, por
escrito, al responsable del laboratorio o Jefe de Sección, previa autorización del profesor del grupo.
Queda prohibido guardar residuos en las gavetas.

VI
ART. 21.- La gaveta podrá usarse hasta la semana 15 del semestre por lo que, el grupo de
estudiantes deberán desocuparla a más tardar en la semana 16.

ART. 22.- No se permitirá el uso de balanzas y equipos a personas ajenas al laboratorio o fuera
del horario de su sesión experimental. Si una persona ajena al laboratorio solicita reactivos, equipo
o materiales debe acudir con el Jefe de Sección con un oficio de solicitud.

ART. 23.- Queda prohibida la entrada al Inter del laboratorio y al Laboratorio de la Sección a toda
persona ajena (incluyendo niños).

ART. 24.- Usar correctamente los equipos, consultando las guías de uso y registrando en las
bitácoras, así como dejarlos limpios al terminar de usarlos.

ART. 25.- Si un equipo está descompuesto, se debe reportar en el formato FITE-CQ-DEX-03-02


que se encuentra al lado del Inter especificando lo que se observa del problema y se debe entregar
al laboratorista.

ART. 26.- Si se tiene alguna queja al incumplimiento de la seguridad en los laboratorios,


manifestarla en el buzón de quejas y sugerencias.

VII
PROTECCION PERSONAL

CUANDO EMPIECES A TRABAJAR EN EL LABORATORIO: Te indicarán cómo se

deben utilizar los instrumentos que vayas a usar. Además, deberás saber dónde se

encuentran los extintores, el botiquín, la ducha, los aparatos lavaojos, y las salidas de

emergencia.

ANTES DE EMPEZAR UNA REACCIÓN: Deberás conocer la peligrosidad de los reactivos

que vayas a usar, así como de los productos que se obtienen de la propia reacción

(toxicidad, inflamabilidad, riesgo de explosión, riesgos biológicos) y tomarás las

precauciones apropiadas (por ejemplo, trabajar en la campana extractora). En cualquier

caso.

AL TERMINAR UNA SESIÓN: Tendrás que tratar los residuos para eliminar su peligrosidad

o los almacenarás adecuadamente clasificados y etiquetados hasta que se retiren. SE

DEBEN DEJAR LAS MESAS DE TRABAJO LIMPIAS.

AL ABANDONAR EL LABORATORIO: Te asegurarás de que no queda encendida la

campana extractora y ninguna fuente de peligro: gases, agitadores, calentadores, etc.

DISEÑO EXPERIMENTAL

Recomendaciones para realizar el diseño experimental:

Objetivos: Proponer experimentos fundamentados química e instrumentalmente para

cuantificar una sustancia de interés en su área y para esto debe:

• Estructurar y justificarlo en base a reacciones químicas conocidas de uso común.

• Consultar la metodología propuesta con el asesor con la finalidad de mejorarlo.

• Aplicar el diseño para la cuantificación de una muestra real.

• Contrastar los resultados con el diseño propuesto a fin de identificar fuentes de error

tanto de diseño teórico como experimental.

VIII
Para poder evaluar adecuadamente el desarrollo de los estudiantes en el diseño de

experimentos; se debe elaborar un formato que debe considerarse como una guía para

presentarlo a revisión con el asesor en la fecha señalada en el calendario

El formato de diseño experimental debe contener al menos los siguientes puntos:

• Los objetivos que se persiguen con la experimentación.

• Listado de actividades generales. Desglosadas en cada parte (material y

reactivos, preparación de soluciones, procedimiento experimental, etc.)

• Programa desglosado por cada actividad general.

• distribución equitativa del trabajo para cada integrante del equipo de trabajo.

• Tratamiento que darán a los resultados experimentales después de obtenerlos

mediante un análisis estadístico.

• Referencias consultadas

El informe de Actividades Final (después de efectuar la experimentación

correspondiente) debe incluir los puntos anteriores así como el análisis de resultados y los

cálculos de contenido de sustancia en la muestra.

Por último, es necesario hacer una recomendación. La naturaleza misma del diseño

experimental es dinámica ya que durante su desarrollo se requiere una retroalimentación

continua y consciente para afinar los aspectos del diseño que se han contemplado. El

hecho de que en esta asignatura se presente una guía para presentarlo a revisión no niega

su dinámica intrínseca, esto es, aunque durante su elaboración cada estudiante debe

retroalimentarse con la información que poco a poco va obteniendo para ir modificando

cada aspecto del diseño en forma lógica y armónica.

IX
Los alumnos deben

1) Cubrir las prácticas que comprende este manual.

2) Elaborar una bitácora; la cual debe contener nombre de la práctica o sesión de

trabajo, fecha, todos los cálculos y las mediciones (pesadas, preparación de

disoluciones, cambios de procedimiento, observaciones, etc.) resultados (medidas

de propiedad, gráficas), análisis de resultados (cálculos de contenido,

identificaciones, reacciones efectuadas) conclusiones y referencias consultadas.

3) En caso de error NO BORRAR NADA solo cruzar con una línea y escribir lo

corregido abajo o a un lado.

NOTA: Es requisito contar con:

ü El 80% de asistencia al curso (10 minutos de tolerancia). La falta anula la

calificación del reporte correspondiente.

ü Entrega puntual y en tiempo de los productos a evaluar (IT, ID, CP, etc.)

X
ACTIVIDADES CONTEMPLADAS PARA LA SEMANA No.1

1º. Entregar tira de materias para que se lleve a cabo su registre en el folder de

calificaciones.

2º. El profesor expondrá una introducción sobre el curso de laboratorio, explicando las

actividades por realizar, el reglamento y la forma de evaluación (ver apartado

evaluación) e Informará sobre el Sistema de Gestión de Calidad (SGC).

3º. Se incluirán las fechas en las actividades calendarizadas en el manual de prácticas.

4º. Se le dará formato a la hoja de inscripción (anotar el nombre de las prácticas).

ENTREGARLA A LOS PROFESORES AL FINALIZAR SU LLENADO.

5º. Se formarán equipos (4-5 personas) de trabajo entre los alumnos del grupo.

6º. Se les solicitará el siguiente material a los estudiantes, el cual estará bajo su propiedad

en gaveta por grupo que retirarán una vez concluido el curso:

INDIVIDUAL POR EQUIPO (3-4 POR GRUPO


ESTUDIANTES)
Bata blanca y lentes de Bitácora de trabajo 1 candado con 3
protección llaves
Libreta y Manual de prácticas 2 frascos de plástico de 100 mL Servitoallas
8 frascos de plástico de 10 mL
1 Marcador o etiquetas Perilla de hule o propipeta Detergente líquido
pequeñas Franela y escobillón
1 barra magnética Muestras por analizar en
cada práctica (ver manual)
de acuerdo a las fechas
calendarizadas.

XI
ACTIVIDADES CONTEMPLADAS PARA LA SEMANA No.1 (continuación)

7º Se recordará el uso y manejo del material y reactivos que se utilizarán durante el curso

de laboratorio realizando cálculos y pesadas en la balanza Analítica de algunas

soluciones de las prácticas que durante el semestre se utilizarán.

8º Recomendar a alumnos con énfasis a leer antes de cada práctica la introducción y

parte experimental debido a que el cuestionario previo es individual y se aplica antes de

iniciar la sesión experimental.

9º El profesor organizará y repartirá el tratamiento, a los equipos de trabajo, de los

residuos generados. ESTO SE REALIZARÁ EN CADA UNA DE LAS PRÁCTICAS.

10º Se avisará a los alumnos dónde y cuándo pueden encontrar a sus profesores para

resolver dudas de los informes o sobre los protocolos de las prácticas.

11º Se indicará a los alumnos la dirección de la prágina de internet en donde deben

resolver el examen diagnóstico. ASEGURARSE QUE AL ENVIAR SUS RESPUESTAS

APAREZCA LA PÁGINA DE CONFIRMACIÓN.

NOTA AL PROFESOR: PROPORCIONAR A LOS ALUMNOS LA FORMA EN LA

QUE ELLOS SE PODRÁN COMUNICAR FUERA DEL HORARIO DE CLASES

EN CASO DE QUE TENGAN DUDAS (CORREO, BLOG, FACEBOOK,

TELÉFONO, ETC.)

XII
PRÁCTICA No. 1
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE AZUL DE TIMOL EN UNA MUESTRA DE
RESIDUOS MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA A
pH ALCALINO.

I. OBJETIVOS

• Cuantificar azul de timol en una muestra mediante una Curva de Calibración.

• Evaluar la calidad y validez de los resultados experimentales mediante algunos

parámetros estadísticos.

II. INTRODUCCIÓN

El uso de curvas de calibración para la cuantificación de analitos es un recurso de gran

importancia en la química analítica, sin embargo, existen varios tipos de curvas

dependiendo de las características particulares del problema a tratar como ejemplo

tenemos a las curvas de calibración, adiciones patrón, uso de estándar interno, valoración,

etc.

El método o curva de calibración se utiliza particularmente para analizar mezclas sencillas,

cuando no existen interferencias físicas o químicas entre la matriz y el analito de interés en

la muestra problema, en general la respuesta analítica es debida exclusivamente a éste.

El método consiste en preparar una solución mediante pesada directa de un patrón

primario, con esta solución patrón se preparan una serie de soluciones estándar que

cumplan con las siguientes características:

a) La concentración del analito se incremente proporcionalmente (por ejemplo 2, 4, 6,

8, 10 ppm).

b) Se deben preparar al menos 5 sistemas (de diferentes concentraciones).

c) Los incrementos de concentración entre los sistemas se recomienda que sean

constantes.

d) Que la matriz donde se preparan los estándares sea semejante a la del problema.

1
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

Una vez preparados estos estándares, se procede a medir la propiedad o respuesta de los

sistemas en el instrumento adecuado y se obtienen una serie de valores con los que se

construye el gráfico de P (propiedad o respuesta) en función de Cs (concentración

estándar). La Figura 1, muestra un ejemplo donde el eje “x” corresponde a la concentración

y en el eje “y” la respuesta o propiedad medida de cada estándar. Se observa que existe

una ecuación matemática que relaciona el comportamiento entre las dos variables. En la

mayoría de los casos se ajusta a la ecuación de una recta (y=mX+b) y mediante una

regresión (mínimos cuadrados) se obtiene la dispersión mínima entre los datos y su

ecuación.

2.00

1.80

1.60

1.40

1.20
Propiedad

1.00

0.80

0.60

0.40

0.20

0.00
0 0.0002 0.0004 0.0006 0.0008 0.001 0.0012
Cstd

Figura 1. Ejemplo de una curva de calibración

Por último se realiza la lectura directa o de una dilución apropiada para la cuantificación del

analito problema (punto azul), que posteriormente se interpola en la gráfica y se obtiene la

concentración correspondiente, también se obtener mediante la resolución de la ecuación

obtenida de la regresión. La validez y calidad del resultado está relacionado con la

dispersión de los datos obtenidos, donde una mayor dispersión implica menor precisión.

2
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

Para evaluar la dispersión y por lo tanto, la calidad del valor que se reportará, se hace uso

de los parámetros estadísticos como: la desviación estándar o el coeficiente de variación,

entre otros.

Finalmente, para medir la respuesta de la propiedad P = Absorbancia, en este caso se

utilizará espectrofotometría de ultravioleta-visible (UV/Vis), una técnica que se revisará más

a fondo posteriormente y donde la relación es A= K*C

III. EQUIPO(S), REACTIVO(S) Y MATERIAL(ES)

Material y Equipo Reactivos y Soluciones

6 matraces volumétricos de 10 mL -Estándar de azul de timol 40 ppm

1 vaso de precipitados de 250 mL

12 Tubos de ensaye medianos con gradilla

3 vasos de precipitados de 50 mL -Muestra problema de azul de timol

2 Pipetas volumétrica de 1, 2, 3, 4 y 5 mL

dos propipetas
-NaOH 0.01 M
1 piseta y 1 barilla de vidrio
- agua destilada
1 espectrofotómetro de luz visible con celdas

de vidrio o plástico (consultar guía de usuario)

1 frasco para almacenar residuos (por grupo)

Las soluciones se encontrarán preparadas en el anaquel de la asignatura

3
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Tabla 1. Preparación de la curva de Calibración y problema (por duplicado)


Sistemas BCO 1 2 3 4 5 P
diluido1

Soln. de NaOH 0.01 M 2 2 2 2 2 2 2


Soln. Problema (mL) 0 0 0 0 0 0 1
Solución patrón de azul de timol aprox. 0 1 2 3 4 5 0
40 ppm (mL)
Aforo con agua destilada 10 10 10 10 10 10 10
Solución de NaOH R-1
Reunir los sistemas del 1-6 (R-2)

Tabla 2.-Prueba de Adecuabilidad del sistema.


Sistema 1 2 3 4 5 6

Soln. de NaOH 0.01 M 2 2 2 2 2 2


mL de Solución patrón de azul 3 3 3 3 3 3
de timol aprox. 40 ppm
Aforo con agua destilada 10 10 10 10 10 10

2. Lectura de la propiedad para cada sistema utilizando el espectrofotómetro

2.1 Calibración del instrumento

Realizar la calibración del instrumento de acuerdo a instructivo anexo y siga las

indicaciones de los profesores.

2.2 Obtención del espectro de absorción. Determinación de la longitud de onda

óptima (l)

Con el sistema 5, que es el más concentrado en relación al analito de interés (azul de

timol), tomar las lecturas del espectrofotómetro de absorbancia (Abs) y porcentaje de

transmitancia (%T) en el intervalo de 500 a 700 nm con incrementos de 10 nm.

(Nota: por cada cambio de l se debe calibrar nuevamente el equipo con la disolución

blanco).

4
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

Con los datos obtenidos se anotan en la Tabla 3 y construya la gráfica 1. Por último,

indique la longitud de onda óptima que seleccionaría para cuantificar el azul de timol.

2.3 Obtención de la curva de calibración a la longitud de onda óptima.

• A la l óptima calibre el espectrofotómetro como se le indicó anteriormente.

• Una vez calibrado el equipo obtenga las lecturas de todos los sistemas de la tabla

1, inicie con él sistema más diluido hasta terminar con el más concentrado,

enjuagando la celda con el sistema siguiente.

• Llene la tabla 4 y obtenga los valores promedio del factor de respuesta, la desviación

estándar y el coeficiente de variación (CV).

• Concluya sobre la respuesta obtenida.

• Calcule la concentración de Azul de timol de cada sistema estándar y grafique

(Gráfica 2) estos datos en relación con el valor promedio de la absorbancia (Aprom),

obtenga la regresión lineal y concluya sobre la linealidad de la gráfica.

2.4 Determinación de la concentración de Azul de Timol Problema.

Determine la concentración de la dilución de la solución problema por interpolación en la

gráfica (recuerde que se efectúa una dilución).

2.5 Prueba de adecuabilidad del sistema.

Permite verificar que el sistema de medición funciona apropiadamente,

independientemente de las condiciones ambientales)

• Realice las lecturas de absorbancia de las disoluciones preparadas con las

condiciones de la tabla 2.

• Coloque los resultados en la tabla 5.

5
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

V. ANALISIS DE RESULTADOS

Tabla 4. Datos experimentales para el análisis estadístico de la curva de calibración


Sistema Concentración Azul A1 A2 Aprom
K = Aprom/ C
de Timol (C)
1
2
3
4
5
Problema desconocida
Kprom
STD
% RSD
Kprom = Factor de Respuesta promedio (constante de proporcionalidad)
Si la respuesta es lineal el factor de respuesta será constante cualesquiera que sean los valores de A y C
STD = Desviación estándar (por sus siglas en inglés)
% RSD = Porcentaje de desviación estándar relativa* (por sus siglas en inglés) o coeficiente de variación, un
valora bajo (menor al 2%) de este permite afirmar casi con certeza que el gráfico A= f(C) es una recta.

6
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

1.4

1.2

Absorbancia
0.8

0.6

0.4

0.2

0
[Azul timol]/M

Gráfica 2. Absorbancia promedio en función de la concentración de azul de timol

Tabla 5.- Resultados de la prueba deadecuabilidad del sistema

Sistema 1 2 3 4 5 6 Aprom STD %RSD


Absorbancia

%RSD un valora bajo (menor al 2%) de este permite afirmar con certeza que el sistema de medición funciona
apropiadamente a pesar de variaciones ambientales.

VI. INFORME DE TRABAJO

ESQUEMA Y PUNTOS MÍNIMOS A EVALUAR PARA LA REALIZACIÓN DEL INFORME

DE TRABAJO.

1.- Datos Generales

I) CARÁTULA. Incluir en este orden: Nombre de la Universidad, nombre de la Facultad,

nombre de la Sección, nombre de la asignatura comenzando con “Laboratorio de…”,

Número y nombre de la práctica, Número de equipo, Nombre de los integrantes., solamente

de aquellos que participaron en su realización, se dará por entendido que los que no

aparezcan no recibirán calificación correspondiente a esa práctica. También es importante

recordar que aquellas personas que faltaron a la parte experimental de la práctica no

tendrán calificación de reporte y por ende no se colocará su nombre, a menos que haya

7
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

repuesto la práctica en otro grupo bajo autorización de los profesores y su informe lo

realizará de manera individual), Nombre de los profesores (incluir grado: QFB, Q, M en C,

Dr., etc.), Fecha de realización de la práctica y Fecha de entrega de reporte.

II) NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA.

III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la práctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el ¿Qué?, ¿Cómo? y ¿Para qué?.

IV) INTRODUCCIÓN. Incluir solamente aplicaciones de la Técnica instrumental en las


diferentes áreas que contempla su carrera, incluyendo ejemplos (recordar que deben citar
las referencias).

V) DIAGRAMA DE FLUJO. Incluir:


v Preparación del STD; indicando los volúmenes, masas y/o concentraciones reales
que se emplearon en caso de una modificación a la parte experimental reportada
en el Manual. Si se emplean reactivos comerciales incluir la pureza y densidad (en
caso de reactivos líquidos).
v Preparación de la muestra; indicando los posibles cambios realizados. Mencionar
la marca y presentación de la muestra empleada en caso que el alumno la halla
proporcionado.
v Preparación de los sistemas de la curva de calibración; en forma de tabla
incluyendo número y nombre. Especificar la concentración real de la solución de
NaOH que se empleó.
v Calibración del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo, puede incluir
imágenes o dibujos y será con base a la explicación del profesor no a lo reportado
en el Manual.
v Realización del espectro de absorción; mismas consideraciones del punto anterior.
v Lectura de los sistemas de calibración; mismas consideraciones del punto anterior.
v Disposición de residuos; mencionar cómo se dispusieron los residuos en la sesión
experimental.

8
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

2) RESULTADOS. Incluir:
ü Tabla No. 3.- Datos experimentales del espectro de absorción, completa.
ü Gráfico del espectro de absorción indicando número y nombre CORRECTO (el
nombre correcto de un espectro de absorción incluye el nombre del analito, la
composición de la matriz, así como las condiciones de amortiguamiento impuestas,
pH por ejemplo, y la concentración del analito, la cual es bien conocida ya que se
emplea un sistema de la curva de calibración para su realización), considerar que
se incluirán 2 gráficos, uno en función de Absorbancia y otro en % Transmitancia.
ü Incluir tabla: con número y nombre.
No. Sistema Concentración (unidades) Absorbancia promedio
ü Gráfico de la curva de calibración indicando número y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del gráfico de una curva de calibración se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
ü Además, debe incluir forzosamente: Ecuación de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la ordenada al origen)
ü No indicar la propiedad y la concentración del analito como “x” y “y”, y también debe
incluir Coeficiente de determinación (r2). Recordar que se tienen que incluir 2
gráficos, uno con unidades de concentración Molar y otro con unidades de
concentración en ppm, cada uno con las especificaciones citadas anteriormente.
ü Incluir tabla: con número y nombre.

Muestra empleada (nombre comercial)


Presentación
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete (enfocándose sólo al analito que se cuantificó experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cápsula, por
100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete

3) ANÁLISIS DE RESULTADOS. Incluir:


ü Tabla No. 4.- Datos experimentales para el análisis estadístico, adicionando una
columna final:
Sistema [analito]UNIDADES Abs1 Abs2 AbsPROM STD %RSD Intervalo de
confianza

9
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

ü Realizar el análisis e interpretación correspondiente de éstos datos, finalizando con


la justificación del valor del coeficiente de determinación y la validez de los
resultados de cuantificación.
ü Analizar los criterios químicos que se emplearon para elegir la λ óptima en los 2
espectros de absorción.
ü Justificar porqué se consideró ese rango de nm para realizar el barrido.
ü Analizar el efecto de la matriz (enfocándose en el pH) en la determinación
ESPECTROFOTOMÉTRICA del azul de timol, emplee los valores del pKa del
analito para justificar su análisis.
ü Analizar la relación de las variables involucradas y contrastarlas con la Ley de
Lambert & Beer.
ü Calcular el Coeficiente de absortividad molar, incluyendo unidades correctas, la
manera de cómo se calculó con ambas gráficas y su interpretación.
ü Incluir los cálculos de cuantificación, en el siguiente orden: Cálculo de la
concentración del STD (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo en
Preparación del STD), cálculo de la concentración de los sistemas de la curva,
Interpolación de la propiedad de la muestra en la ecuación de la curva, regresión a
las diluciones de la muestra (deben coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Preparación de la muestra) y cambio de unidades a las similares al marbete así
como el % de principio activo; esto se debe reportar con los datos de ambas gráficas,
al final discutir sobre los resultados obtenidos en ambas gráficas.
ü Con base al % de principio activo (recordar que el comparativo entre el resultado
experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles errores que
condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que cometió y las acciones
preventivas que sugieres para la mejoría.

4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).

5) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Deberán ser citadas ya sea en la introducción o en


el análisis de resultados en caso que se hallan empleado.

10
Práctica No. 1. Curva de calibración espectrofotométrica

DATOS
Peso molecular de Azul de Timol = 466.6 g/mol.
pKa(s) de Azul de Timol = 2.0, 8.7 (rojo, amarillo, azul)

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/bc/Thymolblau_skeletal.png

VIII. ORIENTACIONES PARA EL TRATAMIENTO DE LOS REACTIVOS UTILIZADOS

Nota. Mantener al azul de timol alejado de los siguientes reactivos:


Agentes Oxidantes fuertes, como Percloratos, Peróxidos y Permanganatos (reacción
rápida y violenta con riesgo de incendio y/o explosión).
Agentes Reductores fuertes, como Fosfuros, Estaño II Cloruro e Hidruros Metálicos
(reacción violenta y vigorosa)

11
PRÁCTICA No. 2
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE ÁCIDO ASCÓRBICO (VITAMINA C) EN
TABLETAS EFERVESCENTES MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN
INDIRECTA ESPECTROFOTOMÉTRICA BAJO CONDICIONES DE
AMORTIGUAMIENTO”.

I.-OBJETIVOS:
• Cuantificar ácido ascórbico en tabletas efervescentes mediante una curva de
calibración indirecta bajo condiciones químicas optimizadas.
• Identificar la sustancia que da la absorbancia al pH de trabajo, mediante su espectro
de absorción y la reacción química establecida.
• Calcular el coeficiente de absortividad a la longitud de onda seleccionada.

II.- INTRODUCCIÓN
Los principios de preparación y trazo de una curva de calibración ya fueron estudiados en
prácticas anteriores, donde se considera que la respuesta del instrumento es lineal respecto
a la concentración de la sustancia a cuantificar, sin embargo debe considerarse que si la
curva es indirecta existe una o varias reacciones efectuadas en los sistemas de
preparación, dado que la sustancia de interés da señal muy pobre o no da señal, este
reactivo que genera la reacción debe encontrarse en exceso , considerando el siguiente
estado de equilibrio de manera general:

aX bY → cZ Keq’ > 1

inicio Vst Cst

agrega VyCy

equilibrio aε VyCy-b/a VstCst c/a VstCst

Cuando la propiedad la da Y el modelo matemático que describe la respuesta gráfica es:

P=KY Y
considerando el estado de equilibrio anterior entonces

12
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

Donde Vst, Vy, Vaforo, representan los volúmenes de estándar, reactivo Y y de aforo

respectivamente. Cst , Cy corresponde a las concentraciones molares del estándar (stock) y

Y agregado para generar la reacción.

Es importante señalar que el volumen de Y en todos los sistemas es constante y el que

cambia es de X.

Por lo que se puede graficar P=f (Vst Cst / V aforo), obteniéndose una función de pendiente

igual a -Kyb/a y ordenada al origen igual a KyVyCy/Vaforo

En esta práctica se propone la cuantificación indirecta de ácido ascórbico en una forma


farmacéutica, siguiendo las variaciones de una especie colorida (Y).

III. EQUIPO(S), REACTIVO(S) Y MATERIAL(ES)

MATERIAL POR EQUIPO REACTIVOS

9 tubos de ensaye con gradilla Agua destilada


9 matraces volumétricos de 10 mL Ácido ascórbico estándar
6 vasos de precipitados de 50 mL Tabletas efervescentes (leer el marbete y
2 pipetas volumétricas de 0.5 1, 2, 3, 4, 5 mL anotar el contenido de ácido ascórbico)
1 probeta de 10 mL 2,6 diclorofenol indofenol
1 matraz volumétrico de 50 mL (por grupo)
1 matraz volumétrico de 100 mL (por grupo)
Buffer Ácido acético /Acetato 0.01 M pH=4.5
1 piseta
Espátula y mortero con pistilo
1 agitador magnético
1 embudo con papel filtro
Un espectrofotómetro con celdas.

13
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

IV.-PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Preparación de soluciones
a) Buffer de acetatos 0.01 M pH = 4.5 (ya está preparado en el anaquel)
b) Solución estándar de ácido ascórbico: Se pesan 20 mg de ácido ascórbico en un
vaso de precipitados de 50 mL se disuelven en aproximadamente 10 mL de Buffer
de acetatos pH= 4.5 y aforan a 10 mL con agua destilada (solución A), de esta
solución se toman 2 mL y mezclan con 10 mL de Buffer pH=4.5 y se aforan a 100
mL con agua destilada (Sol. B stock).
c) Solución de 2,6 diclorofenolindofenol (DFI): Pesar 25 mg del reactivo en un vaso
de precipitados, adicionar 10 mL de buffer pH=4.5 agitar y trasvasar a un matraz de
50 mL y aforar con agua destilada.
d) Solución problema: Se pesan 3 tabletas (al menos) de una en una para obtener el
peso promedio y se anota en la bitácora cada peso, se pulverizan finamente en un
mortero. Se pesan 20 mg de polvo de tabletas finamente pulverizadas, se disuelven
en aproximadamente 5 mL de agua destilada con agitación magnética y se afora a
10 mL con agua destilada (Disolución 1). A 5 mL del buffer pH = 4.5 agregar 2 mL
de la Disolución 1* y aforar a 10 mL con agua destilada (Disolución Problema).

* si la formulación es de 1.0 g de ascórbico se diluyen como se menciona, si es de 2.0 g de


ascórbico se agregan 1 mL de soln. Problema.

2. Preparación de la curva de calibración

Tabla 1 Preparación de Sistemas (curva de calibración y problema)


Sistema 0 1 2 3 4 5 6 P1 P2
Soln. Buffer de acetatos pH=4.5 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Soln. B (stock) de ascórbico 0 0 1 2 3 4 5 0 0
Soln. de 2,6 diclorofenolindofenol 0 1 1 1 1 1 1 1 1
Disolución problema 0 0 0 0 0 0 0 0.5 1
Aforo con agua destilada 10 10 10 10 10 10 10 10 10
R-3 Reunir los residuos de todos los sistemas

3 Calibración del espectrofotómetro: El procedimiento de calibración se realizará de


acuerdo con el instructivo de cada aparato utilizando al sistema cero como blanco
reactivo.

14
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

4 Determinación de l (longitud de onda) de trabajo: Identifique cual es el sistema más


concentrado en 2,6 diclorofenolindofenol y realice el espectro de absorción, el cuál
obtendrá al variar la l en el espectrofotómetro que en este caso en particular será de
560 a 460 nm a intervalos de 10 nm (para cada cambio de l se debe ajustar el
espectrofotómetro con el blanco nuevamente).
5 Registre los datos de absorbancia y % de Transmitancia en la tabla No. 2,
posteriormente se realizará el gráfico correspondiente.
6 Obtenga la curva de calibración: una vez que se ha elegido la longitud de onda, lea
los sistemas de la curva de calibración, registre los datos en la tabla 3 y grafique.
7 Determine la concentración de la dilución de la solución problema por interpolación en

la gráfica (recuerde que se efectúa una dilución).

V. RESULTADOS EXPERIMENTALES

Tabla 2- Datos experimentales del espectro de absorción.


Longitud de onda (nm) 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560
Absorbancia

% Transmitancia

1.4

1.2

1
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud onda /nm

Gráfica 1.- Espectro de Absorción A= f( Longitud de onda )

15
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

Tabla 3- . Curva de Calibración Indirecta


Sistema 1 2 3 4 5 6 7
Concentración M de
Ascórbico estándar
Absorbancia

1.4

1.2

1
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
[Ácido Ascórbico]/M

Grafico 2.- Curva de Calibración Indirecta de Ac. Ascórbico A = f([AA]/M)

VI. INFORME DE TRABAJO

ESQUEMA Y PUNTOS MÍNIMOS A EVALUAR PARA LA REALIZACIÓN DEL INFORME


DE TRABAJO.

1.- Datos Generales


I) CARÁTULA. Incluir en éste orden: Nombre de la Universidad, nombre de la Facultad,
nombre de la Sección, nombre de la asignatura comenzando con “Laboratorio de…”,
Número y nombre de la práctica, Número de equipo, Nombre de los integrantes (solamente
de aquellos que participaron en su realización, se dará por entendido que los que no

16
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

aparezcan no recibirán calificación correspondiente a esa práctica. También es importante


recordar que aquellas personas que faltaron a la parte experimental de la práctica no
tendrán calificación de reporte y por ende no se colocará su nombre, a menos que haya
repuesto la práctica en otro grupo bajo autorización de los profesores y su informe lo
realizará de manera individual), Nombre de los profesores (incluir grado: QFB, Q, M en C,
Dr., etc.), Fecha de realización de la práctica y Fecha de entrega de reporte.

II) NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA.

III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la práctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el ¿Qué?, ¿Cómo? y ¿Para qué?.

VI) INTRODUCCIÓN. Incluir solamente aplicaciones del Método de cuantificación en las


diferentes áreas que contempla su carrera, incluyendo ejemplos (recordar que deben citar
las referencias).

V) DIAGRAMA DE FLUJO. Incluir:


ü Preparación del STD; indicando los volúmenes, masas y/o concentraciones
reales que se emplearon en caso de una modificación a la parte experimental
reportada en el Manual. Si se emplean reactivos comerciales incluir la pureza y
densidad (en caso de reactivos líquidos).
ü Preparación de la muestra; indicando los posibles cambios realizados. Mencionar
la marca, presentación y gramaje de la muestra empleada en caso que el alumno
la halla proporcionado.
ü Preparación de los sistemas de la curva de calibración; en forma de tabla
incluyendo número y nombre. En el caso del buffer especificar la concentración y
pH reales con las que se trabajaron, así como de la solución DFI.
ü Calibración del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo, puede incluir
imágenes o dibujos y será con base a la explicación del profesor no a lo reportado
en el Manual.
ü Realización del espectro de absorción; mismas consideraciones del punto
anterior.

17
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

ü Lectura de los sistemas de calibración; mismas consideraciones del punto


anterior.
ü Disposición de residuos; mencionar cómo se dispusieron los residuos en la sesión
experimental.

2) RESULTADOS. Incluir:
ü Tabla No. 2.- Datos experimentales del espectro de absorción, completa.
ü Gráfico del espectro de absorción indicando número y nombre CORRECTO (el
nombre correcto de un espectro de absorción incluye el nombre del analito, la
composición de la matriz, así como las condiciones de amortiguamiento
impuestas y la concentración del analito, la cual es bien conocida ya que se
emplea un sistema de la curva de calibración para su realización), considerar que
se incluirán 2 gráficos, uno en función de Absorbancia y otro en % Transmitancia.
ü Tabla No. 3.- Datos experimentales de la Curva de calibración.
ü Gráfico de la curva de calibración indicando número y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del gráfico de una curva de calibración se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
ü Además, debe incluir forzosamente: Ecuación de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la ordenada
al origen)
No indicar la propiedad y la concentración del analito como “X” y “Y”, y también
debe incluir Coeficiente de determinación (r2).
ü Incluir tabla: con número y nombre.

Muestra empleada (nombre comercial)


Presentación
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete (enfocándose sólo al analito que se cuantificó experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cápsula, por 100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete

18
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

3) ANÁLISIS DE RESULTADOS. Incluir:

ü Realizar el análisis e interpretación correspondiente al valor del coeficiente de


determinación para la validez de los resultados de cuantificación.
ü Analizar los criterios químicos que se emplearon para elegir la λ óptima en los 2
espectros de absorción. Además justificar porqué se consideró ese rango de nm
para realizar el barrido.
ü Identificar y calcular las condiciones de amortiguamiento impuestas en los
sistemas de la curva; además, proponer la reacción representativa llevada a cabo
entre el ácido ascórbico y el DFI, así como el cálculo de la Keq´ considerando
que en los equilibrios redox el cálculo de la Keq´ no es mediante Ley de acción
de masas, sino mediante la fórmula general considerando los E°´
ü Analizar la relación de las variables involucradas y contrastarlas con la Ley de
Lambert & Beer.
ü Calcular el Coeficiente de absortividad molar, incluyendo unidades correctas, la
manera de cómo se calculó especificando de que analito corresponde y su
interpretación.
ü Incluir los cálculos de cuantificación, en el siguiente orden: Cálculo de la
concentración del STD (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Preparación del STD), cálculo de la concentración de los sistemas de la curva,
Interpolación de la propiedad de la muestra en la ecuación de la curva, regresión
a las diluciones de la muestra (deben coincidir con lo reportado en el diagrama
de flujo en Preparación de la muestra) y cambio de unidades a las similares al
marbete así como el % de principio activo; esto se debe reportar con los datos de
ambos sistemas problema (6 y 7), al final discutir sobre los resultados obtenidos
en ambos sistemas (6 y 7).
ü Con base al % de principio activo (recordar que el comparativo entre el resultado
experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles errores que
condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que cometió y las
acciones preventivas que sugieres para la mejoría.

4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).

19
Práctica No. 2. Curva de calibración indirecta

5) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Deberán ser citadas ya sea en la introducción o en


el análisis de resultados en caso que se hallan empleado.

DATOS
Ácido ascórbico(C6H8O6) pKa’s = 4.05, 7.25
2,6 diclorofenolindofenol (C12H7Cl2NO2) pKa= 5.758 (forma ácida roja, básica azul)
C6H7O6- ® C6H6O6 + H+ + 2e- Eo´ = 0.13 V (pH=4.5)
C12H7Cl2NO2 ® C12H7Cl2NO22- Eo´ = 0.43 V (pH=4.5)
(roja) (Incolora)

VII. ORIENTACIONES PARA EL TRATAMIENTO Y DISPOSICIÓN DE RESIDUOS


El ácido acético glacial debe trabajarse en la campana extractora utilizando una perilla y
nunca cerca de algún mechero, añadir siempre el ácido al agua, tener precaución al
preparar la mezcla debido al desprendimiento de calor. La inhalación de sus vapores es
altamente tóxica produce trastornos en las vías respiratorias. Cualquier contacto directo con
la piel u ojos debe de lavarse con abundante agua.

2,6-diclorofenolindofenol
(mezclado con ascórbico
a pH ácido)

R-3

Neutralizar con bicarbonato

Almacenar para posterior


tratamiento

20
PRÁCTICA No. 3
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE ZINC EN UN MULTIVITAMÍNICO MEDIANTE
UNA CURVA DE CALIBRACIÓN POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN
ATÓMICA
I. OBJETIVOS
ü Conocer el fundamento, las partes básicas y manejo del espectrofotómetro de
absorción atómica, para obtener resultados confiables en este tipo de instrumento.
ü Interpretar y relacionar las variables a utilizar para efectuar el cálculo de contenido
de zinc en un multivitamínico comercial por una curva de calibración directa.

II. INTRODUCCIÓN

La curva de calibración se prepara mediante diluciones de una solución estándar (stock) de


la misma naturaleza del analito a determinar en la muestra, en un intervalo que pueda ser
trabajado en el instrumento y la muestra se prepara de manera tal que la concentración del
analito en la muestra o en su dilución se encuentre dentro de dicho intervalo.
Las soluciones preparadas se llevan al instrumento de medición y se registra una respuesta
P para cada dilución de estándar y de muestra. Los resultados se grafican P=
f(concentración de cada dilución del estándar). Se debe evaluar la linealidad de la respuesta
en relación a la concentración del analito mediante la inspección gráfica y se efectúa
además la regresión lineal para determinar la mejor ecuación que exprese el
comportamiento de la misma. La interpolación de la señal de la muestra (o su dilución) en
la recta permite conocer la concentración de esta.
La Espectrometría de Absorción Atómica (EAA) se utiliza habitualmente en la determinación
cuantitativa de soluciones de iones metálicos Se ha aplicado a determinación de hasta 70
elementos, en concentraciones trazas (ppb) y hasta 1%. Cabe mencionar que esta técnica
no diferencia estados de oxidación de los metales, por lo que solo se mide la cantidad de
metal total.
Previo a la cuantificación por EAA es necesario realizar una digestión ácida a fin de eliminar
la presencia de materia orgánica, aún en muestras líquidas y además para solubilizar los
metales, sobretodo en muestras sólidas. Para ello se utiliza normalmente ácido nítrico
concentrado y calor, hasta que no se generen humos amarillos, reflejo de que todavía hay
una reacción redox presente.

21
Práctica No. 3. Espectrofotometría de Absorción Atómica

El zinc es un nutriente que nos aporta casi todas las enzimas de la piel, incluyendo aquellas
que se encargan de crear el colágeno y producir nuevas células, tanto el zinc como el hierro
son fundamentales en la producción de células en los folículos capilares y en el transporte
de oxígeno, etc.
A continuación, se presenta un esquema de un espectrofotómetro de absorción atómica
con flama (EAA-F).

III. EQUIPO(S), REACTIVO(S) Y MATERIAL(ES)

MATERIAL Y EQUIPO REACTIVOS


1 piseta Muestra:Multivitamínico
1 espátula
1 Pipeta volumétrica de 1, 2, 3, 4, 5 mL Fortimin (sol. oral infantil) o
3 vasos de precipitados de 50 mL SIMIVIT KIDS
1 micropipeta de 100 µL (vol. Variable) Cloruro de Zn
1 parrilla con agitador magnético c/barra
6 tubos de ensaye con gradilla
1 Matraz volumétrico de 25 mL
6 Matraces volumétricos de 10 mL
Ácido nítrico R.A.

22
Práctica No. 3. Espectrofotometría de Absorción Atómica

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

4.1 Preparación de soluciones (algunas soluciones se encontrarán preparadas en el


anaquel de la asignatura, revisar y solo preparar la que falte)
ü Solución de ácido nítrico 1 M.
ü Solución estándar de Zn. Se mide 1 ml de una solución de Zn elemental 100 ppm
con pipeta volumétrica y se afora a 25 ml con solución ácida (soln. Stock).
ü Solución problema del multivitamínico - Medir 0.1 mL del multivitamínico (sol.
oral infantil) agregar con mucho cuidado 2 mL de ácido nítrico concentrado,
mezclando con agitación magnética y con calentamiento en parrilla a 100 oC
(colocarla dentro de la campana de extracción), para eliminar el azúcar, hasta que
no se generen humos amarillos. Enfriar, disolver y aforar a 10 mL con Soln. Ácida.
1
(Soln. Problema)

4.2 Preparación de sistemas para la curva de calibración problemas


Tabla 1 Preparación de los sistemas
Sistema 0 1 2 3 4 5 6Zn
Soln. Acida (mL) 3 3 3 3 3 3 3
Soln. Stock Zn aprox. 4 ppm (mL) 0 1 2 3 4 5 0
Soln. Problema (mL) 0 0 0 0 0 0 0.12
10 10 10 10 10 10 10
R-4 Reunir los residuos de todos los sistemas (0-7)

4.3 Obtención de resultados


a) Optimizar las condiciones de medición en el equipo (EAA-Fl).
Siguiendo el programa que controla el equipo, revisar que estén las siguientes condiciones:
muestreo manual, mezcla de gases = acetileno /aire, señal absorbancia, posición correcta
de la lámpara, longitud de onda (l) 213.9 nm, ancho de banda = 0.7, voltaje de la lámpara
=15 µA, etc. (para determinación de zinc)

1
No sobrepasar la temperatura y tener paciencia hasta que la solución quede lo más
transparente posible

23
Práctica No. 3. Espectrofotometría de Absorción Atómica

b) Optimización de la lámpara de cátodo hueco.


El procedimiento se realizará siguiendo las indicaciones del profesor para alinear la lámpara
de cátodo hueco hacia el monocromador y la posición del quemador.

c) Medición de la Absorbancia.
Considerando las indicaciones del programa de trabajo del equipo, primero se emplea agua
destilada y después el blanco reactivo (sistema blanco) para calibrar la señal a cero.
Después se solicitan las soluciones estándar y problemas, anotar la lectura promedio de
las mediciones que realiza (Tabla 2) y graficar los resultados que se van obteniendo.

V. RESULTADOS EXPERIMENTALES

Tabla 2. Resultados experimentales obtenidos.


Sistema Zn (ppm) estándar Absorbancia
1
2
3
4
5
6

1
0.9
0.8
0.7
Absorbancia

0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
[Fe]/ppm

Gráfica 1. Absorbancia en función de la concentración de Zn

24
Práctica No. 3. Espectrofotometría de Absorción Atómica

VI. INSTRUCCIONES PARA EL INFORME DE TRABAJO

ESQUEMA Y PUNTOS MÍNIMOS A EVALUAR PARA LA REALIZACIÓN DEL INFORME


DE TRABAJO.

1.- Datos Generales


I) CARÁTULA. Incluir en éste orden: Nombre de la Universidad, nombre de la Facultad,
nombre de la Sección, nombre de la asignatura comenzando con “Laboratorio de…”,
Número y nombre de la práctica, Número de equipo, Nombre de los integrantes (solamente
de aquellos que participaron en su realización, se dará por entendido que los que no
aparezcan no recibirán calificación correspondiente a esa práctica. También es importante
recordar que aquellas personas que faltaron a la parte experimental de la práctica no
tendrán calificación de reporte y por ende no se colocará su nombre, a menos que haya
repuesto la práctica en otro grupo bajo autorización de los profesores y su informe lo
realizará de manera individual), Nombre de los profesores (incluir grado: QFB, Q, M en C,
Dr., etc.), Fecha de realización de la práctica y Fecha de entrega de reporte.

II) NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA.

III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la práctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el ¿Qué?, ¿Cómo? y ¿Para qué?.

IV) INTRODUCCIÓN. Incluir solamente aplicaciones de la Técnica instrumental en las


diferentes áreas que contempla su carrera, incluyendo ejemplos (recordar que deben citar
las referencias).

V) DIAGRAMA DE FLUJO. Incluir:


ü Preparación del STD; indicando los volúmenes, masas y/o concentraciones reales
que se emplearon en caso de una modificación a la parte experimental reportada en
el Manual. Si se emplean reactivos comerciales incluir la pureza y densidad (en caso
de reactivos líquidos).

25
Práctica No. 3. Espectrofotometría de Absorción Atómica

ü Preparación de la muestra; indicando los posibles cambios realizados. Mencionar la


marca y presentación de la muestra empleada en caso que el alumno la haya
proporcionado.
ü Preparación de los sistemas de la curva de calibración; en forma de tabla incluyendo
número y nombre. En el caso de la solución ácida indicar la concentración molar
empleada.
ü Optimización del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo, puede incluir
imágenes o dibujos y será con base a la explicación del profesor no a lo reportado
en el Manual. Recuerde especificar la mezcla de gases, longitud de onda y voltaje
de la lámpara que realmente se emplearon.
ü Optimización de la lámpara de cátodo hueco; mismas consideraciones del punto
anterior.
ü Calibración con el sistema blanco y lectura de los sistemas de la curva de
calibración; mismas consideraciones del punto anterior. No olvidar mencionar qué
se debe hacer una vez que se terminó de usar el equipo ya para apagarlo.
ü Disposición de residuos; mencionar cómo se dispusieron los residuos en la sesión
experimental.

2) RESULTADOS. Incluir:
ü Tabla No. 1.- Datos experimentales de la Curva de calibración. Adicionando una
columna más donde coloquen la concentración molar (M) de cada sistema.
ü Gráfico de la curva de calibración indicando número y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del gráfico de una curva de calibración se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
ü Además, debe incluir forzosamente: Ecuación de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la ordenada
al origen)
No indicar la propiedad y la concentración del analito como “x” y “y”, y también
debe incluir Coeficiente de determinación (r2). Recordar que se tienen que incluir 2
gráficos, uno con unidades de concentración Molar y otro con unidades de
concentración en ppm, cada uno con las especificaciones citadas anteriormente.

26
Práctica No. 3. Espectrofotometría de Absorción Atómica

ü Incluir tabla: con número y nombre.


Muestra empleada (nombre comercial)
Presentación
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete (enfocándose sólo al analito que se cuantificó experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cápsula, por
100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete

3) ANÁLISIS DE RESULTADOS. Incluir:


ü Realizar el análisis e interpretación correspondiente al valor del coeficiente de
determinación para la validez de los resultados de cuantificación.
ü Incluir la copia de la hoja del Manual del equipo de Absorción atómica para la
medición de Zinc.
ü Analizar los criterios químicos que se emplearon para elegir la λ óptima, se puede
apoyar con la curva de calibración teórica de la hoja para medición de Zinc por
absorción atómica y al rango de concentraciones que se manejaron
experimentalmente en la curva de calibración.
ü Mencionar la temperatura que alcanzó la llama con la mezcla de gases que
emplearon.
ü Describir brevemente con sus propias palabras como funciona la lámpara de
cátodo hueco y como se lleva a cabo el proceso de nebulización y atomización.
ü Mencionar las posibles interferencias que se pueden llevar a cabo y cómo
evitarlas para que no afecten en la medición y lectura de los sistemas, hablando
de manera particular para el Zinc.
ü Analizar la relación de las variables involucradas y contrastarlas con la Ley de
Lambert & Beer.
ü Calcular el Coeficiente de absortividad molar, incluyendo unidades correctas, la
manera de cómo se calculó con ambas gráficas y su interpretación.
ü Escribir la reacción que se lleva a cabo en la Digestión ácida con HNO3
concentrado, justificando el nombre de la entidad química que se genera en forma
de gas café rojizo y el por qué se realizó en la práctica.
ü Incluir los cálculos de cuantificación, en el siguiente orden: Cálculo de la
concentración del STD (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Preparación del STD), cálculo de la concentración de los sistemas de la curva,

27
Práctica No. 3. Espectrofotometría de Absorción Atómica

Interpolación de la propiedad de la muestra en la ecuación de la curva, regresión


a las diluciones de la muestra (deben coincidir con lo reportado en el diagrama
de flujo en Preparación de la muestra) y cambio de unidades a las similares al
marbete así como el % de principio activo; esto se debe reportar con los datos de
ambas gráficas, al final discutir sobre los resultados obtenidos en ambas gráficas.
ü Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles errores
que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que cometió y las
acciones preventivas que sugieres para la mejoría.

4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).

5) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Deberán ser citadas ya sea en la introducción o en


el análisis de resultados en caso que se hallan empleado.

VII. ORIENTACIONES PARA EL TRATAMIENTO Y DISPOSICIÓN DE RESIDUOS


La inhalación de vapores de ácido nítrico y sus productos de reacción produce trastornos
en las vías respiratorias, usarlo siempre en la campana extractora.
La solución ácida sobrante de todo el grupo se debe mezclar y guardar bien etiquetada
indicando fecha de preparación y concentración aproximada en frasco de vidrio.

Mezcla de Zn
en sol. ácida

R-4

Agregar aproximadamente de 100 a


150 mL de agua

Eliminar con abundante agua

28
1ª SESION DE EJERCICIOS

1. El coeficiente de Absortividad Molar de una solución acuosa de fenol a 211 nm es de


6170 M-1 cuando se mide en celdas de 1 cm calcular el intervalo de concentraciones en
el cual la absorbancia no es menor a 0.15 ni mayor de 0.8.

2. Se requiere cuantificar permanganato de potasio en un desinfectante de peceras, para


ello se miden 0.5 mL de la muestra y se aforan a 50 mL. De esta última se miden 2 mL
y se aforan a 25 mL, dando como resultado una absorbancia de 0.73 y 0.45 a 540 y
500 nm, respectivamente.

DATOS: Espectro de Absorción de Permanganato de Potasio

l (nm) 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640
Absorbancia 0.23 0.18 0.16 0.18 0.3 0.52 0.78 0.9 0.71 0.42 0.19 0.15 0.17

a) Grafique el espectro de absorción y elija la longitud de onda con la que trabajaría una
curva de calibración directa de permanganato de potasio utilizando los datos de su
espectro de absorción. Justifique su repuestas.

b) Determina la concentración de la muestra con aquella curva que consideres más


apropiada, explica la razón de la elección.

Curvas de Calibración KMnO4


1

540 nm 500 nm
0.8
y = 3009.7x - 0.0083
R² = 0.9998
0.6
Absorbancia

0.4
y = 1547.5x + 0.0086
0.2 R² = 0.9845

0
0 0.00005 0.0001 0.00015 0.0002 0.00025 0.0003 0.00035
Concentración (M)

29
Serie de ejercicios primer parcial.

3. Se sabe que el cianuro con ciertos metales forma un complejo con estequiometria 1:1 de
color rojo a valores de pH básicos. El coeficiente de absortividad de este compuesto es
1909.4 L cm M-1.

a) ¿Cuál sería el intervalo de longitud de onda en el que podría absorber el complejo?


b) ¿Cuál sería el valor de absorbancia que se esperaría para los siguientes valores de
concentración de cianuro? Llenar la tabla y esbozar la gráfica A vs Concentración
que se obtendrá. Considerar una celda de longitud de 1 cm de paso óptico.

[CN] x 10-5 M 0 5 13 20 27 41

Absorbancia

4. Se desea determinar la cantidad de ácido ascórbico en gomitas pediátricas, para ello


se preparan disoluciones stock de la siguiente manera:

Disolución Stock (ácido ascórbico). Se pesaron 20 mg de reactivo puro, se


disolvieron con 10 mL de disolución amortiguadora de acetatos pH=3.5 y se aforó
a 25 mL con agua destilada (Sol. A). Posteriormente, se tomaron 3 mL de esta
última disolución, se agregaron 10 mL de disolución amortiguadora y se aforaron a
25 mL con agua destilada (Sol B).

Se preparó una curva de calibración como se indica en la siguiente tabla.

Sistema 1 2 3 4 5 6 7
Sol. B (stock) (mL) 0 1 2 3 4 5 0
Sol. Triyoduro 3x10-3 M (mL) 0 1 1 1 1 1 1
Sol. Problema (mL) 0 0 0 0 0 0 3
Buffer acetatos (mL) 1 1 1 1 1 1 1
Aforo 10 10 10 10 10 10 10
Absorbancia 0 1.745 1.631 1.262 1.031 0.709 1.589

30
Serie de ejercicios primer parcial.

Muestra Problema: Se pesaron 500 mg de gomitas, se adicionaron 15 mL de agua


destilada y se mantuvo en agitación y calentamiento a una temperatura de 40 °C hasta
la disolución, se dejó enfriar y se aforó a 25 mL con agua destilada (Dis. 1),
posteriormente se tomaron 2 mL y aforaron a 10 mL (Dis. Problema).

a) Calcular la concentración de lad sioluciones A, B y de los sistemas en unidades de


molaridad.
b) Indicar el método de cuantificación utilizado en este análisis y la función del sistema 1
de la curva.
c) Realizar el análisis de regresión lineal, analizar el valor de r2 obtenido e identificar
cada uno de la ecuación.
d) Establezca la reacción química balanceada que se lleva a cabo.
e) Estimar el valor del Coeficiente de Absortividad del analito que da la propiedad
señalando sus unidades.
f) Calcula los mg de ácido ascórbico en el producto y el % de contenido en la forma
farmacéutica analizada.
g) Concluir sobre la aceptación o rechazo del producto, si el principio activo debe estar
entre el 95% y 105% sobre lo especificado en el marbete.
MARBETE: Contenido de ácido ascórbico 30 mg por pieza. Peso promedio 1.012 g.

Ácido Ascórbico pka’s = 4.05, 7.25 PM=176.13 g/mol Pureza= 99,7 %


- + -
C6H7O6 / C6H7O6 + H E°=0.39 V I3/ I E°=0.58 V

5. Se desea determinar en un multivitamínico “CENTER SILVER”, el contenido de Hierro


mediante Espectroscopia de Absorción Atómica, para ello se preparó una curva de
calibración de la siguiente manera:
Sistema 1 2 3 4 5 6 7
Sol. Stock Fe 0 1 2 3 4 5 0
(mL)
Sol. Ácida (mL) 0 3 3 3 3 3 3
Sol. Problema 0 0 0 0 0 0 1
(mL)
Aforo 10 10 10 10 10 10 10
Absorbancia 0 0.0744 0.1393 0.2021 0.2718 0.3158 0.1982

31
Serie de ejercicios primer parcial.

Solución Stock: Se tomaron 3 ml de una solución de Fe elemental de 250 ppm y se aforo


a 25 mL (Sol. Stock Fe).
Preparación muestra problema: Se obtuvo el peso promedio de 20 tabletas (𝑥̅ =1.3128 g),
se pulverizaron en mortero, posteriormente se pesaron 50 mg de polvo de tabletas,
adicionando 5 mL de HNO3 R.A. con agitación y calentamiento a 100°C, se dejó enfriar y
se aforo a 10 mL con solución ácida (Sol. Problema)

a) Realice el cálculo parar preparar una 25 mL de una solución de Fe elemental de


250 ppm a partir de FeCl3
b) Calcule la concentración de la Sol. Stock Fe elememtal y cada uno de los
sistemas
c) Grafique los datos y determina la m y b de una regresión lineal.
d) ¿Cuál es el contenido de Fe en mg y % por comprimido? Concluya si se acepta o
rechaza, si el criterio de aceptación es de 90 a 110 %

6. Resultados Obtenidos para evaluar la adecuabilidad del sistema en la determinación de


Ampicilina/ Bromhexina en una formulación por espectrofotometría, completar la tabla.
Sistema Bromhexina Ampicilina
1 0.5698 0.659
2 0.5841 0.676
3 0.6113 0.674
4 0.5817 0.677
5 0.5852 0.657
6 0.5398 0.664
Promedio
Desviación Estándar
CV %

a) Señalar si el sistema de medición empleado funciona adecuadamente ¿Por qué?

32
Práctica 4. Cromatografía de líquidos.

PRACTICA 4: CROMATOGRAFÍA DE LIQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN


DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS QUE ACTÚAN COMO FILTROS UV EN CREMAS DE
PROTECCIÓN SOLAR

OBJETIVOS

• Conocer los componentes básicos del cromatógrafo de líquidos de alta resolución, así como su manejo y
cuidados necesarios.
• Seleccionar las condiciones instrumentales óptimas para la separación y cuantificación de los analitos
oxibenzona, octocrileno y avobenzona.
• Aplicar los conocimientos teóricos adquiridos para efectuar adecuadamente la cuantificación de los
analitos mediante el método del estándar interno.

CUESTIONARIO PREVIO

1. ¿Cuál es el fundamento de la Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC, por sus siglas
en inglés)?
2. Definir brevemente los conceptos de cromatografía de líquidos en fase normal y en fase reversa.
3. Mencionar tres tipos de disolventes usados como fase móvil y tres tipos de fases estacionarias
utilizadas en cromatografía de líquidos de fase normal y fase reversa.
4. Mencionar los métodos de cuantificación más utilizados para las determinaciones cuantitativas
por HPLC.
5. Mencionar las ventajas y desventajas de la cromatografía de líquidos en comparación con la
cromatografía de gases
6. Investigar el contenido máximo permitido de sustancias que actúan como filtros UV en productos
cosméticos y de cuidado personal.
7. Investigue otros nombres comunes para los siguientes analitos: Oxibenzona, Avobenzona,
Octocrileno, 4-MBC.

33
Práctica 4. Cromatografía de líquidos.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.
Materiales, reactivos y equipo de laboratorio
MATERIAL REACTIVOS
4 Vasos de precipitado de 50 mL Mezcla estándar de filtros UV (oxibenzona,
Agitador de vidrio octocrileno y avobenzona) disueltos en MeOH a
Probeta de 25 mL una concentración de 100 ppm.
Matraz volumétrico de 25 mL
Matraz volumétrico de 5 mL Disolución estándar de 4-MBC disuelto en MeOH
Pipeta volumétrica de 1 mL a una concentración de 100 ppm.
MUESTRA: CREMA LUBRIDERM
PROTECCIÓN SOLAR (PROPORCIONADA
POR EL PROFESOR)
MATERIAL POR TODO EL GRUPO: Metanol (MeOH) grado HPLC
-2 pipetas volumétricas de 1 mL
-2 matraces volumétricos de 5 mL
-Viales para automuestreador
-Micropipeta de 100-1000 µL

A. Preparación de la muestra.

1. Pesar 0.1 g de crema Lubriderm Protección Solar en un vaso de precipitado.

2. Agregar 10 mL de MeOH HPLC y homogenizar durante 5 min utilizando el ultrasonido con ayuda del
profesor. En caso de observar grumos, presionarlos con el agitador de vidrio para disminuir su tamaño y
colocar en ultrasonidos durante 5 min más.

3. Aforar la mezcla con MeOH HPLC hasta un volumen de 25 mL (disolución D1). NOTA: La disolución
se observará turbia pero no deben quedar grumos.

4. Tomar 1 mL de la disolución D1 y colocarla en un matraz volumétrico de 10 mL. Aforar con MeOH


HPLC (disolución D2).

5. Solo en caso de que se observe turbidez en la muestra. Filtrar aproximadamente 2 mL de la


disolución D2 a través de un filtro de jeringa de 0.45 µm recuperándolo en un vaso de precipitado.

B. Preparación de los estándares

Para la optimización de la separación cromatográfica

1. Disolución de mezcla de filtros UV (MF). A partir de la mezcla estándar de 100 ppm de


Oxibenzona, Octocrileno y Avobenzona, tomar 1 mL de la mezcla y aforar a 5 mL con MeOH grado
HPLC. Preparar una disolución por grupo.

2. Colocar 1 mL de la disolución MF en un vial para automuestreador.

34
Práctica 4. Cromatografía de líquidos.

3. Disolución del estándar interno (EI). A partir de la disolución estándar de 4-MBC a una
concentración de 100 ppm. Tomar 1 mL y aforar a 5 mL con MeOH grado HPLC. Preparar una
disolución por grupo.

4. Colocar 1 mL de la disolución EI en un vial para automuestreador.

Para el análisis de las muestras

1. Disolución estándar de filtros UV y estándar interno (MF+EI). En un vial para automuestreador,


mezclar 500 µL de la disolución MF y 500 µL de la disolución EI. Preparar una disolución por grupo.

2. Dilución de la muestra y estándar interno (D2+EI). En un vial para automuestreador, mezclar 500 µL
de la disolución EI y 500 µL de la disolución D2.

C. Condiciones cromatográficas

Equipo: VARIAN con Bomba Binaria Modelo 240, Automuestreador Modelo 410, Detector UV Modelo
310.

Columna: Eclipse XDB C18 de 15 cm de largo y diámetro de partícula de 5 µm.

Fase móvil: A) Metanol grado HPLC y B) Agua desionizada

Flujo: 1 mL min-1

Longitud de onda: 310 nm

D. Optimización de la separación cromatográfica.

1. Acondicionar la columna con una proporción de 95 % MeOH y 5 % Agua durante 10 min. Registrar la
presión al cumplirse el tiempo.

4. Inyectar 20 µL de la disolución MF. Registrar el tiempo muerto (to) y los tiempos de retención (tr) de
cada uno de los picos mayoritarios.

El orden de elución de los analitos es: oxibenzona, octocrileno y avobenzona.

5. Acondicionar la columna con una proporción de 90 % MeOH y 10 % Agua durante 10 min. Registrar
la presión al cumplirse el tiempo.

6. Inyectar 20 µL de la disolución MF. Registrar to y los tr de cada uno de los picos mayoritarios.

35
Práctica 4. Cromatografía de líquidos.

7. Seleccionar la composición de la fase móvil que sea adecuada para la separación de los analitos y
con esas condiciones inyectar 20 µL de la disolución MF + EI. Verificar que el pico del EI se separe del
resto de compuestos y registrar los parámetros cromatográficos de cada uno de los picos mayoritarios
en la tabla 1.

Tabla 1. Resultados de la optimización de la separación.


W1/2
Disolución Fase móvil Analito tr (min) Área N Rs
(s)
OX

MF 95% MeOH OC

AV

OX

MF 90% MeOH OC

AV

OX

OC
MF
Óptima
EI
AV

EI
OX = Oxibenzona, OC = Octocrileno, AV = Avobenzona y EI = Estándar interno (4-MBC)

𝟐
𝒕𝒓 𝟐 𝒕𝒓 𝟐(𝒕𝒓𝟐 − 𝒕𝒓𝟏 )
𝑾𝒃 = 𝟏. 𝟕 ∗ 𝑾𝟏/𝟐 𝑵 = 𝟏𝟔 / 2 = 𝟓. 𝟓𝟒 5 6 𝑹𝒔 =
𝑾𝒃 𝑾𝟏/𝟐 𝑾𝒃𝟏 + 𝑾𝒃𝟐

E. Análisis de la muestra por el método del Factor de respuesta (Fr).

Con las condiciones cromatográficas seleccionadas como óptimas.

1. Inyectar 20 µL de la disolución D2+EI. Registrar los parámetros cromatográficos de cada uno de los
picos mayoritarios en la tabla 2.

36
Práctica 4. Cromatografía de líquidos.

Tabla 2. Resultados del análisis de la muestra problema + EI

Disolución Analito tr (min) Área W1/2 (s) N Rs


D2+EI OX
OC
AV
EI

F. Análisis de datos y cálculo de concentraciones mediante el método del Factor de


Respuesta (FR).

1. Calcular el FR para cada analito presente en las muestras utilizando el cromatograma de la


disolución MF+EI con las condiciones de separación óptimas (tabla 1).

[𝐀𝐧𝐚𝐥𝐢𝐭𝐨] Á𝐫𝐞𝐚𝐚𝐧𝐚𝐥𝐢𝐭𝐨
= 𝐅𝐑
[𝐄𝐈] Á𝐫𝐞𝐚𝐄𝐈

2. Calcular la concentración de los analitos en la disolución D2 utilizando el FR obtenido en el punto


anterior y las áreas del cromatograma de la disolución D2+EI (tabla 2).

3. Calcular el contenido de cada analito en la muestra original de crema.

BIBLIOGRAFIA.

1. Introduction to the Modern Liquid Chromatography. 3d Edition. Snyder, L., Kirkland, J., Dolan, J. A John
Wiley & Sons, Inc. 2010.
2. Principios de Análisis Instrumental. Sexta edición. Skoog, D., Holler, F., Crouch, S. Cengeage Learning
Editores. 2008
3. Fundamentos de Cromatografía. Polo, L. Dextra Editorial. 2015.
4. Handbook of HPLC. Danillo Corradini, Terry M. Phillips. Editors. CRC Press. 2011.

CIBERGRAFÍA
1. Chromatography. California State University Northridge.
http://www.csun.edu/~hcchm003/321/321111213.pdf Consultada 15/01/17
2. Theory in HPLC. CHROMacademy.
http://www.chromacademy.com/lms/sco1/theory_of_hplc_introduction.pdf Consultada 15/01/17
3. HPLC Operation. University South of Australia. https://www.youtube.com/watch?v=27etIAYFA_Y
Consultada 15/01/17
4. HPLC Injection. https://www.youtube.com/watch?v=Y7-CuEGfnyI Consultada 15/01/17
37
Práctica 4. Cromatografía de líquidos.

5. High Performance Liquid Chromatography HPLC. https://www.youtube.com/watch?v=dXR9wcK-LUo


Consultada 15/01/17

DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS QUE ACTÚAN COMO FILTROS UV EN CREMA CORPORAL

Preparación del estándar


Preparación de la muestra Análisis cromatográfico

Pesar 0.1 g de muestra y Tomar 1 mL de la mezcla de filtros


Acondicionar el sistema con:
disolver con 10 mL de UV a 100 ppm y aforar a 5 mL con
MeOH utilizando MeOH HPLC (Dis. MF)
- Columna C18 de 15 cm
ultrasonidos.
- Flujo 1 mL min-1

Aforar a 25 mL con MeOH - Longitud de onda 310 nm


HPLC
Tomar 1 mL del estándar de 4-MBC
- Volumen de inyección 20 µL
a 100 ppm y aforar a 5 mL con
MeOH HPLC (Dis. EI)
Tomar 1 mL y aforar a 5 mL
con MeOH HPLC (Dis. D2) Inyectar al sistema la Dis. MF con
las proporciones de fase móvil:
Tomar 0.5 mL de la Dis. MF y 95% MeOH y 90% MEOH.
Tomar 0.5 mL de la Dis D2 y mezclar con 0.5 mL de la Dis. EI.
Elegir la mezcla óptima para la
mezclar con 0.5 mL de la Dis. (Dis. MF+EI) separación
EI.
(D2+EI)

Inyectar al sistema las Dis. EI, Dis.


MF+EI y Dis. D2+EI con la fase
móvil óptima para la separación

Tratamiento de Residuos.
Todas las disoluciones que contengan metanol se desechan en el recipiente marcado como “Residuos
MeOH-Agu

38
PRÁCTICA No. 5
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE ALCOHOL ETÍLICO EN ENJUAGUE BUCAL MEDIANTE
EL MÉTODO DE ESTÁNDAR INTERNO POR CROMATOGRAFÍA DE GASES

I. OBJETIVOS

Aplicar los conocimientos teóricos adquiridos para emplear el método de adición del

estándar interno al realizar un análisis cuantitativo.

Conocer e identificar las partes básicas del cromatógrafo de gases para capacitarse

en su manejo a fin de obtener resultados confiables.

II. INTRODUCCION

En Cromatografía de Gases (CG) la muestra se inyecta y volatiliza en la cabeza de una

columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil, un gas inerte

(no interacciona con las moléculas del analito) cuya única función es la de transportar el

analito a través de la columna (fase estacionaria). Al pasar por la columna los solutos son

separados y eluyen hacia el detector, cuya respuesta se visualiza en un integrador o una

computadora.

Los estándares internos tienen su máxima utilidad cuando hay pérdidas inevitables de la

muestra, por ejemplo durante una inyección manual en CG. Si se agrega un estándar

interno a una mezcla antes de cualquier pérdida, entonces la fracción de estándar que se

pierde es la misma que la fracción de la muestra que se pierde y el cociente (Cmta/Cstd)

permanece constante.

Un compuesto para ser utilizado como Estándar Interno (EI), debe reunir los siguientes

requisitos: a) que el pico de respuesta esté cercanos pero resuelto de los componentes a

determinar, b) que sea estable y químicamente inerte, c) tener estructura similar al

componente a determinar, d) no estar presente en la muestra original y e)tener alto grado

de pureza.

39
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

Los enjuagues bucales llevan la finalidad primordial de corregir el mal aliento de origen

bucal, tornándolo agradable. Para ello, deben controlar el desarrollo bacteriano y dejar la

boca agradablemente fresca, por eso integran en su composición etanol.

1. Fase móvil (gas)


2. Puerto de inyección
3. Columna (FE)
4.Horno de la columna
5. Detector
6. Computadora

Esquema de un cromatógrafo de gases

III. EQUIPO(S), REACTIVO(S) Y MATERIAL(ES)

REACTIVOS MATERIAL EQUIPOS

Alcohol etílico 6 tubos de ensaye de volumen Cromatógrafo de

absoluto pequeño con gradilla gases con detector

3 vasos de precipitado de 50 mL de ionización de

1piseta con agua destilada flama

Alcohol n-propílico 1 jeringa para CG de 10 µL (el

profesor la solicita al laboratorista)

1 micropipeta de 100 a 1000 µL

40
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Preparación de soluciones

Solución estándar externo. Tomar 100 µL de etanol y adicionar 900 µL de agua

destilada en un tubo de ensaye (Soln. 1).

Solución estándar interno. Tomar 100 µL de n-propanol, colocarlos en un tubo de

ensayo y adicionar 900 µL de agua destilada; (Soln. 2).

Mezcla de estándares. Colocar en un tubo de ensayo 100 µL de la Soln. 1, 100 µL de

la Soln. 2 y adicionar 800 µL de agua destilada.

Solución problema. Colocar en un tubo de ensayo 100 µL de la Soln. 2, 100 µL del

enjuague bucal y adicionar 800 µL de agua destilada

2.- DESARROLLO EXPERIMENTAL

Conectar y verificar las conexiones eléctricas del equipo

Abrir las válvulas de los tanques de gas (nitrógeno e hidrógeno) y las llaves de paso.

Encender el equipo y esperar a que alcance la temperatura programada.

a) Seleccionar las condiciones de medición en el equipo (CG-FID).

Siguiendo la pantalla y el programa que controla el equipo, ajustar las siguientes

condiciones.

41
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

Tabla 1. Parámetros a emplear para la separación de alcoholes por CG-FID

PARÁMETRO CONDICIONES
Columna DB-wax 30 m Megabore
Gas acarreador Nitrógeno, a 5 psi
Presión de aire 7 psi
Presión de hidrógeno 20 psi
Temperatura del detector 250°C

Encender el detector y verificar su funcionamiento.

b) Obtención de los cromatogramas.

1.- Ajustar la temperatura del horno a 150 ºC (isotérmico).

2.- Inyectar 1.0 μL de la Mezcla de estándares, registrar el tiempo de retención de cada

analito.

3.- Ajustar la temperatura del horno a 100 ºC (isotérmico).

4.- Inyectar 1.0 μL de la Mezcla de estándares, registrar el tiempo de retención de cada

analito.

5.- Ajustar la temperatura del horno con el siguiente programa de temperatura:

Temperatura inicial: 50 ºC, Mantener (Hold) : 1 min,

Rampa: 8 ºC/min, Temperatura final : 150 ºC

6.- Inyectar 1.0 μL de la Mezcla de estándares, registrar el tiempo de retención de cada

analito.

7.- Inyectar las muestras problema con las mismas condiciones del programa de

temperatura.

42
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

Una vez obtenidos los cromatogramas, calcular los parámetros asociados a la separación

(número de platos teóricos y resolución) a partir de los datos de tiempo de retención (tr),

ancho y área de pico. Anotar los resultados en las Tablas 2 y 3.

NOTA: Al terminar las inyecciones, llevar a cabo el proceso de lavado de la columna,


que consiste en dejar 10 minutos el flujo del gas de arrastre y una temperatura del
horno de 150 ºC. Después disminuir la temperatura del horno a 60 ºC, apagar el equipo
y cerrar las llaves de los gases.

V. RESULTADOS EXPERIMENTALES

TABLA 2. Resultados obtenidos en el análisis cualitativo de la mezcla estándar de


alcoholes.
tR(min) W1/2(min)
tR (min) W1/2 (min) tR (min) W1/2 (min)
Analito Prog. Prog.
150 oC 150 oC 100 oC 100 oC
Temp. Temp.

EtOH

n-Propanol

Tabla 3. Resultados obtenidos con los cromatogramas correspondientes.

Inyección Mezcla estándares Solución Problema


Analito Etanol n-propanol Etanol n-propanol
Conc. % (v/v)
Factor de Respuesta
--- ---

Tiempo retención
(min)

Área de pico

Wb = Ancho de pico
a la base del pico
(min)

43
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

Inyección Mezcla estándares Solución Problema


Analito Etanol n-propanol Etanol n-propanol

Platos teóricos (N)

AEPT (H) cm

Resolución (Rs)

Selectividad (a)

𝟐
𝒕 𝟐 𝒕𝒓 𝟐(𝒕𝒓𝟐 Q𝒕𝒓𝟏 )
𝑾𝒃 = 𝟏. 𝟕 ∗ 𝑾𝟏/𝟐 𝑵 = 𝟏𝟔 M 𝒓 N = 𝟓. 𝟓𝟒 O P 𝑹𝒔 =
𝑾𝒃 𝑾𝟏 𝑾𝒃𝟏 R𝑾𝒃𝟐
𝟐

𝑳 𝒌[𝟐
𝑨𝑬𝑷𝑻 = 𝑯 = 𝜶 = [
𝑵 𝒌𝟏

VII. INFORME DE TRABAJO


ESQUEMA Y PUNTOS MÍNIMOS A EVALUAR PARA LA REALIZACIÓN DEL INFORME
DE TRABAJO.

1.- Datos Generales

I) CARÁTULA. Incluir en éste orden: Nombre de la Universidad, nombre de la Facultad,


nombre de la Sección, nombre de la asignatura comenzando con “Laboratorio de…”,
Número y nombre de la práctica, Número de equipo, Nombre de los integrantes (solamente
de aquellos que participaron en su realización, se dará por entendido que los que no
aparezcan no recibirán calificación correspondiente a esa práctica. También es importante
recordar que aquellas personas que faltaron a la parte experimental de la práctica no
tendrán calificación de reporte y por ende no se colocará su nombre, a menos que haya
repuesto la práctica en otro grupo bajo autorización de los profesores y su informe lo

44
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

realizará de manera individual), Nombre de los profesores (incluir grado: QFB, Q, M en C,


Dr., etc.), Fecha de realización de la práctica y Fecha de entrega de reporte.

II) NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA.

III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la práctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el ¿Qué?, ¿Cómo? y ¿Para qué?.

IV) INTRODUCCIÓN. Incluir solamente aplicaciones de la Técnica instrumental en las


diferentes áreas que contempla su carrera, incluyendo ejemplos (recordar que deben citar
las referencias).

V) DIAGRAMA DE FLUJO. Incluir:


v Preparación de los STD´s y mezcla de STD´s; indicando los volúmenes, masas y/o
concentraciones reales que se emplearon en caso de una modificación a la parte
experimental reportada en el Manual. Si se emplean reactivos comerciales incluir
la pureza y densidad (en caso de reactivos líquidos).
v Preparación de la muestra + STDINTERNO; indicando los posibles cambios
realizados. Mencionar la marca y % etanol de la muestra empleada en caso que el
alumno la halla proporcionado.
v Optimización y preparación del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo,
puede incluir imágenes o dibujos y será con base a la explicación del profesor no
a lo reportado en el Manual. Recuerde especificar tipo de columna empleada (Tipo,
marca y longitud), Gas acarreador empleado y presión trabajada de éste,
temperatura del inyector, tipo de detector y la rampa empleada (en caso de utilizar
una cromatografía por gradiente de temperatura).
v Análisis de los sistemas; mismas consideraciones del punto anterior. Enfatizar
cómo se debe cargar la jeringa con la muestra para inyectar y propiamente el
proceso de inyección de la muestra al equipo. No olvidar mencionar qué se debe
hacer una vez que se terminó de usar el equipo ya para apagarlo.
v Disposición de residuos; mencionar cómo se dispusieron los residuos en la sesión
experimental.

45
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

2) RESULTADOS. Incluir:
Ø Incluir los cromatogramas con número y nombre, recordar que se debe incluir el
cromatograma de la mezcla de STD´s y TODOS los cromatogramas de las
muestras que se hallan empleado en el grupo, ya que se cuantificarán todas las
muestras por cada equipo. Recortar y pegar de forma limpia y ordenada, no
solamente engraparlos, y sombrear con marcatextos los datos del pico del Etanol
de un color y con otro los datos del pico del n-propanol.
Ø Tabla No. 2.- Datos experimentales y parámetros cromatográficos. Incluir dos filas
adicionales al final una para escribir la altura de pico y otra para el AEPT. Recuerde
que las unidades del tR es en minutos y W (ancho del pico) es en segundos para
que los considere en los cálculos, ya que ambos datos deben estar en las mismas
unidades al aplicar las fórmulas. Recordar que la resolución es el único parámetro
contemplado en la tabla que es compartido por 2 picos (etanol y n-propanol).
Ø Incluir tabla: con número y nombre. El número de tablas será el mismo que de
muestras empleadas en el grupo. Recordar que el Marbete (% de etanol en el
enjuage) hay productos que si lo mencionan y otros no y por ende se tienen que
investigar en la página web de la marca comercial.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentación
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete (enfocándose sólo al analito que se cuantificó experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cápsula, por
100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete

3) ANÁLISIS DE RESULTADOS. Incluir:


ü Describir brevemente el funcionamiento del detector empleado y que propiedad
es la que se registra.
ü Analizar qué tipo de cromatografía se empleó con base a la polaridad de la Fase
estacionaria, y también con base a la variación de la temperatura a lo largo de la
corrida cromatográfica, indicando el orden de separación de los analitos con base
a su punto de ebullición.
ü Discutir el efecto que tienen las condiciones de temperatura utilizadas (isotérmico
o programa de temperatura) sobre el ancho de los picos cromatográficos y definir
en qué condición se obtiene la mejor eficiencia (N)

46
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

ü Describir la importancia de emplear el método de adición de estándar interno


cuando se emplea a la cromatografía de gases como técnica instrumental.
ü Mencionar la importancia que tiene realizar una rampa de temperatura para
mejorar la eficiencia en la separación de los analitos.
ü Mencionar que datos del cromatograma usaron para IDENTIFICAR los picos de
ambos alcoholes y que datos usaron para CUANTIFICAR, indicando porqué.
ü Discutir cuál es el motivo del porqué no se recomienda emplear 2-propanol como
estándar interno.
ü Incluir los cálculos de N (# de platos teóricos), AEPT (o H) y R (resolución) para
cada analito en ambos sistemas; además, calcular el tR promedio, N promedio,
AEPT promedio y R promedio y realizar el análisis correspondiente de estos
parámetros cromatográficos para justificar si la separación y corrida
cromatográfica fue eficiente.
ü Incluir los cálculos de cuantificación, en el siguiente orden: Cálculo de la
concentración de los STD´s en la mezcla de STD´s (debe coincidir con lo
reportado en el diagrama de flujo en Preparación de los STD´s y mezcla de
STD´s), cálculo del Factor Respuesta, cálculo del % de etanol en el sistema de
muestra + STDINTERNO y regresión a las diluciones de la muestra, en caso que por
necesidad se hallan tenido que realizar (deben coincidir con lo reportado en el
diagrama de flujo en Preparación de la muestra + STDINTERNO) y cambio de
unidades a las similares al marbete así como el % de principio activo; esto se
debe realizar empleando las áreas y las alturas como propiedad, y para TODAS
las muestras que se trabajaron en el grupo.
ü Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles errores
que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que cometió y las
acciones preventivas que sugieres para la mejoría.

4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).

5) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Deberán ser citadas ya sea en la introducción o en


el análisis de resultados en caso que se hallan empleado.

47
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

DATOS DE LOS REACTIVOS Y DE LA COLUMNA PARA LA PRÁCTICA.

Columna DB-WAX

30 m x 0.53 mm DI, película 1 µm, fase estacionaria: columna tubular capilar de

polietilen glycol (PEG). POLAR

Temperatura mínima 20°C. Límite de máxima temperatura: 250 oC.

Gas acarreador: Nitrógeno de alta pureza.

Gases para el Detector de Ionización de Flama (FID): Hidrógeno alta pureza - Aire.

ETANOL, J. T. Baker, P.M. 46.0 g/mol, n-PROPANOL, J. T. Baker, P.M. 60.097 g/mol,
99.85 % de Pureza, densidad 0.79 g/ml, 99.0 % de Pureza, densidad 0.80 g/ml, Punto
VI. ORIENTACIONES
Punto de ebullición: 78.3 oCPARA EL TR de ebullición: 97.2 oC

TRATATAMIENTO Y DISPOSICIÓN DE RESIDUOS

Los remanentes de la solución se deben de almacenar para su tratamiento posterior dado

el poco volumen generado.

48
Práctica No. 5. Cromatografía de Gases

49
PRÁCTICA No. 6
“DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PLATA EN DESINFECTANTES DE VERDURAS
MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN POTENCIOMÉTRICA EMPLEANDO ELECTRODOS
IÓN SELECTIVOS”.

I. OBJETIVO
A) Conocer el funcionamiento de los Electrodos ión-específicos mediante su empleo y

aplicación en un método analítico, y de esta manera adquirir la destreza en la

correcta forma de calibración del potenciómetro y su manejo adecuado en la

obtención de resultados confiables al utilizar este tipo de instrumentos.

B) Cuantificar la cantidad de plata en un desinfectante por medio de una Curva de

calibración potenciométrica con uso de un Electrodo específico a plata, para analizar

la aplicación de éste tipo de métodos analíticos en el área.

II. INTRODUCCIÓN

El método empleado en esta práctica describe el procedimiento a seguir y el equipo

necesario para la determinación de plata en un producto mediante la Técnica

potenciométrica de ión selectivo en una Curva de calibración.

Esta metodología se fundamenta en el uso de un electrodo de ión-específico sensible a

plata. La diferencia de potencial desarrollada por este electrodo (con el de referencia) y la

concentración de plata se ajustan a la ecuación de Nernst,

E= Eo´ - 0.059 pAg+

la que permitirá calcular la concentración de soluciones incógnitas utilizando soluciones

estándar. La concentración de plata en la muestra, se determina directamente por

interpolación de la lectura obtenida en la curva de calibración. Por lo tanto, cualquier especie

de plata que no se encuentre como plata, no será detectada por el electrodo y necesitará

un procesamiento previo para su detección.

La plata se ha utilizado como conservador ya que impide el crecimiento de hongos y

bacterias en frutas, verduras, agua y el organismo así como sanitización de redes

50
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

hidráulicas y uso médico aunque su uso es restringido por provocar una condición llamada

argiria. También evidencia clínica señala su eficacia para erradicar infecciones vaginales

por levaduras de hongos con aplicación tópica y duchas vaginales.

III.- PARTE EXPERIMENTAL

MATERIAL POR EQUIPO SOLUCIONES (ya se han preparado )


2 vaso de precipitados de 50 ml Muestra de interés: desinfectante “microdyn”
o limpiador con plata
1 pipeta volumétrica 0.5, 2, 3, 5, mL
2 pipetas volumétricas de 1 mL Solución de Ácido nítrico al 10%
2 pipetas volumétricas de 4 mL
6vasos de volumen pequeño
(copas tequileras) Solución de Nitrato de plata 0.01M *
5 matraces aforados de 10 mL Tampón de fuerza iónica (nitrato de sodio)1.0 M
1 bureta de 10 mL
1 soporte con pinzas
1 parrilla con agitador magnético
Solución de Cloruro de potasio 0.01 M *
1 perilla y una espátula pequeña Puente de agar
potenciómetro con electrodo selectivo a
plata y electrodo de calomel

A) LIMPIEZA DE MATERIAL

1.- Lavar perfectamente el material y enjuagar por varios minutos con HNO3 al 10%,

posteriormente enjuagar con agua de la llave y finalmente con agua destilada.

51
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

B) ESTANDARIZACIÓN DEL STOCK DE NITRATO DE PLATA (puede realizarlo

un solo equipo y compartir los datos)

Medir 4 mL de KCl 0.01M (patrón primario) con pipeta volumétrica y verter en un frasco de

volumen pequeño y agregar 5 gotas de K2CrO4 al 5% mezclar (ver figura de montaje para

esta valoración).

Llenar la bureta con la Solución de Nitrato de plata aproximada 0.01M (stock) y agregar

poco a poco esta solución hasta el cambio de amarillo (turbio) a café rojizo.

Realizar por triplicado y obtener el volumen promedio para calcular exactamente la

concentración de la Solución de Nitrato de plata 0.01 M (stock), así como el promedio,

desviación estándar y el % RSD*

*Conocido también como coeficiente de variación (C.V.%), se calcula con la fórmula:

No debe ser mayor al 5% en el caso de métodos volumétricos. Esto ayudará a que los

alumnos evalúen la calidad de su trabajo experimental, además de que el profesor pueda

ver avances con respecto al inicio del curso y al final de éste.

52
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

Se miden 1 mL del desinfectante “microdyn” o un producto de limpieza *(verificar que el

marbete indique contener plata) en un vaso de precipitados de 50 mL, se agregan 5 mL de

Tampón de fuerza iónica (nitrato de sodio) 1.0 M y dos gotas de ácido nítrico concentrado

con agitación magnética y calentando a 100 oC, por 5 minutos. Trasvasar a matraz y aforar

a 10 mL con agua desionizada, se filtra (Solución problema) en caso necesario.

C) PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN

Colocar en vasos de volumen pequeño (copas tequileras) los volúmenes de reactivos y

solución problema indicados en la siguiente tabla:

SISTEMAS 1 2 3 4 5 6 7

Solución de Nitrato de plata 0.01M


0.25 0.5 1 2 4 8 0
(stock) (mL)

Tampón de fuerza iónica (nitrato


2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
de sodio) 1.0 M (mL)

Solución problema (mL) 0 0 0 0 0 0 5

Aforo con agua destilada (mL) 10 10 10 10 10 10 10

NOTA: En caso de registrar una lectura alta, en la muestra problema, preparar otro sistema

con mayor volumen de problema. Por el contrario, en caso de una lectura baja colocar

menor volumen de solución problema

53
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

**; para el caso único del sistema 7 (muestra problema)

E) DETERMINACIÓN POTENCIOMÉTRICA

1.- Efectuar el montaje experimental (página siguiente) con el potenciómetro,

calibrar previamente (cerrando el circuito con el cable correspondiente).

2.- Introducir los electrodos en la solución correspondiente y ajustar la posición

del vaso que contiene Ag+ y su velocidad de agitación.

3.-Situar el botón del potenciómetro en el modo de milivoltios (mV) y una vez estabilizada

la lectura, proceder a su anotación.

NOTA: Para la mayoría de las muestras, la lectura se estabiliza en 1 minuto. La

estabilización de las lecturas tarda más a concentraciones bajas.

Se recomienda medir de la solución más diluida a la más concentrada en este caso no es

necesario el lavado de los electrodos entre mediciones. Para el caso de las muestras

problema, lavar los electrodos con agua destilada y secar suavemente antes de proceder a

efectuar la siguiente determinación.

54
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

NOTA Almacenar los reactivos restantes de trabajo debidamente etiquetados.

NO DESECHARLOS.

Las lecturas, en milivoltios (mV), obtenidas en la determinación potenciométrica de los

sistemas de calibración se representan frente al -log de la concentración de plata= (pAg).

IV.- RESULTADOS

Tabla No. 1 Estandarización de Solución de Nitrato de plata 0.01M (stock)

Alícuota Concentración Volumen (mL) Volumen de AgNO3

M exacta de exacto de KCl utilizado para llegar al

KCl medido punto de equivalencia

1 V1 =

2 V2 =

3 V3 =

Promedio =_______________

Desviación estándar (STD) =_____________

% Desviación estándar relativa (% RSD)* =_____________

55
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

Tabla No.2.- Curva de Calibración

Sistemas 1 2 3 4 5 6

Concentración M del stock de Ag+

-log de la concentración (pAg)

Lectura en milivoltios (mV)

Tabla No. 3.- Resultados experimentales (muestra problema).

Lectura en mV de la muestra problema

(SISTEMA 7 )

Gráfica No. 1.- E = f (-log [Ag+])

56
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

V.- INFORME DE TRABAJO

ESQUEMA Y PUNTOS MÍNIMOS A EVALUAR PARA LA REALIZACIÓN DEL INFORME


DE TRABAJO.

1.- Datos Generales


I) CARÁTULA. Incluir en éste orden: Nombre de la Universidad, nombre de la Facultad,
nombre de la Sección, nombre de la asignatura comenzando con “Laboratorio de…”,
Número y nombre de la práctica, Número de equipo, Nombre de los integrantes (solamente
de aquellos que participaron en su realización, se dará por entendido que los que no
aparezcan no recibirán calificación correspondiente a esa práctica. También es importante
recordar que aquellas personas que faltaron a la parte experimental de la práctica no
tendrán calificación de reporte y por ende no se colocará su nombre, a menos que haya
repuesto la práctica en otro grupo bajo autorización de los profesores y su informe lo
realizará de manera individual), Nombre de los profesores (incluir grado: QFB, Q, M en C,
Dr., etc.), Fecha de realización de la práctica y Fecha de entrega de reporte.

II) NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA.

III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la práctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el ¿Qué?, ¿Cómo? y ¿Para qué?.

IV) INTRODUCCIÓN. Incluir solamente aplicaciones del Método de cuantificación y de los


electrodos ión selectivos en las diferentes áreas que contempla su carrera, incluyendo
ejemplos (recordar que deben citar las referencias).

V) DIAGRAMA DE FLUJO. Incluir:


NOTA: Describir de manera breve como se realizó el lavado de material.
v Estandarización del STD de Nitrato de plata; no olvidar indicar los posibles cambios
en volúmenes o concentraciones que pudieron haberse realizado. Indicar la
concentración correcta y real del KCl.

57
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

v Preparación de la muestra; indicando los posibles cambios realizados. Mencionar


la marca y gramaje de la muestra empleada en caso que el alumno la halla
proporcionado.
v Preparación de los sistemas de la curva de calibración; en forma de tabla
incluyendo número y nombre. Especificar en la tabla la concentración real del
estándar de Nitrato de plata (obtenido y calculado en el paso de la Estandarización)
y la concentración y composición real del Tampón de fuerza iónica. En caso de
haber realizado sistemas adicionales, ya sea de la curva o de la muestra, indicarlos
igual en la tabla.
v Calibración del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo, puede incluir
imágenes o dibujos y será con base a la explicación del profesor no a lo reportado
en el Manual.
v Montaje experimental; mismas consideraciones del punto anterior. Enfatizar bien
en lo que contiene cada uno de los vasos o copas tequileras y que electrodo se
sumergirá en cada solución (tipo y composición).
v Lectura de los sistemas de la curva de calibración; mismas consideraciones del
punto anterior. Mencionar que solución se irá cambiando y cual permanecerá
dentro de su vaso, así como la propiedad que se medirá y en qué unidades. No
olvidar mencionar qué se debe hacer una vez que se terminó de usar el equipo ya
para apagarlo.
v Disposición de residuos; mencionar cómo se dispusieron los residuos en la sesión
experimental.

2) RESULTADOS. Incluir:
Ø Tabla No. 1.- Datos experimentales de la estandarización del estándar de Nitrato
de plata. No olvidar colocar en una fila adicional al final de la tabla los datos de
Promedio, STD y %RSD para los 3 volúmenes gastados de KCl obtenidos en éste
paso.
Ø Tabla No. 2.- Datos experimentales de la Curva de calibración. Considere que la
concentración que debe reportar es de Plata no de Nitrato de plata. Adicionar una
columna más al final de esta tabla para reportar la lectura de la muestra, si realizó
varias muestras o de una misma hizo varios sistemas coloque una columna para
cada sistema, de esta manera puede omitir colocar la Tabla No. 3. Esta tabla debe

58
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

coincidir con el mismo número de sistemas (tanto de la curva como de la muestra)


con la reportada en Preparación de los sistemas de la curva de calibración.
Ø Gráfico de la curva de calibración indicando número y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del gráfico de una curva de calibración se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).

Además debe incluir forzosamente: Ecuación de la recta bajo el modelo:


PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la
ordenada al origen)

No indicar la propiedad y la concentración del analito como “x” y “y”, y también


debe incluir Coeficiente de determinación (r2). No olvidar que la propiedad la debe
graficar en función de -log[Plata]MOLAR.

Ø Incluir tabla: con número y nombre.


Muestra empleada (nombre comercial)

Presentación

Lote y fecha de caducidad (u origen)

Marbete (enfocándose sólo al analito que se cuantificó


experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cápsula,
por 100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete

3) ANÁLISIS DE RESULTADOS. Incluir:


ü Realizar el análisis e interpretación correspondiente del %RSD para determinar
si tiene validez los resultados de la estandarización para el cálculo de la
concentración del estándar de Nitrato de plata.
ü Plantear la reacción de estandarización y la reacción de detección del punto final
de valoración, cada una con su valor de Keq.

59
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

ü Justificar el uso de K2CrO4 5% como indicador del punto final de estandarización


con base al cálculo de las solubilidades molares.
ü Justificar el por qué se realizó el lavado con HNO3 10% del material empleado.
ü Realizar el análisis e interpretación correspondiente al valor del coeficiente de
determinación para la validez de los resultados de cuantificación.
ü Investigar y describir qué es la fuerza iónica y porqué hay que controlarla
justificando la función que tiene el tampón de fuerza iónica en la matriz para la
lectura de los sistemas de la curva, así como la justificación del uso de un puente
de agar entre los sistemas de la curva y la solución de KNO3.
ü Mencionar brevemente el funcionamiento del electrodo ión selectivo de plata.
ü Analizar la relación de las variables involucradas y contrastarlas con la Ecuación
de Nernst, justificando la obtención de una pendiente negativa.
ü Incluir los cálculos de cuantificación, en el siguiente orden: Cálculo de la
concentración del STD (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Estandarización del STD de Nitrato de plata), cálculo de la concentración de
los sistemas de la curva, cálculo del -log[Plata]MOLAR, Interpolación de la
propiedad de la muestra en la ecuación de la curva, regresión a las diluciones de
la muestra (deben coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo en
Preparación de la muestra) y cambio de unidades a las similares al marbete así
como el % de principio activo; esto se debe reportar con los datos de los sistemas
de la muestra que se hallan tenido que realizar para al final compararlos y
analizar.
ü Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles errores
que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que cometió y las
acciones preventivas que sugieres para la mejoría.

4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).

5) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Deberán ser citadas ya sea en la introducción o en


el análisis de resultados en caso que se hallan empleado.

60
Práctica 6. Curva de calibración potenciométrica

DATOS
Ag+/ Ago Eo = 0.79 V Electrodo de Calomel E= 0.245 V

H2CrO4 pKa(s) = 0.8, 6.5 Ag2CrO4↓ pKs= 11.95 AgCl↓ pKs= 9.75

+ - 2-
Ag AgOH Ag(OH)2 Ag(OH)3
pH
11.7 12.7 12.8

VI) ORIENTACIONES PARA EL TRATAMIENTO DE RESIDUOS

+
Residuos de AgCl Sol. Ag (en
medio ácido)
R-9
R-10
Sólido. Filtrar y llevar
a confinamiento
Se agrega HCl o NaCl
para precipitar AgCl
Líquido. Desechar con
abundante agua

Sólido. Filtrar y Líquido.


llevar a Neutralizar con
confinamiento NaOH y
desechar con
abundante agua

61
2ª SERIE DE EJERCICIOS
1. Se realizó la determinación de 𝐻] 𝑂] en un antiséptico mediante una valoración
potenciométrica. Se tomaron 2 mL de la muestra problema, llevándose a un aforo de 50
mL (Solución A), posteriormente se tomaron 1.0 mL de la Sol. A y se aforó a 10 mL
(solución B) y se valora con Permanganato de potasio [0.018] M.

1100
1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
E (mV)

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5


Volumen (mL) K2MnO4

a) Establecer la reacción de valoración y calcular la Keq


b) Aplicar el método de las tangentes y determinar el Vpe
c) Calcular la concentración de 𝐻] 𝑂] en el antiséptico
Datos:
𝑀𝑛𝑂aQ + 8𝐻R + 5𝑒 Q === 𝑀𝑛]R + 4𝐻] 𝑂 𝐸 g = 1.55 𝑉
𝑂] + 2𝐻R + 2𝑒 Q === 𝐻] 𝑂] 𝐸 g = 0.682 𝑉

2. Se desea determinar Clorhidrato de Fenilefrina en la solución oftalmológica


FRESHCLEAR por HPLC, por lo cual se tomaron 30µL de solución oftalmológica, se
adicionaron 10 mL de Fase móvil y se aforo a 50 mL con agua desionizada (Solución
problema). Se prepararon los siguientes sistemas:

Concentración de la Sol. Stock de Fenilefrina: 79.2 ppm.

62
Serie de ejercicios para el segundo examen parcial

(mL) (mL) Volumen Aforo


Sistema Área
Stock Problema (mL)

1 1 0 10 39570

2 2 0 10 62095

3 3 0 10 89830

4 4 0 10 120375

5 5 0 10 150850

Problema 0 4 10 104091

Marbete: 10 g de Fenilefrina por cada 100 mL de solución

a) Calcule las concentraciones para cada sistema estándar indicando las unidades.
b) Grafique los datos, Área & Concentración determine m y b por medio de una regresión
lineal.
c) Indique el método de cuantificación utilizado.
d) Calcular los mg de Fenilefrina por cada 100 ml de solución oftálmica y compare con en el
marbete.

3. Se realizó un análisis de diferentes alcoholes en una muestra de tequila mediante la


técnica de CG, obteniéndose los siguientes cromatogramas, a cada sistema se les
adicionó un Estándar Interno (3):

Mezcla de STD´s
Muestra problema

63
Serie de ejercicios para el segundo examen parcial

Mezcla de STD’s: Los picos corresponden a las siguientes moléculas

Metanol Etanol n-Propanol n-Butanol

a) Con la información que proporcionan los cromatogramas llene las


siguientes tablas de datos:

Solución Concentración Nombre del compuesto Área Tr W N Rs


%v/v
1.2 8732 0.45
1.95 15165 0.40
Mezcla de STD´s
0.98 14487 0.38
2.97 35478 0.41
7245 0.43
Solución
22078 0.42
Problema
0.98 14494 0.39

b) ¿Cuáles son los componentes que contiene el tequila? Justificar su


respuesta
c) ¿Cuáles son los componentes que se encuentran en mayor cantidad en
el tequila?
d) Calcular los siguientes parámetros para el cromatograma de la solución
problema. Indicar que nos indican cada uno de los parámetros en el
cromatograma.
e) Calcular el Factor Respuesta de Etanol con respecto al estándar Interno
f) Determinar la concentración de Etanol % v/v en el Tequila. Considere
que la muestra problema se preparó tomando 800 µL del tequila,
llevándose a un aforo de 10 mL.

64
Serie de ejercicios para el segundo examen parcial

4. Completar la tabla, calculando los parámetros que se piden y explicar si esta

separación es eficiente, dibujando el cromatograma correspondiente.

componente Tr Wb K´ N α R

A 21.5 0.96

B 22.1 0.95

C 25.3 0.99

Tiempo muerto ( to ) es de 2.5 min.

5. El análisis de residuos de pesticidas en plantas se realiza por cromatografía

2.856g de planta son triturados y colocados en un solvente apropiado y aforados

a 20 mL, con fase móvil. Se toman 20 µl de esta solución y se inyectan al

cromatógrafo, obteniendo un área de 3587. Se cuenta con un estándar de

concentración de 52 µg/ ml, y se obtienen los siguientes resultados

sistema mL del mL de Tiempo de W Área

estándar fase móvil retención (min) (min) (UA)

1 2 18 2.510 0.196 1168

2 4 16 2.505 0.197 2170

3 6 14 2.521 0.198 3214

4 8 12 2.513 0.197 4079

5 10 10 2.518 0.196 5392

65
REFERENCIAS.

1) Ramette, A. 1988. Equilibrio y Análisis Químico. Editorial Fondo Educativo

Interamericano. México, DF. P.p. 72-74, 140-144, 148-155, 158-161

2) Harris, D. C. 1999. Análisis Químico Cuantitativo. Grupo Editorial Iberoamérica, SA

de CV. 3ª edición. México, D. F. P.p. 327-330.

3) Christian G., Química Analítica. Editorial Limusa.2ª. Edición cap. 15,17,22

4) Skoog, D. y West D. 1988. Química Analítica.. Ed. McGraw-Hill / Interamericana de

España, SA. 4ª edición. Madrid, España. P.p. 451, 452, 476 y 477.

5) Skoog, D. y West D. 2001.Principios de Análisis Instrumental. Ed. McGraw-Hill /

Interamericana de España, SA. 7ª edición. Madrid, España. P.p. 251 y 252.

6) Smith, R. and Martell, A. 1989. Critical Stability Constants. Plenum Press. 2ª

edition. Volume 4: Inorganic Complexes. USA.

7) Rovessac Annick F., Métodos y técnicas Instrumentales Modernas Ed. McGraw-

Hill Capitulo 2,9,10,11,20,22

8) NOM-001-ECOL-1996 Norma Oficial Mexicana. Diario Oficial de la Federació1997

9) SEDUE 1988 “ Reglamento de la Ley General de Equilibrio Ecológico y la

protección al ambiente en materia de residuos peligrosos “. Diario Oficial de la

Federación.

10) Rubinson/Rubinson, Química Analítica Contemporánea Editorial Pearson

Educación
Serie de ejercicios para el segundo examen parcial

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO


FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN QUÍMICA ANALÍTICA
CODIGO: FPE-CQ-DEX-01-06A,
SOLICITUD PARA PRÉSTAMO DE MATERIAL,
FPE-CQ-DEX-03-06A
REACTIVOS, EQUIPO MENOR Y DE APOYO
No de REVISIÓN: 2

Laboratorio No: Fecha:


Alumno: Equipo: No. de Cuenta:
Asignatura: Grupo:
Carrera: Semestre
Profesor: Práctica:

Cantidad Material, reactivo o equipo Especificación Observaciones

Firma del Alumno

67
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA No. 1 Determinación de Azul de timol en una muestra de residuos.
GRUPO: ____________ FECHA DE ENTREGA: ______________ CARRERA: ___________
INTEGRANTES: __________________________________________
__________________________________________ CALIFICACIÓN
NO. EQUIPO: __________________________________________
__________________________________________
__________________________________________

OBJETIVO GENERAL:

1.- Registro de los datos experimentales del Espectro de Absorción, gráficas de los Espectros de
Absorción del Azul de timol en función de Absorbancia y % Transmitancia e identificación de la lóptima:

Tabla1- Datos experimentales del espectro de azul de timol


Grafica 1. Espectro de absorción del azul de timol en
Longitud de onda
Absorbancia % Transmitancia medio básico
(l) nm
500
510
520
530
540
550
560
570
580
590
600
610 Grafica 2. Espectro de transmitancia del azul de timol en
620 medio básico
630
640
650
660
670
680
690
700
Longitud de onda
óptima (l) (nm) =
PRÁCTICA No. 1 Determinación de Azul de timol en una muestra de residuos

2.- Cálculo de la concentración del Azul de timol en molaridad (P.M. = 466.6 g/mol):
Concentración del Stock Azul de timol en la etiqueta: _______________ ppm
Cálculo:

3.- Cálculo de las concentraciones de los sistemas de la Curva de calibración, a partir de la disolución
Stock, y de la Absorbancia promedio, a partir de las 2 lecturas realizadas experimentalmente de cada
sistema de la Curva:

Tabla No. 2.- Datos de la Curva de Calibración.


Sistema C = Concentración A1 A2 Aprom Cálculos
Azul de Timol (M)
1
2
3
4
5

¿Se realizó una modificación en la preparación de los sistemas de la Curva de calibración? Indicarlo:

4.- Cálculo del Coeficiente de Absortividad Molar (e) a la longitud de onda óptima en unidades de
M-1cm-1 a partir de los datos de la gráfica No. 1.

Semestre 2020-2 2
PRÁCTICA No. 1 Determinación de Azul de timol en una muestra de residuos

5.- Cálculo de K (constante de proporcionalidad) de cada punto de la Curva, a partir de los datos
calculados en la Tabla No. 2.

Tabla No. 3.- Estadística de los datos de la Curva de calibración.


Sistema K = Aprom / C Kprom DE C.V. %
Cálculo
1

6.- Datos experimentales de la Prueba de adecuabilidad y su análisis estadístico. (se realiza preparando
por sextuplicado un mismo sistema).

Tabla No. 4.- Datos de Abs para la Prueba de adecuabilidad .


Sistema 1 2 3 4 5 6 Aprom DE CV %
Cálculo
Absorbancia

Discusión de los resultados del análisis estadístico de la tabla 4 :

Semestre 2020-2 3
PRÁCTICA No. 1 Determinación de Azul de timol en una muestra de residuos

7.- Gráfica de los Sistemas de la Curva de calibración (Abspromedio=f(CAzul de timol) y su regresión lineal:
1.4 Regresión lineal:
1.2
b=___________________
1
m=__________________
Absorbancia

0.8
r2=__________________
0.6

0.4 ECUACIÓN:

0.2

0
[Azul timol]/M

Gráfica No. 3.- Curva de Calibración de Azul de timol


Abs promedio = f([Azul de timol]molar)

Prueba de Q para datos anómalos, en caso que aplique:

Análisis del valor del coeficiente de determinación (r2):

8.- Diagrama de flujo de la preparación del sistema problema, incluyendo las diluciones realizadas a
partir de la muestra original proporcionada por los profesores. DIBUJAR EN LA PARTE DE ATRÁS DE ESTA
HOJA.

Absorbancia experimental obtenida del Sistema problema: ___________________


9.- Interpolación de la Absorbancia del sistema problema en la Ecuación de la Curva de calibración escrita
en el inciso 7:

Semestre 2020-2 4
PRÁCTICA No. 1 Determinación de Azul de timol en una muestra de residuos

10.- Cálculo de la concentración inicial de Azul de timol en la muestra original. Considere las diluciones
realizadas:

11.- Cálculo del pH en los sistemas de la Curva, considere la preparación de los mismos:

12.- Con base a la siguiente tabla de las subregiones del Visible, de los valores de pKa´s del Azul de timol
y del pH impuesto en los sistemas de la Curva calculado en el inciso anterior, justificar el intervalo de
longitud de onda máxima (lmáx) empleado para la obtención del espectro:

pKa(s) de Azul de Timol = 2.0, 8.7 (rojo, amarillo, azul).


Tabla No. 5.- Color absorbido y complementario de la región VISIBLE.
lmáx (nm) Color absorbido Color observado Análisis
380 a 420 Violeta Amarillo verdoso
420 a 440 Azul violáceo Amarillo
440 a 470 Azul Naranja
470 a 500 Verde azulado Rojo
500 a 520 Verde Púrpura
520 a 550 Verde amarillento Violeta
550 a 580 Amarillo Azul violáceo
580 a 620 Naranja Azul
620 a 680 Rojo Verde azulado
680 a 780 Púrpura Verde

¿Qué intervalo de l(nm) utilizarías para realizar el Espectro de absorción si se empleara un buffer de
acetatos donde la [ácido acético]=[acetato de sodio] en lugar de la solución de NaOH 0.01M?

Semestre 2020-2 5
PRÁCTICA No. 1 Determinación de Azul de timol en una muestra de residuos

13.- Con base a la relación de la variables involucradas con respecto a la Ley de Lambert & Beer, calcular
el valor del e (M-1cm-1) a partir de la ecuación de la curva descrita en el inciso 7, y compararla con el valor
del e obtenida a partir del Espectro de absorción. Concluir cuál de las 2 es más confiable.

14.- Conclusiones generales:

15.- Referencias bibliográficas adicionales empleadas:

Semestre 2020-2 6
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA No. 2 Determinación de Ácido ascórbico en tabletas efervescentes.
GRUPO: ____________ FECHA DE ENTREGA: ______________ CARRERA: ___________
INTEGRANTES: __________________________________________
__________________________________________ CALIFICACIÓN
NO. EQUIPO: __________________________________________
__________________________________________
__________________________________________

OBJETIVO GENERAL:

1.- Registro de los datos experimentales del Espectro de Absorción, gráficas de los Espectros de
Absorción del 2,6-DFI en función de Absorbancia y % Transmitancia e identificación de la lóptima.

Tabla No. 1.- Datos experimentales del Espectro de absorción.


Longitud de onda (nm) 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560
Absorbancia

% Transmitancia

1.4

1.2

1
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud onda /nm

Gráfica No. 1.- Espectro de absorción del 2,6-DFI Gráfica No. 1.- Espectro de transmitancia del 2,6-DFI
en buffer de acetatos pH=4.5. en buffer de acetatos pH=4.5.

NOTA: Señalar en ambas gráficas la


l óptima: ______________________
ubicación de la l óptima.
PRÁCTICA No. 2 Determinación de Ácido ascórbico en tabletas efervescentes

2.- Diagrama de flujo de la preparación del Stock de Ácido ascórbico a partir del Reactivo STD. DIBUJAR
EN LA PARTE DE ATRÁS DE ESTA PÁGINA.

3.- Cálculo de la concentración del STD de Ácido ascórbico para la preparación de los sistemas de la Curva
de calibración:

Masa de reactivo del STD Ác. Ascórbico real pesada: _____________________________

Especificaciones: Masa molecular: _____________________________

% Pureza: __________________________________

Cálculo de la concentración molar de la solución A:

Cálculo de la concentración molar de la solución B stock:

4.- Cálculo de las concentraciones de los sistemas de la Curva de calibración, a partir de la concentración
calculada en el inciso anterior:
Tabla No. 2.- Datos de la Curva de Calibración.
Sistema Concentración Abs Cálculos
Ácido ascórbico (C)
1

Semestre 2020-2 2
PRÁCTICA No. 2 Determinación de Ácido ascórbico en tabletas efervescentes

¿Se realizó una modificación en la preparación de los sistemas de la Curva de calibración? Indicarlo:

5.- Cálculo del Coeficiente de Absortividad Molar (e; M-1cm-1) a partir de la Gráfica No. 1 o 2.

¿A qué especie química corresponde el e calculado? ____________________________________


6.- Cálculo de K de cada sistema de la Curva, a partir de los datos calculados en la Tabla No. 2, y su análisis
estadístico:
Tabla No. 3.- Estadística de los datos de la Curva de calibración.
Sistema K = Abs / C Kprom DE CV % Análisis de los resultados
estadísticos

1
2
3
4
5

7.- Gráfica de los Sistemas de la Curva de calibración (Abs=f(CÁcido ascórbico STD) y su regresión lineal:
1.4
Regresión lineal:
1.2
b=___________________
1
m=__________________
Absorbancia

0.8

r2=__________________
0.6

0.4
ECUACIÓN:
0.2

0
[Ácido Ascórbico]/M

Gráfica No. 3.- Curva de Calibración de Ácido ascórbico


Abs = f([Ácido ascórbico]molar)

Semestre 2020-2 3
PRÁCTICA No. 2 Determinación de Ácido ascórbico en tabletas efervescentes

Prueba de Q para datos anómalos, en caso que aplique:

Análisis del valor del coeficiente de determinación (r2):

8.- Datos del Producto farmacéutico empleado y obtención del peso promedio por tableta:
Tabla No. 4.- Datos de fabricante del producto farmacéutico.
Nombre comercial

Presentación

Lote y fecha de caducidad (u origen)

Marbete

Tabla No. 5.- Estadística de los datos para la obtención del peso promedio por tableta.
Tabletas Masa (M) Mprom DE CV % Análisis de los resultados
estadísticos

Masa de polvo de tableta empleada como muestra en la parte experimental: ____________________

9.- Diagrama de flujo de la preparación del sistema problema, incluyendo las diluciones realizadas a
partir de la muestra de polvo de tableta descrita en el inciso anterior. DIBUJAR EN LA PARTE DE ATRÁS
DE ESTA PÁGINA.

Semestre 2020-2 4
PRÁCTICA No. 2 Determinación de Ácido ascórbico en tabletas efervescentes

Absorbancia experimental obtenida del Sistema problema: ___________________

10.- Interpolación de la Absorbancia del sistema problema en la Ecuación de la Curva de calibración


escrita en el inciso 7:

11.- Cálculo de los gramos de Ácido ascórbico por tableta en la muestra farmacéutica, utilizando las
diluciones realizadas:

12.- Cálculo del % de principio activo con respecto al Marbete:

¿Es aceptable? ¿Porqué? _______________________________________________________________

13.- Cálculo de las condiciones de amortiguamiento:

pH= ____________________ pAcO´= ________________________________________

Semestre 2020-2 5
PRÁCTICA No. 2 Determinación de Ácido ascórbico en tabletas efervescentes

14.- Reacción Química Representativa a las condiciones de amortiguamiento impuestas llevada a cabo
en los sistemas de la Curva de calibración:

15.- Cálculo de la Keq´a las condiciones de amortiguamiento impuestas: __________________________

16.- Con base a la siguiente tabla de las subregiones del Visible, del valor de pKa del 2,6-DFI y de las
condiciones de amortiguamiento impuestas en los sistemas de la Curva de calibración, justificar el
intervalo de l empleado para realizar el barrido:
pKa del 2.6-DFI = 5.758 (rojo, azul).
Tabla No. 5.- Color absorbido y complementario de la región VISIBLE.
lmáx (nm) Color absorbido Color observado Análisis
380 a 420 Violeta Amarillo verdoso
420 a 440 Azul violáceo Amarillo
440 a 470 Azul Naranja
470 a 500 Verde azulado Rojo
500 a 520 Verde Púrpura
520 a 550 Verde amarillento Violeta
550 a 580 Amarillo Azul violáceo
580 a 620 Naranja Azul
620 a 680 Rojo Verde azulado
680 a 780 Púrpura Verde

17.- Con base a la relación de la variables involucradas con respecto a la Ley de Lambert & Beer, calcular
el valor del e (M-1cm-1) a partir de la ecuación de la curva descrita en el inciso 7, y compararla con el valor
del e obtenida a partir del Espectro de absorción. Concluir cuál de las 2 es más confiable.

Semestre 2020-2 6
PRÁCTICA No. 2 Determinación de Ácido ascórbico en tabletas efervescentes

18.- Conclusiones generales:

19.- Referencias bibliográficas adicionales empleadas:

Semestre 2020-2 7
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA No. 3 Determinación de Zinc en un multivitamínico.
GRUPO: ____________ FECHA DE ENTREGA: ______________ CARRERA: ___________
INTEGRANTES: __________________________________________
__________________________________________ CALIFICACIÓN
NO. EQUIPO: __________________________________________
__________________________________________
__________________________________________

OBJETIVO GENERAL:

1.- Con base a la hoja del


Manual del equipo para la
determinación de Zinc,
justifique el empleo de la l
óptima empleada:

JUSTIFICACIÓN:
PRÁCTICA No. 3 Determinación de Zinc en un multivitamínico

2.- Esboza el Espectro de absorción con base a lo explicado por parte de los profesores y al arrojado en
el equipo:
Abs

l(nm)

3.- Cálculo de la concentración del STD de Zn(II) elemental para la preparación de los sistemas de la
Curva de calibración:

Concentración del Stock Zn(II) elemental concentrado: ________ Dilución realizada: _______________
Cálculo:

4.- Cálculo de las concentraciones de los sistemas de la Curva de calibración, a partir de la concentración
calculada en el inciso anterior:
Tabla No. 2.- Datos de la Curva de Calibración.
Sistema Concentración Zn(II) Abs Cálculos
elemental (C)
1

Semestre 2020-2 2
PRÁCTICA No. 3 Determinación de Zinc en un multivitamínico

¿Se realizó una modificación en la preparación de los sistemas de la Curva de calibración? Indicarlo:

5.- Cálculo de K de cada sistema de la Curva, a partir de los datos calculados en la Tabla No. 2, y su análisis
estadístico:
Tabla No. 3.- Estadística de los datos de la Curva de calibración.
Sistema K = A/ C Kprom STD % RSD Análisis de los resultados
estadísticos

6.- Gráfica de los Sistemas de la Curva de calibración (Abs=f(CSTD Zn(II) elemental) y su regresión lineal:
1 Regresión lineal:
0.9
0.8
b=___________________

0.7 m=__________________
Absorbancia

0.6
0.5
r2=__________________

0.4
0.3 ECUACIÓN:
0.2
0.1
0
[Zn]/ppm

Gráfica No. 3.- Curva de Calibración de Zn(II) elemental


Abs = f([Zn(II) elemental]ppm)

Semestre 2020-2 3
PRÁCTICA No. 3 Determinación de Zinc en un multivitamínico

Prueba de Q para datos anómalos, en caso que aplique:

Análisis del valor del coeficiente de determinación (r2):

7.- Datos del Producto farmacéutico empleado


Nombre comercial

Presentación

Lote y fecha de caducidad (u origen)

Marbete

Volumen de jarabe empleado como muestra en la parte experimental: _______________ mL

8.- Diagrama de flujo de la preparación del sistema problema, incluyendo las diluciones realizadas a
partir de la muestra de arabe descrita en el inciso anterior. DIBUJAR EN LA PARTE DE ATRÁS DE ESTA
HOJA.

Absorbancia experimental obtenida del Sistema problema: ___________________

9.- Interpolación de la Absorbancia del sistema problema en la Ecuación de la Curva de calibración escrita
en el inciso 6:

Semestre 2020-2 4
PRÁCTICA No. 3 Determinación de Zinc en un multivitamínico

10.- Cálculo del contenido de Zn(II) elemental contenido en la muestra farmacéutica en las mismas
unidades como está reportado en el marbete, utilizando las diluciones realizadas:

11.- Cálculo del % de principio activo con respecto al Marbete:

¿Es aceptable? ¿Porqué? _______________________________________________________________

12.- Mezcla de gases ocupados:

Gas oxidante: _______________ Gas combustible: ______________ T° alcanzada: _______________

13.- Menciona las interferencias que pudieran existir en la determinación de Zn(II) por Espectroscopía
de Absorción Atómica y cómo se pueden eliminar:

Semestre 2020-2 5
PRÁCTICA No. 3 Determinación de Zinc en un multivitamínico

14.- Con base a los valores de potencial estándar (E° V) que se describen a continuación, plantear la
escala de potencial ubicando cada uno de los pares redox y escribir la reacción que se llevó a cabo en el
proceso de Digestión ácida con HNO3/calor, justificándola brevemente:

H+/H2 = 0 V
O2/H2O = 1.23 V E (V)
NO3-/NO2 = 0.49 V
Zn°/Zn2+ = -0.76 V
Gluconato + 2H+ + 2e- Û Glucosa + H2O = -0.44 V

Reacción llevada a cabo:

Justificación:

15.- Cálculo del pH en los sistemas de la Curva de calibración, considere la preparación de los mismos:

16.- Con base a la relación de la variables involucradas con respecto a la Ley de Lambert & Beer, calcular
el valor del e (M-1cm-1) a partir de la ecuación de la curva descrita en el inciso 6, recuerde que las unidades
de concentración empleadas están en ppm y no en Molaridad:

Semestre 2020-2 6
PRÁCTICA No. 3 Determinación de Zinc en un multivitamínico

17.- Conclusiones generales:

18.- Referencias bibliográficas adicionales empleadas:

Semestre 2020-2 7
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA No. 4 CROMATOGRAFÍA DE LIQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN
DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS QUE ACTÚAN COMO FILTROS UV EN CREMAS
DE PROTECCIÓN SOLAR.
GRUPO: ____________ FECHA DE ENTREGA: ______________ CARRERA: ___________
INTEGRANTES: __________________________________________
__________________________________________ CALIFICACIÓN
NO. EQUIPO: __________________________________________
__________________________________________
__________________________________________

OBJETIVO GENERAL:

1.- Con base a los siguientes espectros de absorción de los filtros UV disueltos en la fase móvil a
temperatura ambiente (25°C), justifique el empleo de la l(nm) empleada:
Avobenzona
Oxibenzona Octocrileno

4-MBC
PRÁCTICA No. 4 Determinación de FUV en crema de protección solar

2.- Clasificación del tipo de cromatografía empleada con base a:

Tipo de Columna: _____________________________________________________________

a) Polaridad de la Fase móvil y Fase estacionaria: _____________________________________

b) Tipo de elución utilizado (gradiente o isocrático): __________________________________

3.- Describe brevemente como cambia la fuerza eluyente de la fase móvil al aumentar la concentración
de la fase móvil en el tipo de cromatografía utilizada en la práctica.

4.- Del siguiente ejemplo de un cromatograma, coloque el nombre a cada parámetro señalado con una
letra y mencione aquellos que sirven para identificar y los que sirven para cuantificar:

A: ______________________________

B: ______________________________

C: ______________________________

D: ______________________________

E: ______________________________

F: ______________________________

G: ______________________________

Para IDENTIFICAR: __________________________ Para CUANTIFICAR: __________________________

5.- Adjuntar los cromatogramas obtenidos en la parte experimental correspondientes a los estándares
y a la muestra problema colocando en cada uno de ellos el título correcto de acuerdo al sistema que
represente.

Semestre 2020-2 2
PRÁCTICA No. 4 Determinación de FUV en crema de protección solar

6.- Con los datos arrojados en el cromatograma de la mezcla de filtros UV con estándar interno (MF +
EI), llenar la siguiente tabla y calcular N (platos teóricos), AEPT (H) y Factor de capacidad (k´) para cada
uno:

Longitud de la columna: ________________________mm

Tiempo muerto: _______________________min

Cálculos de N, AEPT, k´ y Rs:

Tabla No. 1.- Datos de los parámetros cromatográficos.


Analito tr Área W (min) W1/2 (min) N AEPT k´ Rs
(min) W1/2=1.7*Wb (mm)
Oxibenzona

Octocrileno

4-MBC (EI)

Avobenzona

tr: Tiempo de retención W: Ancho de pico a la línea base W1/2: Ancho de pico a la mitad del pico
N: Número de platos teóricos AEPT: Altura equivalente del plato teórico
k’= Factor de capacidad o retención Rs: Resolución

Semestre 2020-2 3
PRÁCTICA No. 4 Determinación de FUV en crema de protección solar

7.- Discuta brevemente si los parámetros obtenidos son satisfactorios y por qué.

8.- Calcular el FR para cada analito presente en las muestras utilizando la tabla 1.

[𝐀𝐧𝐚𝐥𝐢𝐭𝐨] Á𝐫𝐞𝐚𝐚𝐧𝐚𝐥𝐢𝐭𝐨
= 𝐅𝐑
[𝐄𝐈] Á𝐫𝐞𝐚𝐄𝐈

Tabla No. 2. Factores de respuesta obtenidos para la mezcla estándar MF + EI.


Analito Concentración FR
(ppm)
Oxibenzona

Octocrileno

4-MBC (EI)

Avobenzona

Semestre 2020-2 4
PRÁCTICA No. 4 Determinación de FUV en crema de protección solar

9.- Con los datos obtenidos para el cromatograma de la muestra problema más el estándar interno (D2
+ EI). Llene la tabla No. 3.

Tabla No. 3. Resultados del análisis de la muestra problema + EI


Disolución Analito tr (min) Área W1/2 (s) N Rs FR
D2+EI Oxibenzona
Octocrileno
Avobenzona
4-MBC (EI)

10.- Datos del Producto analizado:


Tabla No. 4.- Datos de fabricante del producto farmacéutico.
Nombre comercial

Presentación

Lote y fecha de caducidad (u origen)

Marbete

Indicar la cantidad de muestra empleada en la parte experimental: _______________________gramos

11.- Diagrama de flujo de la preparación del sistema problema, incluyendo las diluciones realizadas.
DIBUJAR AL REVERSO DE ESTA HOJA.

12.- Cálculo del contenido de filtros UV en la muestra en las mismas unidades reportadas en el marbete
o en la bibliografía consultada.

Semestre 2020-2 5
PRÁCTICA No. 4 Determinación de FUV en crema de protección solar

13.- Cálculo del % de principio activo con respecto al Marbete o la bibliografía consultada:

Tabla No. 5. Contenido porcentual de cada uno de los FUV en la muestra analizada.
Analito Contenido (%)
Oxibenzona
Octocrileno
Avobenzona

14. ¿Los contenidos son aceptables? ¿Porqué?

Semestre 2020-2 6
PRÁCTICA No. 4 Determinación de FUV en crema de protección solar

15.- Conclusiones generales:

16.- Referencias bibliográficas adicionales empleadas:

Semestre 2020-2 7
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal.
GRUPO: ____________ FECHA DE ENTREGA: ______________ CARRERA: ___________
INTEGRANTES: __________________________________________
__________________________________________ CALIFICACIÓN
NO. EQUIPO: __________________________________________
__________________________________________
__________________________________________

OBJETIVO GENERAL:

1.- Fase estacionaria empleada: ________________________________________


Constitución química:

Fase móvil empleada: _____________________________________________

2.- Gráficas y clasificación de los tipos de elución empleadas con base a la temperatura:

Elución: _____________ Elución: ________________ Elución: ______________

3.- Alcohol empleado como STD interno: _________________________

Alcohol empleado como STD externo: ________________________


PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal

4.- Anexar los cromatogramas obtenidos en la parte experimental correspondientes a la mezcla de STD´s
y al problema colocando en cada uno de ellos el título correcto de acuerdo al sistema que represente y
al tipo de cromatografía que se empleó.
5.- Con los datos arrojados en los cromatogramas de la mezcla de STD´s, llenar la siguiente tabla y
calcular N, AEPT (Atura Equivalente de Plato Teórico), K´, Rs y α para cada uno:

Longitud de la columna: __________________________m

Tiempo muerto: _____________________________min

Tabla No. 1.- Datos de los cromatogramas y parámetros cromatográficos.


Tipo de Alcohol tR W W1/2 N AEPT k´ Rs α
cromatografía (min) (min) (min) (mm)
C. isotérmica 150°C Etanol

Propanol

C. isotérmica Etanol
100°C
Propanol

C. programa de T°C Etanol

Propanol

ANÁLISIS
DE LOS
PARÁMETROS
CROMATOGRÁFICOS
OBTENIDOS

TR: tiempo de retención W: ancho de pico a la línea base W1/2: ancho de pico a la mitad del pico
N: platos teóricos Rs: Resolución α: factor de selectividad K´: factor de capacidad

Semestre 2020-2 2
PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal

Cálculos de N, AEPT, K´, Rs y α:

Con base al análisis de los diferentes parámetros cromatográficos calculados anteriormente, ¿Con qué
condiciones de T°C (tipo de cromatografía) se obtuvo una mejor separación y eficiencia?
___________________________________________________________________________________
6.- Tabla con los datos del cromatograma de la mezcla de STD´s que mejor separación y eficiencia
obtuvo.
Tabla No. 2.- Datos del cromatograma de la mezcla de STD´s con mejor separación y eficiencia.
Alcohol tr (min) Área Altura
Etanol

Propanol

7.- Diagrama de flujo de la preparación del STD interno y cálculo de la concentración en %(v/v):

Especificaciones del reactivo: Pureza=_______________

Diagrama de flujo. ANEXAR EN LA PARTE DE ATRÁS DE ESTA HOJA.

Semestre 2020-2 3
PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal

Cálculo de la concentración porcentual:

8.- Diagrama de flujo de la preparación del STD externo y cálculo de la concentración en %(v/v):

Especificaciones del reactivo: Pureza=_______________

Diagrama de flujo. ANEXAR EN LA PARTE DE ATRÁS DE ESTA HOJA.

Cálculo de la concentración porcentual:

9.- Diagrama de flujo de la preparación de la mezcla de STD´s y cálculo de las concentraciones de ambos
STD´s en éste sistema:
Diagrama de flujo. ANEXAR EN LA PARTE DE ATRÁS DE ESTA HOJA.

Cálculo de la concentración %(v/v) del STD interno en la mezcla de STD´s:

Cálculo de la concentración %(v/v) del STD externo en la mezcla de STD´s:

Semestre 2020-2 4
PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal

10.- Cálculo del FR (Factor respuesta) empleando los datos de la Tabla No. 2 y las concentraciones de la
pregunta anterior:

Cálculo de FR empleando áreas:

Cálculo de FR empleando altura:

11.- Datos del Producto empleado:

Tabla No. 3.- Datos de fabricante del producto empleado como muestra.
Nombre comercial
Presentación
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Contenido según Marbete

Volumen empleado como muestra en la parte experimental: _____________________________

12.- Diagrama de flujo de la preparación del sistema problema más el STD interno, incluyendo las
diluciones realizadas a partir de la muestra original. ANEXAR EN LA PARTE DE ATRÁS DE ESTA HOJA.

Semestre 2020-2 5
PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal

13.- Datos del sistema problema a partir de su cromatograma correspondiente, cálculos de los
parámetros cromatográficos y su análisis.

Tabla No. 4.- Datos del sistema problema con EI y parámetros cromatográficos.
PARÁMETROS Etanol Propanol Análisis de los parámetros cromatográficos del problema
(EI)
tR (min)

Área

Altura

W (min)

W1/2 (min)

AEPT (mm)

Rs

Cálculos de N, AEPT, k´, Rs y α:

Semestre 2020-2 6
PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal

14.- Cálculo de la concentración de Etanol en el sistema problema inyectado en el equipo:

Empleando área:

Empleando altura:

15.- Cálculo del contenido de Etanol en la muestra empleada en las mismas unidades como está
reportado en el marbete o NOM, regresándose a las diluciones realizadas:

¿Es aceptable? ¿Porqué? _______________________________________________________________

Semestre 2020-2 7
PRÁCTICA No. 5 Determinación de Etanol en enjuague bucal

16.- Describir brevemente cuál de los parámetros cromatográficos permite llevar a cabo la identificación
de los alcoholes en los cromatogramas.

17.- Conclusiones generales:

18.- Referencias bibliográficas adicionales empleadas:

Semestre 2020-2 8
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICAS
SECCIÓN DE QUÍMICA ANALÍTICA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA No. 6 Determinación de Plata en un desinfectante.
GRUPO: ____________ FECHA DE ENTREGA: ______________ CARRERA: ___________
INTEGRANTES: __________________________________________
__________________________________________ CALIFICACIÓN
NO. EQUIPO: __________________________________________
__________________________________________
__________________________________________

OBJETIVO GENERAL:

1ra PARTE: ESTANDARIZACIÓN DE AgNO3:

1.- Escribe la reacción de estandarización del AgNO3 y su valor de Keq:

____________________________________________________________________ Keq= ______= Kp

2.- Escribe la reacción de detección de punto final de estandarización y su valor de Keq:

____________________________________________________________________ Keq= ______= Kp

3.- Cálculo de la SM (Solubilidad Molar) en condiciones estándar de ambos precipitados:

SM AgCl↓: SM Ag2CrO4↓:
PRÁCTICA No. 6 Determinación de plata en un desinfectante

4.- Justificación del cambio de color para la detección del punto final de estandarización con base al
análisis de las SM calculadas anteriormente:

5.- Resultados experimentales de la Estandarización de AgNO3 y su análisis estadístico:


Tabla No.1.- Resultados de la Estandarización y análisis estadístico.
[KCl] Número Volumen Volumen Volumen DE CV % Análisis
exacta alícuota alícuota gastado promedio estadístico
empleada de AgNO3
1
2
3
4

6.- Cálculo de la concentración exacta de la solución de AgNO3 empleada a partir de los datos de la
estandarización:

Concentración exacta de la solución de AgNO3: __________________________

2da. PARTE: CURVA DE CALIBRACIÓN POTENCIOMÉTRICA PARA LA DETERMINACIÓN DE PLATA:

7.- Cálculo de las concentraciones de los sistemas de la Curva de calibración, a partir de la concentración
calculada en el inciso anterior:
Tabla No. 2.- Datos de la Curva de Calibración.
Sistema Concentración pAg E
Cálculos de la [Ag] Molar
Ag(I) (C) (-log[Ag]) (mV)
1
2
3
4
5
6

Cálculos del pAg a partir de la [Ag] Molar de cada sistema:

Semestre 2020-2 2
PRÁCTICA No. 6 Determinación de plata en un desinfectante

NOTA: ¿Se realizó una modificación en la preparación de los sistemas de la Curva de calibración?
Indicarlo:

8.- Cálculo de K de cada sistema de la Curva, a partir de los datos calculados en la Tabla No. 2, y su análisis
estadístico:
Tabla No. 3.- Estadística de los datos de la Curva de calibración.
Sistema K = E / pAg Kprom STD % RSD Discución de los resultados
del análisis estadístico

1
2
3
4
5
6

9.- Gráfica de los Sistemas de la Curva de calibración (E=f(pAg) y su regresión lineal:


Regresión lineal:

b=___________________

m=__________________

r2=__________________

ECUACIÓN:

Gráfica No. 1.- Curva de Calibración Potenciométrica de Plata


E = f(pAg)

Prueba de Q para datos anómalos, en caso que aplique:

Análisis del valor del coeficiente de determinación (r2):

Semestre 2020-2 3
PRÁCTICA No. 6 Determinación de plata en un desinfectante

10.- Datos del Producto farmacéutico empleado:


Tabla No. 4.- Datos de fabricante del producto farmacéutico.
Nombre comercial
Presentación

Lote y fecha de caducidad (u origen)

Marbete

Volumen empleado como muestra en la parte experimental: _____________________________

11.- Diagrama de flujo de la preparación del sistema problema, incluyendo las diluciones realizadas a
partir del volumen descrito en el inciso anterior. DIBUJARLO DETRÁS DE ESTA HOJA.

Diferencia de potencial (E) experimental obtenida del Sistema problema: ___________________

12.- Interpolación de E del sistema problema en la Ecuación de la Curva de calibración escrita en el inciso
9:

13.- Cálculo del contenido de Ag en la muestra farmacéutica en las mismas unidades como está
reportado en el marbete, regresándose a las diluciones realizadas:

Semestre 2020-2 4
PRÁCTICA No. 6 Determinación de plata en un desinfectante

14.- Cálculo del % de principio activo con respecto al Marbete:

¿Es aceptable? ¿Porqué? _______________________________________________________________

15.- Comparación de la ecuación de la curva con la ecuación de Nernst a la que responde el electrodo
ión selectivo a plata (con respecto al electrodo de calomel saturado = referencia):

Ecuación de Nernst: E(V) = E°´ - 0.059 pAg

Ecuación de la Curva: _______________________________

Análisis del valor de la pendiente de ambas ecuaciones:

16.- Justificar el uso de HNO3 al 10% para realizar el lavado del material de laboratorio:

17.- Investigar qué es la FUERZA IÓNICA y porqué es importante controlarla en esta determinación:

Semestre 2020-2 5
PRÁCTICA No. 6 Determinación de plata en un desinfectante

18.- Escribir las semirreacciones que se llevan a cabo en ambos electrodos y su expresión de la Ecuación
de Nernst (recuerda que la actividad de sólidos en solución es 1):

• Semirreacción de oxidación llevada a cabo en el electrodo de calomel saturado:

_____________________________________________________________________________
Expresión de la Ecuación de Nernst:

• Semirreacción de reducción llevada a cabo en el electrodo ión selectivo a plata:

_____________________________________________________________________________
Expresión de la Ecuación de Nernst:

17.- Conclusiones generales:

Semestre 2020-2 6
PRÁCTICA No. 6 Determinación de plata en un desinfectante

18.- Referencias bibliográficas adicionales empleadas

Semestre 2020-2 7