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VITAE, REVISTA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS Farmaceuticas Y ALIMENTARIAS ISSN 0121-4004 / ISSNe

2145-2660. Volumen 22, Número 2, año 2015 Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia. págs. 111-120 DOI:
http://dx.doi.org/10.17533/udea.vitae.v22n2a05

Fabricación de un antimicrobiano PACKAGING activo y su efecto


sobre el crecimiento de
Pseudomonas Y bacterias aerobias mesófilas EN
POLLO

ELABORACIÓN DE UN ENVASE ACTIVO antimicrobiano Y SU EFECTO EN EL


DESARROLLO DE Pseudomonas Y BACTERIAS AEROBIAS ES POLLO

Odilia Azucena HIGUERA-BARRAZA Beng. 1, PhD Herlinda SOTO-VALDEZ. 1,


PhD Evelia ACEDO-Félix. 1 †, Elizabeth PERALTA M.Sc. 1

Recibido: Marzo 31 de 2015 Recibido: Septiembre 21 de 2015

RESUMEN

Antecedentes: Uno de los objetivos de envasado de alimentos es proteger el producto de fac- tores ambientales que pueden causar una
reducción en la calidad. crecimiento de la superficie del microorganismo es una de las principales causas de deterioro de los alimentos. Una
opción es utilizar envases antimicrobianos para proporcionar un mayor margen de seguridad y calidad. objetivos: El objetivo de este estudio
fue evaluar el efecto de envases activos con eugenol en el crecimiento de Pseudomonas y bacterias mesófilas aerobias en trozos de pollo
frescos. Métodos: Tres lotes de película de polietileno de baja densidad (LDPE), que contiene 0, 9,0 y 7,7, mg g- 1 eugenol (control, AAF1 y
AAF2, respectivamente), se extruyeron en una máquina de extrusión por soplado escala de planta piloto. Las películas con eugenol perdieron
42,7% y 36,8% (AAF1 y AAF2, respectivamente) de eugenol durante el procesamiento y absorben la luz UV-visible a 300-261 nm. La cinética
de liberación eugenol de la AAF1 en el aire a 5 ° C y 25 ° C muestran el comportamiento de Fick, y un coeficiente de difusión de 10- 8 cm 2 s- 1 fue
calculado.

resultados: Eugenol mostró actividad antimicrobiana en in vitro, usando discos de papel con 1,74, 0,87 y 0,36 mg eugenol en 10 8 UFC mL- 1 de Pseudomonas
fluorescens en agar Muller-Hinton. muslos de pollo fueron envueltos en la película AAF2, y los efectos sobre el crecimiento de Pseudomonas y
bacterias aerobias mesófilas (AMB) se evaluaron después del almacenamiento durante 5 d a 5 ° C. El AAF2 mostró un efecto moderadamente
antimicrobiano en la reducción del crecimiento de Pseudomonas ( 1,1 x 10 6 UFC g- 1) en relación con el crecimiento de la película de control (6,0 x
10 6 UFC g- 1) ( P <0,05). La película con eugenol fue eficaz para reducir el crecimiento de AMB (9,0 x 10 5

UFC g- 1) en relación con el crecimiento de la película de control (1,7 x 10 6 UFC g- 1) ( P <0,05). conclusiones: A pesar de las elevadas pérdidas de
eugenol durante la extrusión de las películas, mostraron un efecto antimicrobiano durante el contacto con pollo fresco en condiciones
comerciales. Este estudio muestra el uso potencial de eugenol para la aplicación en LDPE película de envasado antimicrobiano.

palabras clave: envasado activo antimicrobiano, la difusión de eugenol, Pseudomonas fluorescens.

1
Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, AC Apdo. Postal de 1735. Hermosillo, Sonora 83304, México.

Fallecido.
*
Autor de correspondencia: eperalta@ciad.mx
112 V ITAE o. a. Higuera B. et al.

RESUMEN

Antecedentes: Uno de los Principales Objetivos del Envasado de Alimentos es protegerlo de Factores Que puedan afectar y causar
Una Reducción en la Calidad. El Desarrollo de microorganismos en la superficie es uno de las Causas Principales del Deterioro de los
Alimentos. UNA OPCION ES EL Empleo de Envases con propiedades antimicrobianas. Objetivos: El objetivo m del Presente Estudio FUE
evaluar v el efecto de la ONU Envase antimicrobiano conteniendo eugenol en el Desarrollo de Pseudomonas Y Bacterias aerobias
mesofílicas (BMA) en piezas de pollo. Métodos: Tres lotes de Película de polietileno de baja densidad (PEBD) conteniendo 0, 9,0 y 7,7 mg
g- 1 de eugenol (control, AAF1, AAF2, respectivamente) were obtenidas por extrusión-soplo utilizando un extrusor ONU Nivel Planta Piloto.
Se calculo la cinética de Liberación del eugenol de la AAF1 Hacia el aire a 5 ° C y 25 ° C. Se evaluó la Capacidad antimicrobiana in vitro del
eugenol Sobre 10 8 UFC mL- 1 Delaware Pseudomona fluorescens utilizando discos de papel conteniendo 1,74, 0,87 y 0,36 mg de eugenol en
agar Muller-Hinton. Las piezas de pollo were envueltas en La película AAF2 y almacenadas a 5 ° C evaluando una los 5 Días el efecto de
la Película en el Desarrollo de Pseudomonas Y en BMA. Resultados: El eugenol mostro Actividad antimi- crobiana inhibiendo el Crecimiento
de P. fluorescens. Las Películas conteniendo eugenol perdieron Durante el Proceso de extrusión de 42,7% a 36,8% (AAF1 y AAF2
respectivamente) del añadido total de la ONU Mostrando Comportamiento fickiano Con Un coeficiente de difusión f de 10- 8 cm 2 s- 1. Las AAF2
mostraron ONU efecto moderado en la Reducción del Desarrollo de Pseudomonas (1,1 x 10 6 UFC g- 1) con comparadas el control (6,0 x 10 6 UFC
g- 1) ( P <0,05). Las Películas con eugenol (AAF2) were Efectivas al Reducir el Desarrollo de las BMA (9,0 x 10 5 UFC g- 1) comparadas con la
Película de control (1,7 x 10 6 UFC g- 1) ( P <0,05). nes Conclusio-: A Pesar de las Pérdidas del eugenol Durante el Proceso de extrusión para
la obtencion de las Películas, mostraron Estas ONU efecto antimicrobiano Sobre las piezas de pollo. Por lo Tanto, Este estudio Muestra EL
USO potencial del eugenol para la Aplicación en Envases antimicrobianos Elaborados una base de PEBD.

Palabras Clave: Envases: activos antimicrobianos, coeficiente de difusión f, eugenol, Pseudomonas fluorescens.

INTRODUCCIÓN de 5 días desde el momento de la masacre [6]. Las bacterias del género Pseudomonas
son considerados los principales productores de los compuestos volátiles
En los últimos años, el consumo de pollo haya responsables de sabores alteradas (aldehídos, cetonas y ésteres) en los
mantenido una tendencia de crecimiento constante, lo que alimentos. Pseudomonas fluorescens (P. fluorescens) es una de las
representa más del 43% del consumo de carne en México bacterias aisladas más predominantemente asociados con el deterioro de
[1]. El consumo mundial de pollo en continente americano aves de corral frescas [7].
es casi tres veces el promedio mundial. En el consumo de
la UE de carne per cápita, que alcanzó su nivel más bajo
Uno de los objetivos de envasado de alimentos es
en el año 2013 en los últimos 11 años (64,7 kg), se espera
proteger el producto de los factores ambientales que
que se recupere de este año. Así, en 2023 se espera que
pueden causar una reducción en la calidad [8]. Se han
el consumo per cápita llegará a 66,1 kg y la proyección de
hecho esfuerzos para minimizar las interacciones-paquete
un crecimiento global en alrededor de 2,8% anual
de alimentos, tales como la migración, la sorción y
2013-2022; esta tendencia de crecimiento está
permeabilidad a los gases [9]. Sin embargo, estas
influenciado principalmente por un aumento de la
interacciones también se han utilizado de una manera
demanda de carne blanca, que es baja en grasa [24].
positiva para mejorar la capacidad de protección del
pollo fresco se consume comúnmente debido a su perfil
paquete, como en los sistemas de envasado activo.
nutricional, versatilidad y bajo precio.
Envase activo se puede definir como un tipo de envase
que incluye aditivos que ayuda a extender la vida útil de
los alimentos mediante la preservación de la calidad ya
que los envases convencionales [10]. Estos materiales
proporcionan funciones adicionales que, de alguna
El pollo es un producto altamente perecedero incluso cuando se
manera, habilite el paquete de interactuar con los
almacena en condiciones refrigeradas. productos de pollo tienen un alto
alimentos para mejorar su calidad, seguridad y
número de nismos microor- de descomposición y pueden contener bacterias
comodidad.
patógenas. El tiempo de conservación en refrigeración normal de pollo
fresco es menos
mi laboración activo DE UN ENVASE antimicrobiano y su efecto En El Desarrollo De pseudomonas ... 113

El coeficiente de difusión ( RE) mide la velocidad a la que se produce el AAF1 se fabricó para medir la cinética de la liberación de eugenol
proceso de liberación, y se describe por la segunda ley de Fick [11]. a 5 ° C y 25 ° C (AAF1). A continuación, otro lote fue fabricado en
las mismas condiciones que anteriormente (AAF2) para
crecimiento de la superficie de los microorganismos es determinar la eficacia de la película en trozos de pollo frescos
una de las principales causas de deterioro de los alimentos (muslos) siguiendo el crecimiento de Pseudomonas spp. y
[12] directamente affect- ing la calidad y seguridad de los bacterias aerobias mesófilas (AMB) durante el almacenamiento a
alimentos. Una opción para disminuir el deterioro superficie 5 ° C.
de los alimentos es incorporar agentes antimicrobianos en el
material de embalaje para proporcionar un mayor margen de
seguridad y calidad. envasado de alimentos Antimicrobial MATERIALES Y MÉTODOS
actúa para reducir, inhibir o retardar el crecimiento de
nismos microor- que pueden estar presentes en el alimento materiales
envasado [13]. Un sistema de envasado que permite la
LDPE polietileno de baja densidad (Certene) se obtuvo de
liberación lenta de un agente antimicrobiano en los
Muelhstein (Houston, TX, EE.UU.) con un 110 ° C de punto de
alimentos podría aumentar significativamente la vida útil y
fusión, 2,3 g / 10 min de índice de fusión y 0,924 g cm- 3 de la
mantener la calidad de una variedad de alimentos [14].
densidad. Eugenol se adquirió de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO,
Varios artículos han informado del uso de agentes
EE.UU.). agua de calidad de HPLC y metanol fueron
antimicrobianos para formular envase antimicrobiano [6,
suministrados por JT Baker (Ecatepec, México). muslos de pollo
13-18].
frescos fueron adquiridos en un supermercado local en
Hermosillo, México.

16, 19-24]. El uso de aceites esenciales (por ejemplo, de canela,


orégano, clavo, eucalipto, lavanda, hierba de limón, limón, lima, Organismos y medios de comunicación
naranja, menta, albahaca, gaulteria y tomillo) como agentes
antimicrobianos, in vitro y en los productos alimenticios, se ha reportado
P. fluorescens de la colección de cultivos de tipo americano
(ATCC) 13525 (Manassas, VA, EE.UU.) se mantuvo a 5 ° C en
en varios estudios [13,
caldo nutritivo y agar. Mueller-Hinton Agar, Pseudomonas Agar F
16, 20-26]. La FDA ha clasificado el aceite de clavo como
y recuento en placa de agar se obtuvieron de Difco (Becton
generalmente reconocido como seguro (GRAS) para su uso en el
Dickinson, Franklin Lakes, NJ, EE.UU.). NaCl, tampón de fosfato
cemento tal den- y como aditivo alimentario (CFR 184.1257). Eugenol
(fosfato de sodio monobásico y dibásico), Tween 80 y dimetil
(4-alil-2-metoxifenol) es un compuesto fenólico de origen natural que
sulfóxido (DMSO) fueron adquiridos de Sigma-Aldrich (St. Louis,
es el principal componente de aceite esencial de clavo (90,1%). shows
MO, EE.UU.).
Eugenol absorción de la luz UV con un máximo de absorción a 265
nm. Es un líquido volátil a temperatura ambiente, con solubilidad en
agua moderada (2,46 mg L- 1 a 25 ° C). Se ha demostrado propiedades
fabricación de la película
antioxidantes y anti-microbianas [27]. Se ha informado de que el aceite
de clavo de olor y eugenol pueden afectar P. fluorescens crecimiento Los AAFS fueron producidos en un extrusor de escala de planta

[28]. Eugenol ha mostrado un gran potencial para su uso como aditivo piloto. Dos lotes de gránulos que contienen el agente timicrobial an-

activo en aplicaciones de envasado de alimentos. La difusión de fueron producidos mediante la mezcla de LDPE con 9,0 y 7,7 mg g- 1 de

eugenol puro en películas de plástico ha sido probado previamente eugenol (AAF1 y AAF2, respectivamente). Una máquina de extrusión

[29], pero no ha sido evaluada su lanzamiento como un aditivo de de escala de planta piloto con tres zonas de calentamiento a 130 ° C,

embalaje. equipado con una matriz de filamentos y acoplado a un granulador


(tlespacher Beu-, México, DF), se utilizó. Las películas se obtuvieron a
partir de las dos formulaciones utilizando el proceso de extrusión por
soplado con un tamaño extrusora mono-husillo de planta piloto con
En el diseño de envase activo antimicrobiano, es importante tener
cuatro zonas de calentamiento a 130 ° C (Beutelspacher, México DF,
en cuenta los efectos del proceso de fabricación de paquete en el
México) en el Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, AC
aditivo activo. En el caso de los envases de pollo, los efectos del
campus Hermosillo, México. Una película de control, sin eugenol
proceso de extrusión de película deben ser determinados. El objetivo
también se preparó en las mismas condiciones. El espesor de las
de este trabajo fue para la fabricación de películas activos
películas era
antimicrobianos (AAFS) utilizando un proceso de extrusión-soplado,
con eugenol incorporado en la matriz polimérica. Un
114 V ITAE o. a. Higuera B. et al.

medida con un modelo de TDT micrómetro de El proceso de liberación se puede describir como la cinética
EJ Cady & Co. (Wheeling, IL, EE.UU.). Se midieron las muestras de la difusión del compuesto volátil en la película, y se expresa
de película diez, y los datos se expresaron en micrómetros como D ( coeficiente de difusión). Una solución analítica para la
(micras). El AAF1 fue producido para determinar la cinética de ecuación que describe la segunda ley de Fick, que describe la
liberación, inmediatamente después de la obtención de la película. difusión en dos dimensiones y a un volumen infinito (medio
El AAF2 se produce un mes después en las mismas condiciones ambiente) [30, 31] se utilizó para determinar el valor de RE.
que AAF1. Esta película se almacenó a -20 ° C hasta que la in vitro Se
realizaron efecto antimicrobiano y envasado de piezas de pollo.

(Ecuación 1)

Extracción y cuantificación de eugenol en las películas

dónde METRO t / METRO ∞ es la concentración de eugenol liberado en


AAF1, AAF2 y películas de control se extrajeron utilizando el momento t dividida por la concentración de eugenol liberado en el
metanol con agitación constante a 40 ° C durante 24 h. La equilibrio; y l es el Ness grosor de la película (cm). re es el coeficiente
extracción se repitió para asegurar la extracción completa de de difusión (cm 2 s- 1), que fue calculado usando la Ec. (1) por trama-
eugenol. Los extractos se filtraron en viales de color ámbar con ting la relación de t vs. METRO t / METRO ∞. re se determinó minimizando
0,22 micras filtros miem- brana Durapore® (Millipore Corporation, la suma de los cuadrados de los errores (SSE) entre los valores
Bedford, MA, EE.UU.). La cuantificación eugenol se realizó por medidos y estimados. El programa MATLAB se utilizó para encontrar
cromatografía de fase inversa de alto rendimiento líquido (HPLC) el mejor ajuste de los datos a la ecuación. (1) mediante el uso de la
utilizando un cromatógrafo de líquidos (Varian 9012, México) función de regresión no lineal (nlinfit) en MATLAB R2008b
acoplado a un detector de fluorescencia (Varian 9075, México) en (MathWorks, Natick, MA, EE.UU.) [32].
una longitud de onda de excitación de 272 nm y una longitud de
onda de emisión de 298 nm. El cromatógrafo de líquidos estaba
equipado con un 150 x 4,6 mm C 18 columna ChromSep (Varian,
In vitro actividad antibacteriana de eugenol en P. fluorescens
México) protegido con una C 18

Se utilizó el método de difusión en agar para determinar la


columna de seguridad (50 mm). Un volumen de muestra 10 l se actividad antibacteriana de eugenol. discos de papel estéril (5 mm
inyectó en el HPLC utilizando un inyector Rheodyne 7125 de diámetro) que contienen eugenol se prepararon para la in vitro Ensayo
(Rheodyne, Bershire, UK) y se eluyó (flujo isocrático) con 85:15 de de actividad antibacteriana de acuerdo con el método de [33].
metanol: agua a 1 ml min- 1. Tres repeticiones se realizaron para Sobre- todo, 10 l de diferentes soluciones eugenol, que se
cada muestra. Una curva de calibración para eugenol se preparó prepararon en diluciones de 1: 1, 1: 5 y 1:10 con Tween 80 (10%) y
mediante soluciones de toma que van desde 0,5 a DMSO (0,5%), se cargaron en discos de papel estériles. discos
estériles con tampón de fosfato y Tween 80 en DMSO (0,5%) se
9,0 g ml- 1 de eugenol en metanol. El tiempo de retención para utilizaron como controles negativos.
eugenol fue de 2,6 min, y el límite de cuantifica- ción en
metanol (LOQ) era 0,012 g ml- 1.

Los discos se fijan en la superficie de los platos de agar


Liberación de eugenol de la AAF1 a 5 ° C y 25 ° C
MullerHinton recién cargado con 10 8 UFC mL- 1 de P. fluorescens, y
los platos se incubaron a 25 ° C durante 24 h. El análisis se llevó
Cincuenta y cuatro muestras de película de AAF1 (2,5 x 5 cm) fueron a cabo utilizando tres discos para cada dilución, y se midieron los
expuestos al medio ambiente (ambos lados). Treinta piezas fueron diámetros de zonas de inhibición alrededor de los discos (mm).
expuestos a 5 ° C (temperatura recomendada para el almacenamiento de
pollo fresco), y veinticuatro piezas fueron expuestos a 25 ° C (temperatura
ambiente). La liberación de eugenol se monitorizó periódicamente
La concentración inhibitoria mínima (MIC) de eugenol se
mediante la adopción de conjuntos de tres trozos de película durante los
determinó por el método de difusión en agar según la técnica
períodos de incubación de 20 horas a 5 ° C y 8 ​horas a 25 ° C. Eugenol se
descrita anteriormente. La concentración mínima que
cuantificó en las películas, como se describe en la sección anterior.
muestra una zona clara de 10 mm o menos se tomó como la
MIC.
mi laboración activo DE UN ENVASE antimicrobiano y su efecto En El Desarrollo De pseudomonas ... 115

The ANOVA test was performed for each eugenol La figura 1 muestra la liberación de eugenol en el AAF1 a
dilutions disc, and significant differences between the mean diferentes temperaturas. A 5 ° C, la con- centración de eugenol
diameters of inhibition zones around the discs were se redujo de 5,16 ± 0,78 mg g- 1 a 0,28 ± 0,04 mg g- 1 en 16 h, un
determined by the TukeyKramer test ( P < 0.05) using tiempo en el que se alcanzó el equilibrio. A 25 ° C, el eugenol
Number Cruncher Statistical Systems (NCSS) [34]. se redujo de 5,16 ± 0,78 mg g- 1 a 0,26 ± 0,01 mg g - 1, alcanzar
el equilibrio dentro de 6 h, 10 horas antes de lo a 5 ° C.

Antimicrobial effect of AAF2 on fresh chicken

Four pouches (17 x 8 cm) made of the AAF2 and control


(UN)
films were used for wrapping fresh chicken thighs under
7

hygienic conditions. All treatments were stored for 5 days at 7

6
5°C. Samples (duplicates) of all treatments were taken at 0
6

and 5 days of storage to evaluate Pseudomonas and AMB 5 4

Eugenol (mg g-1)


survival. The counting of Pseudomonas and AMB was 4
3

Eugenol (mg g-1)


performed in accordance with the procedure established by
2

3
NOM-092-SSA1-1994 [35], and NOM-110-SSA1-1994 [36]. 0

0 1 2 3 4 5 6

For Pseudomonas 2
Tiempo (h)

counts, serial dilution of the samples was performed in buffered


0
phosphate, and 0.1 mL of each dilution was spread on Pseudomonas
Agar F. Incubation was carried out at 26 ± 1°C for 24-48 h, and
0 5 10 15 20
values were reported as CFU g- 1.
Tiempo (h)

The ANOVA test was performed, and significant


differences between the means of the counts obtained from 7
(SI)

the antimicrobial active packaging and the control packaging


6
were determined by the Tukey-Kramer test ( P < 0.05) using
NSCC [34]. 5

4
Eugenol (mg g-1)

RESULTS 3

Thickness of the AAF1 with eugenol


1

The thicknesses of the AAF1, AAF2 and control films were


0
27.9 ± 1.85, 26.4 ± 2.79 and 20.8 ± 3.93 µm, respectively.
Differences in the thicknesses val- ues of films prepared due to
0 2 4 6 8 10
variations in the output (gap) of the extruder die. There were no
Tiempo (h)
significant differences in the values of the film elaborated.

Figura 1. Los cambios en la concentración de eugenol en el AAF1 a 5 ° C (A) y


25 ° C (B). Los resultados son medias de 3 repeticiones. Las barras indican la
The effect of processing conditions on the
desviación estándar.
concentration of eugenol in the AAF and on eugenol
release.

The concentrations of eugenol in the AAF1 and AAF2 were DIFUSIÓN DE EUGENOL DE
5.16 ± 0.06 mg g- 1 y 4,87 ± 1,02 mg g- 1, respectivamente. Estos EL AAF1
valores son 57.3% y 63.2% de la eugenol añaden originalmente
antes de procesar respectivamente. La figura 2 muestra las gráficas de difusión, siguientes segunda ley
de Fick, para los experimentos de liberación llevaron a cabo a 5 ° C y 25
° C (AAF1). los re Se determinaron los valores de acuerdo con la
Liberación de eugenol de la AAF1 a 5 ° C y 25 ° C ecuación (1) como 2,04 ± 0,12 x 10- 8 cm 2 s- 1 a 5 ° C y 7,89 ± 0,39 x 10- 8 cm
2 s- 1
116 V ITAE o. a. Higuera B. et al.

a 25 ° C. Estos valores están dentro del mismo orden de 25

magnitud, pero un mayor re valor se obtuvo a 25 ° C.


20

Las zonas de inhibición (mm)


15

10

0
1: 1 1: 5 uno y diez

Eugenol (dilución)

Figura 3. La actividad antimicrobiana de diferentes diluciones de eugenol en


discos de papel contra P. fluorescens ( zonas de inhibición en mm). Las barras
indican la desviación estándar de 2 repeticiones.

El disco de control (sin eugenol) presentó ninguna zona de


inhibición. Se observaron diferencias estadísticamente significativas (p
<0,05) para las diferentes diluciones.

El efecto de la AAF2 piezas de pollo frescos

El AAF2 se ensayó directamente en las piezas de pollo frescos (muslos).

Los resultados de los recuentos microbianos de

Pseudomonas ssp. y AMB a 5 ° C se resumen en la Figura 4. La razón


para la incorporación de compuestos antimicrobianos en el embalaje es
para prevenir el crecimiento de superficie en alimentos en los que se

Figura 2. Difusión de eugenol de AAF1 para el medio ambiente en (A) 5 ° produce un alto nivel de deterioro y la contaminación. La presencia de
C y (B) 25 ° C. Los ejes y muestran la masa de eugenol difundida en el eugenol (4,87 mg g- 1) en el AAF2, mostraron una pequeña reducción del
momento t, dividida por la masa de eugenol difundida en equilibrio ( METROnúmero de Pseudomonas ( 1,1 x 10 6 UFC g- 1)
t/ METRO ∞).
Espesor de las películas era 27,9 ± 1,85 m. en comparación con la película de control (6,0 x 10 6 UFC g- 1),
con diferencias estadísticamente significativas (P <0,05) (6,3 log UFC

In vitro actividad antibacteriana de eugenol en P. fluorescens g- 1 y 6,77 log UFC g- 1 respectivamente).

Eugenol inhibió el crecimiento de P. fluorescens En todas las Pseudomonas


diluciones probadas. La dilución de 1: 1 (1,74 mg eugenol por AMB
7
disco) presentó la zona más grande de inhibición (21 mm), seguido
de 1: 5 (0,87 mg eugenol por disco; 16-15 mm) y 1:10 (0,36 mg
Log (CFU g -1)

eugenol por disco; 10 mm considerado el MIC). Estos resultados se 6

resumen en la Figura 3.

15

Controlar AAF2

Figura 4. Cuenta de Pseudomonas y AMB en piezas de pollo empaquetados en


las películas AAF2 y de control durante 5 días a 5 ° C. Las barras indican la
desviación estándar de 2 repeticiones.
mi laboración activo DE UN ENVASE antimicrobiano y su efecto En El Desarrollo De pseudomonas ... 117

Por lo tanto, la presencia de eugenol en el AAF2 causó que de acuerdo con lo señalado por Dhoot et al. [ 32], que
sea más eficaz que la película de control. Estos resultados son informó de que se alcanzó el estado estacionario de la
consistentes con los de la difusión de eugenol a través de una película de polietileno
in vitro prueba, en la que P. fluorescens era sensible a la presencia de lineal de baja densidad (LLDPE) después de 8,3 h a 16 ° C.
eugenol (a concentraciones tan bajas como 0,36 mg eugenol por La liberación de eugenol a partir de los AAFS depende de
disco). factores tales como la temperatura y el tipo de polímero. Si
El efecto de la AAF2 sobre el crecimiento de AMB en los muslos se expone al aire, una presión de vapor de 0,03 mm Hg a
de pollo fresco era mejor para reducir la microflora, desde 1,7 x 10 6 UFC25 ° C [27] indica que eugenol existirá solamente como
g- 1 en la película de control y 9,0 x 10 5 UFC g- 1 en la película con vapor en la atmósfera ambiente. eugenol en fase de vapor
se degrada en el ambiente de una reacción con radicales
eugenol (P <0,05) (5 días a 5 ° C) (6,2 log UFC g- 1 y 5,9 log UFC g- 1 respectivamente).
Estos recuentos bacterianos encontrados en el presente trabajo, hidroxilo producidos fotoquímicamente; la vida media para
están dentro de los límites establecidos por la NOM-034-SSA1-1993 esta reacción en el aire se estima en 6 horas, un tiempo
para 5 x 10 6 que coincide con el lanzamiento observaron a la
temperatura de este estudio (25 ° C). El comportamiento de
UFC g- 1 en México [37]. los AAFS muestra que durante su aplicación como
envasado de alimentos se dará a conocer eugenol en
DISCUSIÓN condiciones refrigeradas. En el caso de aumentos de la
temperatura,
Las altas pérdidas de eugenol durante la fabricación de
películas eran debido a las altas temperaturas de procesamiento,
lo que causó la rápida evaporación o descomposición del eugenol.
Además, las pérdidas pueden haber sido causados ​por la En cuanto a la difusión de eugenol de la AAF1, Kuorwel et
inestabilidad química de eugenol en presencia de aire, la luz, el al., [ 40], informó que el aumento de la temperatura desde
oxígeno y otros factores ambientales. Suppakul et al., 15 ° C a 35 ° C, el coeficiente de difu- sión aumentó por
carvacrol, linalool y timol. Piringer y Baner [41], reportaron
[38] informaron de mayores pérdidas de agentes antimicrobianos, una
tales como linalool y metilchavicol de LDPE y de etileno y acetato de re valor de 1,3 x 10- 10 cm 2 s- 1 para eugenol en películas de LDPE que
vinilo (EVA) que los observados en el presente estudio; después del estuvieron en contacto con metanol / etanol a 23 ° C. Este valor es
proceso de soplado, los autores observaron una concentración de inferior a los valores determinamos en el presente trabajo, ya que
0,34 g / 100 g, por debajo de una concentración inicial de 1,0 g / 100 mantienen la fase de polímero en contacto con una fase líquida de
g. Galloto et al., [ 39] informó de que casi el 30% de la timol incluido metanol / etanol. El contacto con líquidos orgánicos puede haber
inicialmente en una formulación de polietileno antimicrobiana de baja disminuido la liberación de eugenol de la película. Difusión de
densidad (LDPE) película quedó después del proceso de extrusión. eugenol en películas de LLDPE también se determinó por Dhoot et
Yuwono et al. [ 27], informó de que la presión de vapor de los al. [ 32], que encontró una
aumentos de eugenol de 0,01 mm Hg a 20 ° C a 20 mm Hg a 138,7 °
C; por lo tanto, pérdidas de eugenol fueron influenciados por re valor de 8,86 x 10- 10 cm 2 s- 1 a 23 ° C. Sin embargo, estos autores
evaporación en el medio ambiente debido a la alta volatilidad de informaron la difusión, o la penetración, de eugenol puro líquido en la
eugenol a temperaturas de procesamiento. matriz de LLDPE. Por lo tanto, parece que penetra eugenol puro más
lentamente en una matriz de polímero de lo que se libera a una baja
concentración de un polímero en el medio ambiente. La migración
rápida de eugenol se debe a su capacidad para difundirse a través
Al final de los experimentos de difusión, cerca de 94% de eugenol de las cadenas de LDPE a abandonar el sistema rápidamente.
había sido liberado de ambas películas. A medida que la temperatura Parece que no hay interacciones químicas entre la molécula de
aumentó, el tiempo necesario para causar la liberación de eugenol fue eugenol y las cadenas no polares de polietileno. El uso de tales
disminuida debido al hecho de que un aumento de la temperatura películas podría aumentar la vida útil de un producto alimenticio en
favorece la evaporación de eugenol de la matriz de polímero en el condiciones refrigeradas por imple- Menting un sistema con una
medio ambiente. Estos resultados sugieren que la liberación lenta migración del agente desde el material de embalaje sobre la
antimicrobiana comenzó dentro de los primeros minutos de la superficie del producto alimenticio. La encapsulación de eugenol en
exposición de las películas para el medio ambiente y el equilibrio materiales
alcanzado rápidamente. Los resultados
118 V ITAE o. a. Higuera B. et al.

como ß-ciclodextrina antes de su incorporación en las películas es el las bacterias estudiadas. Residencia en P. fluorescens curva de
siguiente paso en esta investigación. crecimiento (no mostrado), la fase de registro comenzó después de 7,5

El disco de control (sin eugenol) presentó ninguna zona de horas de incubación (26 ° C). En ese momento, la mayor parte del

inhibición. Este resultado confirmó la in vitro eugenol ya había sido liberado de la AAF (25 ° C). Por lo tanto, la

actividad antimicrobiana de eugenol, que mostró un alto efecto actividad antimicrobiana de AAF depende de la relación entre la

inhibidor sobre la P. fluorescens. Girova et al., velocidad de liberación de eugenol de la película y la tasa de

[28], informó de que el aceite de clavo, que se compone de 76,8% crecimiento de las bacterias.

eugenol, mostraron actividad antimicrobiana contra P. fluorescens. Ouattara


et al. [ 29] informó de que P. fluorescens se vio afectada por una A pesar de las pérdidas de eugenol durante el procesamiento
dilución 1: 100 de aceite de clavo. En ambos casos, el efecto de la AAF, y la rápida liberación de la película a 5 ° C y 25 ° C,
antimicrobiano se atribuyó a la presencia de eugenol. El mecanismo AAF2 fue eficaz en retardar el crecimiento de Pseudomonas y
de acción del efecto antimicrobiano de eugenol sigue sin estar AMB en muslos de pollo. La liberación del agente antimicrobiano
clara. Una característica importante de eugenol es su se dirige hacia la superficie del alimento, lo que permitió
hidrofobicidad. Esta propiedad le permite penetrar la capa de concentraciones relativamente bajas de eugenol en la película de
lipopolisacárido en la membrana celular bacteriana Gram-negativa y LDPE de mantener la calidad microbiana de pollo.
perturbar las estructuras celulares [25]. Se ha sugerido que esta
actividad es causada por la presencia de compuestos fenólicos y
monoterpenos [20]. Los componentes fenólicos debilitan la bicapa Con el fin de minimizar las pérdidas de eugenol durante la
de fosfolípidos de la membrana celular, provocando un aumento en producción de los AAFS, la investigación sobre la encapsulación de
la permeabilidad y la fuga de los componentes intracelulares [17]. eugenol en ß-ciclodextrina y su incorporación en películas de
Pandima et al., [ 42] informó de que el mecanismo primario de acción múltiples capas son actualmente en curso. Los estudios futuros
de eugenol es la interrupción de la membrana citoplásmica, lo que también evaluarán el efecto de este agente antimicrobiano en las
aumenta su permeabilidad no específica. Este hiperpermeabilidad propiedades sensoriales de pollo.
es seguido por la fuga de iones y extensa pérdida de otros
contenidos celulares, incluyendo las proteínas intracelulares y en
última instancia resulta en la muerte celular. CONCLUSIONES

ILMS LDPE f suplementado con 9,0 y


7,7 mg g- 1 eugenol se han fabricado, y 42,6% y 36,7% del
eugenol, respectivamente, se pierde durante el proceso de
producción. La liberación de eugenol de las películas en el
Han y Floros [43], informaron que durante una extrusión, las
medio ambiente mostró el comportamiento de Fick, con valores
condiciones de alta temperatura en la extrusora afectadas la
de D de 10- 8 cm 2
estabilidad química de sustancias antimicrobianas incorporadas y
redujeron su actividad antimicrobiana residual. Los resultados del s- 1 a 25 ° C y 5 ° C (mismo orden de magnitud). A 25 ° C el

presente estudio mostraron que las películas AAF2 mostraron equilibrio se alcanzó en 6 h, 10 h antes de 5 ° C. A pesar de las

moderadamente reducción del crecimiento de Pseudomonas y AMB pérdidas de eugenol durante la extrusión de las películas,

cuando fueron usados ​para envasar muslos de pollo. Eugenol, por mostraron un efecto antimicrobiano durante el contacto con pollo

su naturaleza, es altamente soluble en la piel de pollo graso, que fresco mediante la reducción del crecimiento de Pseudomonas y

promueve su difusión y acción en la superficie de las piezas de AMB. Por lo tanto, la adición de eugenol con el LDPE mostró un

pollo. Otra posible explicación es el efecto de las diferencias entre potencial de mantener la calidad de pollo en aplicaciones de

la velocidad de difusión del agente antimicrobiano y la tasa de envasado de alimentos.

crecimiento de los microorganismos. El agente antimicrobiano se


podría agotar y perder la actividad antimicrobiana de la película
antes de que el crecimiento de los microorganismos in- pliegues. AGRADECIMIENTOS
También debido a la liberación de eugenol de la AAF2, tal vez la
Queremos agradecer a QB Rosalva
cantidad restante era en realidad por debajo de la MIC, insuficiente
Pérez-Morales para la asistencia técnica con los estudios
para inhibir el crecimiento de
microbiológicos. Este estudio fue apoyado por fondos desde /
CONACYT / FOMIX (SON-2008- CO3-106207) y Qualyplast,
SA de CV
mi laboración activo DE UN ENVASE antimicrobiano y su efecto En El Desarrollo De pseudomonas ... 119

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