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ESTERILIZACIÓN

Y MEDIOS DE
CULTIVO

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ESTERILIZACIÓN CIÓN
INTRODUCCION :

La esterilización es la eliminación o muerte de todos los organismos vivos de un material. incluyendo endosporas
(enlace) bacterianas. No hay grados de esterilización; un material está estéril o no lo está. Para trabajar en el
laboratorio de Microbiología es necesario que todo el material esté estéril y no vuelva a contaminarse. Solo es
posible manejando los microorganismos con técnicas asépticas.

Los métodos de esterilización se diferencian por los agentes esterilizantes utilizados: se puede esterilizar matando
los microorganismos o separándolos del fluido en el que se encuentren (aire o líquidos). Para matar a los
microorganismos se pueden emplear: agentes físicos(como calor o radiaciones) ó agentes químicos (como el
óxido de etileno). Para separarlos del aire o líquidos se emplea la filtración.

OBJETIVOS :

Garantizar que el proceso de esterilización se realice cumpliendo los requisitos de eficiencia, seguridad y calidad;
estabilizar o mantener el proceso de la esterilización bajo control, evitando que se produzca una variabilidad
excesiva

Higienizar el instrumental; preservar el material, recibir, custodiar y entregar el material; mantener y proteger los
equipos de la central; protección de la salud y seguridad del trabajador; eficiencia y protección ambiental.

METODOLOGÍA :

*Calor húmedo (en autoclave de vaporizacion)

*Calor seco (en horno de esterilización)


MATERIALES :

 Placas de Petri
 Papel Kraft
 Pabilo
 Matraces
 Algodón
 Gasa
 Autoclave
 Horno
PROCEDIMIENTO :

1. Lavar las placas petri con detergente y lejia.


2. Secar con papel toalla
3. Cortar el papel graft de 24 × 16 cm. Y el pabilo también.
4. Envolver las placas petri con el papel graft y amarrar con el pabilo.
5. Llevarlo al horno a 120°c por 10 minutos.
6. Sacarlo y dejar reposar.
7. Preparar los agares en los matraces para preparar los medio de cultivo.
8. Luego llevar a la incubadora .
AGAR MAC CONKEY
El agar MacConkey es un medio de cultivo sólido que permite el aislamiento exclusivo de bacilos Gram negativos.
Por esta razón es un medio selectivo y además permite distinguir entre bacilos fermentadores y no fermentadores
de la lactosa, lo que lo hace un medio diferencial. Es uno de los medios de cultivo más utilizado en un laboratorio de
microbiología.

USO:

Este medio se usa principalmente para el aislamiento de bacilos Gram negativos pertenecientes a la
familia Enterobacteriaceae, incluyendo las especies oportunistas y las enteropatógenas.

PREPARACION:

1. Pesar 16 gr. De agar mac conkey.


2. Llenar dos tubos de ensayo de agua destilada 200 ml.
3. Echar en el matraz junto con el mac conkey y diluir.
4. Para la esterilización llevar al autoclave por 10 minutos a 120°C.
5. Sacar en 100 °C y plaquear.
AGAR MANITOL SALADO
Este medio se usa principalmente para el aislamiento de bacilos Gram negativos pertenecientes a la
familia Enterobacteriaceae, incluyendo las especies oportunistas y las enteropatógenas.

Sin embargo, también es útil para aislar Staphylococus epidermidis, que en ocasiones puede estar presente
como patógeno oportunista, y Staphylococcus saprophyticus, reconocido patógeno urinario, entre otras
especies.

USOS:

Por su alta selectividad, este medio es ideal para sembrar muestras con flora mixta en la que se quiere buscar la
presencia de Staphylococus aureus, como principal patógeno de este género.

En este sentido, uno de sus usos más frecuentes es en el análisis microbiológico de muestras de exudados faríngeos
y secreción nasal, especialmente para detectar portadores asintomáticos de S. aureus.

FORMULA:

1000 ml. ___________________ 38gr.

200 ml. ____________________ X

38 x 200 =
1000

PREPARACION:

1. Pesar 11 gr. de Muller Hinton


2. 200 ml. De agua destilada
3. Diluir el agua destilada con el Muller Hinton en el matraz.
4. Para la esterilización llevar al autoclave por 10 minutos a 120°C.
5. Sacar a 100 °C y agregar 2.5 ml. De sangre
6. Plaquear
AGAR CHOCOLATE

El agar chocolate es un medio de cultivo sólido, enriquecido, no selectivo y no diferencial. Es utilizado


principalmente para el aislamiento de microorganismos exigentes desde el punto de vista nutricional,
aunque en él pueden crecer cualquier tipo de bacterias.

Este medio posee un color marrón característico muy parecido al chocolate, de allí su nombre. La
preparación es muy similar a la del agar sangre, solo que en este caso la sangre debe ser calentada con la
finalidad de que los glóbulos rojos se rompan.

USOS:

Se usa para realizar la prueba de susceptibilidad antimicrobiana de microorganismos exigentes,


como Streptococcus pneumoniae usando 5% de sangre de carnero calentada.

También sirve para el aislamiento primario de Neisserias y Haemophilus, pero en el caso particular del
aislamiento de Haemophilus se prefiere el uso de sangre de caballo, por ser una fuente rica en factor X y V.

PREPARACION:

1. Pesar 11 gr. de Muller Hinton


2. 200 ml. De agua destilada
3. Diluir el agua destilada con el Muller Hinton en el matraz.
4. Para la esterilización llevar al autoclave por 10 minutos a 120°C.
5. Sacar a 100 °C y agregar 2.5 ml. De sangre. Plaquear