“GERMINACIÓN ASÉPTICA DE SEMILLAS in vitro”

Aguirre Fausto, Benavides Freddy, Fonseca Randal, Montalvo Cristian, Ponce Arianna, Ponce
Rashell, Vásquez Angie.

Facultad de Ciencias de la Vida Universidad Politécnica Salesiana, Av.12 de Octubre, Quito,

Ecuador.

Resumen

La presencia de una cubierta mucilaginosa denominada sarcotesta, cubre externamente a las

semillas de papaya, por lo cual es necesario aplicar varias técnicas para que el cultivo in vitro
que se haga con la semilla tenga éxito y de esta manera superar la dormancia que se defina como
la incapacidad de semillas viables e intactas para completar la germinación, bajo condiciones
favorables. Las semillas se colocaron en una caja petri estéril para su posterior siembra en tubos
que contenían una composición de MyS con (GA3) y MyS con AIA. Se obtuvo un crecimiento
para positivo papaya, de la cual se realizó multiplicación. El uso de partes como cotiledones ha
sido profusamente utilizado para la producción de callos

Palabras claves: Cultivo in vitro, sarcotesta, dormancia, germinación.

Abstract

The presence of a called sarcotesta, covers the seeds of papaya, for that reason in necessary apply
several techniques, so that the in vitro culture have been success, and in this way overcome the
dormancy, that is defined as the inability of viable and intact seeds to complete germination,
under favorable conditions. The seeds were plant in tubes containing a composition of MyS with
(GA3) and MyS with AIA. Growth was obtained for positive papaya, of which multiplication
was carried out. The use of parts as cotyledons has been profusely used for the production of
calluses

Keywords: In vitro culture, sarcotesta, dormancy, germination

1. Introducción

La producción de papaya (Carica papaya sustratos o con papel filtro para ello algunos
L.) se encuentra entre las principales investigadores emplean medios nutritivos en
especies de frutas cultivadas comercialmente distintas concentraciones y otros a base de
en el mundo. La presencia de una cubierta solo agar y agua (Gomes y Canhoto 2003,
mucilaginosa denominada sarcotesta, cubre Brondani et al. 2012). En algunos casos la
externamente a las semillas de papaya germinación in vitro en medios enriquecidos
(Constantino & Espín, 2010). Los con sales minerales resulta apropiada
cotiledones de las semillas de cítricos especialmente en semillas pequeñas como
contienen grandes cantidades de proteínas de orquídeas (Roy et al. 2011). La
reserva (Nieves, Blanco , & Guerra, 1995). germinación in vitro permite producir
La dormancia es definida como la plántulas asépticas como fuente de explantes
incapacidad de semillas viables e intactas y la aplicación de tratamientos químicos
para completar la germinación, bajo para romper latencia (Larson et al. 2006).
condiciones favorables. Para superar la
dormancia y promover la germinación de las
semillas se han empleado diversos
tratamientos, desde la remoción de la
sarcotesta, el remojo en agua, secado al sol,
almacenamiento de las semillas a diferentes
periodos de tiempo, la inmersión de semillas
en promotores del crecimiento como el
KNO3 y el ácido giberélico. La germinación
es el proceso mediante el cual la semilla en
estado latente entra de pronto en actividad y
origina una nueva planta. La germinación in
vitro se utiliza con éxito para muchas
especies y ha demostrado ser superior a otras
técnicas como la germinación ex vitro en
2. Materiales y métodos. Crecim Crecim Crecim
MANDA
iento ento iento
RINA (cm) (cm) (cm)
Lo que primero se hizo fue la preparación de
FECH FECH FECH
los explantes (semillas de papaya y de A1 A2 A3
mandarina), se tomaron todas las semillas T1 MS 1.1 1.1 1.1
T1 MS 0 0 0
para hacer el protocolo de desinfección, se
MS+
T2 1,4 6.1 6.1
realizó un enjuague con alcohol al 70% CA
MS+
durante 2-3 min, después se añadió cloro T2 1.3 5.4 5.4
CA
20% 20ml más 80 ml de agua y dos gotas de MS+
T2 1 5.1 5.1
CA
Tween, se agitó durante 15 min. MS
T3 1.4 6.4 10.2
(GA3)
Posteriormente las semillas se enjuagaron
MS
T3 1.5 6.7 9.8
tres veces en agua estéril usando un vaso de (GA3)
MS+A
precipitación y gasas estéril como filtro para T4 0 0 0
IA
el agua. Estas semillas se colocaron en una MS+A
T4 1.2 1.2 1.2
IA
caja petri estéril para su posterior siembra en MS+A
T4 0.9 5.4 5.4
IA
tubos que contenían una composición de MS
con (GA3) y MS con AIA. Crecim Crecim Crecim
PAPAY
iento ento iento
A (cm) (cm) (cm)
FECH FECH FECH
A1 A2 A3
3. Resultados y Discusión. T1 MS 1.4 6.3 3.6
T1 MS 1.3 6.1 6.1
MANDARINA PAPAYA T1 MS 0 0 0
T1 MS T1 MS MS+
T2 1.3 1.3 1.3
CA
T2 MS+CA T2 MS+CA
MS+
T3 MS (GA3) T3 MS (GA3) T2 1 6.4 9.9
CA
T4 MS+ AIA T4 MS+ AIA MS
T3 2.3 6.9 10.6
(GA3)
MS
T3 2.5 6.6 10.6
(GA3)
Para cada semilla de diferentes especies se MS
T3 2.5 6.8 10.4
(GA3)
realizaron 4 tratamientos distintos para MS+A
T4 0.9 5.2 5.2
evaluar en cuál de los tratamientos se obtuvo IA
MS+A
una mejor respuesta analizando diferentes T4 1 5.5 5.5
IA
variables
En los resultados obtenidos podemos notar mandarina se las sumergió en una solución
que el crecimiento tanto de mandarina y de GA3 logrando así un mejor crecimiento
papaya fue bueno debido a que se realizó el de tallo en relación a los otros tratamientos.
método de escarificación que consiste en un
Pérez-Tornero et al. (2010) observaron que
corte en la semilla para la obtención de
la adición de GA3 en el medio de cultivo fue
plantas con mayor vigor y reduciendo su
esencial para el crecimiento óptimo de
tiempo de germinación. Manotoa (2012,
explantes de mandarina y papaya. También
pp.25-28), evaluó tres formas de
demostraron que el GA3 tuvo una mayor
escarificación, en semillas de Olea europea,
influencia sobre los tratamientos con CA y
los cortes fueron a un lado, reportando un
AIA
mayor porcentaje de germinación y de
sobrevivencia, indicando que los
tratamientos pre germinativos son efectivos.
Contam Contam Contam
MAND inación inación inación
De acuerdo a la tabla se observa que no ARINA Fúngica Fúngica Fúngica
existen diferencias significativas entre (%) (%) (%)
FECHA FECHA FECHA
tratamientos para la variable de 1 2 3
T1 MS 0 1 1
germinación. Sin embargo, la primera
T1 MS 1 1 1
semana no se reportó resultados para los MS+
T2 0 0 1
tratamientos con CA y AIA. CA
MS+
T2 0 0 1
CA
Para Jiménez (1998), Un balance apropiado MS+
T2 0 0 1
entre auxinas y citoquininas en el medio de CA
MS
cultivo es necesario para la formación de T3 (GA3 0 0 0
)
plantas a partir de meristemos, ápices o MS
yemas. T3 (GA3 0 0 0
)
MS+
Carimi y De Pasquale (2003) señalaron que T4 1 1 1
AIA
las giberelinas son frecuentemente MS+
T4 0 1 1
AIA
empleadas para promover la elongación de MS+
T4 0 0 1
los tallos en los cítricos, eso es notorio en AIA

los tratamientos de MS (GA3) que fueron

donde a las semillas tanto papaya como
 Contam Contam Contam el adecuado por lo que al final solo se pudo
PAPA inación inación inación
YA Fúngica Fúngica Fúngica obtener 6 plantas libres de patógenos.
(%) (%) (%)
FECHA FECHA FECHA
1 2 3
T1 MS 0 0 0
T1 MS 0 0 1
T1 MS 1 1 1
MS+
T2 0 0 1
CA
MS+
T2 0 0 0
CA
MS
T3 (GA3 0 0 0
)
MS
T3 (GA3 0 0 0
)
MS
T3 (GA3 0 0 0
)
MS+
T4 0 0 1
AIA
MS+
T4 0 0 1
AIA

La contaminación fúngica se logró controlar

en primera instancia dado que como indica
Gonzalez (2001) las semillas de cítricos son
menos propensas una propagación de
hongos, por lo que casi el total de los
tratamientos tanto de mandarina como de
papaya presento colonias al momento de la
primera revisión, aunque al pasar el tiempo
algunos de los tratamientos empezaron a
contaminarse por lo que podemos decir que
la planta madre fue la que estaba
contaminada y el protocolo en campo no fue
4. Conclusiones https://s3.amazonaws.com/academia.e
du.documents/34431273/Propagacion_
El protocolo de desinfección realizado a las de_plantas_por_cultivo_in_vitro.pdf?A
semillas es uno de los pasos más WSAccessKeyId=AKIAIWOWYYGZ2Y53U
L3A&Expires=1542248289&Signature=J
importantes porque si las semillas no se
RD5EmGAeRTwl4iN%2BGgLgfZNcFU%3
encuentran completamente asépticas, se va a D&response-content-
generar contaminación. La escarificación se disposition=inline%3B%20filename%3D

realizó para eliminar la testa y que de esta
manera la semilla tenga una fácil
germinación. El uso de partes como
cotiledones ha sido profusamente utilizado
para la producción de callos.
5. Bibliografía
Castillo, A. (s.a). Propagación de plantas por
cultivo in vitro:una biotecnología que
nos acompaña hace mucho tiempo .
Obtenido de Unidad de Biotecnología:
Constantino, M., & Espín, G. (2010). Efecto de la
biofertilización y los bioreguladores en
la germinación y el crecimiento de
Carica papaya. Rev.Colomb.Biotecnol,
103-115.
Nieves, N., Blanco , M., & Guerra, O. (1995).
Caracterización bioquímica de la semilla
botánica y el proceso de germiación en
mandarina cleopatra. Cultivos
Tropicales , 24-29. Obtenido de
Caracterización bioquímica de la semilla
botánica y el proceso de germinación
en mandarina cleopatra .