Extracción de la caseína, determinación del punto isoeléctrico y precipitación

salina de proteínas.

Nombres: Simón Bayer - sgbayerm@unadvirtual.edu.co

Andrea Carolina – acpardor@unadvirtual.edu.co
Angela Gil - lagilh@unadvirtual.edu.co
Fabian Eduardo Matiz Abril- fematiza@unadvirtual.edu.co

OBJETIVO:
El objetivo de esta práctica es la determinación del punto isoeléctrico de la
caseína extraída de la leche.
LA CASEINA
La caseína de la leche es una proteína que está asociada el calcio esta proteína
tiene gran influencia en la composición de la leche además está relacionada con
la coagulación (formación del cuajo) en general con la formación de los quesos,
esta es considerada una fosfoproteína esta contiene ácido fosfórico la mayoría es
del grupo fosfato que están unidas por grupos hidroxilos a los aminoácidos de
serina y treonina principalmente su parte exterior es fácilmente soluble en agua
Gracias a los grupos polares su otra parte de superficie se une a las alfa y beta
que forman las micelas estas son responsables de la apariencia opaca blanca de
la leche.
La función de las micelas es transportar grandes cantidades de calcio y fosfato
para formar un coagulo en el estómago para favorecer una nutrición eficiente.
PUNTO ISOELECTRICO

Todas las macromoléculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se

dispersan en agua. Una característica de las proteínas y otros biopolímeros es
que la carga total que adquieren depende del pH del medio. Así, todas las
proteínas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se
encuentren y de los aminoácidos que la componen, así como de las cargas de
cualquier ligando que se encuentre unido a la proteína de forma covalente
(irreversible). Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los
radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio:
catiónicos, neutros y aniónicos. Cualquier proteína tendría una carga neta
positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente ácido debido a que los
grupos COOH de los aminoácidos aspártico y glutámico estarían en su forma
neutra pero los grupos amino de Arginina y lisina estarían protonados (-NH3 +).
De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto
estaría cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estarían
desprotonados (COO -) y los grupos amino estarían en su forma neutra (NH2).
De lo anterior se deduce que las proteínas tienen un pH característico al cual su
carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoeléctrico (pI). En el punto
isoeléctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas
por lo que la proteína presenta su máxima posibilidad para ser precipitada al
disminuir su solubilidad y facilitar su agregación.
Precipitación de la salina de proteínas:
Este fenómeno está vinculado al fenómeno cosmotrópico ejercido por algunas
sales. La concentración salina y el tipo de sal requerida para
la precipitación varían de soluto a soluto. Este fenómeno es empleado para la
separación de proteínas.
PRACTICA EXTRACCION DE LA CASAEINA
TUBO PH ABSORBANCIA (640nm)
1 3.2 0.243
1 3.3 0.258
2 3.6 0.240
2 3.5 0.272
3 3.8 0.245
3 3.7 0.142
4 3.7 0.231
4 3.8 0.128
5 4.1 0.211
6 4.4 0.170
7 4.7 0.226
8 5.2 0.187
9 5.8 0.256
10 6.2 0.301

Extracción de la Caseína
12

10
10
9
8
8
ABSORBANCIA

7
6
6
5 Total
4 4 Linear (Total)
4

2 2
2
1 1

0
3.2 3.3 3.5 3.6 3.7 3.8 4.1 4.4 4.7 5.2 5.8 6.2
PH
Practica No. 5. Cuantificación de proteínas.

OBJETIVO: reconocimos métodos de cuantificación de proteínas y reconocimos

su curva de calibración
MARCO TEORICO:
Proteínas son la asociación de varios aminoácidos puestos en una cadena lineal.
Contienen carbono, oxígeno, nitrógeno e hidrógeno.
Los aminoácidos se unen entre sí por enlaces peptídicos, uniendo el extremo
amino de uno con el extremo carboxilo de otro aminoácido. De acuerdo con la
disposición de estos aminoácidos en la cadena, es decir, el orden, es como va a
estar dispuesto el ADN, código genético propio de cada persona.

Para la realización de este laboratorio se utilizará el método de Bradford que

consiste en condiciones adecuadas los grupos ácidos o básicos de las proteínas
pueden interaccionar con grupos orgánicos de determinados colorantes para dar
lugar a precipitados con un color característico. Para el ensayo de Bradford se
utiliza el colorante Coomassie Brillant Blue G250. Se basa en la conversión de la
forma leuco del colorante (marrón-naranja) a una de color intensamente azul
cuando los grupos aniónicos del colorante interaccionan con los grupos amino de
las proteínas. Dicha reacción se mide por absorbancia a 595nm y también existe
una relación lineal dentro de determinadas concentraciones de proteínas.
Curvas de calibración
Las curvas de calibración se utilizan para comprender la respuesta instrumental
a un analito y predecir la concentración en una muestra desconocida. Por lo
general, un conjunto de muestras estándar se hace a diferentes concentraciones
con una gama que incluye al desconocido de interés y se registra la respuesta
instrumental en cada concentración. Para más exactitud y comprender el error,
se puede repetir la respuesta en cada concentración por lo que se obtiene una
barra de error. Los datos entonces se caben con una función por lo que se pueden
predecir las concentraciones desconocidas. Por lo general la respuesta es lineal,
sin embargo, una curva se puede hacer con otras funciones como la función es
conocida. La curva de calibración puede utilizarse para calcular el límite de
detección y límite de cuantificación (JoVE,2019).
RESULTADOS Y ANALISIS:

TUBO BSA NaCL

2 0.1 ml 2.9 ml
3 0.2 ml 2.8 ml
4 0.4 ml 2.6 ml
5 0.8 ml 2.2 ml
6 1.0 ml 2.0 ml

2.0 ml - 1.0
7
6 ml
6 2.2 ml - 0.8
5 ml
5 2.6 ml - 0.4
4 ml
4 2.8 ml - 0.2
3
3 ml
2 2.9 ml - 0.1
2 ml
Linear (2.0
1 ml - 1.0 ml)
Linear (2.6
0 ml - 0.4 ml)
Total

TUBO BSA NaCL BRADFORD

7 0.25 ml 2.75 ml 3 ml
8 0.5 ml 2.5 ml 3 ml
9 0.25 ml 2.75 ml 3 ml
10 0.5 ml 2.5 ml 3 ml
11 0.25 ml 2.75 ml 3 ml
12 0.5 ml 2.5 ml 3 ml
CONCLUSIONES:

Bibliografía:
Feduchi, E. (2014). Bioquímica: Conceptos esenciales (2ª edición). Madrid.
Médica Panamericana, S.A. (pp. 28-45). Recuperado de -
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2055/VisorEbookV2/Ebook/9788498358742#
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Fernández, G. (s.f). Aminoácidos y punto isoeléctrico. Química Orgánica.
Recuperado de: https://www.quimicaorganica.org/aminoacidos-peptidos/528-
aminoacidos-punto-isoelectrico.html
Peña, C. (s.f). Digestión. Fundacionolgatorres. Recuperado:
http://www.fundacionolgatorres.org/aparato_digestivo/introduccion/