PRÁCTICA NO.

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“Centrifugación”

Materia: Separación Mecánica Periodo: 2020 - 01

Profesor: Dr. Carlos Javier Escudero Santiago Grupo: 8010
Integrantes del Equipo:
o Ricardo Alexis Gutiérrez Aguiñaga 3223712
o Nicole Bernal Tijero 3279890
o Juan Carlos Vargas Ruiz 3250046
o Jorge Alexis Hurtado Martín 3285987
o Libni Fraraim Valdez Carbajal 4504038
Carrera: Ing. Química Zapopan, Jal., 11 febrero 2020
Contenido

OBJETIVO ............................................................................................................................................. 3
INTRODUCCION ................................................................................................................................... 3
Centrifugación Diferencial............................................................................................................... 3
Centrifugación Zonal ....................................................................................................................... 3
Ultracentrifugación ......................................................................................................................... 4
Utilización de la Centrifugación ...................................................................................................... 4
PRELABORATORIO ............................................................................................................................... 4
Centrifugas de baja velocidad ......................................................................................................... 4
Ultracentrífugas............................................................................................................................... 5
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ....................................................................................................... 6
RESULTADOS ....................................................................................................................................... 7
Medición Del Radio De La Centrifugadora ...................................................................................... 8
Cálculo de las fuerzas centrifugas (Fc) ............................................................................................ 8
Cálculo de Velocidad de Centrifugación (Vc) .................................................................................. 9
Cálculo de tiempo de centrifugación (Tc) ....................................................................................... 9
DISCUCION ........................................................................................................................................ 10
CONCLUSION ..................................................................................................................................... 11
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................................................... 12
OBJETIVO
Aplicar los fundamentos de centrifugación.
Observar el comportamiento de la separación de la partícula aplicando una fuerza centrífuga.
Obtener las velocidades de sedimentación de partículas finas.

INTRODUCCION
La Centrifugación es un método que permite separar sólidos de líquidos, o líquidos de líquidos
de diferentes densidades mediante la utilización de una centrifuga. La centrifuga obliga a una
mezcla a experimentar un movimiento rotatorio con una fuerza de mayor intensidad que la
fuerza gravitacional, provocando la sedimentación del sólido o de las partículas de mayor
densidad. Este es uno de los principios en los que se basa la densidad: todas las partículas, por
poseer masa, se ven afectadas por cualquier fuerza. La centrifugación impone, gracias a la
aceleración centrífuga, un efecto parecido al gravitacional: Las partículas experimentan una
aceleración que las obliga a sedimentar. [1]
Existe una correlación entre el tamaño, la densidad de una
partícula y la velocidad que separa la partícula de una mezcla
heterogénea, cuando la única fuerza aplicada es la de la
gravedad. Cuanto mayor sea el tamaño y cuanto mayor sea la
densidad de las partículas, más rápido se separarán de la
mezcla. Mediante la aplicación de una mayor fuerza
gravitacional efectiva a la mezcla (como una centrífuga lo hace),
la separación de las partículas se acelera. Esto es ideal en
entornos industriales y de laboratorio porque las partículas que
se separan naturalmente durante un largo período de tiempo
pueden separarse en mucho menos tiempo. Figura 1: Proceso de Sedimentación

Existen varios métodos de centrifugación y una extensa variedad de técnicas derivadas:

Centrifugación Diferencial
Se basa en una diferencia en la densidad de las moléculas. Esta diferencia debe ser grande para
poder ser observada al centrifugar; Las partículas que posean densidades similares sedimentan
juntas. Este método no es especifico, por lo que se utiliza como centrifugación preparativa para
separar partículas de otros componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias
de núcleos y membrana) pero no es útil para separar moléculas. [2]

Centrifugación Zonal
Las partículas se separan al usar medios de diferente densidad. Las partículas con mayor
densidad se sedimentarán al fondo (precipitado). Aquellos componentes de la mezcla con
menor densidad al medio quedarán en el sobrenadante mientras que las partículas con
densidad similar a la del medio de centrifugación, quedarán en una zona intermedia entre el
precipitado y el sobrenadante. El medio puede no presentar gradientes de concentración
(centrifugación zonal sin gradiente) o tener diferencias de concentración (centrifugación zonal
con gradiente).
Ultracentrifugación
Permite estudiar las características de sedimentación de estructuras subcelulares (lisosomas,
ribosomas y microsomas) y biomoléculas. Usar rotores especiales (fijos o de columpio) y
sistemas de monitoreo.

Utilización de la Centrifugación

Medio ambiente: desecación de lodos para el tratamiento de aguas residuales.

Industria alimentaria: la separación de la crema de la leche, la eliminación de partículas de
la cerveza o vino (clarificación), la eliminación de aceites y grasas (extracción de aceite de
oliva), extracción de miel (apicultura).
En laboratorios: recuperar un precipitado, separar elementos en la sangre (glóbulos rojos,
glóbulos blancos, plaquetas suspendidas en plasma sanguíneo), separación de compuestos
celulares para estudio bioquímico o molecular.
Campo nuclear: enriquecer Uranio con el isótopo ligero 235 U. [3]

PRELABORATORIO
Centrifugas de baja velocidad
También conocidas como sobremesa o clínica: de pequeño
tamaño y normalmente sin refrigeración, alcanzan una
velocidad máxima de 6,000 rpm y son útiles para la separación
de partículas grandes como células o precipitado de sales
insolubles.
Figura 2: Centrifugadora de sobremesa o
clínica

• Centrífugas de alta velocidad: alcanzan velocidades máximas de entre 18,000 y

25,000 rpm (pueden generar alrededor de 60,000g). Son refrigeradas, pueden o no
tener sistema de vacío para evitar el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con
el aire. Son útiles para la separación de fracciones celulares, pero insuficientes para la
separación de ribosomas, virus o macromoléculas en
general.
Al igual que las centrifugas de mesa este tipo de
centrifugas están diseñadas para ofrecer
rendimiento, fiabilidad y productividad.

Figura 3: Centrifugadora de alta velocidad

Ultracentrífugas
Superan los 50,000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de
refrigeración para refrigerar no solo la cámara del rotor donde están las
muestras sino también el motor. Pueden generar hasta 60,000 g, las
cuales son suficientes para separar pequeñas proteínas. Las
ultracentrífugas se pueden dividir en dos tipos: analíticas y preparativas.
La diferencia más importante entre ellas es que la analítica cuenta con un
sistema óptico para visualizar la sedimentación de la muestra en tiempo
real, por otro lado, la preparativa se usa para aislar partículas de bajo
coeficiente de sedimentación (microsomas, virus y macromoléculas). [4]
Figura 4: Ultracentrífuga

Tabla 1: Aplicaciones del Proceso de Centrifugación en Actividades Cotidianas e Industriales

ACTIVIDAD MATERIA QUE SEPARAN

Lavadora Separa la ropa del agua.

Centrifuga de lechuga Separa el agua de la lechuga.

Análisis clínicos Separa la sangre del plasma.

Industria láctea Separar la grasa del agua

¿Cuáles son las funciones del rotor y motor de una centrífuga?:

✓ Rotor: Es la pieza que gira impulsada por el motor y sobre la cual se coloca la muestra.
Han de ser materiales ligeros y resistentes a altas velocidades de giro. Los mejores son
de titanio y fibra de carbono ya que son ligeros y resistentes.
✓ Motor: Parte fundamental del sistema de una máquina para hacer funcionar una
máquina.

Características generales del tipo de levadura a utilizar

o Marca: Tradi-pan
o Diámetro de la partícula: 6 a 8 micrómetros.
o Uso: Hacer pan
o Composición: Carbohidratos, grasas, colesterol, sodio, proteínas, vitaminas, calcio y
hierro.
o Densidad: 1.04g/cm3
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1) Se prepararon 50 mL de una suspensión de levaduras al 1% p/v en agua

destilada.
2) Se tomó el peso de los tubos a utilizar y de las camisas metálicas del rotor
de centrífuga.
3) Se Homogenizó la suspensión y transferir 7 mL a un tubo. Repita la
operación cuantas veces sea necesaria.
4) Para introducir los tubos a la centrífuga es necesario balancearlos.
5) Colocar los tubos dentro del rotor de la centrífuga, los tubos del mismo
peso deben ir en sitios opuestos de la centrífuga para lograr el balance.
6) Realizar la centrifugación de acuerdo a las condiciones de prueba,
realizando la operación siguiendo las instrucciones del profesor.
7) Las centrifugaciones se realizarán variando las velocidades angulares:
1000, 2000 y 3000 rpm, tiempo de centrifugación: 5 y 10 min
8) Después de centrifugar las muestras, recupere 5 mL de sobrenadante.
9) Lea la absorbancia del centrifugado utilizando como blanco agua en un
espectrofotómetro a 600 nm y registre la lectura de la absorbancia de cada
muestra.
Figura 5: Figura
centrifugada

Figura 6: Velocidad angular para la centrifugación Figura 7: Interior de la centrifugadora

RESULTADOS
Tabla 2: Datos experimentales de absorbancia en las muestras centrifugadas

Velocidad Absorbancia
Tiempo
Angular (rpm) 500nm 600nm
1000 5 min 0.679 0.618
2000 5 min 0.233 0.173
3000 10 min 0.071 0.068

0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
Abs (500nm)
0.3
0.2 Abs (600nm)
0.1
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
Velocidad Angular (rpm)

Figura 8: Gráfica de velocidad angular contra absorbancia

Cálculo de Fuerza centrífuga Cálculo de Velocidad de Centrifugación

𝜔2 ∗ 𝑟 ∗ 𝑑𝑝 ∗ (𝜌𝑆 − 𝜌)
𝐹𝑐 = 𝑚 ∗ 𝜔2 ∗ 𝑟 𝑉𝑐 =
18 ∗ 𝜇

Cálculo de Tiempo de Centrifugación (Ecuación de Stokes centrífuga)

18 ∗ 𝜇
𝑡𝑐 =
𝑅
𝜔 2 ∗ 𝑑𝑝 2 ∗ (𝜌𝑆 − 𝜌) ∗ 𝑙𝑛 [𝑅2 ]
1

Donde:
m = masa (Kg) ρ = densidad del fluido (kg/m3)
w = velocidad angular (rad/s) μ = viscosidad del fluido (kg/ms)
r = radio (m) R1= Radio del rotor hasta superficie (m)
dP = diámetro de la Partícula (m) R2 = Radio del rotor hasta fondo (m)
ρs= densidad de la partícula (kg/m3)
Medición Del Radio De La Centrifugadora

Figura 9: Medición de la capucha Figura 10: Medición del radio de la centrifugadora

Distancia del punto central a la parte superior del capuchón: 8.2cm – 2.5cm = 5.7 cm
Largo del Capuchón: 9.5 cm
Y que la altura promedio del líquido es de 7.5 cm (largo)
Por lo que R2= 5.7 cm + 9.5cm = 15.2 cm
Y R1 = 15.2 – 7.5 cm = 7.7cm

Por lo tanto, para obtener r (radio hasta el punto central de la mezcla) se debe obtener un
promedio ponderado de ambos radios: (15.2cm + 7.7cm)/2 = 11.45 cm

Cálculo de las fuerzas centrifugas (Fc)

Fc1000 rpm= (5.018x10-4kg) *(104.7197rad/s)2*(0.082m) = 0.4512 N

Fc2000 rpm= (5.018x10-4kg) *(209.4395rad/s)2*(0.082m) = 1.8049 N
Fc3000 rpm= (5.018x10-4kg) *(314.1592rad/s)2*(0.082m) = 4.0611 N
 Separación Mecánica Dr. Carlos Javier Escudero Santiago

Cálculo de Velocidad de Centrifugación (Vc)

Vc1000 rpm=((104.7197rad/s)2 *(0.082m) * (6x10-6m) *(1040kg/m3-

1000kg/m3))/(18kg/ms*1) = 0.0119m/s
Vc1000 rpm=((209.4395rad/s)2 *(0.082m) * (6x10-6m) *(1040kg/m3-
1000kg/m3))/(18kg/ms*1) = 0.0479m/s
Vc1000 rpm=((314.1592rad/s)2 *(0.082m) * (6x10-6m) *(1040kg/m3-
1000kg/m3))/(18kg/ms*1) = 0.1079m/s

Cálculo de tiempo de centrifugación (Tc)

Tc1000 rpm = 18kg/ms(1)/(104.7197m)2(6x10-6m)2(1040kg/m3-1000kg/m3) x ln

(0.152m/0.077m) = 465 s
Tc2000 rpm = 18kg/ms(1)/(209.4395m)2(6x10-6m)2(1040kg/m3-1000kg/m3) x ln
(0.152m/0.077m) = 116.2789 s
Tc3000 rpm = 18kg/ms(1)/(314.1592m)2(6x10-6m)2(1040kg/m3-1000kg/m3) x ln
(0.152m/0.077m) = 51.6795 s

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DISCUCION
Para obtener mejores resultados precisos o adecuados se necesita de la preparación correcta
de las disoluciones, en su volumen determinado, es por eso por lo que se tuvo que realizar el
peso correcto y más que nada exacto de la levadura. A temperatura ambiente la agitación
constante para evitar formación de cuerpos solidos antes de empezar. Además de que la
centrifugación se hizo en 3 diferentes velocidades (1000,2000 y 2500 rpm) y en dos tiempos
diferentes (5 y 10 minutos).
La práctica se realizó a condiciones ambientales, un alumno seleccionado junto con el Doctor
fueron los encargados de llevar a cabo el control de las velocidades de él centrifugador y a
ciertos integrantes de el equipo se encargó de las demás tareas o actividades de la práctica.
Tomando en cuenta el cuidado del tiempo en que se estima cada velocidad. Durante el
desarrollo de la práctica no hubo ninguna anomalía, ya que, aunque fue una práctica de
duración media, no se presentó un alto grado de dificultad al realizar el desarrollo
experimental.
Si tomamos en cuenta la densidad de la levadura es alrededor de 20 Billones de celular / gr en
el volumen total de 50 ml con una masa de la muestra 0.5018 gr de levadura con una solubilidad
en agua **gr / 50 ml de agua a 25º C, era de esperarse que las seis muestras se separarán
mediante una fuerza rotativa. Las partículas de la levadura son más densas que las partículas
de agua, además se pudo notar que al inicio hubo un poco de saturación de la levadura, pero
con ayuda de una buena agitación constante se pudo solubilizar. Además, el área de trabajo se
encuentra a una temperatura menor de 25º C, lo cual propicia que se pueda solubilizar de
manera efectiva.
Por lo tanto, la mejor condición observada fue: disponer de los reactivos correctos, en su
concentración precisa y exacta, y su manejo y utilización de manera adecuada, tener el material
limpio, que no intervenga otra sustancia para que no obtengamos interferencias o reacciones
que, no esperadas, la agitación de la levadura fue primordial para facilitar la separación de las
partículas antes de comenzar a medir el tiempo de centrifugación. Con una correcta agitación
son aseguramos de tener una agitación uniforme a lo largo de nuestra probeta.
La práctica se realizó con 2 compuestos:
1. La levadura
2. Agua
Para observar el proceso de
centrifugación de estas mismas. Se
utilizo la misma concentración
para ambas 1% masa-volumen.

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Análisis Del Proceso De Centrifugación Llevado A Cabo

1. Alimentación: La suspensión de sólidos y líquidos se introduce a la canasta girante con
una guarnición filtrante mediante el tubo de alimentación. La fuerza centrífuga empuja el
líquido a través de la torta de sólidos y las aguas madres se descargan a través de los agujeros
situados en la circunferencia de la canasta.
2. Lavado: Un líquido de lavado se introduce y se distribuye a través de los sólidos. La acción
“enchufe de flujo” del líquido, purifica los sólidos y elimina las aguas madres residuales.
3. Rotación final: Los líquidos residuales se eliminan de la torta de sólidos y se descargan a
través de los agujeros en la canasta para alcanzar la máxima deshidratación.

CONCLUSION
Como conclusión, la centrifugación es un proceso que nos facilita el análisis cuantitativo y
cualitativo de algunas sustancias, al poder separar las fases con la fuerza centrífuga cuando no
es posible con la fuerza de gravedad.
En esta técnica de separación de sólidos y líquidos se empleó la fuerza centrífuga de un
sistema (mecánico-eléctrico) que hizo girar la muestra a gran velocidad (de 1000 a 3000 rpm),
lo que aceleró la separación de fases con respecto a las otras técnicas en que sólo se emplea la
fuerza gravitatoria. Los tubos empleados fueron de un diseño especial, dada su fragilidad,
fueron colocados en unos soportes metálicos. Es muy importante, para evitar vibraciones
debidas a descompensaciones en el peso, llenar todos los tubos de la centrífuga (incluso los que
no se utilicen para la separación) con pesos aproximadamente iguales y los tubos centrifugados
fueron llevados al espectrofotómetro para medir la absorbancia de cada una de las muestras.
Al analizar el gráfico de velocidad angular vs. Absorbancia es posible observar que a medida
que aumenta la velocidad angular, disminuye la absorbancia. Por otro lado, gracias a la ley de
Lambert y Beer es posible observar que la absorbancia es proporcional a la concentración. Por
lo que se puede concluir que la concentración en la centrifugación es inversamente
proporcional a la velocidad angular. En otras palabras, al aumentar la velocidad angular,
disminuye la concentración final.
Por ello, se puede saber que cuando la fuerza de gravedad en la sedimentación no es suficiente
para sedimentar los sólidos o si el objetivo es bajar la concentración es necesario centrifugar, y
como ya se mencionó en el prelaborarorio, se requiere mayor fuerza centrífuga (rpm) para
sedimentar partículas de menor tamaño o para tener una menor concentración.

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] Químico, L. (2017, October 6). ¿Qué es la Centrifugación? " TP - Laboratorio Químico.
Retrieved February 9, 2020, from https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-
quimico/procedimientos-basicos-de-laboratorio/centrifugacion.html
[2] Harrison, Roger G., Todd, Paul, Rudge, Scott R., Petrides D.P. Bioseparations Science and
Engineering. Oxford University Press, 2003.
[3] Dishon, M., Weiss, G.H., Yphantis, D.A. Numerical Solutions of the Lamm Equation. I.
Numerical Procedure. Biopolymers, Vol. 4, 1966. pp. 449–455.
[4] Cao, W., Demeler B. Modeling Analytical Ultracentrifugation Experiments with an Adaptive
Space-Time Finite Element Solution for Multicomponent Reacting Systems. Biophysical Journal,
Vol. 95, 2008. pp. 54–65.

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