Curso HPLC Chemstation - Segunda Parte PDF

CAPACITACION
HPLC Agilent 1100 Series

Chemstation
Data Analysis & Reporting
Julio 21 y 22 de 2004
Grupo de
Mercadotecnia
Capacitación y
Soporte Técnico. Parte I
www.canitec.com.mx
Grupo de Mercadotecnia,
Capacitación
y Soporte Técnico
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www. Canitec.com.mx -1- Agilent HPLC ChemStation Software

Capacitación
y Soporte Técnico
Contenido
Introducción al Software HPLC ChemStation 4

Menú 7
Configuración del Equipo 8
Menúl principal del HPLC ChemStation 9
Menús del HPLC ChemStation Software 11
Niveles de Acceso 12
ChemStation Scheduler 13
Creando un Método -ACQUSITION- 14

Que es un Método? 15
Desarrollando Métodos 16
Parámetros de la Bomba 21
Parámetros del Inyector 25
Parámetros del Detector de Arreglo de Diodos 32
Parámetros del Detector de Fluorescencia 34
Parámetros del Detector de Longitud de Onda Convencional (VWL) 35
Parámetros del Horno para Columnas 36
Identificación de Columnas 37
Números de Serie 38
Run Time Check List 39
Salvando el Método 40
Run the Method 41
Gráficas OnLine 44
LogBook 46
Análisis de Datos e Integración 47

Trabajando con Cromatógramas 48
Anotaciones 54
Window Functions 56
Standard and Enhanced Integrator 58
Como desarrollar una Integración 59
Enhanced Integrator 60
Integración Manual 68
Salvando los Eventos de Integración 70

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Cuantificación 71
Creando una Tabla de Calibración 72
Detalles de las Señales 73
Parámetros de la Calibración 75
Introduciendo datos en la Tabla 79
Opciones de la Tabla de Calibración 86
Detalles de los Compuestos 88
Detalles de los Picos 89
Detalles de Identificación 90
Opciones de la Tabla de Calibración 92
Herramientas de Cuantificación 93
Salvando la Tabla de Calibración como parte del Método 94
Reporte Básico 95
Reporte Específico 96
Curvas de los Datos del Instrumento 102
Salvando los parámetros del reporte 103
Impresión de Reportes 104
Herramientas del Reporte 105
Secuencia y Batch 106

Construyendo una Secuencia 107
Parámetros de la Secuencia 108
Re calibración Automatizada 112
Salida de la Secuencia 118
Resumen de la Secuencia 119
Salvando la Secuencia 122
Iniciando una Secuencia 123
Diagrama de Muestreo de la Secuencia 124
Calibración Avanzada 125
Revisión de un Batch 127
Reporte Avanzado 132

System Suitability 133
Formato de Reporte GLP 138
Salvando Datos GLP 139

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Introducción al Software HPLC ChemStation

En esta sección tomaremos un tour por el software HPLC ChemStation y veremos sus
principales componentes. El uso de niveles de acceso y del ChemStation Scheduler se
revisarán.

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Estructura del Software HPLC Chemstation
El diagrama muestra la estructura de los directorios del software. HPCHEM es el directorio

que comprende los programas para configurar e iniciar la aplicación. 1 0 2, ect., son
subdirectorios o fólderes para configurar el instrumento. Estos subdirectorios tienen cinco
subdirectorios adicionales, los cuales son; Data, Methods, Sequence, Temp, y Verify. El
subdirectorio Data comprende todos los directorios de resultados de los análisis y del mismo
modo para los otros subdirectorios. Si nosotros creamos subdirectorios de acuerdo a nuestro
trabajo o bien métodos estos nuevos subdirectorios serán identificados con la extensión D, y
se observan de la siguiente manera:
• .CH Archivos de Cromatógramas

• .UV Archivos de Espectros
• .MAC Archivos de Información de Muestras
• .REG Archivos de Registros Binarios
• .LOG Archivos de LogBook
• .M una copia del método, si se almacena como archivo de datos.
El subdirectorio de METHODS incluye todos los que tengan la extensión .M. El subdirectorio
de SEQUENCE contiene los archivos de las tablas de secuencias y los parámetros de las
secuencias. El subdirectorio de VERIFY comprende archivos de datos, métodos y resultados
de datos procesados almacenados y registrados como .REG.

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Estructura del Software HPLC Chemstation
El nombre de un archivo para el ChemStation puede tener hasta 8 caracteres, un punto de

separación y después una extensión de 3 letras. Regularmente y de modo estándar se
emplean las siguientes extensiones:
.d data file
.m method file
.uvl spectral library
.mac macro file
.exe an executable program file
.txt a text file
.log a log file
.b a batch file

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Menú del Software HPLC Chemstation
Para iniciar el programa se requiere hacer click en el menú de inicio con el botón izquierdo
del Mouse y seleccionar en los programas ChemStation. El sistema On-Line tendrá una
comunicación bi direccional entre el software y el hardware. La sección Off-Line se emplea
únicamente para el reproceso de información.

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Configuración del Instrumento 1100
Cuando inicia el software nos pregunta por la configuración de los módulos instalados o a
instalar. La lista de módulos configurados muestra todos los sistemas 1100 activos. Se
pueden adicionar seleccionado uno o más módulos disponibles en la lista Available Modules
y adicionarlos a la lista de Configured Modules. También se pueden remover módulos de
esta lista. Esta pantalla no aparece en el modo de Off-Line.

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Menú Principal del HPLC ChemStation
El software tiene una interfase diseñada en ventas o menús simples, con las funciones
analíticas más empleadas.
El menú o la ventana de Method and Run Control es empleada para definir los parámetros
del un método. En esta pantalla podemos observar las condiciones del instrumento en tiempo
real; como las lecturas de presión, temperatura y flujo. También se pueden observar
espectros y cromatógramas en tiempo real.
El software tiene una barra de herramientas para el rápido acceso a diferentes secciones del
software. La primer barra de herramientas sus componentes son comunes en el software
como métodos y secuencias. El menú de Method and Run Control adicionalmente incorpora
un sistema de barras de estado, un diagrama de muestreo puede ser configurado para una
corrida sencilla o bien para corridas automáticas. La configuración esquemática de la interfase
con el equipo emplea indicadores gráficos animados para el rápido acceso a los parámetros
de cada módulo. Este esquema puede ser removido si no se requiere o bien si se quiere
salvar memoria para otros programas.

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Otros Menús del HPLC ChemStation
El ChemStation tiene cinco ventanas estándar:
Method and Run Control; Para controlar y Adquirir Datos del Instrumento.
Data Análisis; Para revisión y re evalución de información que ha sido adquirida.
Report Layout; Para el diseño de formatos de reporte.
Verification.
Diagnosis.
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Menús del HPLC ChemStation
Existen dos maneras de cambiar los menús del ChemStation. Una es a través del menú de
View y la otra es mediante la caja de dialogo drop-down.

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Niveles de Acceso
Los accesos a los diferentes menús pueden ser establecidos para cada usuario. Se pueden
seleccionar usuarios como Manager o como Operador. Un Manager tiene acceso completo a
todos los menús. Un operador tiene acceso limitado y no puede editar métodos.

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HPLC ChemStation Scheduler
Se puede emplear el HPLC ChemStation Scheduler para programar eventos y que el

software los ejecute de manera automática una vez, diario, cada semana o una vez a la
semana o al mes. Se puede programar cualquier evento, como encender el detector, iniciar la
corrida de un blanco.
Cuando el comando ha sido completado el Scheduler anota el status en la línea de Result,

así que se puede estar monitoreando el progreso de este.

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Creando un Método –Acquisition -
Un método incluye todos los parámetros necesarios para la adquisición y análisis de datos.
Con parámetros de pre y post corrida. En esta sección revisaremos los elementos de un
métodos y discutiremos los parámetros de adquisición.

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¿Que es un Método?
• Un método incluye todos los parámetros necesarios para desempeñar la adquisición y
el análisis de lo datos de una muestra, incluyendo parámetros de integración y
calibración para una muestra.
• Parámetros de pre y post corrida pueden especificados por un comando o algún macro
del menú Run Time Checklist.
• Los métodos se identifican por una extención .m
Partes de un Método
• Información del Método

• Parámetros de control del instrumento
• Parámetros de Análisis de datos
• Run Time Checklist
Un método incluye todos los parámetros necesarios para desempeñar la adquisición y el

análisis de lo datos de una muestra. Parámetros de pre y post corrida pueden
especificados por un comando o algún macro del menú Run Time Checklist. Acquisition
se refiere a los parámetros de control del instrumento (bomba. Detector, Autosampler,
Column Compartment and Detector). Los parámetros para el Análisis de datos nos
definen como estos serán procesados. Estos parámetros incluyen detalles de las señales,
eventos de integración, cuantificación de picos, calibraciones y el estilo del formato de
impresión. El Run Time Checklist define cuales partes del método serán ejecutadas
cuando el método inicie.

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Desarrollando un Método
Se puede hacer clic en el gráfico que representa la bomba y se desplegará el menú

relacionado al módulo. Por ejemplo; se puede dar un flujo o cambiar composiciones haciendo
clic en el menú Set up Pump.

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Si se solo se tienen que cambiar uno o dos parámetros en sólo una parte del método, será
más fácil introducirse al panel individual de cada módulo en el menú Instrument. Para
cambiar cada parte del método de una manera individual será mejor a través del menú Edit
Entire Method.

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Se puede editar un método existente empleando el menú Edit entire Method, que es parte
del menú Method. Automáticamente es guiado a través de los diálogos, pare esto
primeramente se tiene que cargar el método o bien si se va editar uno nuevo se puede cargar
el método default, def_lc.m. seleccionar Edit entire Method del menú de Method. Después
se realizarán todos los cambios necesarios para la adquisición y análisis de datos, recuerde
salvar el método como Save the Method (As).

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Después de seleccionar Edit Entire Method, el software nos pregunta sobre las secciones del
método que van a ser editadas. Se seleccionan las partes del método que editaremos
colocando una marca (check) en el menú correspondiente. En el momento de aceptar (OK),
el software muestra cada parte del método que fue seleccionada para editar en orden
secuencial. En este ejemplo se modificarán todos los parámetros del método. Method
Information, Instrument/Adquisition, Data Análisis y Run Time Checklist.

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La información de un Método “Method Information” comprende la descripción general de un

método. Esta información se imprime en cada reporte. Esta información nos independiente del
método, ni tampoco es un archivo individual de datos.

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Parámetros de la Bomba
Flow
El flujo es la velocidad de movimiento del eluente a lo largo de la columna. Es importante
mantener el flujo constante para asegurar un tiempo de retención preciso en cada pico y
reproducible en cada corrida. Las variaciones se pueden presentar como resultado de una
falla parcial del sistema de bombeo, un cambio en la viscosidad de la fase móvil o cambios en
la temperatura. El rango de velocidad de flujo en las bombas isocráticas y cuaternarias 1050 y
1100 es el mismo y es de 0.0 a 5.00 ml/min en etapas de 0.001 con una presión máxima de
400 bar. Con presiones menores a 200 bar se puede programar hasta un flujo de 10 ml/min.
Solvents
Se tienen la elección de eluir nuestro analito de manera isocrática o bien a través de
gradiente. Se pueden programar los porcentajes de A, B y C en cualquier valor de 0 a 100%.
El canal A siempre entregará el volumen restante al 100% de la composición.

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Pump Parameters
En esta pantalla podemos apagar o encender los canales, la caja de diálogo también permite
introducir el nombre del solvente. Cuando se este trabajando con un análisis de fase reversa
la fase móvil acuosa se coloca en el canal A.
Pressure Limits
Permite aumentar o disminuir los límites de presión. El límite superior de presión será aquel al
cual la bomba apagará el flujo de manera automática para proteger el sistema contra el
exceso de presión. Si la presión cae por debajo del límite inferior, como por ejemplo cuando
se acaba la fase móvil, la bomba también apagará el flujo automáticamente.
Stop Time
Es el tiempo final del análisis. Después de este tiempo todos los gradientes son detenidos y
los parámetros de la bomba regresan a las condiciones iniciales. La bomba es el módulo que
maneja el tiempo global de análisis para todos los módulos del sistema. Los límites son 0.0 a
99999 minutos para el sistema 1100.
Post Time
El Post Time es el lapso de tiempo mínimo entre el final del análisis y el inicio del siguiente
análisis. Este parámetro se puede emplear para equilibrar la columna después de cambios en
la composición de la fase móvil, por ejemplo después de un gradiente.
Timetable
El Timetable es empleado para programar diferentes eventos en la bomba durante la
ejecución del método. Los valores del Timetable cambian linealmente con respecto al tiempo
del valor inicial. Se puede programar composición, flujo y el límite de presión máximo.

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El menú Pump Auxiliary se muestra cuando se selecciona More Pump del menú Instrument.
Este nos permite indicar la proporción máxima del cambio de flujo de un solvente, la distancia
mínima recorrida por pistón, la compresibilidad del solvente y el canal primario de una bomba
cuaternaria.
Maximum Flor Gradient Indica el límite de la proporción del cambio del flujo de solvente.
Minimu Stroke Define el volumen de fase móvil desplazado en un movimiento

del pistón. Este volumen tiene influencia en el desempeño del
mezclado y la linealidad del gradiente. En AUTO la bomba
selecciona el valor con respecto al flujo.
Compressibility La compresibilidad de la fase móvil tiene un efecto en el

desempeño de la bomba. Para una mayor precisión en el flujo y
en el mezclado se puede ajustar de acuerdo a la fase móvil que
esta siendo empleada.
Primary Channel Especifica el primer canal del cual se tomará la fase móvil. El
valor recomendado es AUTO.

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y Soporte Técnico
El menú Control se muestra cuando se selecciona More Pump del menú Instrument y luego
Control.
La bomba puede se puesta en condiciones de On, Off o Standby. En la condición de

Standby el motor de la bomba se encuentra activo, y cuando la bomba es puesta en On no
necesita ser re inicializada.
El grupo de Error Method nos permite definir un método de la bomba particular cuando se
detecta un error en el sistema. Este método puede ser ejecutado cuando el sistema se detiene
debido a algún problema.
El grupo de Automatic turn On, aquí se pueden programar fechas y horarios para que la
bomba se encienda automáticamente.

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Parámetros del Inyector
El menú Setup Injector se muestra cuando se selecciona Setup Injector del menú
Instrument o como parte del menú Edit entire Method...
Se pueden editar parámetros de inyección, incluyendo un programa opcional Injector

Program para automatizar algunas funciones como pre-column derivatization.
Standard Injection es para una secuencia simple de inyecciones. Los límites del volumen de
inyección dependen de la jeringa y el asiento del capilar instalados. Para la configuración
estándar (jeringa de 100 ul, asiento de capilar de 0.17 i.d. (2.3 ul) y un loop de 250 ul) el límite
superior es de 100.00 ul.
La opción de Injection Needle Wash especifica una eyección que incluye un lavado de aguja
después de tomar la muestra pero antes de moverse hacia el asiento. Especificar el vial que
contiene el solvente de lavado en el campo de Wash Vial.

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y Soporte Técnico
Optimización
Overlap Injection Cycle – El menú de Overlapping Injections promueve un procesamiento
de muestras, permitiendo su preparación mientras la inyección en curso termina. El efecto
neto es que se pueden correr en un menor periodo de tiempo mientras que el periodo de
inyección se mantiene constante.
Existen algunas restricciones cuando se emplea Overlapping Injection en una secuencia:
1. Todas las muestras programadas en una secuencia deben de emplear el mismo

método.
2. Muestras control no pueden ser empleadas.
3. Pausing and Resuming la secuencia no puede ser empleado.
Prefetch Simple Vial – Con esta opción, la siguiente muestra de una secuencia debe de ser
colocada al lado de la aguja durante la corrida en curso.
Draw Speed determina la proporción a la cual el pistón mueve la muestra del vial. Para
muestras viscosas o volúmenes de inyección grandes se recomienda emplear Slow Draw
Speed.
Eject Speed de termina la proporción a la cual el pistón expulsa la muestra de la unidad

metering device.
Draw Position es el ajuste vertical que permite posicionar la aguja a una distancia específica
con respecto a la posición estándar. Esta función es mujy empleada cuando se analizan
muestras muy pequeñas o bien solo se quiere tomar la capa de la parte superior de la
muestra.

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y Soporte Técnico
El 1100 puede aplicar algunas funciones especiales para mejorar o incrementar su

desempeño. La función del lavado de aguja reduce el carry over de la muestra que puede
haberse retenido en la parte exterior de la aguja. La función multi draw es empleada para la
inyección de grandes volúmenes, pero requiere aditamentos adicionales. El modo de bypass
se emplead para flujos de gradiente muy pequeños. La programación del inyector nos permite
desempeñar funciones especiales para el manejo de las muestras.

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y Soporte Técnico
La pantalla de Injection Configuration se muestra cuando seleccionamos More Injector del

menú Instrument de la pantalla de Method and Run Control y seleccionamos
Configuration…
Se pueden configurar los volúmenes de la jeringa y del asiento del capilar del inyector. El
volumen máximo de inyección es el volumen de la jeringa. Si el volumen del asiento del capilar
es mayor que el de la jeringa, entonces el Multiple Draw es aplicable, y el volumen máximo de
inyección es la suma de los volúmenes de la jeringa y del asiento del capilar.
Trays muestra las charolas de viales instaladas en el inyector. El número de viales que se
manejan en la tabla de secuencia o en el menú de muestras depende de esta configuración.
Cuando se emplean dos charolas, la charola A identifica a la charola de la izquierda y B a la
de la derecha.

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Injector Program
Permite desempeñar un pre tratamiento de muestras. El programa del inyector comprende una
serie de líneas, hasta un máximo de 20. Cada línea define un número y una operación que el
inyector debe de realizar. Esta programación reemplaza al ciclo estándar de inyección.
Functions
Describe las funciones que se pueden introducir en la tabla de programación.

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y Soporte Técnico

Eject mueve la aguja del inyector a una posición específica y expulsa la cantidad especificada
de la aguja. Se puede especificar el vial en el que se dispensará muestra, aire o desechos.
Mix mezcla los volúmenes cuando la aguja esta en la posición superior o bien en el asiento
moviendo la jeringa (pistón) hacia delante o hacia atrás.
Inyect mueve la aguja de inyección hacia abajo y mueve la válvula rotatoria al modo de
inyección donde el loop es conectado al flujo del solvente, la muestra es llevada hacia fuera del
inyector y hacia la columna.
Wait especifica el tiempo que debe de esperar el inyector para procesar la siguiente linea del
programa. Los límites son de 0 a 99999 minutos.
Valve controla la operación de la válvula de inyección de muestras.
Main Pass mueve la válvula de inyección de muestra al modo de inyección. La aguja se

mueve hacia abajo y se coloca en el asiento en esta posición el loop está conectado al flujo del
solvente.
Bypass mueve la válvula de inyección de muestra al modo de carga (load). La aguja es

colocada en la parte superior y el loop es desconectado del flujo del solvente.

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Del menú Instrument, more inyector, encontraremos los comandos de ayuda del Injector.
Reset Injector se puede usar cuando el inyector automático no esta ejecutando los comandos
apropiadamente o cuando falla al hacer una inyección y aparece un error. Si un vial se atora en
el Gripper Arm el comando de Release vial se utiliza para liberar el vial.

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Parámetros del Detector de Arreglo de Diodos
La caja de diálogo 1100 DAD Signals se muestra cuando seleccionamos Setup DAD Signal
del menú Instrument en la pantalla de Method and Run Control.
Se pueden definir hasta cinco señales que opcionalmente incluyen referencias. Seleccionar el
check box del menú store de cada señal de la cual requiramos almacenar los datos. Sample
es la longitud de onda a la cual se medirá la absorbancia de la muestra y está en función del
tiempo. La absorbancia de la longitud de onda de referencia es restada de la absorbancia de la
longitud de onda de la muestra. Los límites son de 191 a 949 en etapas de 1 nm. El ancho de
banda de la longitud de onda de la muestra determina el rango de longitud de onda sobre el
cual la absorbancia es medida. Por ejemplo una longitud de onda de muestra de 254 nm con
un ancho de banda de 20 nm mide la absorbancia de 244 a 264 nm.

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Parámetros del Detector de Arreglo de Diodos

La longitud de onda de referencia compensa las fluctuaciones causadas por cambios en la
absorbancia de la línea base, por ejemplo cuando se hace un cambio en la composición de
solventes durante una elusión por gradientes.
Store define en que puntos de una señal se tomará el espectro y se salvará. Si None es
seleccionado, no se tomará ningún espectro. Apex + baselines, apex + slopes + baselines y
All in peca son adquisiciones controladas de espectro en cada pico. La detección de picos y el
almacenamiento de espectros se encuentran controladas por los parámetros de Threshold y
Peak With. Every 2nd spectrum almacena otros espectros reduciendo los datos
almacenados. Cuando All es seleccionado, aproximadamente 8 espectros se almacenan por el
valor de Peak Width.
Step define la resolución de la longitud de onda para el almacenamiento de espectros.
Threshold es la altura en mAU del menor pico esperado. El detector de picos ignora cualquier
pico que sea menor al valor del Threshold y no salva su espectro.
Peak Width nos permite seleccionar el tiempo de respuesta para el análisis. Introducir un valor
de Peak Width con respecto al pico más agudo de importancia en el cromatograma. El detector
de picos ignorara cualquier pico que sea considerablemente mas agudo o ancho que el
parámetro seleccionado y no salvará sus espectros.
Slit nos permite seleccionar el ancho de banda óptico del detector . El valor del Slit más
pequeño nos dará la mejor resolución espectral pero disminuirá la sensibilidad. El Slit se refiere
a la apertura física en el paso óptico del haz de luz el cual es electromecánicamente
controlado.

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Parámetros del Detector de Fluorescencia

Capacitación
y Soporte Técnico
Parámetros del Detector de Longitud de Onda

Variable

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y Soporte Técnico
Parámetros del Horno para Columnas
El menú del Column Thermostat Method se muestra cuando nosotros seleccionamos SETUP
del menú del Column Thermostat del menú de Instrument.
El compartimiento de columnas contiene dos soportes para columnas independientes

controlados por Peltier. Los límites de Temperatura son de -5 a 80 ºC. La temperatura sin
embargo solamente se puede bajar 10 grados centígrados de la temperatura ambiente.
Por default el lado derecho del compartimiento va tener la misma temperatura del lado
izquierdo pero se pueden controlar de manera independiente.
El menú de Column Thermostat también nos permite controlar la valvula de Switcheo de

columnas.

Capacitación
y Soporte Técnico
Identificación de Columnas
Del menú de Instrument seleccionamos Columns. Se puede introducir la información de la

columna en este panel como descripción, numero de serie, e instrucciones especiales sobre su
tratamiento y el volumen muerto. El volumen de la columna se puede emplear en cálculos del
desempeño de esta. Cuando no tenemos el chip de identificación instalado nosotros le
podemos decir al equipo manual mente que columna es con la que estamos trabajando.
En esta pantalla nosotros también podemos observar el número de inyecciones que se han
hecho en la columna.

Capacitación
y Soporte Técnico
Números de Serie
Del menú de Instrument seleccionamos Revisión and Serial. Este menú nos muestra las
revisiones de Software y los números de serie de los módulos del equipo instalados.

Capacitación
y Soporte Técnico
Run Time Checklist
El menú de Run Time Checklist selecciona cada sección del método que nosotros queramos
que se ejecute.
Seleccionar Data Adquisition si nosotros queremos que el software colecte y almacene los
datos de la corrida. Si seleccionamos Standard Data Analysis el software analizara los datos
colectados de las corridas empleando el macro estándar RunDAMethod.
Si seleccionamos Save GLP Data el Software guarda los registros con el método. El registro es
leído únicamente como un archivo binario protegido. El registro contiene programación del
instrumento parámetros del desempeño, señales, resultados de integración, resultados de
cuantificación, análisis de datos y el Log book.
Si seleccionamos Post Run Command/Macro el equipo ejecutara el macro específico después

de haber terminado el método. Por ejemplo: alguna hoja especial de procesos de datos e
impresión en Excel.

Capacitación
y Soporte Técnico
Salvando el Método
La caja de dialogo Save Method salva al método en un directorio. También podemos utilizar la
herramienta o el icono Save Method.

Capacitación
y Soporte Técnico
Run the Method
Setup Sample Info...
Sample information especifica la información de la muestra en una corrida sencilla, no en una

secuencia. Antes de que ejecutemos el análisis nosotros podremos introducir esta información
ya que durante la corrida no será posible. Esta información no forma parte del método y no se
salva cuando el método es salvado, esta información es almacenada con el archivo de datos.
File Name
Es la locación en donde el software guarda los resultados del análisis. El software puede
nombrar los archivos de manera automática o nosotros lo podemos hacer manualmente.
Prefix/Counter
El ChemStation nombre los archivos automáticamente, los nombres son generados del File
Prefix, el cual el operador introduce, y el numero va incrementando cada vez que un archivo se
va generando, nosotros podemos modificar el conteo cada vez que se inicia una inyección y los
archivos toman una extensión D.

Capacitación
y Soporte Técnico
Run the Method

MANUAL FILE NAMING
El ChameStation genera un nombre para archivo de datos, nosotros podemos usarlo o borrarlo
y poner el de nuestra elección.
Sample Parameters
El menú de Sample Parameters describe si la muestra va ser usada para un reporte de

cuantificación o una de calibración.
Vial
EL número de vial le indica al inyector automático donde se encuentra localizada la muestra.
Sample Name
Es el nombre de la muestra que aparece en el reporte final.
Sample Amount
Los resultados de ESTD% and ISTD% se calculan como el % total de la cantidad empleada en
la formula: % Y = (cantidad de Y / cantidad muestra) esto 100 y esto x Multiplicador.
Para obtener los resultados en cantidades absolutas en esta formula se tendrá que introducir 0
en la caja de cantidad de muestra por vial.
Dilution
Es un número por el cual todos los resultados calculados son multiplicados antes de que se
impriman.
Se puede utilizar el factor de dilución para cambiar la escala de los resultados o bien para
corregir los cambios en la composición de la muestra durante el trabajo de preparación el factor
de dilución es empleado por todos los reportes.

Capacitación
y Soporte Técnico
Run the Method

Multiplier
Corrige los cambios en la concentración de la muestra o el volumen. Los resultados de la

muestra son multiplicados por este valor antes de ser reportados.
ISTD Amount
La cantidad ISTD es la cantidad de estándares interno adicionado a la muestra.
RUN Method Button
Este botón nos sirve para iniciar inmediatamente el método.

Capacitación
y Soporte Técnico
Gráficas OnLine
Setup Sample Info...
Este menú se emplea para seleccionar las señales de las muestras en proceso y ajustar los
rangos de las accisas. Para acceder a este menú tenemos que seleccionar Change de la
ventana de la grafica On-Line. Debemos de seleccionar las señales que se enlistan en la caja
de Available Signals y posteriormente presionamos el botón Add. Para remover las señales
de la grafica seleccionamos la señal que no queremos visualizar y seleccionamos Remove.
Nosotros podemos ajustar los rangos de absorbancia para esta señal y seleccionar un ajuste
manual de la línea base. También se puede seleccionar un Auto y-adujst de la accisa Y.

Capacitación
y Soporte Técnico
Gráficas OnLine
Para ver las señales en tiempo real seleccionar On Line Signals del menú View.

Capacitación
y Soporte Técnico
LogBook
El menú de Log book nos muestra el contenido del Log book. El sub menú de Current
Logbook nos va mostrar todos los datos que se están monitoreando en ese momento. El
Sequence Logbook nos muestra el archivo que indica todo lo que ha sucedido durante el
proceso de una secuencia, y este se emplea para identificar los errores que se presentan en
corridas durante la noche.
El sub menú de Save As nos permite guardar el Logbook en otro archivo.
El Sub menú de Clear Logbook borra el archivo de Logbook actual o en proceso.
El menú de Print Logbook imprime el Logbook en proceso.

Capacitación
y Soporte Técnico
Análisis de Datos e Integración
En esta sección nosotros aprenderemos a manipular los cromatógramas. También

aprenderemos como introducir los parámetros apropiados de integración y salvarlos como parte
del método. Nosotros podemos observar que el software tiene muchas cualidades que nos
ayudan a la integración incluyendo los eventos por tiempo, auto integración e integración
manual.

Capacitación
y Soporte Técnico
Trabajando con Cromatogramas
Los cromatógramas se abren desde la ventana Data Analysis. Del menú de File se selecciona
Load Signal.
DATA FILE LIST
Aquí observamos los archivos que se pueden seleccionar de cada directorio.
FILE INFORMATION
Seleccionamos File Information para observar los detalles de la señal como Fecha y tiempo
de la inyección, operador, nombre de la muestra, método de adquisición línea de la secuencia,
numero de vial, numero de inyección y señal.

Capacitación
y Soporte Técnico

DETALLES DE LA SEÑAL
El menú Signal Details nos muestra que señales fueron evaluadas durante la corrida
(longitudes de onda), las señales que no aparecen no fueron integradas o reportadas. Si no
existe presente ninguna señal todas las señales disponibles serán presentadas en el
cromatógrama.
CURVAS DEL INSTRUMENTO
La pantalla de Instrument Curves nos permite cambiar el contenido de la Ventana del

Cromatógrama. Nosotros podemos especificar que curva queremos ver en el cromatógrama
(temperatura, Presión, etc).
INTEGRAR DESPUES DE CARGAR
Si nosotros queremos integrar el cromatógrama tan pronto como se muestre en la pantalla

debemos de seleccionar el menú Integrate after signal load. Si nosotros queremos que la
señal sea impresa de manera automática tan pronto como la señal a sido mostrada en la
pantalla seleccionar el menú Integrate and print report after load.
NETWORK
Podemos tener acceso a archivos de otras ChemStation conectadas a través de la red.

Capacitación
y Soporte Técnico
Signal Options
EL menú de Signal Options define como se va ver el cromatógrama cuando se muestre en la

pantalla o se imprima.
INCLUDE
Se mostrara un cromatógrama o se imprimirá de acuerdo a las opciones seleccionadas en este

menú. Se seleccionara el menú correspondiente a las opciones que nosotros necesitemos en
nuestro reporte. Nosotros podemos seleccionar que se incluyan los ejes, líneas bases de los
cromatógramas, nombres de los compuestos, nombres de los picos calibrados, marcas de pico
y tiempo de retención.
Peak Labels Font
Se pueden cambiar los atributos del tipo de letra (Tamaño, estilo, color y rotación) para las
identificaciones de los picos haciendo clic en el menú Font.

Capacitación
y Soporte Técnico

Ranges
Para imprimir o ver el cromatógrama completo debemos de seleccionar la opción Full. El rango
completo para el tiempo de retención y el de respuesta se imprimirá. Para imprimir solo una
parte del cromatógrama seleccione la opción Use Ranges.
La opción de Autoscale nos hará la escala automática de la respuesta del segundo pico más
alto.
Multi-Chromatogram
Nosotros podemos seleccionar el formato de Overlaid (sobre puestos) o Separeted

(separados). Todos los cromatogramas se observarán con la misma escala, All the same
Scale, o cada cromatograma puede tener su propia escala, Each in Full Scale.

Capacitación
y Soporte Técnico
El uso de la herramienta de graficas nos permitirá trabajar con nuestro cromatógrama. Estas
opciones se encuentran en el menú de Signal Options... Estas herramientas se muestran en el
margen derecho de nuestra grafica cuando el menú de Graphics Task Tool se ha
seleccionado.

Capacitación
y Soporte Técnico
Signal Tool
Alineación al eje de las X múltiples señales
Alineación al eje de las Y múltiples señales
Re establecer la alineación de las señales
Crear una Gráfica 3D de señales súper puestas (overlay)
Señales Espejo
Restar Señales
Integrar Todos Los Cromatogramas
El uso del conjunto de herramientas de la señal trabaja gráficamente con el cromatógrama.

Estas herramientas no tienen menús correspondientes. Se pueden desarrollar funciones como
la alineación de los picos con el eje de las X de varias señales, esto puede ser útil cuando se
están adquiriendo datos de dos detectores de manera simultánea. Otras opciones incluyen
sobre poner señales 3D y restar señales.

Capacitación
y Soporte Técnico
Anotaciones
Esta función nos permite hacer anotaciones en la ventana activa. Nosotros también podemos
editar o borrar anotaciones existentes. Antes de editar una anotación asegurémonos de que se
tenga un cromatógrama y que se encuentre activo en la ventana. Seleccione New Annotation
del menú de Graphics, Y haga clic con el cursor en la parte del cromatógrama donde se quiera
adicionar la anotación. En ese momento aparecerá la ventana en donde comenzaremos a
desarrollar nuestra anotación, el menú de Option nos mostrara los tipos de letra, tamaños y
colores de la anotación.

Capacitación
y Soporte Técnico
Anotaciones
Si la herramienta de graficas es seleccionada las herramientas de notas se mostraran en el

margen derecho con estas herramientas nosotros podremos adicionar nuevas anotaciones,
dibujar líneas, moverlas y borrarlas.

Capacitación
y Soporte Técnico
Window Function
Estas funciones nos pueden ayudar a controlar las graficas que se muestran en una ventana.
New Window
EL uso de una nueva ventana se emplea para copiar el contenido de una grafica a una nueva
ventana. Clic en el menú Window y seleccione New Window.
Delete Window
Se emplea para eliminar la gráfica seleccionada.

Capacitación
y Soporte Técnico
Window Function
List Content
List Content nos indica los gráficos que se encuentran activos en la pantalla. Los objetos
mostrados en la tabla se pueden eliminar, salvar o seleccionar en mostrar sus datos mediante
una tabla. La lista o tabla de datos nos mostrara todos los puntos individuales (data points) del
objeto seleccionado.
Save Window
Save Window se emplea para salvar la gráfica mostrada en la pantalla como un archivo
independiente.
Load Window
Load Window nos permite cargar gráficas.

Capacitación
y Soporte Técnico
Standard or Enhanced Integrator
El integrador “Standard” del ChemStation todavía es empleado y se puede seguir empleando

para métodos validados.
El algoritmo del integrador “Enhanced” es un archivo tipo Def_LC.m y se recomienda para

todos los nuevos métodos.
El integrador “Enhanced” nos ofrece:
Distribución de la línea base.

Rechazo de picos ruidosos, considerando la altura de un pico inicial como parámetro de
rechazo.
Control de la integración con marcas de inicio y final.
Distribución de los picos en señales ruidosas.
Distribución de hombros de pico a través de la segunda derivada.
El ChemStation incluye dos algoritmos de integración. El algoritmo de integración Standard

que fue incluido en las primeras versiones y el algoritmo Enhanced.

Capacitación
y Soporte Técnico
Como Desarrollar una Integración
Existen varios caminos para integrar la señal de un cromatograma en la pantalla de Data

Análisis. Cuando se carga una señal empleando los menús File, Load Signal el analista debe
seleccionar el diálogo Integrate after load. También se pueden seleccionar Integrate o Auto
Integrate del menú Integration. Cuando la herramienta de Integración es seleccionada
podremos emplear la herramienta de integración. Si se corre un mpetodo con que incluya el
análisis de datos también se producirá un cromatograma integrado.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
La tabla de integración nos permite definir los parámetros de cada señal. A esta pantalla se
puede acceder desde el menú de Integration con Integration Events o seleccionando la
herramienta de de integración de la barra de herramientas.
Esta tabla se emplea para definir manualmente la sensibilidad de la pendiente, el ancho del
pico, área de rechazo, altura de rechazo y tratamiento de hombros.
Slope Sensitivity
Este parámetro se emplea para definir picos durante la integración. Si valor de la pendiente de
la señal excede el valor de la pendiente de la tabla, el integrador lo considerará como un pico.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
Cuando el valor decrece y se hace menor que el valor de la pendiente en la tabla el integrador
considerará que es el fin de integración del pico.
Peak Width
El valor de Peak Width controla la selectividad del integrador para que este distinga un pico del
ruido de la línea base. El valor de Peak Width debe corresponder al al valor de ancho de pico a
la mitad de la altura del pico más agudo (delgado) en el cromatograma. El valor es en minutos.
Height Rejected
Height Rejected es un parámetro que se emplea para fijar el nivel de ruido de la integración.
Picos menores a este valor serán ignorados por el integrador.
Shoulders
Cuando la detección Shoulders is on, el integrador detecta los hombros empleando la

curvature del pico como resultado de la segunda derivada. Cuando la curvatura va hacia cero,
el integrador define que es un punto de inflexión y probablemente sea un hombro.
Advanced Baseline
Cuando se selecciona Advanced Baseline, dos características son adicionadas al algoritmo de

integración. La primera característica es el reconocimiento de una línea base mejorada y la
segunda es el reconocimiento de áreas no asignadas.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
Cuando la opción de Advanced Baseline es seleccionada ocurren dos eventos; el

reconocimiento de una línea base mejorada y el reconocimiento de áreas no asignadas, los
picos que no muestran un solo máximo serán definidos como picos. Típicamente estas áreas
no asignadas se asignan a picos contiguos. Cuando se emplea la opción Advanced Baseline o
se asigna un evento Unassigned Peak, el integrador dividirá estas áreas. Esta integración
probablemente la mejor manera de representar el área de un pico. Tradicionalmente esta área
corresponde a otro pico que esta eluyendo.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
Se puede emplear la tabla de eventos para personalizar la señal de línea base cuando no es
apropiada la línea de default. Todos los eventos pueden ser personalizados para obtener las
áreas finales.
Para adicionar un evento a la tabla de integración, seleccionar Add una nueva línea en la barra
de herramientas. Seleccionar el evento de menú y llene con el valor.
Eventos disponibles para el Enhanced Integrator
Baseline Now
Es el valor al cual el integrador re inicia la línea base al valor actual de altura si la señal
es en un pico, si la señal es de la línea base la funsión es ingnorada y se detecta a
través de la línea base normal.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
Baseline at Valleys
Es el valor (On/Off) entre el cual integrador re inicia la línea base entre cada pico y
valle.
Baseline hold
Una línea base es dibujada en la línea base establecida a partir de donde se requiere y
hasta donde sea necesario. Si se emplea en un pico esta altura será la empleada hasta
que la función se apague. Si la función se encuentra apagada el valor será el
establecido por la línea base.
Tail Tangent Skim
On
Es el valor al cual el integrador introduce una tangente en la orilla del siguiente pico.
Todos los picos arriba de la tangente son integrados a la línea base re establecida.
Off
Finaliza el tiempo al cual el integrador emplea la tangente.
Tangent Skim Mode
Coloca la tangente de diferente modo: Straight, Exponential, Standard, integration

algorithm.
Area Sum
Es el valor (On/Off) entre el cual el integrador suma las áreas entre la suma de las
áreas en posición On y la suma de las áreas en posición Off.
Integration
Es el valor (On/Off) entre el cual el integrador inicia y termina la integración.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
Slope Sensitivity
Es el nuevo valor de la sensibilidad de la pendiente. Este valor relaciona la pendiente

con la señal.
Area Rejected
Es el valor de área al cual los picos serán rechazados como picos y considerados como
parte de la línea base.
Negative Peak
Es el valor (On/Off) entre el cual el integrador reconoce los picos negativos.
Split Peak
Especifica un punto al cual se divide un pico.
Auto Peak Width
Enciende la actualización automática del peak widths para los siguientes peak widths.
Detect Shoulders
Enciende o apaga la detección de hombros.
Shoulders Mode
Introduce un nuevo modo de detección de hombros: Tangent o Drop Lines.
Unassigned Peaks
Marca el inicio o final del área de un pico.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
Todas la señales se pueden integrara con el menú de Auto Integrate o bien con la herramienta
de Auto Integrate.
Auto Integrate examina la regiones de inicio y final del cromatograma para estimar los niveles
de ruido y asignar los valores de la pendiente de sensibilidad y altura de rechazo. También se
determina un valor temporal de Peak Width.
La función de Auto Integrate envía algunos mensajes de advertencia:
Requerimientos de simetría del pico para el calculo de Peak Width

Número insuficiente de picos para el cálculo de Peak Width
No se encontraron picos (101 signal to noise ratio).
Auto Integrate es una función muy importante para la mayoría de los cromatogramas en los
inicios del desarrollo del método. Sin embargo no debe ser empleado como substituto de una
buena preparación de la muestra y de las buenas prácticas cromatografía y de laboratorio.

Capacitación
y Soporte Técnico
Enhanced Integrator
Integration
Integration Events
Auto Integrate
Integrate Current Chromatogram
Set Baseline Now
Set Base Line Hold
Set Tail Tangent Skim
Set Integration
Set Slope Sensitivity
Set Area Reject
Set Fixed Peak Width
Set Detect Shoulders

Capacitación
y Soporte Técnico
Integración Manual
La integración manual es muy empleada cuando la integración es compleja.
Draw Baseline
Especifica en donde se debe dibujar una línea base para un pico o un conjunto de ellos.
También podemos especificar en que rango los picos deberán de ser separados por los valles.
Negative Peaks
Es empleado para integrar picos negativos.
Tangent Skim (Manual Integration)
Calcula las areas de todos los picos que no se encuentran dentro de la tangente.

Capacitación
y Soporte Técnico
Integración Manual
Split Peaks
Especifica en donde un pico será divido en su integración.
All Valleys
All Valleys puede estar activo o inactivo. La posición de default es inactivo.
Delete Peaks.
Borra uno o mas picos del cromatograma de manera manual.

Capacitación
y Soporte Técnico
Salvando los Eventos de Integración
Recuerda salvar los parámetros de integración como parte del método antes de continuar. Esto
se puede efectuar de dos maneras. Primero desde el menú File, se puede seleccionar Save,
Method. También se puede seleccionar Save Method desde la barra de herramientas.
SI estamos empleando Enhanced Integrator, también se puede salvar a través de la

herramienta en el menú del integrador, pero también se debe salvar el método por una de las
dos técnicas anteriores.

Capacitación
y Soporte Técnico
Cuantificación
En esta sección aprenderemos como crear una tabla de calibración y salvarla como parte del
método.

Capacitación
y Soporte Técnico
Creando una Tabla de Calibración
1. Inyectar los estándares con concentraciones que abarquen las concentraciones

de mis muestras.
2. Introducir los eventos de integración apropiados para la menor concentración de

estándar.
3. Iniciar una nueva tabla de calibración con el nivel uno, el menor nivel. Llenarla con
el nombre de los compuestos y sus cantidades.
4. Integrar cada nivel de estándar adicional y adicionarlo a la tabla de calibración.
5. Examinar la curva de calibración y salvarla como parte del método.

Capacitación
y Soporte Técnico
Detalles de las Señales
Primero debemos de ir al menú de Signals Details, encontrado en el menú de Calibration. El

cuadro de diálogo de Signal Details define cuales son las señales que van a ser evaluadas
durante una corrida. Las señales que no se encuentran en la lista no serán integradas ni
reportadas.
Add to Method
La señal es copiada a la tabla de señales del método que comprenderá todas las señales que
serán evaluadas y procesadas por el método. Después de que la señal es copiada a la lista,
podemos editar el inicio y final del tiempo de evaluación. La señal será procesada unicamente
en esos límites.
Available Signals Combo Box
Este diálogo muestra la descripción de la señal de las eñales disponibles que pueden ser
procesadas por el método.

Capacitación
y Soporte Técnico
Detalles de las Señales

Method Signal Table Editor
Muestra la descripción de las señales que pueden ser procesadas en el método. El editor de la
tabla también muestra las columnas del start, end y delay. Únicamente las señales que se
encuentren en esta tabla serán evaluadas en un método en proceso. Si no se introducen datos
en los espacios correspondientes para Start, End y Delay todos los datos del análisis serán
procesados.
Start and End
Se pueden emplear estos parámetros para incluir un rango de evaluación.
Delay
Esta opción se emplea para compensar el retardo de una señal de un detector con respecto a
otro detector, esto cuando se están correlacionado picos de diferentes señales.
Align
Este es empleado cuando se están empleando detectores en línea o bien LC/MSD.

Capacitación
y Soporte Técnico
Parámetros de Calibración
El diálogo de Calibration Settings ajusta varios parámetros relacionados a la tabla de

calibración. Los valores de default se encuentran en todos los campos y no deben de ser
cambiados a menos de que entendamos como funciona la calibración.
Title
Nos permite introducir un titulo el cual aparecerá en la parte superior de nuestra tabla de
calibración.
Use Simple Data
Simple data será obtenida de una de las dos siguientes fuentes:
From Simple Defaults Below

Capacitación
y Soporte Técnico
Estos valores se muestran y colocan en la sección de Simple Defaults de este menú.
From Data File
Cuando se selecciona de la opción de From Data File, no podemos modificar los

valores de default en este menú. Debemos de usar la información generada por cada
muestra en el panel de Sample Info o en Sequence Table.
Amount
Amount es necesario para calcular ESTD% o ISTD%. En estos tipos de reportes el resultado
será calculado como porcentaje de la muestra original.
Amount Units
Las unidades en las cuales las cantidades de la muestra son medidas, por ejemplo ng/ul.
Multiplier
Un número por el cual todos los resultados calculados son multiplicados antes de reportarlos. El
multiplicador puede ser empleado para cambiar la escala de los resultados o corregir cambios
en la composición durante el trabajo de pre análisis.
Simple ISTD
Especifica la cantidad de estándar interno en una muestra conocida. Hasta 99 ISTD pueden ser
empleados.
I#
Define el compuesto como estándar interno. Este I# corresponde an I# en la tabla de

calibración.

Capacitación
y Soporte Técnico
ISTD Amount
La cantidad de estándar interno. La cantidad se introduce aquí y se emplea como default si no

hay información existente.
Default RT Windows
Las ventanas del tiempo de retención son usadas por el software para identificar picos en la
tabla de resultados. Especificando una ventana en tiempo el software identificará los picos aún
si hay ligeras variaciones en los tiempos de retención.
Refrence Peaks
Los picos de referencia son empleados para corregir movimientos en los tiempos de retención y
aplica a todo el cromatograma.
Other Peaks
Si el tiempo de retención del pico de referencia se mueve se puede aplicar en la tabla de

calibración.
Calculate Uncalibrated Peaks
Esta opción nos permite definir el factor de respuesta de compuestos no identificados en cada
señal individual.
Default Calibration Curve
Este es empleado para calibraciones de multiples niveles. Una curva de regresión es calculada
basándose en los puntos de calibración dados y se ajustan a los parámetros de origen.
Curve Type
Existen varios cálculos posibles para el ajuste de la curva empleada en calibraciones multi
nivel. Línear, Cuadrática, Cúbica, Exponencial, Logarítmica, Power, Average Rsp/Amt.

Capacitación
y Soporte Técnico
Origin
Existen varias formas de tratar el origen de una curva, se puede incluir el origen, forzar el
origen o conectar con el origen. Los valores de default son linear e incluir el origen.
Weight
Cuando la curva de calibración es generada, se puede especificar el peso relativo de varios

puntos de calibración (Importancia).
Equal
Todos los puntos en la calibración tienen la misma importancia.
Linear (Amt)
Un punto de calibración con un valor x de importancia 1/x para la normalización de la cantidad

más pequeña.
Quadratic (Amt)
Un punto de calibración con un valor x de importancia 1/x’2 para la normalización de la

cantidad más pequeña.
Linear (Resp)
Un punto de calibración con un valor x de importancia 1/y para la normalización de la

respuesta más pequeña.
Quadratic (Resp)
Un punto de calibración con un valor x de importancia 1/x’2 para la normalización de la

respuesta más pequeña.
# Calibrations
Un punto de calibración tiene la importancia de acuerdo al número de calibraciones para este

punto. Por ejemplo, si el nivel 1 ha sido calibrado dos veces, entonces los puntos en el nivel 1
tienen un peso o valor especifico de dos. Ninguna normalización es realizada.

Capacitación
y Soporte Técnico
Introduciendo datos en la Tabla
Para crear un atabla de calibración, primeramente cargar el nivel de estándar más bajo e
integrar. El nivel más bajo de estándar siempre es el más difícil de integrar, así que será mucho
más fácil integrar las demás concentraciones. Asegúrese de que todos los picos de importancia
estén integrados y que sus marcas este apropiadamente colocadas.

Capacitación
y Soporte Técnico
Una vez que se haya integrado la señal para el menor nivel de estándares, ir al menú
Calibration y seleccionar New Calibration Table. Este menú creará una tabla de calibración
del archivo en pantalla. La tabla existente será removida. Especifica el nivel de calibración de
inicio. El valor de default es uno. Se puede especificar el valor del default para todos los picos.
Cuando esta función no es seleccionada, el % de todas las señales será el 100%.
Calculate signals Separately es un pre requisito para calcular por señal en la tabla de
calibración.

Capacitación
y Soporte Técnico
La tabla de calibración aparecerá en este momento se llenará con la información

correspondiente a las concentraciones de los estándares y nombre de los picos calibrados.
Compound Number#
El software asigna un número único para cada componente en la calibración en orden de

elución. Los números de los compuestos son rea asignados sin importar el número de
inserciones o eliminaciones que se hagan.
RT
El tiempo de retención del pico de calibración aparece en la columna RT.

Capacitación
y Soporte Técnico

Signal
Indica que señal pertenece a los picos calibrados.
Compound
Nombre del Compuesto
Lvl
El nivel de calibración es un punto en la curva. Una concentración y una respuesta

corresponden a cada nivel.
Amt
La concentración o la cantidad de activo en la muestra de calibración.
Area (or Height)
El area (or height) del pico calculada por el integrador. Este es un valor fijo y no puede ser
editado.
Rsp. Factor
Cantidad, Concentración. Area or Height y el factor de respuesta son independientes y de

acuerdo a la siguiente fórmula:
Response factor = Amount/(Area or Height).
Consecuentemente, el factor de respuesta se muestra en Amt/Area o Amt/Height. El software

calcula el factor de respuesta.

Capacitación
y Soporte Técnico

Ref
Identifica a un pico como el tiempo de un pico de referencia. Los picos de referencia corrigen
las variaciones de los tiempos de retención entre corrida y corrida debidos a la temperatura,
flujo o técnicas de inyección.
ISTD
Identifica a un compuesto que es empleado como estándar interno.
EIndica el número de estándar interno en caso de tener más de uno.

Capacitación
y Soporte Técnico
Para adicionar el segundo nivel en la tabla de calibración, primero cargue la señal para el
segundo estándar e intégrelo. Del menú de Calibration seleccione Add Level.. Llene el
número de nivel. En el caso de que sea el nivel sea el segundo indique solamente OK.
Cuando aparezca el la tabla, solo se requiere llenar las cantidades para el segundo nivel.

Capacitación
y Soporte Técnico
Repetir el proceso Add Level hasta que todos los estándares hayan sido adicionados a la
tabla.
Observe que la curva de calibración muestra automáticamente la actualización con cada nuevo
nivel.

Capacitación
y Soporte Técnico
Opciones de la Tabla de calibración
El menú de Calibration Table Options contiene cuatro esquemas diferentes de tablas de

calibración.
Overview
Este es el esquema de default y contiene el tiempo de retención, señal, nombre, nivel #, área, e
información del ISTD de cada pico. Este se puede cambiar empleando Edit Options.
Compound Details
Este esquema de la tabla de calibración nos muestra un vista de la información de nuestro

compuesto. Contiene nombre del compuesto, grupo del compuesto, nivel #, concentración,
límites de concentración.

Capacitación
y Soporte Técnico
Opciones de la Tabla de calibración

Peak Details
Este es el esquema de tabla de calibración nos muestra detalles de nuestro pico. Tiempo de
retención, señal, nombre. Nivel #, concentración, área o altura e información sobre la curva de
calibración.
Identification Details
Esta tabla nos muestra información importante de la identificación del pico. Tiempo de
retención, ventana del tiempo de retención, señal, nombre del compuesto, área o altura,
respuesta %, tolerancia.

Capacitación
y Soporte Técnico
Detalles de los Compuestos
La tabla de los detalles de los compuestos muestra todos los picos y nos permite especificar
los límites.
Amount Limits and Height
Especifica el valor máximo y mínimo de la concentración de compuesto. Si la concetración

calculada se encuentra fuera de los límites, un aviso aparecerá en el reporte. Los límites
pueden ser empleados como calificadores para confirmar la identificación de un pico. Los
compuestos que se encuentran fuera de los límites no son empleados en la curva de
calibración.

Capacitación
y Soporte Técnico
Detalles de los Picos
Los detalles de los picos en la tabla de calibración contienen información de la curva de

calibración. Se pueden seleccionar varios tipos de curvas de calibración incluyendo: piecewice,
linear, log, power, exponent, quadratic, cubic y avarages rsp/amt. Si se selecciona Def la curva
de calibración de default y el tratamiento al origen del menú de Calibration Settings serán
empleados. Cuando se cambia la curva de calibración en el menú de calibration settings la
tabla es automáticamente actualizada.
Existen cuatro maneras de tratamiento para el origen, ignorar el origen, incluir el origen, forzar
el origen o conectar directo al origen.

Capacitación
y Soporte Técnico
Detalles de Identificación
Los detalles de Identificación en la tabla de calibración especifica como cada señal puede ser
usada y permite al usuario actualizarlas como calificadores.
Rsp%
Muestra la medida del factor de respuesta (qualifier response/main peak response).
Def Qualifier Tolerante (DEF)

Si se selecciona esta columna se aplicará una tolerancia por default de +/- 20%.
+/-
La respuesta edl pico calificador es un porcentaje de la respuesta del pico principal. La
tolerancia del pico calificador especifica la desviación del porcentaje esperado.
Peak Usage
Enlista las opciones del pico las cuales son Main, Qualifier o Ignore. Por default el mayor pico
de un compuesto es el pico Main.
Main
Este pico es empleado para los cálculos cuantitativos.
Qualifier
Un pico calificador es empleado para confirmar que el pico principal pertenece al compuesto
esperado.
Ignore
Picos que no son empleados en los cálculos.

Capacitación
y Soporte Técnico
Detalles de Identificación
Un componente puede ser detectado a más de una longitud de onda. Normalmente la longitud
de onda cercana al máximo de absorción es empleada para definir el pico principal en la tabla
de calibración, las otras longitudes de onda no pueden ser empleadas como calificadores, así
que el espectro de absorción puede ser empleado como un calificador.

Capacitación
y Soporte Técnico
Opciones de la tabla de Calibración
La pantalla de las opciones de la tabla de calibración nos permite definir las columnas incluidas
en el menú de la tabla de calibración. Las opciones comprenden dos listas: Columns not
shown, menciona las columnas que pueden ser adicionadas a la tabla de calibración y
Columns shown, enlista las columnas que se encuentran en la tabla de calibración.

Capacitación
y Soporte Técnico
Herramientas de Cuantificación
Herramientas de calibración
Nueva Tabla de Calibración
Recalibrar con el cromatograma en pantalla
Adicionar un nuevo nivel
Adicionar nuevos picos
Detalles de la señal
Editar las opciones de la tabla de calibración
Seleccionar compuestos del cromatograma y recalibralos
Seleccionar picos del cromatograma y adicionarlos a la tabla de

calibración
Selecciona picos calibrados del cromatograma y los borra de la

tabla de calibración

Capacitación
y Soporte Técnico
Salvando la Tabla de Calibración como Parte

del Método
Cuando se ha completado la tabla de calibración y el tratamiento a la curva se tiene que salvar

la tabla como parte del método.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Básico
En esta sección revisaremos como crear un reporte. Un reporte puede incluir información
cualitativa y cuantitativa de las muestras analizadas. El destino final del reporte puede ser una
impresión, en la pantalla o un archivo. El reporte puede incluir detalles de los picos detectados
durante el ensayo.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Especifico
El menú de Specify Report especifica como los resultados serán reportados.
Destination
Se puede enviar un reporte o más a un solo destino. El reporte puede ser enviado a los
siguientes destinos impresora, pantalla o archivo.
Report Styles
Nos permite elegir de una variedad de estilos de reporte estándar.
Chromatogram Output
Nos permite personalizar la impresión del cromatograma.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Especifico
Cuantitative Results.
Especifica como se calcula la cuantificación de los resultados.
CALCULATE.
Nos permite elegir 6 diferentes tipos de cálculos:
Porciento
STD
STD %
ISTD
ISTD %
NORM %
BASE ON
Los cálculos y la identificación de picos se basan en las áreas o en las alturas.
SORTED BY
Tiempo de retención. Para reportes de múltiples señales los picos de todas las señales son
acomodados de acuerdo a su tiempo de retención.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Especifico
Si se elige salvar el reporte en un archivo se debe de elegir el tipo de archivo en el que se

desea guardar:
.TXT
El reporte de texto es guardado en el disco como un archivo ASCI . Únicamente el texto es
guardado. El archivo se nombra Report.txt y es salvado en el directorio de datos en el fólder .D
.WFM
Cada reporte gráfico (cromatograma, espectro y curva de calibración) se guarda en un archivo
de Windows metafile (.WFM). Puede haber muchos archivos .WFM para un solo reporte.
.DIF
Es un reporte de datos tabular que se salva en data interchange format (.DIF) este formato es
aceptado por Excel.
.CSV
El reporte se encuentra en el formato de comma separated values. Este es un formato muy
simple de datos tabulados y es aceptado por la mayoría de bases de datos.
.XLS
Es el tipo de reporte de Excel.
.HTM
Esta extensión identifica a los archivos hypertext markup language. Estos archivos son
empleados por páginas web o para enviar por e-mail.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Especifico
Se puede observar el reporte de manera final como será impreso o bien como se guardará en
un archivo electrónico para ser enviado vía mail.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Especifico
Reporte Styles
Nos permite elegir de una variedad de reportes estándar:
None
No será reportado texto. Solamente se reportará el cromatograma si se selecciona la opción
add chromatogram out put.
Short
Imprime el texto de los resultados cuantitativos de la integración de todas las señales.
Detail
Contiene el encabezado los resultados cuantitativos y las curvas de calibración.
Header + Short
Contiene el archivo del encabezado y los resultados cuantitativos. Se puede incluir un
encabezado personalizado en el directorio del método.
Glp + Short
Incluye el encabezado, información de la muestra, condiciones del instrumento, log book,
cromatogramas y resultados cuantitativos.
Glp + Detail
Incluye el encabezado, información de la muestra, condiciones del instrumento, log book,
cromatogramas, resultados cuantitativos y curvas de calibración.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Especifico
Short + Spectrum
Incluye condiciones del instrumento cromatograma, resultados cuantitativos y gráficas de
pureza de picos.
Detail + Spectrum
Incluye encabezado, condiciones del instrumento, cromatograma, resultados cuantitativos,
curvas de calibración y gráficas de pureza de picos.
Full
Incluye encabezado, información de la muestra, condiciones del instrumento, logbook,
cromatograma, resultados cuantitativos y gráficas de pureza de pico.
Library Search
Genera un reporte calibrado que incluye resultados de la búsqueda en librerías. Números de
pico, tiempos de retención, match factors, concentraciones y normes de los compuestos se
imprimirán de acuerdo a los parámetros especificados en el menú de automated library search.
Performance
Genera un reporte de acuerdo a los límites especificados en el menú de Edit Performance
Limits del menú de System Suitability. Para métodos no calibrados los parámetros del reporte
incluyen número de pico, tiempo de retención, área de pico, altura de pico, señal, ancho de pico
a la mitad de la altura, simetría, k´, eficiencia y resolución de cada pico. El valor de k´ no puede
ser calculado al menos de que se introduzca el valor de la columna entes de la inyección. El
ancho de pico es calculado en el punto de inflexión . Los valores de eficiencia y resolución se
basan en el ancho del pico.
Performance + Library Search

Combina el Performance con el estilo de Library Search.
Performance + Noise
Combina el reporte Performance con los cálculos de ruido, los rangos de ruido son definidos en
el menú de System Suitability.
Extended Performance
Genera un reporte extenso con todos los parámetros y cálculos del desempeño de cada pico.
Este reporte únicamente incluye picos calibrados..

Capacitación
y Soporte Técnico
Curvas de los Datos del Instrumento
El panel de las curvas del instrumento nos permite cambiar el contenido de la ventana del
cromatograma. Podemos especificar que datos del instrumento se mostraran en el reporte
empleando el menú Print Report.
Para adquirir los datos del instrumento durante la corrida seleccionar Instrument More Pump y
luego Data Curves.

Capacitación
y Soporte Técnico
Salvando los Parámetros del Reporte
Salvar los parámetros del reporte como parte del método.

Capacitación
y Soporte Técnico
Impresión de reportes
El menú de Print Report identifica y cuantifica los picos de acuerdo a las opciones
seleccionadas en el menú Specify Report. Los resultados se muestran en la pantalla y se
imprimen o almacenan de acuerdo al destino seleccionado.
Los picos identificados, los resultados de los cálculos y la herramienta Print Report podrán
imprimir el reporte si en el menú de Specify Report no se incluyo la impresora como un
destino.

Capacitación
y Soporte Técnico
Herramientas del Reporte
Herramientas de calibración
Specify Report
Identify Peaks, Calculate & Preview Results
Print Report
Show/Hide Current Chromatogram
Cuando se selecciona la herramienta de calibración, varias herramientas se encuentran

disponibles en la barra de herramientas.

Capacitación
y Soporte Técnico
Secuencia y Batch
Una secuencia es una serie de instrucciones que automatizan el análisis de las muestras. Una
secuencia puede automatizar la inyección de las muestras, adquisición de datos y su análisis
de acuerdo al método seleccionado e imprimir el reporte de cada muestra. Se puede generar
un reporte sumarizado con estadísticas de todas las muestras analizadas en la secuencia.
Cada muestra puede emplear diferente método, diferentes condiciones de los instrumentos y
diferentes parámetros de evaluación.
El Batch es parte del software de análisis de datos y nos permite rápidamente revisar los datos
adquiridos y procesados de cada estándar de calibración, muestra control, o archivos de datos.

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y Soporte Técnico
Construyendo una Secuencia

1. Ir a la pantalla de Method and Run Control
2. Del menú de Sequence, seleccionar New

Sequence
3. Editar los parámetros de la Secuencia
4. Seleccionar Sequence Output
5. Salvar la Secuencia
6. Iniciar la secuencia del menú Run and Control

o desde la Sequence Table.
Una secuencia permite automatizar el análisis de muchas muestras y actualizar calibraciones

de manera automática. Para definir una secuencia hay que ir al menú Method and Run
Control, del menú de Sequence encontrar New Sequence. Este menú cargará el archivo de
default, def_lc.s, el cual se encuentra vacío. Ahora editar los parámetros de la secuencia. Los
parámetros de la secuencia le dicen al software en donde almacenar los archivos generados.
Los parámetros de la secuencia también le dicen al instrumento que se apague al final de la
secuencia, si así se desea. La tabla de la secuencia es generada por la entra de los viales,
métodos y replicas; al mismo tiempo hay que indicar cuales muestras son los estándares de
calibración, muestras y controles. Sequence Output nos indica en donde se deben de
almacenar los reporte generados y el reporte sumarizado, finalmente antes de iniciar la
secuencia es necesario salvarla.

Capacitación
y Soporte Técnico
Parámetros de la Secuencia
El panel de los parámetros de la secuencia contiene información común pata todas las
muestras en una secuencia. En esta tabla podemos introducir información correspondiente a
los nombres de los archivos así como el tipo de procesamiento y que debe de ocurrir al final de
la secuencia.
Operador Name
El nombre de la persona que esta creando la secuencia, este nombre se imprime en el reporte.
El nombre puede tener un máximo de 29 caracteres.
Data File
Un nombre de archivo diferente es generado para cada análisis durante la secuencia.

Capacitación
y Soporte Técnico
Subdirectory
En este fólder se almacena los archivos generados por la secuencia y son salvados. Si el
subdirectorio no existe, el software lo genera. El subdirectorio es alojado en el directorio PATH.
Si no se quiere re escribir los archivos existentes será necesario crear un directorio nuevo para
cada secuencia.
Part of Methods to Run
Para correr una secuencia tenemos la opción de correr el método completo y la adquisición de
datos o únicamente procesar los datos existentes en una secuencia sin inyectar.
Run Time Checklist

Corre cada vial de muestra en la secuencia de las inyecciones, adquisición de datos,
integración, cálculos y reporte de acuerdo al Run Time Checklist del método.
Adquistion Only
Corre cada vial de muestra en la secuencia de las inyecciones, pero únicamente realiza la
adquisición de datos.
Reprocessing Only
Repite la integración, cálculos y reportes de los archivos de muestras existentes. No se realiza
ninguna inyección o adquisición de datos.
Use Sequence Table Information
Este menú se encuentra activo únicamente cuando la secuencia se encuentra en modo de

“Reprocessing Only”, si Use Sequence Table Information es revisada, la información de la
muestra de la Tabla de Muestras actual se emplead para generar el reporte
independientemente a al reporte que se genero cuando se realizado la adquisición de datos de
la muestra. Esto nos permite personalizar y actualizar nuestros reportes a través de la tabla de
la secuencia. Si esta información no se revisa, la información generada durante la adquisición
de datos se empleará para generar el reporte. La información de la muestra nunca ser sobre
escrita, únicamente se actualizará el reporte.

Capacitación
y Soporte Técnico
Wait Time
El Wait Time es el tiempo entre que se carga el método e inicia la inyección en la primera línea
de la secuencia. Introduciendo un valor de tiempo aquí nos permite estabilizar las condiciones
antes de iniciar las inyecciones.
Bar Code Reader
Se activa si queremos leer codigos de barra durante la corrida.
On a Bar Code Mistmatch
El lector de código de barras verifica el número de vial de cada vial, si se encuentra uno que no
corresponda se tendrá la opción de inyectar la muestra o no.
Inject Anyway
Cada vial que no correspondió al código de barras en la tabla de muestras aparecerá al final
del reporte.
Don’t Inject
Cada vial que no correspondió al código de barras en la tabla de muestras será ignorado.
Shutdown
Post sequence Cmd/Macro
Si selecciona, especifica un comando post secuencia o algún macro que requiere ser ejecutado
o cuando se presente algún error.
Comandos:
STANBY.- Pone al equipo en estado de standby (lámpara y bomba son apagados)
LAMPALL OFF.- Apaga las Lámparas
PUMPALL OFF.- Apaga las Bombas

Capacitación
y Soporte Técnico
Macros
El macro Macro SHUTDOWN.mac especifica que un macro post corrida necesita ser ejecutado.
HP 1050 Series
El timeout de la secuencia se introduce en los módulos de la serie 1050. Si una condición en

las que el sistema no este listo la secuencia es abortada.
Sequence Comment
Se pueden introducir cualquier número de líneas de texto describiendo la secuencia.

Capacitación
y Soporte Técnico
Recalibración Automática
La Tabla de la secuencia desarrolla una re calibración automática de una manera explicita. En

otras palabras, la tabla de calibración existente será reemplazada con los factores de respuesta
de los nuevos estándares de calibración antes de la primera inyección de la muestra. El
software actualizará la tabla de calibración una vez que la inyección del vial número seis se
haya realizado.
Sequence Table
El menú de Sequence table muestra el estado de la corrida de la secuencia actual y/o define
exactamente cuanta información de cada muestra en la secuencia será adquirida y analizada.

Capacitación
y Soporte Técnico
Currently Running
Una vez que la corrida comenzó, se puede monitorear el progreso checando los valores de
Line, Method, Vial e Inj en el grupo de corrida actual. Estos valores son actualizados como
reflejo del estado actual de trabajo. Los valores asociados con las muestras listas para ser
analizadas se pueden modificar.
Sample Info
La pantalla de Simple Info muestra la información sobre las muestras.
Sequence Table Entries
Line
Únicamente identifica una línea en la tabla de secuencia.
Vial
Número empleado para identificar el vial de cual la muestra será tomada. Este número
representa la posición física del vail en el inyector.
Sample Name
Nombre de la muestra (16 caracteres).
Method Name
Nombre del método a emplear para adquirir/analizar la muestra.
Inj/Vial
Número de inyecciones a realizar del vial (hasta 99).
Sample Type
Identifica si la muestra es una muestra de análisis, calibración o control.
Cal Level
El nivel de la calibración es el punto al que corresponde en la curva.
Update RF
Determina si la calibración actualizará los factores de respuesta y como actualizará este valor.
No Update, Average, Replace o Bracket.

Capacitación
y Soporte Técnico
Interval
El intervalo de recalibración determina que tan seguido se realizara la calibración durante la
secuencia.
Sample Amount
Cuando se introduce un valor positivo, el resultado de los cálculos de ESTD% o ISTD% se
reportan como por ciento de la cantidad total de la muestra:
Relative Amount of y=Actual Amount * 100/Simple Amount
ISTD Amount
Cantidad de estándar interno adicionado a la muestra.
MUltiplier
Es un factor de escala aplicado a los resultados calculados antes de ser reportados, por
ejemplo si se realizo una dilución en 10 ml el valor a introducir deberá de ser 10.
Dilution
Es un factor de escalamiento aplicado a los resultados antes de reportar.
Datafile
Nombre del archivo en donde los datos colectados serán almacenados.
Inj Volume
Cantidad de Muestra en microlitros a ser inyectada.

Capacitación
y Soporte Técnico
Cyclid Recalibration
Una recalibración ciclica recalibra muestras de calibración que se encuentran en la misma

posición en el inyector. Este intervalo regular de calibración se efectúa especificando una
frecuencia particular. Por ejemplo el valor de 3 recalibrará después de cada 3 muestras en la
secuencia. Los intervalos están relacionados al número de inyecciones de muestra, las
inyecciones de calibración no cuentan en el intervalo.

Capacitación
y Soporte Técnico
Las muestras se encuentran separadas por pre y post calibraciones. La evaluación se realiza
cuando la ultima muestra de calibración ha sido corrida. Los datos de la calibración existente es
reemplazada por los resultados de la primera corrida de calibración del bracket. Después de
que la calibración es actualizada los reportes de las muestras se producen.

Capacitación
y Soporte Técnico
Se emplea el menú Run Partial Sequence para ver la secuencia en orden de corridas y/o para
seleccionar corridas específicas para la adquisición de datos y análisis.
Cada corrida se muestra en la tabla de secuencia parcial en el orden de adquisición de datos.

Se puede seleccionar cualquier corrida para su inyección y análisis de datos.

Capacitación
y Soporte Técnico
Salida de la Secuencia
Sequence Output nos permite activar el reporte sumarizado de la secuencia. Si entramos al

menú Setup.. podemos definir el contenido de este reporte sumarizado.
Para imprimir el reporte en un archivo específico, seleccionar Report to File: e introducir el

nombre del archivo. El archivo de default es GLPRPRT.TXT. Seleccionar Report to Printer
para enviar el reporte a la impresora.
Si seleccionamos Print indivdual reports for each run as well se activará la impresión
individual de cada reporte, de acuerdo al método analítico después de cada análisis. Estos
reportes son adicionales al reporte de la secuencia que se imprimirá al final de esta.

Capacitación
y Soporte Técnico
Resumen de la Secuencia
Edit Sequence Summary
El menú de Sequence Summary Parameters nos permite definir varias partes del reporte
sumarizado de la secuencia con el estilo apropiado de reporte. Se pueden activar hasta 9
diferentes componentes de este reporte. Estas categorías nos permiten seleccionar desde un
reporte de una página sencilla hasta un documento que contenga estadísticas.
Las categorías son:
1. A one page header. Este reporte se toma de \hpchem\core\ssrhead.txt. Si nosotros

queremos personalizar el encabezado. Es necesario copiar el archivo en el directorio
del instrumento, por ejemplo \hpchem\1\ssrhead.txt. y actualizarlo de acuerdo a
nuestras necesidades.
2. Información de la configuración del instrumento al momento del análisis.
3. Sequence sample table, una lista de muestras y métodos son programados para correr.
4. The logbook, es la documentación actual del instrumento.

Capacitación
y Soporte Técnico
5. Methods, impresión de todos los métodos en el momento del análisis.
6. Analysis reports for each sample, este no es un reporte definido en el método.
7. Statics on calibration runs, este reporte requiere un método calibrado. Y se pueden

seleccionar los estilo estándar o extendido. El modo estándar incluye solamente texto y
el modo extendido gráficas.
8. Statics on sample runs, este reporte requiere un método calibrado. Se pueden

seleccionar dos tipos de reporte. Estándar y Extendido. El estándar solamente es texto e
incluye tiempos de retención, áreas, alturas, concentraciones, peak width y simetría. El
estilo extendido incluye los menús seleccionados en la pantalla de estadísticas.
9. Summary. Existen dos estilos. El reporte sumarizado de muestras imprime una línea de
información por análisis. El reporte sumarizado compuesto incluye las concentraciones y
los detalles del activo de cada muestra analizada.

Capacitación
y Soporte Técnico
En el menú Sequence, Extended Statics.. se muestra una caja de diálogo. Este menú nos
permite activar parámetros específicos del reporte para cálculos estadísticos de repetibilidad.
La selección que hagamos en este menú se llevara acabo únicamente cuando utilicemos la
opción de Extended Statistic en el menú de Sequence Summary Parameters. Si elegimos la
opción estándar las estadísticas reportadas serán: tiempo de retención, área, altura,
concentración, peak width a la mitad de la altura y simetría.
El reporte sumarizado evalúa el desempeño del instrumento basado en información estadística

de las replicas de las inyecciones de una muestra. Por repetición de muchos análisis la
precisión del inyector y de la bomba pueden ser evaluados. Adicionalmente se pueden
introducir límites de desviación, los cuales aparecen en el reporte si se exceden. El botón de
opciones nos permitirá especificar como queremos que estos parámetros sean evaluados,
desviación estándar, relativa o con un intervalo de confianza del 95%.

Capacitación
y Soporte Técnico
Salvando la Secuencia
El menú Save sequence As nos permite salvar la secuencia con el nombre de nuestra
elección. También podemos emplear la herramienta de salvar.

Capacitación
y Soporte Técnico
Iniciando una Secuencia
Para iniciar una secuencia esta debe de estar previamente cargada y seleccionamos Run
Sequence del menú Run Control. Otras maneras de iniciar la secuencia son: el botón de
Start, F6, Sequence Table o Partial Sequence Table.

Capacitación
y Soporte Técnico
Diagrama de Muestreo de una Secuencia
El diagrama de muestreo de una secuencia es muy útil, este se muestra de acuerdo a nuestra
tabla de secuencia. Los estándares serán identificados con la letra “c” (calibración) y las
muestras control con un marca (palomita).
Durante la corrida podemos observar el vial que se esta analizando.

Capacitación
y Soporte Técnico
Calibración Avanzada
Este menú nos especifica como actualizar la tabla de calibración. Estos datos solo aplican a re
calibraciones con la opción average. Los tiempos de retención y los factores de respuesta de la
nueva tabla de calibración pueden ser calculados con No Update y Average of All
Calibrations o como Floating Average.

Capacitación
y Soporte Técnico
Calibración Avanzada
En este menú podemos indicar en que punto las re calibraciones se hacen de manera
automática por la secuencia.
Un Bracket de la secuencia es una parte de muestras que están divididas por pre y post
calibraciones.

Capacitación
y Soporte Técnico
Revisión del Batch
Si se generan diariamente un gran número de muestras y se requiere un camino rápido para

revisar los resultados y el reproceso de los datos es necesario, entonces Batch Review puede
ayudar. El Batch Review permite revisar los estándares de calibración, muestras control,
muestras, ajustes de integración y revisión de las secuencias.

Capacitación
y Soporte Técnico
Revisión del Batch

Corre la Secuencia
Ir a Data Análisis y cargar el Batch
Seleccionar muestras para su revisión
Revisar las Calibraciones
Revisar las Muestras control
Revisar los resultados de las muestras
Reprocesar interactivamente o automáticamente.
Aprobar resultados
Para poder utilizar el Batch Review es necesario primero adquirir datos en el modo de
secuencia. El software de secuencias crea un archivo .b (batch) este contiene lo mismo que el
archivo de la secuencia .s.
Ir al menú de Data Analysis y seleccionar Batch. Encontrar el menú de Load Batch y

seleccionar el archivo a revisar. La siguiente etapa incluye la selección de las muestras y el
método.

Capacitación
y Soporte Técnico
Revisión del Batch
Una vez que se cargo el archivo del batch, aparecerá este menú. Este nos permite seleccionar
los métodos y las muestras a ser empleados por el batch para su revisión.

Capacitación
y Soporte Técnico
Revisión del Batch
Se puede iniciar el proceso del batch de manera automática seleccionado el botón Start. Por
default un nuevo archivo será mostrado en pantalla cada 10 segundo para su evaluación. Si se
requieren hacer cambios en la integración, será necesario presionar el botón Pause. Si no
quiere realizar el batch de manera automática, simplemente es necesario hacer Clic en el menú
Next de la muestra, un asterisco aparecerá una vez que se haya revisado el archivo.

Capacitación
y Soporte Técnico
Revisión del Batch
Se puede Personalizar los menús mostrados durante la revisión del batch, seleccionado
Options encontrado en la parte inferior del menú de Batch.

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte Avanzado
En esta sección, exploraremos algo de las opciones disponibles el reporte avanzado en el

ChemStation, incluyendo los reportes del System Suitability y el reporte GLP.

Capacitación
y Soporte Técnico
System Suitability
Se puede revisar el desempeño del análisis antes y durante el análisis de rutina con el reporte
del System Suitability. Este reporte nos permite introducir límites para el tiempo de retención,
altura de pico, área de pico, concentración, ancho de pico, factor de capacidad (k’), platos,
resolución, selectividad, library match y pureza de pico de un pico calibrado. El ruido y la
variación de la línea base también pueden se medidos. Para acceder a este menú ir a Report y
seleccionar System Suitability.

Capacitación
y Soporte Técnico
System Suitability
El menú de Edit Noise Ranges nos permite especificar hasta 7 rangos para determinación del
ruido. Seleccionar un aparte de la línea base que no incluya ningún pico. Los resultados del
ruido se presentan para cada señal en una tabla independiente.

Capacitación
y Soporte Técnico
System Suitability
El menú de Edit Performance Limits nos permite introducir los límites aceptables de los
parámetros del desempeño de nuestro sistema. Los valores que se encuentran fuera de los
rangos especificados en este menú se muestran en el reporte como: mayor que(>) y menor que
(<). Se emplean dos referencias ASTM (Sección E682-93) y USP (pp 943 y 946).

Capacitación
y Soporte Técnico
System Suitability
Performance Performance + Noise
Genera un reporte de acuerdo a los límites Combina el reporte Performance con los
especificados en el menú de Edit cálculos del ruido para los rangos
Performance Limits definidos
RT PW
PA k’
PH Eficiencia
Simetría Resolución
Performance + Lib Search Extended Performance

Combina el Performance + Library search Genera un reporte con todos los
styles parámetros de los cálculos del desempeño
de los picos y graficas individuales. Solo
incluye picos calibrados.
Estos son los estilos de reportes disponibles para la opción de System Suitability.

Capacitación
y Soporte Técnico
System Suitability
Para seleccionar una columna o editar los parámetros de una es necesario ir al menú de
Columns en el menú Instrumnet. Esta información incluye el volumen muerto o el tiempo, estos
datos serán necesarios para el cálculo del factor de capacidad.
Los parámetros empleados para el cálculo del factor de capacidad pueden ser calculados de 3
maneras:
% Longitud de la columna, diámetro y flujo empleado.
ml Flujo
min Tiempo

Capacitación
y Soporte Técnico
Reporte GLP
GLP + Short
Header
Sample Information
Instrument Conditions
Logbook
Quantitative Results
GLP + Detail
Header
Sample Information
Instrument Conditions
Logbook
Quantitative Results
Calibration Curves
Existen dos estilos de reporte GLP en el software ChemStation.

Capacitación
y Soporte Técnico
Salvando los datos GLP

Seleccionando GLP Data en el menú
Run Time Checklist salva un archivo
binario GLPSave.Reg junto con Data
Análisis Method.
GLPSave.Reg
Instrument Performance
Parameters
Chromatographic signals
Integration Results
Data Análisis method
Logbook

Capacitación
y Soporte Técnico
Salvando los datos GLP
Se puede emplear la función de Review GLP Save Registrer para demostrar que los datos del
cromatograma son originales y probar la calidad del análisis y del desempeño del equipo.

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Introducción al Software HPLC ChemStation 4

Creando un Método -ACQUSITION- 14

Análisis de Datos e Integración 47

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Secuencia y Batch 106

Reporte Avanzado 132

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Introducción al Software HPLC ChemStation

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Estructura del Software HPLC Chemstation

El diagrama muestra la estructura de los directorios del software. HPCHEM es el directorio

• .CH Archivos de Cromatógramas

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Estructura del Software HPLC Chemstation

El nombre de un archivo para el ChemStation puede tener hasta 8 caracteres, un punto de

.uvl spectral library

.mac macro file

.exe an executable program file

.txt a text file

.log a log file

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Menú del Software HPLC Chemstation

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Configuración del Instrumento 1100

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Menú Principal del HPLC ChemStation

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Otros Menús del HPLC ChemStation

El ChemStation tiene cinco ventanas estándar:

Data Análisis; Para revisión y re evalución de información que ha sido adquirida.

Report Layout; Para el diseño de formatos de reporte.

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Menús del HPLC ChemStation

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HPLC ChemStation Scheduler

Se puede emplear el HPLC ChemStation Scheduler para programar eventos y que el

Cuando el comando ha sido completado el Scheduler anota el status en la línea de Result,

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Creando un Método –Acquisition -

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• Información del Método

Un método incluye todos los parámetros necesarios para desempeñar la adquisición y el

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Se puede hacer clic en el gráfico que representa la bomba y se desplegará el menú

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La información de un Método “Method Information” comprende la descripción general de un

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www. Canitec.com.mx - 22 - Agilent HPLC ChemStation Software

Minimu Stroke Define el volumen de fase móvil desplazado en un movimiento

Compressibility La compresibilidad de la fase móvil tiene un efecto en el

www. Canitec.com.mx - 23 - Agilent HPLC ChemStation Software

La bomba puede se puesta en condiciones de On, Off o Standby. En la condición de